医学免疫学实验课件-沉淀反应

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概述
一、单向琼脂扩散试百度文库 二、双向琼脂扩散试验 三、火箭电泳 四、对流免疫电泳 五、免疫电泳
•目的要求
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目的要求
1.掌握对流免疫实验原理、操作过程及应用。 2.熟悉单向、双向琼脂扩散实验的原理、操作 过程及应用。 3.了解免疫电泳、火箭电泳实验的原理、操作 过程及应用。
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二、火箭电泳
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沉淀反应分类
一、单向琼脂扩散 二、火箭电泳 三、双向琼脂扩散
用于样品成分分析 抗原和抗体纯度分析
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三、双向琼脂扩散试验
【原理】抗原和抗体加到琼脂板上相对应的孔中，
两者各自向四周扩散，如两者相对应，浓度比例合适， 则经一定时间后，在抗原、抗体孔之间出现清晰致密 的白色沉淀线。
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三、双向琼脂扩散试验
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方法：
倒琼脂→打孔→分别加入抗原抗 体→孵育→观察结果 一对相应抗原抗体形成一 条沉淀线
多对相应抗原抗体形成多 条沉淀线
双向琼脂扩散试验
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三、双向琼脂扩散试验
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沉淀反应分类
一、单向琼脂扩散 二、火箭电泳 三、双向琼脂扩散 四、对流免疫电泳
琼脂中含抗体
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
1:80
1:40 1:20
1:10
未知
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用不同浓度的抗原制成标准曲线，则未知 标本中的抗原含量可从标准曲线图中求出。
沉淀环直径平方
抗原浓度
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沉淀反应分类
一、单向琼脂扩散 二、火箭电泳
特点：
1. 需仪器 2. 灵敏度与单向扩散相仿 3. 需时间短、可定量
2. 取约4ml 琼脂液浇注在载玻片上
凝固
3. 打4个孔，孔径3mm，孔距6mm
_
+
4. 在孔中加入相应样品
Ag1
Ab
Ag2
Ab
5. 电泳约1h
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对流免疫电泳
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沉淀反应分类
1.单向琼脂扩散 2.火箭电泳 3.双向琼脂扩散 4.对流免疫电泳 5.免疫电泳
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免疫电泳
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(一）实验材料
1.试剂 1.5%琼脂液，AFP诊断血清（含抗AFP抗体），
AFP阳性血清、待检血清，巴比妥缓冲液。 2.仪器及用具
电泳仪、电泳槽、打孔器、微量滴管、纱布条、 镊子。
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四、对流免疫电泳
（二）方法
（1）制板 （2）打孔 （3）加样 （4）电泳
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方法：
1. 彻底融化1.5% 琼脂液
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一、单向琼脂扩散试验
【原理】将Ab混合于琼脂内，倾注于玻片上， 凝固后打孔，将Ag标本加入孔内，经过一定的时 间，在孔的周围出现AgAb复合物形成的沉淀环， 环的大小与Ag含量和扩散时间相关。
——定量试验，可检查血清中Ig和补体的含量。
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单向琼脂扩散
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一、单向琼脂扩散试验
沉淀物
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琼脂扩散实验
可溶性抗原和抗体在琼脂中扩散，相遇， 在适当比例下形成沉淀线或沉淀环。
分类:
单向琼脂扩散实验: 仅抗原或抗体扩散 —— 定量
双向琼脂扩散实验: 抗原和抗体同时扩散 —— 定性
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沉淀反应分类
一、单向琼脂扩散 特点
1. 简单 2. 灵敏度较低约为：10－20μg 3. 1~2天才能看结果
特点： 1.需仪器 2.灵敏度提高约为：10μg/ml 3.1h能看结果
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四、对流免疫电泳
【原理】
在适宜缓冲液和电场条件下，抗原和相应抗 体在琼脂凝胶中，由于电泳和电渗作用，抗原向 正极移动，抗体向负极移动，两者相向移动，在 两孔之间相遇，在比例合适处形成沉淀线。
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四、对流免疫电泳
实验二 沉淀反应 （Precipitation test）
可溶性抗原（如血清蛋白、外毒素等）与 相应抗体结合，在适宜条件(比例/电解质/时间) 下，形成肉眼可见的沉淀物的现象。
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➢沉淀反应
+
比例/电解质/时间
可溶性抗原
➢
相应抗体
➢ 分类:
✓ 琼脂扩散 ✓ 环状沉淀反应 ✓ 絮状沉淀反应 ✓ 免疫电泳