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台盼蓝染色实验原理
台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。
活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。
分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水（10mg/ml)。
实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。
通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。
因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和。
台盼蓝是组织和中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。
注意也有台盼蓝拒染现象。
台盼蓝染色后，通过显微镜下或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞进行比较精确的定量。
台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。
实验步骤：
1、配制4%台盼蓝：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至
100ml，用滤纸过滤，4℃保存。
使用时用PBS稀释至0.4 %。
2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。
3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
（终浓度0.04%）
4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。
5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而拒染呈无色透明状。
6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%
注意：
1.保存条件：室温保存。
2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
For personal use only in study and research; not forcommercial use台盼蓝染色实验原理台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。
活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。
分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水（10mg/ml)。
实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。
通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。
因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。
台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。
注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。
台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。
实验步骤：1、配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。
使用时用PBS稀释至0.4 %。
2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。
3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
（终浓度0.04%）4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。
5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。
6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%注意：1.保存条件：室温保存。
2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途。
For personal use only in study and research; not for commercial use.Nur für den persönlichen für Studien, Forschung, zu kommerziellen Zwecken verwendet werden.Pour l 'étude et la recherche uniquement à des fins personnelles; pas à des fins commerciales.толькодля людей, которые используются для обучения, исследований и не должны использоваться в коммерческих целях.以下无正文仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途。
For personal use only in study and research; not forcommercial use台盼蓝染色实验原理台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。
活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。
分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水（10mg/ml)。
实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。
通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。
因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。
台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。
注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。
台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。
实验步骤：1、配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。
使用时用PBS稀释至0.4 %。
2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。
3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
（终浓度0.04%）4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。
5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。
6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%注意：1.保存条件：室温保存。
2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途。
For personal use only in study and research; not for commercial use.Nur für den persönlichen für Studien, Forschung, zu kommerziellen Zwecken verwendet werden.Pour l 'étude et la recherche uniquement à des fins personnelles; pas à des fins commerciales.толькодля людей, которые используются для обучения, исследований и не должны использоваться в коммерческих целях.以下无正文仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途。
实验一死活细胞鉴别目的要求学习并掌握死活细胞鉴别的原理及方法。
实验原理死活细胞鉴别有许多不同的方法，其中最常用方法是染色排除法。
其原理是：许多酸性染料不容易穿过活细胞的质膜进入胞内，使其着色，以此来鉴别死活细胞。
也可以用荧光排除法来鉴别，其原理是：由于活细胞内有较强的酯酶活性，可将二丙酸酯荧光素分解出来，从而使细胞发出强烈的黄绿色荧光。
而死亡的细胞，由于酯酶活性丧失，不能分解二丙酸酯荧光素，则完全没有荧光，从而区别死活细胞。
实验用品（1）器材：显微镜、荧光显微镜、离心机。
（2）试剂：1％台盼蓝溶液（生理盐水配制）、0.05％苯胺黑Hanks溶液、0.02％赤藓红B 染液、0.15％伊红Y染液（生理盐水配制）、丙酮Ph5～6的生理盐水、0.65mol/L甘露醇、二丙酸酯荧光素染液（取二丙酸酯荧光素10mg溶于5ml丙酮中，将此溶液逐滴加入5ml生理盐水或0.65mol/L甘露醇溶液中直至出现永久性乳白色沉淀为止）。
（3）材料：培养细胞。
方法台盼蓝（Trypan Blue）法。
（1）试剂：用生理盐水配成0.4％台盼蓝染液。
（2）染色制片：取0.5ml细胞悬液放入干净试管中，加入约0.1ml（1～2滴）染液，混合，2min后立即制成临时装片，镜检。
（3）结果：死细胞染成蓝色，活细胞不着色。
根据下式求细胞活力：细胞总数－死细胞数细胞存活率（％）＝×100％细胞总数观察结果生活力强的细胞能发出强烈的黄绿色荧光；生活力弱的细胞发出荧光也较弱；死亡细胞则无荧光。
作业书写实验报告，计算所测细胞成活率。
思考题细胞活力检测有何用途？。
台盼蓝染色实验原理
台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。
活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。
分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水（10mg/ml)。
实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。
通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。
因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和。
台盼蓝是组织和中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。
注意也有台盼蓝拒染现象。
台盼蓝染色后，通过显微镜下或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞进行比较精确的定量。
台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。
实验步骤：
1、配制4%台盼蓝：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至
100ml，用滤纸过滤，4℃保存。
使用时用PBS稀释至0.4 %。
2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。
3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
（终浓度0.04%）
4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。
5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而拒染呈无色透明状。
6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%
注意：
1.保存条件：室温保存。
2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
台盼蓝染色法
材料：
1. 显微镜、玻片、盖玻片、滴管；
2. 试剂：0.4%台盼蓝染液；
3. 台盼蓝（Trypan blue）：0.4g；
4. 生理盐水：100ml；
操作步骤：
1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液；
2. 用0.5%胰蛋白酶：0.2%EDTA=1：1混合液来消化培养的贴壁细胞；
3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液；
4. 将待染色细胞稀释至所需浓度（方法及浓度范围与细胞计数相同）；
5. 每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴，室温下染3—5min；
6. 染色过的细胞材料，取一滴细胞悬液置玻片上，加盖玻片后放高倍镜下观察；
7. 死亡的细胞着浅蓝色并膨大，无光泽。
活细胞不着色并保持正常形态，有光泽；
8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目；
9. 统计未染色细胞。
可按公式计算出细胞活率。
细胞活率（%）=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100。
注意事项：
1. 染色时间不能太长，否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色，使监测结果偏低；
2. 另可结合细胞计数方法，同时进行细胞计数和活力检测。
