肠出血性大肠埃希菌O157噬菌体的生物学特性

（ ｉ ｎ ｕＰｒ ｖｎ ｉｌＣｅ ｔｒｆ ｒＤｉｅ ｓ ｎｒ ｌａ ｄ Ｐｒ ｖ ｎ ｉｎ，Ｎａ ｊ ｎ １ ０ ９，Ｃｈ ｎ ） Ｊ ａ ｇｓ ｏ ｉｃａ ｎｅ ｏ ｓａｅＣｏ ｔｏ ｎ ｅ ｅ ｔ ｏ ｎ ｉｇ ２ ０ ０ ｉａ
ＡＢＳ ＴＲＡＣ Ｔｈ ｉ ｏ ｈ ｔ ｄ ｏａ ａｙ ｅｔｅｈ ｍｏｏ ｙｏ Ｔ： ｅａｍ ｆｔ ｅｓｕ ｙｔ ｎ ｌｚ ｈ ｏ ｌｇ ｆ Ｅ．ｃ ｌ Ｏ１ ｓｒｉｓｆｏ ｓ ｖ ｒｌｒｇｏ ｓｏ ｎ ｓ ｒ ｖｎ ｅ ｏｉ ７ ｔａｎ ｒｍ ｅ ｅａ ｅ ｉｎ ｆ ｉ ｇ ｕｐ ｏ ｉｃ ５ Ｊａ
钱 慧敏 朱 叶飞 ， ， 董 晨 张平平。 朱凤 才 ， ，
摘 要 ： 目的 对 历 年 从 江 苏省 不 同地 区 分 离 的 肠 出血 性 大 肠 埃 希 菌 Ｏ１７ 以 下 简 称 ： ５ ） 行 分 型 分 析 。 方 法 采 ５（ Ｏ１７ 进 用 多聚 酶 链 反 应一 制 性 片 段 长 度 多态 性 分 析 （ Ｃ － Ｆ ） 法 对 １ ８株 ０ ５ 限 Ｐ ＲＲ Ｉ 方 Ｐ ０ １ ７分 子 分 型 ， 比较 不 同地 区 、 同年 份 菌 型 差 异 。 不 结 果 根 据 Ｅ ０ ｃＲＶ 限 制 性 酶 切 图谱 可 将 菌 株 分 成 Ｊ ０一Ｓ Ｏ十 个 不 同 的 型 别 。 主 要 菌 型 Ｊ０ 占 ６ ． ，Ｓ ２型 与 Ｊ Ｏ Ｓ １Ｊ ｌ Ｓ１ ４９ Ｊ０ Ｓ ｌ型 菌 株 酶 切 图谱 相 似 度 很 高 ，Ｓ ３和 Ｊ ０ Ｊ０ Ｓ ４型 菌 株 数 目较 少 （ ２株 ） 但 近 一 半 属 于 人 源 菌 株 。从 时 间方 面 看 ，９ ９年 分 离 的 菌 １ ， １９
肠 出血 性大 肠埃 希 菌 （Ｅ ｔｒｈ ｍｏｒ ａ ｉ Ｅｓ ｎ ｅｏ ｅ ｒｈ ｇｃ — ｃｅ ｉ ａｃｌ ， ＨＥ ）Ｏ１ ７ 上世 纪八 十 年代 在美 ｈ ｒｃ ｏｉ Ｅ ｈ Ｃ ５ 是

• 目前，污染的肉、家畜，甚至饮用水均面临大肠杆菌O157: H7的卫生威胁。检测食品和水源中肠道病原体使用传统的 培养法,结果不理想。IMS和其它检测的研究表明,对快速检 测食品和环境标本似乎前景良好,Yu检等以IMS结合电化学 发光检测法(ECL)检测食品和污染物中的大肠杆菌。结果 显示,在原缓冲液检出大肠肠菌的范固为100－1000 cfu/lm, 在食品检出的范围为1000－2000cfu/lm ，检测时间十分快, 一般不到1小时。菌O157: H7菌株的牛粪便悬液,其敏感性比 在两种培养基上直接培养高100倍。在监测牛群的4个月间, 从牛采集1024份直肠标本,其中检出大肠杆菌O157: H784份 （8.2%）84份中有23份（27.4%）由直接培养和IMS分离。 23份中15份由两种培养基、5份仅由CT-SMAC、3份仅由 CR－SMAC分离,其余61份(72.6%)仅IMS分离。用含吐温－ 20 的PBS洗涤磁珠可减少其它微生物与磁珠的非特异性结 合。用无关的抗体包被磁,则大肠杆菌O157: H7不结合。IMS 具有快速、操作简单、特异性高,在流行病学调查中有价值。
大肠杆菌O157: H7传染源和传播途经
• 大肠杆菌O157: H7基本上是一种食源性病原菌， 可通过食用大肠杆菌O157: H7污染的牛肉、牛奶、 牛肉或制品、鸡肉、蔬菜、水果、饮料、水等 感染,也可通过人与人、人与动物密切接触传播。 • 在实验室，大肠杆菌O157: H7可以感染小鼠、鸡、 兔、猪、牛等动物。 • 大肠杆菌O157: H7的感染已成为世界性的问题 • 我国情况也不容乐观
• Padhye 等用单克隆抗体进行直接 ELISA 反应检 测O157: H7,除O26 ：H11外，未发现与沙门氏菌、 结肠炎耶氏森菌、志贺氏菌和肺炎克雷伯民菌 等有交叉反应。单克隆抗体用于检测大肠杆菌 O157: H7有明显特异性，可作为一种免疫试剂用 于临床和食物标本的快速检测。 Clark 等近一 步对单克隆抗体的研究发现,此种单克隆抗体识 别的物质是 LPS, 这种 LPS 抗原决定簇用全细胞 ELISA 同样可以在其它血清型大肠杆菌和产生 或不产生 Vero 毒素的大肠杆菌中检测到, 而且 易受到胆盐、吖啶黄和温度的影响,但可以通过 结合免疫捕获的修饰方案来提高 ELISA 的特0mg/L 新生霉素的EB肉汤或肠道增菌液 • 含10mg/L 新生霉素或10mg/L盐酸-吖啶黄的胰蛋白

致病性：（1）致 病因素
LT与ST的比较
特性
分子量 耐热性 免疫原性 B亚单位受 体
致病机理
不耐热肠毒素
耐热肠毒素
较大，73000
较小，1500-5000
不耐热
耐热
有
无
肠黏膜GM1神经节苷酯 肠黏膜GM1神经节苷酯
活化细胞腺苷酸环化酶，活化细胞鸟苷酸环化酶，
细胞内cAMP含量升高， 细胞内cGMP含量升高，
原理：伊红美蓝琼脂平板含伊红和美蓝染料，在此亦作为指示剂。 大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境时，故可染上酸性染料伊红，又因 伊红与美兰结合（该两种染料即结合成复合物）使大肠菌群产生带 核心的、有金属光泽的深紫色的（龙胆紫的紫色）阳性菌落，从菌 落表面的反射光中还可看到绿色金属闪光。在伊红美兰平板上的典 型菌落呈紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常有金属光泽。 有的由于被检样品影响，亦呈现紫色、粉紫、中心灰紫、无黑心、 湿润等，常为大肠杆菌，均应注意挑选。
革兰氏阴性杆菌
革兰氏 阳性杆 菌
大肠杆菌扫 描电镜照片源自大肠杆菌 透射电镜 照片大肠杆菌革兰氏染色照片
大肠杆菌平 板菌落照片
一、埃希氏菌属生物学特性
生化特性
一．可发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇产酸产气，有些不典型的菌株不发酵或 迟缓发酵乳糖；
二．不同菌株对蔗糖，卫矛醇、水杨苷发酵结果不一致; 三．本菌可使赖氨酸脱鞍、不能使苯丙氨酸脱羧。 四．不产生H2S，不液化明胶，不分解尿素;
二、致病性大肠埃希氏菌的检验
（二）、分离培养
将乳糖胆盐发酵阳性管液与增菌液分别划线接种于麦 康凯或伊红美兰琼脂平板上。 2、于36±1℃培养 18—24小时观察菌落对于污染严重的食品可直接按 划线法接种，不经过增菌过程。不但要注意乳糖发酵 的菌落，同时也要注意乳糖不发酵的菌落。

大肠杆菌噬菌体大肠杆菌噬菌体大肠杆菌噬菌体，是指寄生在大肠杆菌内的一种噬菌体，属于细胞病毒的一种。

噬菌体还有一个特点就是具有专一性,一种噬菌体只在一种细菌中生活,而不能在另一种细菌中生活,人噬菌体是一种大肠杆菌的温和噬菌体,它是遗传工程中极好的载体分子,就是担当把动物的基因搬运进大肠杆菌细胞的搬运工角色。

繁殖特点繁殖过程可以分为吸附、侵入、复制、合成与释放4步。

大肠杆菌噬菌体(1)吸附。

噬菌体以它的尾部末端高度特异性地吸附到敏感细胞表面上某一特定的位点，如细胞壁、鞭毛或纤毛。

(2)侵入。

(3)复制与合成。

指噬菌体DNA和蛋白质外壳的复制。

噬菌体DNA进入宿主细胞后，立即引起宿主的代谢改变，宿主细胞内的核酸不能按自身的遗传特性复制和合成蛋白质，而由噬菌体核酸所携带的遗传信息控制，借用宿主细胞的合成机构及酶等复制核酸，进而合成噬菌体的蛋白质。

核酸和蛋白质装配合成新的噬菌体。

(4)释放。

噬菌体粒子成熟后，噬菌体的水解酶水解宿主细胞而使宿主细胞裂解，噬菌体被释放出来。

病症肠出血性大肠杆菌引起的疾病症状包括腹部绞痛和腹泻，一些病例可能发展为血性腹泻(出血性大肠炎)。

还可能出现发烧和呕吐。

潜伏期3至8天，平均为3至4 天。

大多数病人10天内康复，但是有少数病人(特别是幼儿和老年人)的染病可能发展为威胁生命的疾病，例如溶血尿毒综合症(HUS)。

溶血尿毒综合症的特点是急性肾衰竭、溶血性贫血和血小板减少。

据估计，10%的肠出血性大肠杆菌感染者可发展为溶血尿毒综合症，病例死亡率为3%至5%。

总体来说，溶血尿毒综合症是幼儿急性肾衰竭的最通常原因。

25%的溶血尿毒综合症病人可发生神经并发症(例如癫痫发作、中风和昏迷)，在大约50%的幸存者中发生通常是轻型的慢性肾病。

不同年龄组的肠出血性大肠杆菌感染的发病不尽相同，所报病例的最高发病率发生在15岁以下的儿童中(美利坚合众国每10万病例中占0.7)。

63%至85%的病例是由于通过食物感染病菌。

抗原构造
大肠杆菌具有多种抗原构造，包括菌 体抗原（O抗原）、鞭毛抗原（H抗 原）和表面抗原（K抗原）。
大肠杆菌在生物工程中的应用
01
02
03
基因克隆和表达
大肠杆菌是基因克隆和表 达的常用宿主菌，可以通 过质粒载体将外源基因导 入大肠杆菌中进行表达。
蛋白质生产
大肠杆菌可以用于生产各 种蛋白质药物，如胰岛素、 生长激素等。
生物防治
噬菌体可以作为生物防治剂，用于防治某些细菌感染，如食品防腐和植物病害 控制等。
噬菌体的复制和感染机制
DNA复制
噬菌体进入宿主细胞后，利用宿主细胞代谢 系统进行DNA复制，产生多个子代DNA。
蛋白质合成
噬菌体DNA控制宿主细胞代谢系统合成噬菌体蛋白 质，包括头部和尾部蛋白质。
组装与释放
子代噬菌体在宿主细胞内组装完成，通过宿 主细胞裂解或出芽方式释放到外界环境中。
生物催化剂
大肠杆菌可以用于生产各 种生物催化剂，如脂肪酶、 淀粉酶等。
大肠杆菌的致病性
肠道感染
大肠杆菌是肠道感染的主要病原体之一，可引起腹泻、 呕吐等症状。
败血症
大肠杆菌可引起败血症，导致全身感染和多器官功能 衰竭。
尿道感染
大肠杆菌也是尿道感染的主要病原体之一，可引起尿 频、尿急、尿痛等症状。
02 质粒
基因敲除
利用质粒介导的同源重组技术，实 现基因敲除或定点突变。
03
02
表达载体
通过将目的基因插入到质粒上，实 现目的基因的高效表达。
基因治疗
质粒作为基因治疗载体，用于将治 疗基因导入病变细胞。
04
质粒的复制和传播机制
复制机制
质粒通过独特的复制机制， 在宿主细胞内自主复制， 并遗传给后代细胞。

大肠埃希氏菌
制作人：xxxxx xxxxx
行业倾力
1
目录：
一、引起疾病症状（致病性、流行病学情况）---3-4 二、基本情况及特征 ---5-12 三、培养特性 ---13-14 四、生化特性 ---15-18 五、抗原特征 ---19-20 六、检验方法（举例阐述检验某一食品、商品中该菌
的详细操作过程）---21-23
株只含有一种O抗原，其种类以阿拉伯数字表示；可
用抗O单因子血清通过凝行集业倾试力 验鉴定。
19
抵抗力
该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃ 经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。 在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低 的粪便中存活更久。胆盐、煌绿等对大肠杆菌有 抑制作用。对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感， 但易耐药，是由带有R因子的质粒转移而获得的。
行业倾力
4
科肠杆菌科与(医Ent学ero有bact关eri的acea属e)
种
埃希氏菌属
沙门氏菌属
一大群寄居肠杆在菌人属 和动物肠道中大生肠埃物希学菌 性状近似、
革兰氏阴性、遗志传贺氏学菌上属 有亲缘关系蟑的螂肠埃希道菌杆菌。现已
肠杆菌科 知有44个菌属，克1雷7伯0氏多菌个属 菌种 ，包弗括格三森埃大希类菌 别： 摩根菌属 1. 致病菌：如沙门菌，志贺菌、鼠赫尔疫曼耶埃希尔菌森菌； 沙雷氏菌属 2. 机会致病菌变：形杆大菌肠属 埃希菌、奇异伤口变埃形希菌杆菌等；
H抗原： 即抗鞭原毛抗结原；构不及耐热分，类
80℃可破坏其抗原性。1个菌株 仅有1种H抗原。
K抗原：即荚膜抗原；个别位于 菌毛中。不耐热。O不凝集性： 具有K抗原的菌株不会被其相应的 抗O血清凝集。
O抗原：即菌体抗原，化学本质为多糖-磷脂-蛋白质

医学微生物学案例-答案医学微生物学案例噬菌体1958年某城市炼钢工人不慎大面积烧伤，并造成细菌性感染，经检测为铜绿假单胞菌（绿脓杆菌），使用了当时仅有的几种抗生素治疗，未取得明显疗效，后经某医学院分离出此菌，并找到该菌对应的特异性噬菌体，经该噬菌体治疗后取得明显疗效。

思考题：噬菌体治疗后获得明显疗效的相关机制及其此案例给予的启示。

答案：造成细菌性感染，经检测为铜绿假单胞菌（绿脓杆菌），使用了当时仅有的几种抗生素治疗，未取得明显疗效，因为细菌产生了抗药性，对抗生素敏感性下降了。

而最后找到该菌对应的特异性噬菌体，经该噬菌体治疗后取得明显疗效。

是因为噬菌体是感染细菌的病毒，而铜绿假单胞菌的特异性噬菌体只对铜绿假单胞菌具有裂解和杀死的功效，而铜绿假单胞菌的特异性噬菌体，通过吸附—传入—生物合成—成熟与释放的过程是最终的细菌死亡。

所以最后铜绿假单胞菌死亡，病情得到康复。

金黄色葡萄球菌2006年10月11日，XXX在课间餐后，有185名学生出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状，呕吐较明显，伴有低热、白细胞升高。

取呕吐物及剩余食物进行微生物学检查，镜下查见革兰阳性球菌，葡萄串状排列，普通培养基培养可见圆形、中等大小、金黄色菌落。

思考题：1，患者的初步诊断是何病？由何菌引起？2，如何防治？答案：食物中毒/急性胃肠炎金黄色葡萄球菌现恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状，呕吐较明明，伴有低热、白细胞降低都是金黄色葡萄球菌肠毒素对机体的损伤施展阐发。

防治：防留意个人卫生加强食物卫生监视管理避免耐药性产生避免医源性感染，医务人员手部充分消毒治：皮肤创伤及时处理、脓肿引流等药敏试验链球菌XXX，男，16岁，因发烧、浮肿、血尿入院。

自幼时常咽喉痛、发烧，曾因心脏杂音卧床一个月。

入院前3周又因咽痛发烧而打针青霉素很多天，症状消逝，入院前两日高热，血尿。

查体：T 39℃，血压稍高，眼睑及下肢浮肿。

实验室检查：ASO抗体800单位尿，RBC+++，尿蛋白+++。

第一讲O157：H7大肠杆菌和志贺样毒素(续)
徐建国
【期刊名称】《疾病监测》
【年(卷),期】1997(012)002
【摘要】@@ 二、ETEC、EPEC、EIEC和EAggEC的毒力因子和鉴定
rn1.ETEC:ETEC的主要特征是能分泌热稳定毒察(ST)、热不稳定毒素(LT);具有与致病性相关的菌毛,如CFAs(Colonization factor antigens).
【总页数】3页(P79,57-58)
【作者】徐建国
【作者单位】无
【正文语种】中文
【相关文献】
1.第一讲 O157:H7大肠杆菌和志贺样毒素 [J], 徐建国
2.第一讲 O157:H7大肠杆菌和志贺样毒素(续) [J], 徐建国
3.肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺样毒素2B亚基的表达 [J], 丁益强;王长军;俞守义
4.肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺样毒素Ⅱ毒素亚单位Stx2A的表达与纯化[J], 马颖;毛旭虎;邹全明;张卫军
5.噬菌体鸡尾酒制剂对牛奶中产志贺毒素大肠杆菌O157:H7的抑制作用 [J], 季慕寅;李敏;张海燕;张爽;马勋;张炜
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【 中图分类 号 １８２ Ｓ５． ６
【 文献标 识码 Ｉ Ａ
【 章编 号 】６２— ２７（ ０） 文 ｌ７ ０ ８ ０８０ ００ — ０ ２ ４— ０６ ３
Ｓ ｐ ｒ ｔ ｎ ａ ｄＰ ｒ ｃ ｔ ｎｏ Ｅ ｔｒ ｈ ｍｏｒ ａ ｉ ｃ ｌ ： ｃｅｉｐ ａ ｅ ｅ ａ ａｉ ｎ ｕ ｆ ａｉ ｆ ｎ ｅ ｏ ｅ ｒｈ ｇｃ ｏ ｉ ｉ ｏ Ｅ ｏｉ ５ Ｈ７Ｂａ ｔｒ ｈ ｇ ０１ ７ ｏ
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大肠埃希菌1.概况：大肠埃希菌是肠道中重要的正常菌群，婴儿出生数小时后就进入肠道中并终生伴随，能为宿主提供一些营养作用的合成代谢产物，宿主免疫能力下降或细菌侵入肠道外组织或器官，即可成为条件致病菌，引起肠外感染，以化脓性感染和泌尿道感染最为常见，某些血清型大肠埃希菌具有致病性，能导致人类腹泻。

2.形态：中等大小的革兰阴性杆菌无芽孢，多数菌株有周身鞭毛，能运动；有菌毛包括普通菌毛和性菌毛3.体内分布：大肠杆菌在人和动物的肠道内，大多数于正常条件下是不致病的共栖菌，在特定条件下（如侵入肠外组织或器官）可致病。

但少数大肠杆菌与人和动物的大肠杆菌病密切相关，它们是病原性大肠杆菌，正常情况下极少存在于健康机体。

4.培养：兼性厌氧菌，营养要求不高，在普通的琼脂平板37℃培养24小时后，埃希菌形成圆形凸起灰白色S型菌落。

在液体培养基中均匀浑浊的生长。

5.生化反应：能发酵葡萄糖等多种糖类，产酸并产气，绝大多数菌株能发酵乳糖，可与沙门菌，志贺菌等区别。

吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐试验（IMViC试验）为++--，IMViC试验为此结果，可判断为典型的大肠埃希菌，表明被检物已被粪便污染，有传播肠道传染病的危险6.抗原构造：大肠杆菌抗原主要有O、K和H三种，已确定的大肠杆菌菌体（O）抗原有173种，表面（K）抗原有80种，鞭毛（H）抗原有56种。

O抗原凝聚相对较慢，呈颗粒状。

H抗原刺激机体主要产生IgG类抗体，H抗原的凝集出现较快，呈絮状。

K抗原位于O抗原外层，为多糖，与细菌侵袭力有关。

7.生物学特性：本属细菌对干燥、腐败、日光等因素具有一定的抵抗力，在外界条件下可以生存数周或数月。

对化学消毒剂的抵抗力不强，一般常用消毒剂和消毒方法均能达到消毒目的。

通常情况下，对多种抗菌药物敏感。

但由于长期滥用抗生素，对常用抗生素耐药现象普遍，不仅影响该病防制效果，而且亦成为公共卫生关注的问题。

8.致病物质定植因子：又称黏附素（adhesin），可与黏膜表面细胞的特异性受体相结合而定植于黏膜，这是大肠杆菌引起的大多数疾病的先决条件。

大肠埃希菌1.概况：大肠埃希菌是肠道中重要的正常菌群,婴儿出生数小时后就进入肠道中并终生伴随，能为宿主提供一些营养作用的合成代谢产物，宿主免疫能力下降或细菌侵入肠道外组织或器官,即可成为条件致病菌，引起肠外感染，以化脓性感染和泌尿道感染最为常见，某些血清型大肠埃希菌具有致病性，能导致人类腹泻。

2。

形态：中等大小的革兰阴性杆菌无芽孢，多数菌株有周身鞭毛，能运动；有菌毛包括普通菌毛和性菌毛3.体内分布：大肠杆菌在人和动物的肠道内,大多数于正常条件下是不致病的共栖菌，在特定条件下（如侵入肠外组织或器官)可致病.但少数大肠杆菌与人和动物的大肠杆菌病密切相关，它们是病原性大肠杆菌，正常情况下极少存在于健康机体。

4.培养:兼性厌氧菌，营养要求不高，在普通的琼脂平板37℃培养24小时后，埃希菌形成圆形凸起灰白色S型菌落。

在液体培养基中均匀浑浊的生长。

5。

生化反应：能发酵葡萄糖等多种糖类，产酸并产气，绝大多数菌株能发酵乳糖，可与沙门菌，志贺菌等区别.吲哚、甲基红、V—P、枸橼酸盐试验(IMViC试验）为++——,IMViC试验为此结果，可判断为典型的大肠埃希菌，表明被检物已被粪便污染,有传播肠道传染病的危险6。

抗原构造：大肠杆菌抗原主要有O、K和H三种,已确定的大肠杆菌菌体（O)抗原有173种,表面（K)抗原有80种，鞭毛（H）抗原有56种。

O抗原凝聚相对较慢，呈颗粒状。

H抗原刺激机体主要产生IgG类抗体，H抗原的凝集出现较快，呈絮状。

K抗原位于O抗原外层，为多糖，与细菌侵袭力有关。

7.生物学特性：本属细菌对干燥、腐败、日光等因素具有一定的抵抗力，在外界条件下可以生存数周或数月。

对化学消毒剂的抵抗力不强,一般常用消毒剂和消毒方法均能达到消毒目的。

通常情况下，对多种抗菌药物敏感。

但由于长期滥用抗生素，对常用抗生素耐药现象普遍,不仅影响该病防制效果，而且亦成为公共卫生关注的问题。

8.致病物质定植因子：又称黏附素(adhesin），可与黏膜表面细胞的特异性受体相结合而定植于黏膜，这是大肠杆菌引起的大多数疾病的先决条件.外毒素：大肠杆菌可产生外毒素，最为人所知的是ETEC产生的由质粒编码的不耐热肠毒素 (LT）和耐热肠毒素（ST）.LT有抗原性，分子量大,65℃经30min 即被灭活,可激活肠毛细血管上皮细胞的腺苷环化酶,增加环腺苷酸（cAMP）产生，使肠黏膜细胞分泌亢进，发生腹泻和脱水;ST无抗原性，分子量小,100℃加热30min而不失活，可激活回肠上皮细胞刷状缘绒毛上的颗粒性的鸟苷环化酶，增加环鸟苷酸（cGMP）产生，同样引起分泌性腹泻。

埃希氏大肠菌及检验一、定义：大肠埃希氏菌更习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，并且大肠杆菌株ATCC 11775是该属的模式菌种。

大肠杆菌的不同菌株间DNA相关性为80%，而与同科的志贺氏菌属（除鲍氏志贺氏菌外）的DNA相关性可达80-87%。

与人类疾病有关的大肠杆菌，统称为致泻性大肠杆菌（此名称不易与致病性大肠杆菌相混淆），一般包括五种：即肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）和粘附性大肠杆菌（EAEC）。

文献报道还有几种，象：凝集性大肠杆菌、即产VT毒素又具有侵袭性的大肠杆菌等，但目前尚未达成统一共识。

二、生物学特性：基本形态特征：此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般大小约0.5μ-0.8μm*1.0μm-3.0μm,因生长条件不同，个别菌体可呈近似球状或长丝状。

此菌多单独存在或成双，但不呈长链状排列。

约有50%左右的菌株具有周生鞭毛而能运动，但多数菌体只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱；多数菌株生长有比鞭毛细、短、直且数量多的菌毛，有的菌株具有荚膜或微荚膜；不形成芽胞，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。

培养特征：由于此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。

最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。

在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：（1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中容易分散。

（2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。

（3）粘液型：常为含有荚膜的菌株。

此菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为6.8-8.0，所用培养基pH为7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0则生长缓慢。

生化反应与血清学反应大肠杆菌属于卫生学意义的大肠菌群和粪大肠菌群的范畴，因此，必须符合大肠菌群和粪大肠菌群的有关定义，在检测大肠菌群、粪大肠菌群的基础上，可以应用I（吲哚）、M（甲基红）、Vi（3羟基-2-丁酮）、C（柠檬酸）即IMViC 生化试验对大肠杆菌作进一步鉴定，其IMViC结果为++--或-+--。

全国肠出血性大肠杆菌O157:H7感染性腹泻应急处理预案一、前言肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7感染性腹泻是近年来新发现的危害严重的肠道传染病。

该病可引起腹泻、出血性肠炎，继发溶血性尿毒综合症(HUS)、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)等。

HUS和TTP的病情凶险，病死率高。

自1982年美国首次发现该病以来，在世界上许多国家相继发生了暴发和流行，其流行已成为全球性的公共卫生问题之一。

近几年，我国已陆续有十多个省份在食品、家禽、家畜、昆虫、腹泻病患者中检出该致病菌，存在着疫情暴发、流行的潜在威胁。

为了有效控制肠出血性大肠杆菌O157:H7感染性腹泻的突发疫情，保障广大人民群众的生命与健康，维护社会稳定和经济发展，特制定本预案。

二、目的确保一旦发生疫情，及时采取有效措施，迅速控制和扑灭疫情。

三、预案启动条件凡发生肠出血性大肠杆菌O157:H7感染性腹泻暴发疫情，即启动本预案。

对于既往无疫情的地区发生首例肠出血性大肠杆菌O157:H7确诊病例时，可按照本预案执行。

有关暴发疫情判定和病人诊断标准，参照《全国肠出血性大肠杆菌O157:H7感染性腹泻监测方案（试行）》执行，即：1．疑似病例标准（１）有鲜血便、低烧或不发烧、痉挛性腹痛的腹泻病例；（2）腹泻若干天后继发少尿或无尿等表现的急性肾功能衰竭病例；（3）腹泻病人粪便标本O157抗原免疫胶体金方法检测阳性者。

符合以上条件之一者，即为疑似病例，其中（3）为新增标准。

2．确诊病例标准疑似病例或其他腹泻病患者，具有以下条件之一者即为确诊病例：（1）从粪便标本中检出产生志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157：H7；或恢复期血清O157脂多糖（LPS）IgG抗体呈4倍升高；或经蛋白印记试验证实血清标本有与O157 LPS、或肠出血性大肠杆菌溶血素、或志贺毒素分子量一致的特异性抗体；（2）在流行区内，经省级专家组确认，与确诊病例流行病学密切相关，并排除其它疾病的疑似病例，为临床符合病例；（3）腹泻病例的粪便中分离出不产生志贺毒素1或志贺毒素2及其变种的肠出血性大肠杆菌O157:H7，亦为确诊病例（不产毒）。

大肠埃希菌大肠埃希菌是人体不可缺少单细胞生物。

大肠埃希菌，俗名大肠杆菌（革兰氏阴性短杆菌），周身鞭毛，能运动，无芽。

是人和动物肠道中的正常栖居菌。

大肠埃希菌的致病物质之一是血浆凝固酶。

根据致病性的不同，致泻性大肠埃希菌被分为产肠毒素性大肠埃希菌、肠道侵袭性大肠埃希菌、肠道致病性大肠埃希菌、肠集聚性黏附性大肠埃希菌和肠出血性大肠埃希菌5种。

简介大肠埃希菌，俗名大肠杆菌（革兰氏阴性短杆菌），周身鞭毛，能运动，无芽。

是人和动物肠道中的正常栖居菌。

大肠埃希菌的致病物质之一是血浆凝固酶。

根据致病性的不同，致泻性大肠埃希菌被分为产肠毒素性大肠埃希菌、肠道侵袭性大肠埃希菌、肠道致病性大肠埃希菌、肠集聚性黏附性大肠埃希菌和肠出血性大肠埃希菌5种。

部分埃希菌菌株与婴儿腹泻有关，并可引起成人腹泻或食物中毒的暴发。

肠出血性大肠埃希菌O157:H7是导致1996年日本食物中毒暴发的罪魁祸首，它是出血性大肠埃希菌中的致病性血清型，主要侵犯小肠远端和结肠。

常见中毒食品为各类熟肉制品、冷荤、牛肉、生牛奶，其次为蛋及蛋制品、乳酪及蔬菜、水果、饮料等食品。

中毒原因主要是受污染的食品食用前未经彻底加热。

中毒多发生在3、9月。

中毒表现不同的致泻性大肠埃希菌引起的中毒，症状各不相同。

①产肠毒素性大肠埃希菌引起的中毒主要症状是水样腹泻、腹痛、恶心、低热。

每天腹泻可达8～12次。

②肠道侵袭性大肠埃希菌的中毒症状与志贺菌引起的痢疾相似，发热、剧烈腹痛、水样腹泻、粪便中有少量粘液和血。

③肠道致病性大肠埃希菌引起的中毒主要症状是发热、不适、呕吐、腹泻、粪便中有大量粘液但无血，有约20%患者有呼吸道症状，感染的症状通常比较严重。

④肠集聚性黏附性大肠埃希菌引起的中毒症状成年人表现为中度腹泻，病程1～2天。

婴幼儿多表现为2周以上的持续性腹泻。

⑤肠出血性大肠埃希菌引起的中毒，一般3～10天发病，常有突发性的腹部痉挛，有时类似于阑尾炎的疼痛。

有的病人只有轻度腹泻；有些病人由水样便，转为血性腹泻，腹泻次数有时可达10多次，低热或不发热；许多病人同时有呼吸道症状。

菌,不发酵乳糖的是病原菌（志贺菌,沙门菌）； 5. 易变异，可通过突变和“可移动遗传原件”的转移
而致变异； 6. 菌体抗原、鞭毛抗原及荚膜抗原是血清学分型、
鉴定的依据。
主要内容
一、概述 二、生物学性状
概述
大肠埃希氏菌
（Escherichia coli)
俗称大肠杆菌， 为德国科学家 Escherich首先 发现（1885年） 。
2.检验项目：致泻性大肠艾希氏菌
3.检验方法：
3.1 增菌和分离培养：以无菌手续称取检验25g，加在225mL营养肉汤中， 以均质器打碎1min或用乳钵加灭菌砂磨碎。 取出适量，接种乳糖胆盐培养基，以测定大肠菌群MPN， 其余的移入500mL广口瓶内，于36±1℃培养6h。 挑取1环，接种于1管30mL肠道菌增菌肉汤内，于42℃培养18h。
抵抗力
该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃ 经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。 在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低 的粪便中存活更久。胆盐、煌绿等对大肠杆菌有 抑制作用。对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感， 但易耐药，是由带有R因子的质粒转移而获得的。
大肠艾希氏菌的鉴定
1.样品来源：从本市批发部、超市、另售点等12家 供货单位共采取鸡翅、鸡腿、鸡胸、鸡尖、鸡爪、 整鸡及鸭头、鸭掌等9个冻离类产品计20件样品。
麦康凯琼脂： 红色菌落
伊红美蓝琼脂： 紫黑色菌落
血平板： 一些致病性菌株 常β溶血
生化特性
含酚红指示剂，酸性呈黄色，碱性呈红色
能发酵多种糖类，产酸产气。 多数菌株发酵乳糖； 约半数菌株不分解蔗糖；
I M Vi C 实验现象为
“＋ ＋ − − ”
凡此实验有上述结果的，判为典型的大肠埃希菌

清洁剂加热
介质温度时间
蒸汽93℃5分钟
水76.6℃5—20分钟
干热82℃20分钟
热水通常用作清洁剂，尤其在食品服务操作中，象洗碗机、大型操作用大型多层箱输送清洗机器。输送带把盘子通过清洗、漂洗、消毒箱，在清洗步骤中用热水。适宜的清洗意味着被消毒的器具温度至少要加热到71℃，在器具中建立的加热一部分要通过65.5℃左右的清洗和漂洗喷雾。
通常，进入消毒喷雾机的水必须至少82℃，固定的架子除外，单个温度机械上最低清洗温度为74℃，使器具的温度升到65.5℃或更高。
另一个重要因素是喷雾的压力，太大的压力，使水滴雾化而导致其到达器具之前冷却太快。另一方面太小的压力可能导致形不成喷雾，通常每平方英尺15-25磅的压力工作最好。
清洁频率
对不同类型的设备清洁频率是不同的。例如，切板必须每四小时被清洗消毒，在细菌能繁殖到危险水平之前必须去除它们。切板也需在不同用途时被清洁以避免交叉污染。例如，如果切板首先用于生的产品，那么在它们用在蒸煮的即食产品时，必须被清洗和消毒，为防止交叉污染，锅、盘和其他处理食品的设备，其含有生的产品或含有蒸煮的产品，在再次使用它们之前，必须清洗和消毒。
在检测过程中，也可以在选择性增菌后，取出5mL增菌液，经100℃水浴15分钟灭活后，供自动酶联荧光免疫测试（VIDAS），迅速获得初步结果，阳性反应者需作进一步证实。
附:自动酶联荧光免疫测试（mini-VIDAS）
自动酶联荧光免疫测试（VIDAS）测定程序
EHEC O157:H7检验程序图解
检样25g
美国FDA已批准对猪肉、牛肉、禽肉、羊肉、香料、调味品进行辐照，也可以用于水果、蔬菜和谷物。有关食品辐照的要求在21CFR PART179可以查到。
每种技术都有自已的术语，辐照也不例外。KILOGRAY是个用于食品加工业中描述辐照量值的术语。

大肠杆菌的生物学特性•简介：大肠埃希氏菌习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，并且大肠杆菌株ATCC 11775是该属的模式菌种。

附：肠杆菌科各属肠杆菌科有一些共同特性，比如都是革兰氏阴性小杆菌，好氧或兼性厌氧，没有芽孢。

大肠杆菌的不同菌株间DNA相关性为80%，而与同科的志贺氏菌属（除鲍氏志贺氏菌外）的DNA相关性可达80-87%。

大肠杆菌为人和动物肠道中的常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道外感染。

•形态与染色大小0.4～0.7×1～3um,无芽胞,大多数菌株有动力。

有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖类包膜，革兰氏阴性杆菌。

附：有动力是什么意思？请看动力试验。

革兰氏阴性杆菌是什么意思？请看革兰氏染色介绍。

革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram 创立。

细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。

为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。

阳性菌仍带紫色，阴性菌那么被染上红色。

有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。

革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。

现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。

另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌那么相反。

所以染色时的条件要严格控制。

例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时，那么可都呈负反应。