高效液相色谱法测定发酵醪中的γ-氨基丁酸

高效液相色谱法测定莜麦米酒中γ-氨基丁酸刘文勃;易好诚;李苏红;徐杰;王俊伟;张雷【摘要】建立紫外—高效液相色谱测定莜麦米酒中的γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric acid,GABA)含量的分析方法.利用碱性条件下,GABA可与邻苯二甲醛(OPA)发生衍生化反应,生成具有较强紫外吸收的衍生物.采用紫外—高效液相色谱仪检测,色谱条件:Eclipse XDB-C18分析柱(5μm,4.6×150 mm),以50 mmol/L 的乙酸钠(pH6.8)—甲醇—四氢呋喃(THF,A相,82∶ 17∶1；B相,22∶ 77∶1,V/V)为流动相进行梯度洗脱,可检测到GABA在0.04～0.5 g/L范围内与GABA峰面积的线性关系良好R2=0.9985,样品衍生时间1 min最佳,平均回收率为99.5％,精密度相对标准偏差(RSD)为1.6％,重复性(RSD)为0.66％,最低检出限为0.0254 g/L.方法简单快捷、重复性好、灵敏度高,可用于莜麦、莜麦发酵酒等中GABA含量测定.【期刊名称】《粮油食品科技》【年(卷),期】2013(021)001【总页数】4页(P67-70)【关键词】莜麦米酒;γ-氨基丁酸;紫外检测;高效液相色谱【作者】刘文勃;易好诚;李苏红;徐杰;王俊伟;张雷【作者单位】沈阳师范大学粮食学院,辽宁沈阳 110034;沈阳师范大学粮食学院,辽宁沈阳 110034;沈阳师范大学粮食学院,辽宁沈阳 110034;沈阳师范大学粮食学院,辽宁沈阳 110034;沈阳师范大学粮食学院,辽宁沈阳 110034;沈阳师范大学粮食学院,辽宁沈阳 110034【正文语种】中文【中图分类】TS207.3γ－氨基丁酸(γ－Aminobutyric acid，简称GABA)是一种非蛋白质氨基酸，为哺乳动物中枢神经系统内重要的氨基酸类神经递质［1］，分布非常广泛，在动物、植物、微生物中均有GABA存在。

HPLC法测定发芽糙米中γ-氨基丁酸含量试验赵海波【摘要】建立测定γ-氨基丁酸的高效液相色谱分析方法,测定不同蒸煮发芽糙米中的γ-氨基丁酸含量.试验结果表明:与未蒸煮相比,蒸煮20 min的发芽糙米中的γ-氨基丁酸含量最高,增加率为66.30%.【期刊名称】《农业科技与装备》【年(卷),期】2017(000)003【总页数】2页(P50-51)【关键词】高效液相色谱;γ-氨基丁酸;发芽糙米;检测波长【作者】赵海波【作者单位】辽宁省分析科学研究院,辽宁省标准化体系建设工程技术研究中心,沈阳 110015【正文语种】中文【中图分类】S511发芽糙米是将糙米发芽至一定芽长得到的芽体，相当于将糙米活化，其芽体具有旺盛的生命活力。

发芽后的糙米不仅品质有所提升，而且含有多种生物活性物质，如植酸、γ－氨基丁酸、γ－谷维素等。

γ－氨基丁酸又名氨酪酸，具有改善神经机能、增强肝功能、防止动脉硬化、调节肾功能、预防肥胖等多种生理活性能。

利用高效液相色谱建立γ－氨基丁酸快速分析方法，完成色谱条件的优化并对不同蒸煮时间发芽糙米中γ－氨基丁酸的含量进行测定。

1.1 仪器与设备Agilent 1260 高效液相色谱仪；AR224CN 型分析天平：奥豪斯仪器（上海）有限公司；pHS－3CW 型 pH计：上海般特仪器制造有限公司；SL－250A 高速多功能粉碎机：浙江省永康市松青五金厂；TDL－5－A 低速台式大容量离心机：上海安亭有限公司。

1.2 液相色谱工作条件色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 （250 mm×4.6 mm×5 μm）；流动相 B：纯乙腈；流动相 D：浓度为 0.025 mol／L，pH 为5.90±0.05 的乙酸钠溶液；紫外检测器：发射波长 332 nm；柱温：40 ℃；进样量：10 μL；流速：0.5 mL ／min；梯度洗脱程序如表 1 所示。

γ-氨基丁酸（GABA）的分布及测定方法周青生物化工2110805057一、分布：γ-氨基丁酸在动、植物体内都有分布，在动物体内，GABA主要分布于神经组织中，在哺乳动物的脑组织内分布最为集中，其含量是单胺类含量的1000倍，而在外围器官中含量很少。

在植物体内，GABA是细胞自由氨基酸库的重要组分，胞液中有几种构型，可形成类似脯氨酸的环状结构。

高等植物组织中GABA含量通常在0.3～32.5μmol／g之间，超过许多蛋白质类氨基酸的含量。

在一些与根瘤菌共生固氮植物的根瘤中，GABA以结合态形式存在，苜蓿中结合态形式的GABA高达干重的6.6%[1]。

除此之外，GABA还存在于以下植物中，见表一。

①薄层色谱：原理：用一定波长的光照射在经薄层层析后的层析板上，对具有吸收或能产生荧光的层析斑点进行扫描，用反射法或透射法测定吸收的强度，以检测其浓度。

方法：展开剂是正丁醇：醋酸：水=4：1：1。

分别吸取5μl γ-氨基丁酸标准品溶液和样品洗脱液，点于自制的硅胶薄层板上，以正丁醇：醋酸：水体积比为4：1：1为展开剂展开，取出晾干，用体积分数0.2％茚三酮乙醇溶液显色，105℃烘数分钟，直至获最大斑点，用Camag TLC scanner 3 扫描仪扫描。

扫描条件为：反射式双波长锯齿扫描,扫描波长λS=515nm,参比波长λR=680nm，狭缝50×0.45 mm。

黄怀生用最小二乘法对标准溶液点样量和色谱峰面积值进行回归分析，其相关系数可达到0.99以上[14]。

黄美娥[15]用此方法测得得蕨菜叶、茎中γ-氨基丁酸的质量分数分别为0.319％、0．141％。

采用双波长扫描法[16]，可以避免分离度不佳的其他氨基酸的相互干扰；二、双波长扫描可以排除背景干扰使基线平直；三、能提高灵敏度。

②纸电泳法：原理：纸上电泳法，以纸为支持剂，使带电的γ-氨基丁酸于纸上在外电场作用下定向移动，从而达到分离目的。

方法：取上清液用于点样于滤纸上，以标准GABA溶液做对照，在电压300V、室温条件下电泳60min，电泳缓冲液为吡啶-冰醋酸混合溶液[吡啶：冰醋酸：蒸馏水(体积比)=2：2：121，pH4.7]。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910835848.9(22)申请日 2019.09.05(71)申请人 广东乐尔康生物科技股份有限公司地址 515342 广东省揭阳市普宁市梅塘镇远光村04610038地号(72)发明人 周银泉　(74)专利代理机构 广州粤高专利商标代理有限公司 44102代理人 林晓霖　陈伟贤(51)Int.Cl.G01N 30/02(2006.01)G01N 30/36(2006.01)G01N 30/86(2006.01)(54)发明名称一种采用高效液相快速检测γ-氨基丁酸含量的方法(57)摘要本发明公开一种采用高效液相快速检测γ-氨基丁酸含量的方法，色谱条件与系统适用性实验如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：0.2-0.5%三乙胺水溶液；检测波长：205-211nm；流动相流速：0.3～0.7mL/min；理论塔板数按γ-氨基丁酸计算不低于5000。

本发明采用高效液相色谱直接进样，紫外检测器检测，不需要柱前衍生，达到快速检测的目的，又能够排除反应液中其它杂质(氨基酸)的干扰，可满足γ-氨基丁酸生产中快速检测的需要。

权利要求书1页 说明书4页 附图3页CN 112444573 A 2021.03.05C N 112444573A1.一种采用高效液相快速检测γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于，色谱条件与系统适用性实验如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：0.2-0.5%三乙胺水溶液；检测波长：205-211nm；流动相流速：0.3～0.7mL/min；理论塔板数按γ-氨基丁酸计算不低于5000。

2.根据权利要求1所述的一种采用高效液相快速检测γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于，所述三乙胺水溶液浓度为0.3%。

3.根据权利要求1所述的一种采用高效液相快速检测γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于，所述检测波长为210nm。