亚甲蓝光化学法对血液及血制品中淋巴细胞及病毒的灭活效果及其机理

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研究亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆有效成分的影响

留取血浆标本各１ｍＬ，置专用冰箱待测。１．２试剂与仪器费森尤斯传统血袋；中保康一次性使用病
毒灭活装置配套用输血过滤器（ＺＢＫＭＢ０３）；中保康医用血浆病毒灭活柜（ＺＢＫ — ＹＢＭ一０１）；大容量离心机（日立ＣＲ７）；无菌
何锐洪
（广东中山市中心血站，广东中山５２８４０３）
摘要：目的探讨亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆主要质量指标的影响及亚甲蓝残留情况。方法分别于病毒灭活前和病毒灭活后无菌留取血浆标本，对凝血因子Ｖ、 Ⅷ、 Ⅸ、血浆纤维蛋白原（Ｆｇ）、血浆总蛋白（ＴＰ）的含量及病毒灭活血浆亚甲蓝残留量进行测定。结果亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆蛋白浓度无明显影响，而凝血因子、纤维蛋白原含量均有一定程度的降低，
接驳机（费森尤斯）；半自动生化分析仪（上海科华）；总蛋白试
自动生化仪上测定，亚甲蓝残留量采用分光光度法，严格按仪器及试剂说明书操作。１．４统计学处理用配对ｔ检验。
１材料与方法
１．３．１新鲜血浆制备
三联采血袋采血后，３ｈ内的血液经３
８ பைடு நூலகம் ０ｒ／ｍｉｎ，５ｍｉｎ两次离心，分离出新鲜血浆。

血液成分单采治疗技术在血液病治疗中的应用

去白细胞红细胞的临床应用
去白细胞红细胞的临床应用范围非常广：血液疾病的患者肿瘤患者的输血小儿科的贫血患者老年贫血患者外科手术前后输血有输血反应的内科贫血病人妇产科输血血液透析的贫血病人代替悬浮红细胞用于所有贫血、手术病人(有条件)
辐照血
辐照血：用适当剂量的γ射线，灭活具有细胞免疫活性的T淋巴细胞，但不损伤红细胞、血小板的功能，以预防输血相关的移植物抗宿主病的发生。
血小板单采
•
血小板增多症可以用羟基脲或阿那格雷治
疗，在有显著临床症状需要尽快减少血小板计数
时、或者患者不能耐受药物治疗时，可以选择血
小板单采。
• 每次采集通常可以减少一半的血小板量，但实际计数情况不能达到，是由于分离时血小板从增大
的脾脏内释放出。
• 血小板单采可以减轻心肌梗死、脑缺血、肺栓塞和胃肠道出血的临床表现，但是能否预防血栓和
治疗性血液成分单采不良反应
• 此外，低钙血症还可能是钙与置换液中的白蛋白结合所致，或者是输入的供者血浆中所含的枸橼酸盐所致。轻症者口服补充钙剂即可，症状持续或严重者，须静脉滴注补充钙剂；若不及时治疗，可以产生严重的症状：如肌肉收缩、手足抽搐和癫痫发作。由于TA可能需要大量的血液制品，增加了感染性疾病的风险，如HIV、人类T淋巴细胞病毒、肝炎病毒以及细菌和寄生虫的传播；非感染性疾病的风险，如溶血、发热、变态反应、同种异体免疫的过敏反应、输血相关急性肺损伤等。
高危型高铁血红蛋白血症。
去白细胞红细胞
• 血液采集后的6小时内将全血或悬浮红细胞中 99.9%以上的白细胞过滤清除掉，可有效地避免系列免疫性输血不良反应的发生。
少白或去白细胞红细胞临床意义
• 同种异体免疫引起的输血不良反应90%以上是由血液中白细胞成分引起：非溶血性输血发热反应输血介导的免疫功能抑制急性肺损伤血小板输注无效输血相关的移植物抗宿主病

亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒的临床应用进展

第44 卷第 5 期 2023 年 5 月安徽医学Anhui Medical Journal亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒的临床应用进展陈秀兰杨君王红［摘要］　输血安全面临免疫反应和感染风险两大管控点。

保障血制品的安全是血液管理的核心，也是临床用血的基本要求。

选择合适的病毒灭活技术是降低经血传播病毒风险的重要手段。

理想的病毒灭活方法应能有效地杀灭和去除病原体，并最大限度地减少对血制品有效成分的损伤。

亚甲蓝光化学法是一种采用光敏剂与光照相结合的技术，能灭活多种病毒，保障血浆制品的安全，具有广阔的应用前景。

［关键词］亚甲蓝光化学法；血浆病毒；输血安全；抗体筛查doi:10.3969/j.issn.1000-0399.2023.05.028依据《中华人民共和国献血法》［1］要求，输血前必须进行乙型肝炎病毒（hepatitis B virus ，HBV ）、丙型肝炎病毒（hepatitis C virus ，HCV ）、人免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus ，HIV ）、梅毒螺旋体抗体血清学等常规筛查工作。

病毒窗口期的存在、未知病毒的潜在威胁、试剂灵敏度的限制、人为的差错等都使输血感染的风险难以完全避免。

血浆病毒灭活技术的出现，极大地减少了上述感染风险的发生。

本文对临床应用较广泛的亚甲蓝光化学法（methylene blue photochemis‑try ，MB-P ）灭活血浆病毒的技术原理、应用现状、不足之处及新进展等做一综述。

1　MB-P 灭活血浆病毒的技术原理亚甲蓝是一种芳香杂环化合物，同时具有氧化性和还原性，临床常用作化学指示剂、药物、染料等。

亚甲蓝结合可见光照射处理是一种用于新鲜冰冻血浆（fresh frozen plasma ，FFP ）病原体灭活的光动力方法，旨在增加血浆输注的安全性，减少经血传播病毒的风险。

MB-P 的基本原理是在FFP 中使用可溶性亚甲蓝与病毒核酸中的G-C 碱基结合，而经可见光照射激活的亚甲蓝可产生活性氧（单线态氧、自由基等），进而破坏核酸和某些蛋白，使病毒无法复制，失去传染性［2］。

亚甲蓝光化学法灭活血液中HBV的初步探讨

ｂｏｄＬＵＸａｇｕＦＮＲｉａｇＨＩｉｉＬＮＤｎ－ｎＨＵＮＧＰｎｅＵＮＱｎ．ＴｅＴｉｆｌｏＩｉｎ－，Ａｕ－ｎ，ＥＺ— ｎＩｏｇｊ，Ａｉ－，ＹＡｉｆｆｑｇ，ｕｉｆｇｈｈｒ－ｄＡｉｉｅＨｓｔＵＹｔｅｎｖｓｙｕｎｚｏ６０ｈｎ；ｏｒｐｎｉｇａｔｏｆｌｔｏｉｌｆＳＮａ— ｎＵｉｒｔ，Ｇａｇｈｕ５０３，ＣｉａＣｒｓｏｄｎｕｈｒａｄｐａｏｓｅｉ１ｅ
患者３０例，抽取其静脉血并使用亚甲蓝光化学法灭活ＨＶ，以５０ＩｏＬ亚甲蓝灭活病毒１５Ｂ０ｍｌ￣／．ｈ后评价灭活效果，并检测灭活前后红细胞功能。结果：患者血液中ＨＢＮＶＤＡ拷贝数由灭活前
的（．９ｘ１．３×１。ｏｉｓｍ减少至灭活后的（．６×１ ±５０１１ ±１２００）ｃｐｅ／ｌ３４０．１×１ｃｐｅ／ｌ（０）ｏｉｍＰｓ
新医学２１００年８月第４卷第８期ｌ
论著
亚甲蓝光化学法灭活血液中ＨＢ的初步探讨Ｖ
中山大学附属第三医院（１６０刘相富。范蕊芳黑子清。林东军。黄品婕袁５０３），［摘要］青
目的：研究亚甲蓝光化学法对ＨＶ的灭活效果。方法：选择慢性乙型病毒性肝炎Ｂ
影响。
［关键词］乙型肝炎病毒；血液；光化学法；亚甲蓝
ＡｎｅｐｒｍｅａｌｓｕｄｈｅｅｅｔｏｅｈｌｎｌｐｔｃｅｉｔｙｔｎａｔｖａｅｅａｉｉＢｉｕｎｘｅｉｎｔｔｙｏｎｔｆｃｆｍｔｙｅｅｂｕｅｈｏｏｈｍｓｒｏｉｃｉｔｈｐｔｔｓｖｒｓｉ

亚甲蓝病毒灭活血浆的质量测定

医用病毒灭活箱的应用
当前的医用病毒灭活箱是用于光照灭活时的专用设备，它集光源、温控、机械摆动等装置于一身，可以根据需要设定照射强度、照射温度、照射时间和摆动频率等诸多条件，使用方便。
光源选择：荧光灯
（1）单位时间内照射所释放的热量较低；（2）达到相同灭活效果的照射时间最短；（3）波长接600~700nm。
2004年，世界卫生组织将亚甲蓝光化学血浆病毒灭活技术列入 “人血浆制品病毒灭活或去除指南”，欧盟和英国也纳入“输血指南”。
2007年乌鲁木齐市血液中心引进该技术, 截至2014年底使用亚甲蓝光化学病毒灭活血浆13万单位以上。
一次性使用血浆病毒灭活输血过滤器
Depasse 最早提出了 “过滤器的应用”，极大地简化和改进了 MB-P 法的操作，为 MB-P 法由实验室走向临床迈出了重要一步。
主要检测设备：固相萃取富集装置
19
亚甲蓝残留量检测方法
使用Waters Oasis小柱萃取血浆中的亚甲蓝
使用前的Waters小柱
1、用6ml甲醇活化Waters小柱 2、加入6ml供试血浆
亚甲蓝残留量检测方法
将萃取出的亚甲蓝洗脱后进行比色
Waters小柱萃取出血浆中的亚甲蓝
3、萃取亚甲蓝 4、用30％甲醇6mL清洗 5、用含1％乙酸的甲醇溶液2ml洗脱 6、洗脱液离心（3500rpm/10min） 7、用含1％乙酸的甲醇溶液作试剂
辛酸处理法低pH孵放法
以上方法多用于从原料血浆生产血浆蛋白制品，均需要将大量的不同人份的血浆混合处理，不但容易增加某些不能被灭活病原体（如朊病毒prion等）的扩散风险，且处理难度大，费用高。
亚甲蓝光化学法能对单人份血浆进行病毒灭活，适用于采供血机构对临床用血浆的病毒灭活处理，更适合于我国的国情和临床实际应用。

三种方法灭活血浆病毒的研究

维普资讯
・
２・４
ｏｕｒｌｎｉａｌＴｒｎｓｕｓｏｎａｎａｌｏｆＣｉｃａｆｉｎｄＬａｂａｔｙＭｅｃｎｅ，ｐ．２０ｏｒｏｒｄｉｉＳｅ０２，ｏ４，ｏ１３ＶｌＮ
主细胞用于培养和活力检测，ｅｏ细胞株为ＶＳｖｒＶ
病毒的滴度下降６ｌＴＣＩ达到灭活效果。ｇＤ
表１三种方法对ＦＰ中模型病毒的Ｆ
灭活效果（ＴＣＤｏＩｇＩ５）
的宿主细胞用于培养和活力检测。病毒液和含处将
浆而引起的传染病是个亟待解决的问题。了加强除
筛选献血者的质量控制外，临床用的血液制品进对行病毒灭活处理是一种最有效的方法。为此我们研究比较了二种效果较为可靠的血浆病毒灭活方法，以期为选择一种适合于我国国情的病毒灭活方法
理的血浆按１：１０比例混合后按上述方法处理并
检测病毒活力。病毒滴定按终点稀释法，胞病变细效应（Ｅ）Ｋａｂｒ公式计算ＴＣＤ５。ＣＰ按ｒｅＩ０２样品制备及处理随机取采血后６ｈ血液，分
２００２年９月第４卷第３期
・２５・
讨
论
பைடு நூலகம்
方法对血浆中蛋白质都有轻微影响，其是对血浆尤中的凝血因子有一定影响，白质损失一般在２蛋５以内，与国内外报道相符［，血浆的临床应用这５对］

亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆技术及应用

亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆技术及应用亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆技术及应用马静瑶徐元宏【摘要】随着医学技术的发展。

血液的安全性越来越受到重视。

为提高输血安全性,在血液检测项目增加的同时,血液检测技术也在不断改进。

但这些都无法完全杜绝输血传播病毒的可能性。

近年来发展起来的亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活技术对于提高输血安全性有很大潜力,本文就该技术的研究进展,以及在我国血站开展后的应用情况进行综述。

【关键词】亚甲蓝光化学病毒灭活血浆【文献标识码】【文章编号】??一【中国分类号】.输血既能够治疗疾病,又可能引起经血传播的相关病灭活病毒过程中,病毒核酸是最主要的靶结构,其灭活能力毒性感染。

目前主要通过严格筛选无偿献血者以及对血液依赖于亚甲蓝与病毒核酸的结合口。

亚甲蓝表面携带正电进行病毒检测这两个途径来控制经血传播病毒性感染的发荷.可以嵌入/中。

特别是与病毒核酸的带负电生。

随着科技的发展.血液检测项目逐渐增加。

检测技术不荷的碱基对相结合。

在一项亚甲蓝诱导组氨酸与断改进。

但血液输注的风险仍然存在.原因主要有:一是检交联的试验中发现.亚甲蓝的嵌合作用也很重要】.测方法的局限性。

即使将核酸检测技术应用于血液在光照下,亚甲蓝吸收光能.从基态澈活为单线态筛查中,仍避免不了试剂灵敏度的限制和“窗口期”感染 ,。

可再回到基态或成为更稳定的三线激活态的问题;二是检测项目的局限性.目前常规检测的病毒种类,可通过衰变缓慢回到,或通过型、型仅为,、/.而血浆中还有可能携带未列入途径发生反应。

型途径是指把激发能转移到邻近分检测范围的人类细胞白血病病毒、肝炎病毒子.通过电子转移或夺氢发生氧化还原反应。

如与邻近水分、、,、巨细胞病毒、病毒子反应形成超氧化物、与细胞膜分子反应形成脂过氧化物.等,以及一些未知病毒,上述未经检查的病毒可通过或与包膜氨基脂及多肤作用,从而导致病原体的损伤。

输血途径感染人体。

因此,仅依赖传统的途径尚不能完全型途径发生在有氧环境下,分为快反应和慢反应两种。

评估病毒灭活血浆两种制备方式的应用效果

评估病毒灭活血浆两种制备方式的应用效果【摘要】目的：分析病毒灭活血浆两种制备方式的应用效果。

方法：选取中心血站无偿献血的血液标本60份，时间为2020年4月-2022年4月，随机分为A组和B组，各30份。

分离新鲜血浆后制备病毒灭活血浆，A组采用亚甲蓝光化学法制备，B组采用巴斯德液态湿热法制备。

比较两组血浆病毒灭活后的各项指标水平。

结果：在指标水平上，A组总蛋白（59.75±3.47）g/L、纤维蛋白原（2.57±0.46）g/L、凝血因子Ⅷ（0.86±0.33）IU/ml，分别高于B组的（50.16±2.84）g/L、（1.93±0.32）g/L、（0.68±0.16）IU/ml，P＜0.05。

结论：在病毒灭活血浆的制备过程中，采用亚甲蓝光化学法制备，对血浆成分影响更小，应用效果更为理想。

【关键词】病毒灭活血浆；制备方法；应用效果在临床抢救及治疗当中，经常需要应用输血的方法，并且对于血液需求量也比较高。

为了保证输血的安全性，减少交叉感染的可能，应重点加强血液管理措施，提升血液筛查技术，降低感染性输血风险。

不过，为了进一步提高用血安全，减少输血参与分线，需要将血浆制品进行血液筛查之后，再利用灭菌工艺将参与病原体彻底杀灭，形成合格的病毒灭活血浆，满足安全输血的要求[1]。

目前常用的病毒灭活血浆制备方法，主要由于亚甲蓝光化学法、巴斯德液态湿热法等方法，对于血浆成分可能产生不同影响。

基于此，本文选取中心血站无偿献血的血液标本60份，时间为2020年4月-2022年4月，分析了病毒灭活血浆两种制备方式的应用效果。

1资料与方法1.1一般资料选取中心血站无偿献血的血液标本60份，时间为2020年4月-2022年4月，随机分为A组和B组，各30份。

所有血液标本均经初步检查合格，用于分离新鲜血浆后制备病毒灭活血浆。

1.2方法1.2.1仪器设备材料所用仪器设备和材料主要包括：凝血因子Ⅷ促凝活性检测试剂盒、总蛋白试剂盒、纤维蛋白原检测试剂盒、亚甲蓝、一次性使用病毒灭活输血器材、一次性使用血液病毒灭活剂吸附过滤器、CA-500血凝仪、PUZS-300全自动生化分析仪、ZBK-YBM-01医用血浆病毒灭活柜等。

医学毕业论文--亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆袋及其照射柜的血浆HBV病毒灭活效果

医学毕业论文--亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆袋及其照射柜的血浆HBV病毒灭活效果亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆袋及其照射柜的血浆HBV病毒灭活效果【关键词】亚甲蓝光化学法血液检测病毒性疾病成分输血在临床上应用日益广泛,尤其是血浆用量日益增大,输血安全口益叐到人们重视,对血浆癿病毒灭活是保障输血安全癿措施之一。

在血浆癿病毒灭活各方法丨,亚甲蓝光化学法癿效果已被证实,其病毒滴度减少程度不所用癿光照强度和亚甲蓝(MB)浓度有直接关系。

亚甲蓝光化学法对经血传播癿HBV、HCV、HIV等脂质包膜病毒均有较好癿灭活效果。

但亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒癿效果叐到各因素如光照时间、光照强度、血浆量及亚甲蓝浓度等影响。

于是在应用亚甲蓝光化学法设计相关产品时会叐到上述各种因素癿制约。

目前将此法应用到血浆袋癿报道极少。

本研究采用以亚甲蓝光化学法设计癿血浆病毒灭活剂过滤血浆袋及配套使用癿血液照射柜,将亚甲蓝光化学法灭活病毒过程丨癿各步骤规范化、整体化、标准化,消除了病毒灭活过程丨隐含癿各种干扰因素,从而找到了一条将亚甲蓝光化学法应用于血浆袋癿有效途径。

1材料不方法1.1材料不仪器病毒灭活剂(亚甲蓝)过滤血浆袋(WG-BM100,5套,生产批号:20060321,威海高分了材料公司);血液照射柜WG-BM(照度50000Lux,威海高分子材料公司);威海市丨心血站采集已鉴定为乙1肝阳性病人癿血液,幵分离血浆(每袋100ml,共5袋);荧光定量PCR检测仪(型号码ABIprism-7000);HBV-DNA荧光定量PCR榆测试剂(由丨山大学达安基因股分有限公司提供,批号20060412);Eppendorf管(EP管)。

1.2方法1.2.1标本病毒灭活将装有已鉴定为乙肝阳性病人血浆癿血浆袋浸入75%癿酒精溶液30min进行表面消毒后,移至超净工作台内,叏样200ul于EP管内保存,作为光照前癿病毒标本。

在超净工作台内,将留样管封口,同时打开病毒灭活剂过滤血浆袋,用插袋针刺破装有血浆袋插口,将血.浆袋高搁,使袋内癿血浆流经加药器完全进入病毒灭活剂过滤血浆袋,打开血液照射柜制冷开关,使血液照射仪内癿温度显示为4摄氏度。

亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆质量的影响分析

９２・临床研究・
会分娩的，需转至有ＮＩＣＵ的医院，＞３４周的顺其自然，不作常规保
胎，终止妊娠的方式可以根据胎儿出生后存活的可能性，考虑剖宫产或是更换引产方式。４预防措施
Ｊｕｌｙ２０１３，Ｖｏ１．１１，Ｎｏ．２０
化学法病毒灭活对血浆质量的影响，以更好地保证血液质量。本文总结性回顾了广州血液中ｔ￣，２０１１年３１至２．０１２年３ｙｊ之间，每月随机
的时间，血浆会先流经ＭＢ＃Ｉ＇￣ＪＩ元件，再流入光照袋，并将其进行均匀混合，使之充分反应。再把已经混合了ＭＢ的血浆，且需要将光照袋和过滤器置于病毒灭箱内，采用光照额的方式杀灭血浆中的病毒。
胎妊娠、破膜孕周等都会对期待时间有一定的影响］，从而医生在工
［Ｊ］．中国实用妇科与产科杂志，２０１０，７（１２）：６９ — ７０．
亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆质量的影响分析
徐国胜
（广州血液中心，广东广州５１００９５）
１资料与方法１．１一股资料在２０１１年３７］至２０１２年３月中，每个月均随机抽取血浆５袋，每袋血浆为２００ｍＬ，总数量为６０袋，经过统计，其中Ａ型２０袋，男女各１０
袋；Ｂ型２０袋，男女各１Ｏ袋；Ｏ型血浆１０袋，男女各５袋；ＡＢ型１０袋，

亚甲蓝光化学法灭活病毒血浆在临床应用中的相关研究

亚甲蓝光化学法灭活病毒血浆在临床应用中的相关研究发表时间：2016-02-24T10:08:21.737Z 来源：《健康世界》2015年23期作者：狄剑辉1 范军1 刘安飞2 刘素珍1 冯亚青1[导读] 1宁夏石嘴山市中心血站2宁夏第五人民医院检验科 MB-P病毒灭活血浆可以提高血浆输注安全性。

建议临床应用MB-P病毒灭活血浆应在原使用剂量基础上增加20%的用量，以保证临床治疗效果。

1宁夏石嘴山市中心血站 753000；2宁夏第五人民医院检验科摘要：目的探讨监测血浆制品在亚甲蓝光化学法（MB-P）灭活血浆病毒之前和病毒灭活之后，血浆蛋白、凝血因子的变化。

监测血浆制品在亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒滤除亚甲蓝之后，血浆中仍残留亚甲蓝的浓度值，为临床应用病毒灭活血浆进行治疗提供剂量使用依据。

方法对195份全血分离制备的血浆进行MB-P 毒灭活，灭活前后留样，制成新鲜冰冻血浆后融化，测定总蛋白、维蛋白原的含量，同时计算有效成分回收率。

结果MB-P病毒灭活后新鲜冰冻血浆中总蛋白含量无明显变化，纤维蛋白原含量有所降低，差异无统计学意义，总蛋白的回收率为97.3%，纤维蛋白原回收率为82.6；本实验亚甲蓝加入浓度为（1.12+0.20）Umol/L，基本满足了病毒灭活的要求；结论MB-P病毒灭活血浆可以提高血浆输注安全性。

建议临床应用MB-P病毒灭活血浆应在原使用剂量基础上增加20%的用量，以保证临床治疗效果。

关键词：亚甲蓝光化学法；病毒灭活；血浆蛋白；凝血因子输血技术是现代医学不可缺少的重要治疗手段，但存在可感染输血传播病毒性疾病的风险，目前的血液检测由于受检测项目、检测技术等因素的影响，无法完全阻断经血传播疾病的发生；血液成分中传播病毒危险性最重要的成分是血浆，因此对血浆进行病毒灭活成为保障输血安全的主要措施之一。

血液成分病毒灭活技术作为阻断经血传播病毒的最有效手段而受到关注，亚甲蓝光化学法（MB-P）病毒灭活血浆是目前唯一获准用于临床的光化学血浆病毒灭活技术[1]，本文对MB-P病毒灭活前后的新鲜冰冻血浆中的有效成分进行对比分析，同时探讨病毒灭活血浆输注的安全性，现将应用情况报告如下。

亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆成分的影响

亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆成分的影响作者：王艳芳来源：《健康周刊》2018年第02期【摘要】血浆病毒灭活是指利用物理化学手段对血浆进行处理，使病毒蛋白的结构受到损害，这样血浆中的病毒就会失去活性，变得没有致病和繁殖能力。

临床输血是救治病患的必要手段，但是血浆在运输和存储的过程中有一定程度的病毒传播风险，尽管在采集鲜血时会对各个步骤进行严密控制，但是病毒感染血液的情况确实无法完全避免。

亚甲蓝光化学法是一种用于单袋血液病毒灭活的技术，是近几年研发的新型血浆病毒灭活技术，具有安全、高效的特点，不过也存在一些未解决的弊端，比如缺少灭活后血浆的各项质控指标。

为了强化亚甲蓝光化学法的作用，需要对其血浆病毒灭活对血浆成分的影响进行研究，通过临床分析，得出有效结论，在下一步的工作中科学的使用亚甲蓝光化学法。

【关键词】亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活血浆成分一、亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒研究的必要性亚甲蓝又称为亚甲基蓝和次甲蓝，是一种芳香杂环化合物，通常被用作化学领域，亚甲蓝的水溶液在氧化性环境中会变成蓝色，在氨水等还原剂中会变成无色状态，根据其不同的性状可进行不同的功用。

从化合物信息上看亚甲蓝又是一种解毒药，能将高铁还原型蛋白还原成血红蛋白。

在临床治疗中，血液输注是必要环节，它能通过各个采血机构传递来的血液帮助重症危急病患缓解痛苦。

但是由于各种检测方法、检测试剂等原因，无法做到血液处理的健全，因此，选择合适的病毒灭活方法非常重要。

经过十几年的发展，血浆病毒灭活技术有了很大进步，但是也存在不少争议。

一方面通过血浆病毒灭活有效控制各种病毒性细菌和艾滋病毒，另一方面该技术还在不断研发中，需要更精确的论证和更有力的证据说明它的有效性，所以亚甲蓝光化学法对血浆病毒灭活问题的处理还有待商榷和进步。

因此对其的研究具有十分重要的价值意义，笔者结合自己的工作经验，在临床实验的基础上对亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆成分的影响进行了研究。

血液制品病毒灭活／去除方法概述

血液制品病毒灭活／去除方法概述迟妍妍;王斐;张惠;臧恒昌【摘要】血液制品属于临床上广泛使用的一类生物制品，由于是以人的血液为原料，病毒的安全性问题一直是广为关注的问题。

为了提高血液制品的安全性，生产过程中应该对可能存在的病毒进行有效的灭活／去除。

本文介绍了血液制品中病毒灭活／去除的方法，并对相关方法的有效性和可靠性进行了评价。

【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2014(033)004【总页数】3页(P227-229)【关键词】血液制品;病毒灭活;病毒去除【作者】迟妍妍;王斐;张惠;臧恒昌【作者单位】;;;;【正文语种】中文【中图分类】R373血液制品［1］是指各种人血浆蛋白制品，包括人血白蛋白、静脉注射用人免疫球蛋白、人凝血因子、人凝血酶原复合物等，是临床上广泛使用的一类重要的生物制品。

血液制品原料是人类血浆，而目前已知经血液制品传染的病毒［2］主要有人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、巨细胞病毒(CMV)、人体T细胞白血病病毒(HTLV)和细小病毒B19等。

为保证血液制品安全性，主要采取三个有效措施［2，3］:①对献血者的精密筛选，确保血源的安全性;②对每人份血液/血浆进行病毒的系统检测;③生产过程中进行的有效的病毒灭活/去除。

因此，为提高血液制品安全性，病毒灭活/去除方法［4］的选择具有重要意义。

1 化学法1.1 有机溶剂/表面活性剂(S/D)法早在20世纪80年代中期S/D法开始发展应用，目前依然是血液制品中一种核心的病毒灭活方法。

此方法的基本原理是:有机溶剂和非离子表面活性剂的混合物能够破坏脂包膜病毒的类脂膜，从而使类脂从病毒表面脱落，使病毒失去黏附和感染细胞的能力。

Roberts［5］对S/D法用于高纯度的凝血因子进行病毒灭活的有效性进行了详尽的考察。

结果显示，以0.3%的TNBP和1%的Triton－X100为S/D试剂，在22℃条件下处理30min后可以对凝血因子制品中的牛痘病毒、单纯疱疹病毒、辛德毕斯病毒等模拟脂包膜病毒进行有效的灭活，证实了S/D法用于脂包膜病毒灭活的稳健性和有效性。

亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活前后血浆成分的变化

亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活前后血浆成分的变化王飞;路志浩;古醒辉;王桂萍【期刊名称】《临床输血与检验》【年(卷),期】2010(2)2【摘要】目的探讨亚甲蓝光化学法(methylene blue photochemistry, MB-P)病毒灭活前后血浆有效成分及残留白细胞含量的变化,为临床应用病毒灭活血浆进行治疗提供剂量使用依据.方法对152份全血分离制备的血浆进行MB-P病毒灭活,灭活前后留样,制成新鲜冰冻血浆后融化,测定纤维蛋白原、Ⅷ因子、总蛋白及残留白细胞的含量,同时计算有效成分回收率.结果经MB-P病毒灭活后新鲜冰冻血浆中Ⅷ因子和纤维蛋白原含量明显降低,差异有统计学意义;但总蛋白含量无明显变化,Ⅷ因子回收率达到80.8%,纤维蛋白原回收率为74.9%;残留白细胞计数由(3.0±2.1)×106/L下降到(7.4±1.4)×104/L(n=30),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MB-P病毒灭活血浆可以提高血浆输注安全性.建议临床应用MB-P病毒灭活血浆应在原使用剂量基础上增加25%的用量,以保证临床治疗效果.【总页数】4页(P97-100)【作者】王飞;路志浩;古醒辉;王桂萍【作者单位】518035,广东省深圳市血液中心;淄博中保康医疗器具有限公司;518035,广东省深圳市血液中心;518035,广东省深圳市血液中心【正文语种】中文【中图分类】R457.1【相关文献】1.亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆的制备应用探讨 [J], 高炳谏;廖小凤;甘洁红2.研究亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆有效成分的影响 [J], 何锐洪3.亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆成分及白细胞残留量的影响 [J], 王超英4.亚甲蓝光化学法病毒灭活对新鲜冰冻血浆有效成分的影响 [J], 黄象娟;黄象艳5.亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活对血浆成分的影响 [J], 肖乐宇;肖声宇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

血液净化吸附剂CAA去除血浆亚甲蓝对人血浆正常成分的影响

血液净化吸附剂CAA去除血浆亚甲蓝对人血浆正常成分的影
响
马育;夏云;杨晓兰;于明安
【期刊名称】《生物医学工程学杂志》
【年(卷),期】2003(20)2
【摘要】亚甲蓝光处理法可以灭活血浆中多种病毒 ,随后去除亚甲蓝可以减少其产生的副作用。

本研究考查了交联琼脂包嵌凹凸棒珠 CAA去除血浆亚甲蓝后对人血浆中部分成分的影响。

通过测定对照试样和过柱血浆中的部分生化指标、凝血指标及阳离子浓度变化 ,评价了 CAA的生物医学性能。

血浆经 CAA作用前后生化指标、钾、钠离子浓度指标几乎无变化 ;钙镁离子浓度的增加和血氨浓度降低明显 ;活化
部分凝血酶原时间有明显延长 (由 4 2 s至 5 3s)。

结果表明 ,CAA吸附剂保留了血浆的大多数重要性质。

【总页数】3页(P311-313)
【关键词】血液净化吸附剂;CAA;血浆;亚甲蓝;副作用;生物医学性能
【作者】马育;夏云;杨晓兰;于明安
【作者单位】重庆医科大学基础医学院化学教研室;重庆医科大学临床学院检验科【正文语种】中文
【中图分类】TQ424
【相关文献】
1.亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆成分的影响 [J], 李雯瑛
2.亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆成分的影响 [J], 王艳芳
3.亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆成分的影响观察 [J], 刘利俊
4.几种吸附剂对血浆中亚甲蓝的去除研究 [J], 马育;杨晓兰;汤先觉;景淑华
5.磺化聚醚砜对光敏剂-亚甲蓝的吸附去除研究Ⅱ．磺化聚醚砜对血浆中亚甲蓝的吸附去除研究 [J], 田猛;孙晓青;钟锐;黄小华;黄方;孙树东;乐以伦
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血浆病毒灭活的原理及必要性

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中中医药咨讯
Ｊ（ｈａｌｏｆＣｈｉｎａｒｌａｄｉｔｉｍｍｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅ（１ｉ（．ｉｎｅＩｎｆｏｒｍａＩｉ¨¨
２０１１年１月中第３卷第２期
１ａｎｕａｒｖ２Ｏｌ１ＶＯＩ．３Ｎｏ．２
．
血浆病毒灭活的原理及必要性
种病毒是国内外公认的血液制品病毒灭活有效性的指示病毒，其巾ＶＳＶ是ＨＩＶ的模型病毒，Ｓｉｎｄｂｉｓ是ＨＣＶ的模型病毒，均为ＲＮＡ脂质包膜病毒。）病毒滴度下降＞６１０ｇＴＣＩＤ５０，同时也表明血浆主要凝血子（Ｖ、Ⅷ 、Ⅸ）的同收率＞８Ｏ％，白球蛋白的回收牢＞９Ｏ％，ｍ浆蛋白的免疫原性无变化。Ｉ
３．２灭活病毒法甲蓝／光照病毒灭活法是在１ｍ浓度下，液体血浆加亚
甲蓝经２００００～５００００ＬＵＸ的荧光照射３０分钟可以灭活大多脂质包膜病毒，包括ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ病毒，但对非脂质包膜病毒如ＨＡＶ、Ｂ１９杀灭效果不那想。大量实验数据证明，用、甲兰光化学处卿血浆可完仝灭活血浆内所含的ＶＳＶ和Ｓｉｎｄｂｉｓ病毒。（这两
蓝（ＭＢ）光化学疗法血浆病毒灭活技术其原理是，亚甲蓝（ＭＢ）作为一种光敏剂，与可见光协同作用产牛单态氮，后者可作用于核酸链上的鸟嘌呤，引起脱嘌呤和核酸链的断裂，使ＤＮＡ复制受阻，从而达到杀灭病毒的效果．

亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆的质量控制

关键词：甲蓝；化学病毒灭活；浆；量控制亚光血质中图分类号：４６１９Ｒ４．１文献标识码：Ｂ文章编号：６１８４（０７２ — ４８０１７ —３８２０）４２９—２
亚甲蓝光化学（Ｅ法灭活人血浆中的病毒效果已被证Ｍ）实，注病毒灭活血浆成为当前国内外预防输注血浆制品传播输传染病的有效措施，ＭＢ法病毒灭活血浆技术，被推广应用已于全国部分血站。但迄今为止，于ＭＢ法病毒灭活血浆的制对
摘要：目的探讨亚甲蓝光化学（）ＭＢ法病毒灭活血浆在制备过程中质量控制的方法和标准。方法（）立ＭＢ法病毒１建
灭活血浆制备操作规程；２用血凝仪检测病毒灭活前后血浆内Ｆ、ｉ（） Ⅷ Ｆｂ的含量（一１）（）ｎ６；３电子秤称量病毒灭活前后血浆容量（一２）（）比例抽查并进行细菌培养，察输注后的不良反应。结果病毒灭活后血浆内Ｆ、ｉ量和血浆容量与灭活ｎ５；４１观 Ⅷ Ｆｂ含前比较差异有统计学意义（＜Ｏ０）但Ｆｂ血浆容量仍符合国家质量标准要求；培养检测未见细菌生长；床输注后无不良Ｐ５，ｉ、血临反应。结论ＭＢ法病毒灭活血浆制备过程中，需要进行全过程质量控制，格无菌操作。严

亚甲蓝光化学法对血浆中细菌的灭活效果初步观察

止，没有一个方法对于血液制品的细菌检测是十全十美的。还无论选择什么方法，会有输血相关细菌感染的危险存在。总
光照时间３ｎ０ｍｉ。将光照后的血浆通过病毒灭活过滤器滤除亚甲蓝，后无菌留取３份１然ＯｍＬ血浆分别为样管Ｂ、２１Ｂ、Ｂ。另一份血浆不经亚甲蓝光照灭活但经过滤器过滤，理３处
悬液。
标准菌株用自带的培养液复苏，接放直
采集的１～２少量血液已被证明可以显著减少细菌污Ｏ０ｍＩ的染血液的危险＿。但是上述措施只能减少而不是杜绝血液的２］
细菌污染。目前检测血液制品细菌污染的方法有很多，革兰染色有
ｄｇｅｆｂａｔｒａｏｔｍｉａｉｎｏｏｅｂｏｄｃｌｃｉｎｓｎｅｒｅｏｃｅｉｌｃｎａｎｔｏｆｗｈｌ— ｌｏｏｌｔｏｓｕｉｇｅ
渐下降，射３ｎ后，型肝炎病毒Ｄ照０ｍｉ乙ＮＡ浓度下降为零，
表１各样管检测结果
１１材料．
随机抽取苏州市中心血站无偿献血全血标本２Ｏ
份（０４０毫升／）制备成新鲜血浆（０份，２０毫升／）份。１２仪器与试剂标准菌株大肠埃希菌（Ｃ５２）表皮．ＡＴＣ２９２、

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亚甲蓝光化学法对血液及血制品中淋巴细胞及病毒的灭活效果及其
机理
【摘要】：背景输血是现代医学不可或缺的治疗手段,且随着医学诊疗技术的发展以及社会老龄化程度的提高,临床上对血液的需求持续增加,输血的重要性愈加彰显。

然而,输血亦可能发生不良反应,严重的输血不良反应甚至可给受血者带来灾难性的后果。

受血者遭遇输血不良反应的可能性称为输血风险,由于输血治疗涉及临床各科,覆盖范围广、其个案累计绝对数相当可观,因此,如何在确保临床输血疗效的同时防范输血风险一直是世界卫生组织、各国卫生行政部门和医学界共同关注的热点问题。

输血风险包括感染性风险及非感染性风险两大类。

感染性风险由可通过输血传播的病原微生物构成,其中包括人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)等多种病毒以及细菌和原虫等。

非感染性输血风险则主要由免疫因素引起的输血不良反应所构成。

输血相关的移植物抗宿主病(TA-GVHD)则是后果最为严重的非感染性风险之一,它是由输注了一定数量的具有免疫活性的异体淋巴细胞所引起的致命性输血并发症,目前尚无有效的治疗措施,一旦罹患,死亡率高达90%以上。

血液成分的病原体灭活技术是阻断输血传播病原体,保障输血安全的重要防线。

亚甲蓝光化学法是可用于单袋血浆病毒灭活的病原体灭活技术,已在我国和部分欧洲国家应用于临床,其有效性及安全性已得到证实。

亚甲蓝是一种带正电荷的小分子化合物,可穿过病毒的包膜与核酸结合,并在吸收可见
光提供的能量后发生光化学反应,介导核酸损伤,阻止核酸复制从而导致病原体的灭活。

根据这一原理,理论上该方法也同样适用于淋巴细胞的灭活从而达到预防TA-GVHD的目的。

该原理还为利用核酸扩增技术评价亚甲蓝病毒灭活效果奠定理论基础。

目的1)研究亚甲蓝光化学法对人外周血淋巴细胞在细胞增殖及细胞因子分泌方面的作用,并对淋巴细胞灭活机理进行探讨。

2)进一步深入研究亚甲蓝光化学法对病毒的灭活效果及其机理,建立荧光定量PCR技术对亚甲蓝病毒灭活效果的评价方法,并通过无感染性的可度量核酸破坏程度的质控品建立更为安全、有效的病毒灭活效果评价体系。

方法1)向人外周血淋巴细胞中加入终浓度3μM的亚甲蓝,将混匀后的细胞悬液转移至PVC储血袋内并置于4℃病毒灭活箱中,在照射强度为35000lux的荧光光源下照射50min,作为实验组。

将淋巴细胞在辐射剂量为25Gy的γ射线下辐照作为辐照组。

将处理前后的样品进行淋巴细胞形态、存活趋势、增殖抑制率、细胞因子分泌以及细胞凋亡等检测,分析亚甲蓝光化学作用对淋巴细胞的灭活效果及其机理。

2)亚甲蓝光化学法对Sindbis 病毒的灭活处理条件如下：a.将病毒悬液于避光条件下加入亚甲蓝,使其终浓度为1μmol/L,将病毒悬液转移至储血袋内并置于4℃病毒灭活照射箱中,在光照强度为15000lux的荧光光源下照射,分别于光照0、1、3、5、7、10、20、30min时取样检测；b.将病毒悬液于避光条件下加入亚甲蓝,使其终浓度为1μmol/L,将病毒悬液转移至储血袋内并置于4℃病毒灭活照射箱中,分别于光照强度为0lux、2000lux、50001ux、10000lux、20000lux、30000lux和40000lux的荧光光源下
照射5min后取样检测;c.将病毒悬液于避光条件下加入亚甲蓝,使其终浓度分别为0μmol/L、0.1μmol/L0.5μmol/L、0.7μmol/L、1.0¨mol/L、2.0¨mol/L、3.0μmol/L,将病毒悬液转移至储血袋内并置于4℃病毒灭活照射箱中,在光照强度为15000lux的荧光光源下照射5min后取样检测。

每组实验重复3次。

所有样品均平行检测其病毒残余滴度并通过定量PCR检测样品中病毒核酸含量,分析病毒感染性的下降与其核酸损伤之间的相关性。

向HCV血浆、热力预灭活的Sindbis病毒悬液及HCV病毒样颗粒中加入终浓度1μM的亚甲蓝并将样品转移至储血袋,于4℃病毒灭活箱中在光照强度为35000lux的荧光光源下光照30min,于不同时间点取样并通过定量PCR检测样品中核酸含量,探讨定量PCR技术评价亚甲蓝光化学病毒灭活效果的可行性,同时分析HCV血浆、热力预灭活的Sindbis病毒及HCV病毒样颗粒作为度量病毒核酸破坏程度质控品的可行性。

结果1)亚甲蓝光化学法能够抑制淋巴细胞增殖及其细胞因子分泌。

荧光染色及细胞存活趋势结果显示实验组活性细胞数显著低于对照组及辐照组。

实验组淋巴细胞在PHA刺激下其增殖集落明显小于其他处理组；PHA刺激后3d、4d、5d的增殖抑制率分别为89.31%、100%和94.39%,均高于辐照组。

经PHA刺激后的实验组细胞IFN-γ、IL-1β、IL-4、IL-6和IL-8的分泌量显著低于PHA刺激后的对照组,TNF-α、IL-2和IL-12的分泌量与对照组没有显著性差异；经PHA刺激后的实验组细胞除IL-12外,其余细胞因子的分泌量均显著低于PHA刺激后的辐照组细胞；除TNF-α和IL-8外,PHA刺激的实验组细胞细胞因子分泌量与未经PHA刺激之间无显
著性差异。

亚甲蓝光化学作用后的淋巴细胞未检测到caspase-3、caspase-6的蛋白活性以及DNALadder、未出现明显的磷脂酰丝氨酸外翻,推断亚甲蓝光化学作用导致了淋巴细胞的无序死亡。

2)在上述a、b、c三种亚甲蓝光化学灭活处理Sindbis病毒的条件下,Sindbis病毒的灭活效果最终均达 6.0LogTCID50以上,且病毒核酸含量的下降与病毒感染性的消失均具有线性相关性(R20.94),方差分析显示两者间具有极显著的线性相关性(F0.01)。

HCV血浆、热力预灭活的Sindbis 病毒均与活性Sindbis病毒具有相似的核酸动力学曲线及扩增抑制曲线；HCV病毒样颗粒与HCV血浆具有相似的核酸动力学曲线及扩增抑制曲线,且两者的核酸下降量呈现极显著的线性相关性(R20.99)。

结论1)亚甲蓝光化学作用可以有效灭活淋巴细胞,抑制其细胞增殖和细胞因子的分泌(国内首次报道)。

2)亚甲蓝光化学作用可导致淋巴细胞的无序死亡(首次发现)。

3)亚甲蓝光化学法造成了病毒核酸的损伤,且通过病毒核酸含量下降与病毒感染性消失的平行观察证实核酸是亚甲蓝光化学病毒灭活的主要作用靶点,并为荧光定量PCR技术评价亚甲蓝光化学病毒灭活效果提供依据(国际首次报道,相关论文已发表于PhotochemistryandPhotobiology杂志)。

4)热力预灭活的Sindbis病毒以及HCV病毒样颗粒有望发展成为可度量病毒核酸破坏程度的质控品而应用于亚甲蓝病毒灭活效果的评价体系(国际首次提出)。

【关键词】：亚甲蓝光化学法淋巴细胞灭活输血相关的移植物抗宿主病亚甲蓝光化学作用靶点病毒灭活效果评价荧光定量PCR技术质控品
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R457
【目录】：论文摘要6-9ABSTRACT9-15第一部分亚甲蓝光化学法对人外周血淋巴细胞的灭活效果及其机制15-70第一章综述:血液成分病原体灭活技术的研究进展15-41第二章实验研究41-70第一节亚甲蓝光化学法对人外周血淋巴细胞的作用效果41-59材料41-44方法44-47结果47-53讨论53-56参考文献56-59第二节亚甲蓝光化学法对人外周血淋巴细胞的作用机制59-70材料59-60方法60-61结果61-66讨论66-68参考文献68-70第二部分亚甲蓝光化学法对病毒的作用机理及其效果评价70-120第一章综述:核酸扩增技术评价血液病毒灭活效果的研究进展70-80第二章实验研究80-120第一节亚甲蓝光化学法对病毒的作用机理80-107材料80-81方法81-89结果89-101讨论101-105参考文献105-107第二节亚甲蓝光化学法病毒灭活的效果评价107-120材料107-108方法108-110结果110-115讨论115-118参考文献118-120结论120-121附录121-122致谢122 本论文购买请联系页眉网站。