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银杏内酯B促进体外培养胚胎大鼠脊髓神经细胞生长发育的研究

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安徽医药ＡｎｈＨｉ　Ｍｅｄｉｃ。ｌ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　２００８　Ａｕｇ；１２（８）　‘６８５・　

银杏内酯Ｂ促进体外培养胚胎大鼠脊髓　

神经细胞生长发育的研究　

叶蓓　，高建新　，张立光　

（１．苏州卫生职业技术学院，江苏苏州２１５００９；２．山东大学基础医学院，山东济南２５００１２）　

摘要：目的探讨ＧＢ对体外培养的胚鼠脊髓神经元存活和生长发育的作用。方法胚胎大鼠脊髓神经细胞原代培养，相差显　

微镜下进行细胞计数和显微测量，观察ＧＢ对神经元存活和生长发育的作用。对培养７　ｄ细胞行ＮＳＥ免疫组化染色，光镜下观　

察ＧＢ对ＮＳＥ染色阳性神经元生长发育的影响。结果ＧＢ及ＮＧＦ能够促进体外培养胚胎大鼠脊髓神经细胞及ＮＳＥ染色阳性　

神经元的存活，促进其细胞及突起的生长。其促进脊髓神经细胞的存活、胞体及突起发育的作用与ＮＧＦ一致，而其促进神经突　

起分化与生长的作用强于ＮＧＦ。结论ＮＧＦ和ＧＢ能促进培养大鼠发育期脊髓神经元存活、分化和生长，并且表现出各自作用　

的特异性。　关键词：神经生长因子；银杏内酯Ｂ；神经元；脊髓；鼠胚　

Ｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅ　Ｂ　ｐｒｏｍｏｔｅｓ　ｔｈｅ　

ｏｆ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｒａｔ　ｓｐｉｎａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　

ｃｏｒｄ　ｎｅｕｒｏｎｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　

ＹＥ　Ｂｅｉ　．ＧＡＯ　Ｊｉａｎ—ｘｉｎ　，ＺＨＡＮＧ　Ｌｉ—ｇｕａｎｇ‘　

（１．Ｓｕｚｈｏｕ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｓｕｚｈｏｕ　２１５００９，Ｊｉａｎｇｓｕ；２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，　

Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎａｎ　２５００１２，Ｓｈａｎｄｏｎｇ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｉｍ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＧＢ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ａｎｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｎｅｕｒｏｎｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｓｐｉｎａｌ　ｃｏｒｄ　ｏｆ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｒａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　

Ｕｓｉｎｇ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｎｅｒｖｅ　ｃｅｌｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ，ｗｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｔｈｅ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ａｎｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｓｐｉｎａｌ　ｃｏｒｄ　ｎｅｕｒｏｎｓ　ｗｉｔｈ　ｐｈａｓｅ－ｃｏｎｔｒａｓｔ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．ＮＳＥ　ｉｍｍｕ－　

ｎｏｈｉｓｔｏｅｈｅｍｉｃａｌ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＧＢ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｐｉｎａｌ　ｃｏｒｄ　ｎｅｕｒｏｎａｌ　ｃｅｌｌｓ　

ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＮＧＦ　ａｎｄ　ＧＢ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ　ｎｅｕｒｏｎｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ｔｈｅｙ　ｐｒｏｍｏｔｅｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ　ａｎｄ　ｎｅｕｒｉｔｅ　ｇｒｏｗｔｈ　

ｏｆ　ｎｅｕｒｏｎｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｓｔａｔｅ．Ｂｏｔｈ　ＮＧＦ　ａｎｄ　ＧＢ　ｃｏｕｌｄ　ｅｎｈａｎｃｅ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃｅｌｌ　ｂｏｄｉｅｓ．Ｔｈｅ　ｎｅｕｒｉｔｅ．１ｅｎｇｔｈ．ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｅｕ１．　

ｔｕｒｅｄ　ｎｅｕｒｏｎｓ　ｗａｓ　ｂｅｔｔｅｒ　ｉｎ　ＧＢ　ｍｅｄｉｕｍ　ｔｈａｎ　ｉｎ　ＮＧＦ　ｍｅｄｉｕｍ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＮＧＦ　ａｎｄ　ＧＢ　ｈａｖｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ａｃｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｅ－　

ｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｓｐｉｎａｌ　ｃｏｒｄ　ｎｅｕｒｏｎｓ．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｎｅｒｖｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ；ｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅ　Ｂ；ｎｅｕｒｏｎｓ；ｓｐｉｎａｌ　ｃｏｒｄ；ｒａｔ　ｅｍｂｒｙｏ　

脊髓损伤是中枢神经系统中的常见疾病，发病率极高。　

脊髓的损伤可以导致广泛的轴突断裂、神经元功能退化甚至　

丧失。结构重建和功能恢复是脊髓损伤后治疗的关键。由于　

脊髓损伤后的再生能力极其有限，同时，对脊髓再生的调控缺　

乏足够的认识，脊髓损伤的治疗成为多年来困扰医学界的一　

大难题。人们普遍认为，脊髓损伤后再生困难很可能是由于　

缺乏适宜的微环境所致。神经营养因子在神经元的存活与发　育生长，功能的维持与调节和损伤修复过程中均发挥了重要　

作用。近年的研究表明，神经营养因子家族在哺乳动物脊髓　

损伤中有着一定的治疗作用，但是，由于神经营养因子不能透　

过血－脑屏障，不能有效到达损伤部位，往往会同时引起较多　

的副作用，因此，将其应用于临床仍受到一定的限制。目前在　

脊髓损伤中的研究重点之一便是寻找可以对脊髓神经元有保　

护作用同时又能够透过血－脑屏障的小分子物质。　

银杏内酯是银杏提取物中的一种活性成分，包括银杏内　酯Ａ、Ｂ、ｃ、Ｍ、Ｊ及白果内酯。研究表明，银杏内酯Ｂ（Ｇｉｎｋｇｏｌ—　

ｉｄｅ　Ｂ，ＧＢ）具有抗炎、抗过敏、抗休克等广泛的生物学作用。　

其除对缺血、缺氧等多种因素引起的神经细胞损伤有保护作　用外，还有促进学习记忆、促进神经系统发育和神经干细胞向　神经元分化，防治早老性痴呆等神经系统退行性疾病等诸多　

重要作用。本研究观察了银杏内酯Ｂ对体外培养胚胎大鼠　

脊髓神经元生长的影响，旨在为进一步研究银杏内酯的神经　

保护作用机制提供可能的作用及机制，为有效治疗脊髓损伤　疾患提供可靠的理论和实验依据。　

１材料和方法　１．１　实验药品　试剂为银杏内酯Ｂ、多聚赖氨酸（ＰＬＬ，　

ＭＷ３０　０００～７０　０００），为ＳＩＧＭＡ公司产品；高糖ＤＭＥＭ干粉　

培养基、ＨＥＰＥＳ和胰蛋白酶（１：２５０）购自ＧＩＢＣＯ公司；胎牛　

血清由杭州四季青生物制品有限公司生产；神经元特异性烯　醇化酶（ＮＳＥ）、即用型ＨＩＧＨ－ＳＡＢＣ免疫组化试剂盒武汉博　

士德生物工程有限公司产品。　１．２　胚胎大鼠脊髓神经元体外培养　培养液由高糖　

ＤＭＥＭ１３．４　ｇ・Ｌ～、ＮａＨＣＯ３２．２　ｇ・Ｌ～、ＨＥＰＥＳ３．５７　ｇ・Ｌ～、　

１％ＩＴＳ添加剂（含０．５　ｇ・Ｌ　胰岛素、０．５　ｇ・Ｌ　转铁蛋白、　

０．５　ｍｇ・Ｌ　硒）、庆大霉素５０　Ｕ・Ｌ　配置而成。　

选孕１４～１７　ｄ　Ｗｉｓｔａｒ大鼠（购自山东大学医学院实验动　物中心），无菌条件下取出胚胎脊髓，置０．１２５％胰蛋白酶溶　

液中，３７℃消化１５　ｍｉｎ，终止消化，反复吹打制成单细胞悬液，　

２００目不锈钢筛网过滤，悬液与台盼蓝按１：１　昆合后计数活　

细胞数，然后将悬液以４．０×１０　・Ｌ　的密度接种到涂有０．１　

ｇ・Ｌ　多聚赖氨酸的２４孔培养板（２４孔板内放有１　ｅｍ的盖　

玻片），置饱和湿度，５％ＣＯ：培养箱中，３７℃静置培养。每周　

换液２次，每次换半液。培养第３　ｄ时以５　ｍｇ・Ｌ　的终质量　

浓度加入阿糖胞苷抑制杂细胞生长。　

实验分３组：（１）单纯对照组：细胞仅在培养液中生长；

　维普资讯 http://www.cqvip.com ・６８６・　安徽医药Ａｎｈｕｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　２００８　Ａｕｇ；１２（８）　

（２）银杏内酯Ｂ组：培养液中同时加入ＧＢ，浓度为４０　ｇ・　

Ｌ～；（３）神经生长因子组：培养液同时加入ＮＧＦ，浓度为５０　

ｇ・Ｌ～。文献报道，ＮＧＦ和ＧＢ显著疗效剂量范围分别为　

１０—１００　ｇ・Ｌ　和１０～１００　ｇ・Ｌ～。本实验使用的ＮＧＦ　

和ＧＢ浓度均在显效剂量范围内；每次实验每组各培养８孔，　

共重复４次。　

１．３活细胞观测　在倒置相差显微镜下，分别于培养第３、　７、１０　ｄ时，每组随机观察３０个视野（２００），对存活神经细胞进　

行计数（胞体饱满，光晕明显，突起均匀光滑的细胞认为是活　

细胞。胞体肿胀或皱缩，形状不规则，空泡化，突起断裂呈串　

珠样甚至消失的细胞认为是受损或死亡的细胞）。求其均数　

以表示神经元的数量。　

１．４细胞生长发育状况的测量　在培养第３、７　ｄ，在倒置相　

差显微镜下每组随机选３０个细胞，测量胞体平均直径，即测　

量胞体长径和长径中点垂直径，计算两者之和平均数的均数，　

以示胞体发育状况。计数每个细胞的突起数并测量最长突起　

长度，所得数值的平均值示细胞突起发育状况。　

１．５免疫组化染色　细胞培养至７　ｄ时，取出盖片，ＰＢＳ冲　

洗２　ｒａｉｎ，４％多聚甲醛固定３０　ｒａｉｎ。ＰＢＳ冲洗５　ｒａｉｎ，３％过氧　化氢室温孵育１０　ｒａｉｎ，ＰＢＳ冲洗５　ｒａｉｎ，１０％正常山羊血清封　

闭５　ｍｌｎ，室温下５　ｒａｉｎ，滴加ＮＳＥ一抗，４＇ｔ３过夜，ＰＢＳ冲洗５　

ｒａｉｎ，滴加生物素化二抗，３７℃作用２０　ｒａｉｎ，ＰＢＳ冲洗５　ｒａｉｎ，滴　

加ＨＩＧＨ．ＳＡＢＣ，３７℃２０　ｒａｉｎ，ＰＢＳ冲洗５　ｒａｉｎ，ＤＡＢ显色，苏木　

素复染，酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。以ＰＢＳ代替　

一抗做空白对照。染色的每张切片在２００倍镜下随机选取　

３０个视野，通过ＳｉｍＰＣＩ图像处理软件系统计算每张切片上　

神经细胞数及ＮＳＥ平均阳性细胞数及其突起数，测量其胞体　

直径、最长突起长度，并进行显微摄影。　１．６统计学处理　所有实验数据均以均数　±Ｓ标准差表　

示，进行方差分析和ＳＮＫ检验。　

２结果　２．１培养的胚胎大鼠脊髓神经细胞的生长发育情况　胚鼠　脊髓神经细胞在培养１２～２４　ｈ后，绝大多数细胞贴壁。贴壁　

细胞多为圆形或椭圆形，未见突起。培养２　ｄ后，贴壁细胞多　

数呈分散生长，神经细胞开始长出突起。培养３～７　ｄ后，神　

经细胞突起分支增多，根据其突起分支数量，分为单极、双极　

和多极神经元，以双极神经元居多。细胞突起增长，有的细胞　突起相互连接，神经细胞胞体呈圆形或椭圆形及多边形不等，　

培养７～１０　ｄ，神经细胞胞体大且饱满，光晕明显。神经突起　

增粗并进一步延长。多极细胞的数量逐渐增多。培养１０　ｄ　

后，神经细胞开始减少并退化，表现为细胞体积缩小，胞浆内　

出现大小不等的空泡，突起萎缩减少。　２．２　ＧＢ和ＮＧＦ对细胞存活的影响培养３　ｄ后，对照组部　

分神经细胞开始退化死亡，７　ｄ后死亡细胞增多。ＧＢ组和　

ＮＧＦ组在培养３　ｄ时偶见死亡细胞，７　ｄ时死亡细胞也增多。　统计学分析，在不同的培养时间ＧＢ组和ＮＧＦ组细胞存活数　

均多于对照组（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０５）。　表１　ＧＢ对细胞存活的影响　

注：与对照组相比．　Ｐ＜０，０５　

２．３　ＮＧＦ和ＧＢ对胚鼠脊髓神经细胞生长发育的影响　培　

养７　ｄ胚鼠脊髓神经细胞生长发育状况见图１。与对照组相　比，ＮＧＦ组（图１Ｂ）和ＧＢ组（图１Ｃ）神经细胞数目明显增多，　

分布均匀，胞体饱满有光晕，以圆形及三角形为主。细胞突起　

较长，以双突起多见。对照组（图１Ａ）细胞密度低，胞体小，以　

梭形为主，突起少且短。总之，ＧＢ和ＮＧＦ处理组细胞生长状　

态明显好于对照组，并且表现出各自作用的特异性。ＮＧＦ组　

与对照组相比，胞体生长的更加大而饱满。ＧＢ组与对照组相　

比，细胞存活率更多，胞体更大；而与ＮＧＦ组相比，突起生长　

的更长。　在培养第３天和第７天进行显微测量，经方差分析及　

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银杏内酯B对大鼠心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

银杏内酯B对大鼠心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

实验研究812017年总第49卷第12期银杏叶为银杏科银杏属多年生落叶乔木银杏

的叶，是我国传统中药品种，《本草纲目》和《中药

志》中均有记载，其味甘、苦、涩，性平，具有益心敛

肺、化湿止泻之功效。现代药学研究发现，萜内酯

类化合物为银杏叶的主要有效成分，包括银杏内酯

A、B、C、M和白果内酯。研究表明银杏内酯为血小

板活化因子（PAF）拮抗剂，活性最强的即为银杏内

酯B（Ginkgolide B，GB），银杏内酯B能够通过抑制

细胞凋亡而对脑缺血再灌注、肝脏缺血再灌注等起

到一定的保护作用[1-3]。但银杏内酯B是否对心肌缺

血再灌注后细胞凋亡具有抑制作用及其作用机制的

研究报道尚不多见。本实验通过制备心肌缺血再灌

注大鼠模型并给予银杏内酯B进行干预治疗，观察

银杏内酯B对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋

亡及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、

Bcl-2相关X蛋白（Bax）、激活型半胱氨酸天冬氨酸

蛋白酶-3（Caspase-3）表达的影响，以期为临床用

药提供依据。1 实验材料

1.1 动物 实验用SD大鼠（清洁级，雄性，鼠龄8周

龄，220～260g）购自河北省实验动物中心，动物合

格证号：SCXK（冀）2013-1-003。饲养环境：温度

22～25℃，湿度55%~60%，通气良好。1.2 药物与试剂 银杏内酯B购自美国Sigma公司

（批号：BAT2016012）。四氮唑（TTC）购自美国

Sigma公司（批号：M2128）；苏木精-尹红（HE）试

剂盒、TUNEL试剂盒购自南京建成生物工程研究

所（批号分别为：170214、160925）；Bcl-2、Bax、激

活型Caspase-3多克隆抗体购自上海碧云天生物技

术有限公司（批号分别为：201701024、20161217、

20170104）。1.3 仪器 酶标仪（WD-2102A型，北京六一生

物科技有限公司）；组织匀浆机（FS-2型，金坛市

盛威实验仪器厂）；多用电泳仪、电泳槽（DYY-

银杏内酯B治疗缺血性脑中风的神经保护作用及机制的研究

银杏内酯B治疗缺血性脑中风的神经保护作用及机制的研究

• 论 著 •12019 年 6 月第 17 卷 第 17 期 中 国 医 药 指 南 银杏内酯B治疗缺血性脑中风的神经保护作用及机制的研究刘 佳 陈少壮* 马 骏 叶岩荣 蔡定芳 符茂东 罗艾君 姜维文（复旦大学附属中山医院厦门医院，福建 厦门 510530）【摘要】目的 验证银杏内酯B（GB）可改善缺血性脑中风远期神经功能缺失，白质修复作用是否参与其中。方法 成年小鼠随机分为Sham组、PBS组和GB组，后两组制作大脑中动脉栓塞模型，并予脑室给药干预。行为学检测神经功能，标记并统计MBP/SMI-32荧光比值以检测髓鞘修复程度。结果 脑室予GB可降低损伤21 d后患侧错步率，延长转棒时间（P<0.01）。标记并计算损伤35 d髓鞘MBP/SMI-32值，GB组较PBS组明显增高（P<0.05）。结论 GB对MCAO小鼠远期白质的修复作用参与了其神经功能的改善作用。【关键词】银杏内酯B；缺血性脑中风；神经功能；白质中图分类号：R743.3 文献标识码：B 文章编号：1671-8194（2019）17-0001-02Ginkgolide B Treatment for Ischemic Stroke Confers Neuroprotection and Its MechanismLIU Jia, CHEN Shao-zhuang, MA Jun, YE Yan-rong, CAI Ding-fang, FU Mao-dong, LUO Ai-jun, JIANG Wei-wen(Xiamen Branch, Zhongshan Hospital, Fudan University, Xiamen 510530, China)[Abstract] Objective To check Ginkgolide B(GB)Treatment for Ischemic Stroke Confers Neuroprotection and its white matter repair Mechanism. Methods Male mice subjected to MCAO after random allocation as sham, PBS or GB group. Latter two groups received intracerebroventricular injection of PBS or GB for 7 days. Neurobehavioral assessments and MBP/SMI-32 was detected. Results Consecutive GB infusion after MCAO obviously promoted recovery of neuronal ability in long-term period (P<0.01). Beneficial up-regulation of MBP/SMI-32 rate was also induced in sharp contrast with PBS group (P<0.05). Conclusion GB-improved white matter repair was involved in neurological recovery after MCAO[Key words] Ginkgolide B; Ischemic stroke; Neuroprotection; White matter缺血性脑中风（IBS）是以脑组织缺血缺氧损伤及相应神经功能病变体征为主要临床表现的脑血管病，多年来临床尚缺乏有效治疗药物[1]。且梗死位置及体积相似的患者长期预后的神经功能恢复却并不一致，这提示神经功能恢复并非仅与灰质相关[2]。白质由神经元轴突、髓磷脂蛋白及多种胶质细胞构成，IBS引起缺血缺氧损伤，继发胶质细胞坏死、髓磷脂蛋白脱失降解，影响神经功能。损伤后，机体产生少突胶质细胞前体细胞（OPCs）迁移至脱髓鞘区域，促进髓鞘再生，但该修复能力有限[3]；而小胶质细胞作为中枢免疫细胞，可被激活成两种表型：M1型释放炎性因子，造成继发性的白质损伤[4]；M2型可吞噬、清理坏死细胞碎片，释放生长因子促进细胞再生和分化成熟[5-6]。银杏叶主要成分银杏内酯B（GB）是活性最强的血小板活化因子（PAF）抑制剂，前人研究主要聚焦于抗炎作用：抗血栓形成[7]；抑制血管内皮细胞氧化应激损伤[8]；抑制急性脑缺血炎性反应，改善急性期神经功能[9]。而脊髓损伤模型中，PAF作为GB的靶点，可诱导原本向少突胶质细胞分化的前体胶质细胞向星性胶质细胞转化[10]，引起反应性星形胶质细胞增生；而阻断PAF及其下游通路后，可明显缩小胶质瘢痕，并改善动物神经功能[11]。这提示GB可能参与了髓鞘修复过程，本文旨在从白质修复角度进一步验证GB的神经保护作用及机制。1 材料与方法1.1 动物及分组：清洁级成年雄性C57/BL6小鼠（上海斯莱克实验动物公司），8~10周龄，24~28 g，随机分为假手术组（sham组），对照组（MCAO+PBS，简称PBS组），实验组（MCAO+GB，简称GB组）。1.2 成年小鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型制备[7]：动物麻醉后切开颈部，颈外动脉处剪一小口，放入线栓（硅胶头直径0.22~0.23 cm），离断颈外动脉，沿颈外动脉、颈内动脉进线栓直至大脑中动脉起始部，检测脑血流确认中动脉血流下降至术前的80%以上，阻断60 min，拔出线栓。1.3 脑室立体定位植入注射套管和渗透压泵：术前1 d，将胶囊式渗透压微量注射泵（alzet®，容积100 μL，泵药速率0.5 μL/h，持续给药 7 d） 装入液体：PBS组为100 μL PBS溶液；GB组为GB浓度为5 ng/μL的100 μL PBS溶液。将微量注射套管（alzet®）与渗透压泵组合。MCAO后1 d使用立体定位仪将微量注射套管垂直向下植入麻醉小鼠损伤对侧脑室区（前囟后0.20 mm，右侧旁开1.00 mm），后将与套管相连的胶囊式渗透压泵埋藏于小鼠背部皮下，生物胶黏合套管与颅骨。为确保泵内药物的完全注射，第9天行气麻下渗透压泵取出+导管封堵术。1.4 行为学实验：错步实验：计数小鼠在含有2 cm×2 cm小栅栏的不锈钢架上右侧肢体错步率（错步数/总步数×100%）。转棒实验：记录小鼠转棒仪器（5 min内加速到40转/分后恒速运转）上的运动时间。共3次，间隔15 min。1.5 组织冰冻切片制备：麻醉小鼠后左心室依次灌注生理盐水、4%PA液后取脑固定，6 h后依次移入梯度蔗糖磷酸缓冲液脱水。使用恒冷箱切片机做冠状切片，厚度为25 μm，-20 ℃原位杂交保护液中保存。1.6 免疫组织化学染色：PBS漂洗脑片；破膜剂孵育20 min；漂洗；含10%山羊血清的PBS孵育1 h封闭抗原；含1%山羊血清的PBST液中加入一抗，室温中孵育1 h，4度冰箱过夜；漂洗；含1%山羊血清的PBST溶液中加入荧光标记的二抗，室温孵育1 h；漂洗；贴片封片。 1.7 数据统计和分析：使用SPSS 16.0软件处理数据，以均数±标准误（x-±s）表示。使用单因数方差分析差异，P<0.05为显著性临界值。2 结 果2.1 MCAO后脑室注射GB可促进远期神经功能恢复：将PBS组、GB组基金项目：复旦大学附属中山医院青年科学基金资助（项目编号：2016ZSQN13）*通讯作者2• 论 著 •June 2019, Vol.17, No.17Guide of China Medicine

银杏叶提取物对神经及心血管系统的调节机制

银杏叶提取物对神经及心血管系统的调节机制

银杏叶提取物对神经及心血管系统的调节机制谢作权,张庆华3

(上海交通大学医学院附属瑞金医院血液研究所,上海　200025)

摘要:银杏叶提取物是从银杏叶中提取的复方组分,其组分中含多种化学单体,这些成分可在神经

及心血管系统等部位发挥一定的调节效应,具有改善神经及心血管系统疾病的作用。银杏叶提取

物是目前许多国家常用的神经及心血管疾病治疗药物,同时也是在国际上得到认可的中药之一,这

主要得益于药物严格的质控及深入的机制研究。本文选取银杏叶提取物这一传统中药,介绍其对

神经及心血管系统调节作用的分子机制,初步反映目前国际化中药的研究状况。

关键词:银杏叶提取物;银杏黄酮苷;银杏内酯;阿尔茨海默病

中图分类号:R969　文献标识码:A　文章编号:100120971(2007)0120035204

RegulationmechanismsofGinkgobilobaleafextract

innervousandcardiovascularsystem

XIEZuo2quan,ZHANGQing2hua(InstituteofHematology,RuijinHospital,SchoolofMedicine,ShanghaiJiaotongUniversity,Shanghai200025,China)

Abstract:GinkgobilobaleafextractcontainscomplexconstituentsextractedfromGinkgobilobaleaves,

whichcontainmultiplechemicalmonomers1Theseconstituentscaninteractwithnervousandcardiovascu2

larsystemtobringregulatoryeffectintofullplay,andimprovenervousandcardiovascularsystemdisea2

银杏叶提取物对大鼠创伤后脑细胞的保护作用

银杏叶提取物对大鼠创伤后脑细胞的保护作用

银杏叶提取物对大鼠创伤后脑细胞的保护作用

但建新;秦龙;万敬枝;胡四宝

【期刊名称】《中国临床神经外科杂志》

【年(卷),期】2008(13)1

【摘 要】目的探讨银杏内酯对创伤性脑损伤(TBI)后神经细胞及其功能的保护作用。方法按自由落体撞击法造成TBI模型,通过木条平衡实验评价伤后大鼠的神经功能恢复情况,并在伤后不同时间点观察病理改变,同时检测脑组织中丙二醛(MDA)、NO和水含量的改变。结果与假损伤组比,伤后第一天大鼠脑组织内MDA和NO的含量显著升高(P<0.01),不同时间点脑组织的含水量显著增加(P<0.01),伤后1周内大鼠完成木条平衡作业的能力明显受损(P<0.05)。经银杏内酯治疗后,TBI大鼠神经功能明显改善,病理改变减轻,脑组织含水量及MDA、NO的含量明显降低。结论银杏内酯可以促进颅脑损伤后神经功能的恢复,可能与早期抗氧化应激、降低NO的产生、减轻脑水肿、保护脑组织有关。

【总页数】4页(P35-38)

【关键词】创伤性脑损伤;银杏内酯;神经功能;大鼠

【作 者】但建新;秦龙;万敬枝;胡四宝

【作者单位】咸宁学院医学院外科教研室;咸宁学院医学院附属一医院神经外科

【正文语种】中 文

【中图分类】R615.15;R285.5

【相关文献】 1.大鼠颅脑创伤后脑红蛋白的动态变化及对神经元的保护作用 [J], 楼亨通;贾玉;陈雪民;吕晓敢;曹玉平

2.Iloprost对大鼠脑创伤后脑保护作用的实验研究 [J], 张文坡;张可成

3.脑苷肌肽注射液对大鼠创伤性脑损伤后脑保护作用 [J], 谭亮;马康;李荣伟;唐俊;陈前伟;刘昕;冯华

4.红细胞在大鼠创伤性脑内出血后脑水肿中的作用 [J], 史保中;赵勇刚;骆东辉;刘劲芳;徐立新;刘运生

5.右美托咪定后处理对大鼠创伤性脑损伤后脑保护作用及其机制 [J], 冀翔宇;张丽娜;刘然;齐立杰;王黎;周赞宫

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