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罗氏_荧光定量PCR仪_Lightcycler480使用说明书-中文版

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羅氏應用科學L i g h t C y c l e r®480儀器操作手冊軟體版本1.0修訂史前言頁一.修訂史 (9)二.聯繫地址 (9)三.一致性申明 (10)四.保證 (10)五.商標 (10)六.用途 (11)七L i g h t C y c l e r®許可聲明 (11)八.軟體許可協定 (12)九.導言 (16)十.L i g h t C y c l e r®480儀器操作手冊的用法 (16)十一.本手冊中的約定 (17)文字約定 (17)符號 (17)十二.警告和預防 (19)操作要求 (19)一般預防 (20)電氣安全 (21)十三.儀器處理 (22)A概述頁1.介紹 (25)2.L i g h t C y c l e r®480規格 (26)2.1一般規格 (26)2.2環境參數 (26)2.3介面 (27)2.4樣本容量 (27)2.5運輸 (27)2.6數據站 (28)3.檢測單位規格 (29)3.1激發 (29)3.2探測器 (29)3.3濾光器 (29)4.溫度阻斷迴圈控制器規格 (30)5.多孔板條碼掃描器規格 (31)6.手提式條碼掃描器規格 (32)前言3修訂史4L i g h t C y c l e r ®480 儀器操作手冊-操作手冊1.0版B系統描述 頁1. 系統包裝...........................................................35 2. 安裝 ..............................................................36 2.1 安裝要求.............................................................36 2.2 空間和電源要求.......................................................36 2.3 環境要求.............................................................38 2.4 L i g h t C y c l e r ® 480 儀器安裝 ...........................................39 3. 系統描述...........................................................43 3.1 L i g h t C y c l e r ® 480儀器描述.............................................43 3.2 熱迴圈器單元描述.................................................... 47 3.3 檢測單元描述.........................................................50 3.4 檢測通道描述.........................................................52 3.5 L i g h t C y c l e r ® 480儀器耗材.............................................53 3.6 L i g h t C y c l e r ® 480儀器P C R 試劑 .........................................55 3.7 所需的額外設備.......................................................56 3.8 L i g h t C y c l e r ® 480 儀器即時P C R 檢測格式 ............................ ..56 3.8.1 概述...............................................................56 3.8.2 使用S Y B R 綠色I 染料監控P C R ..........................................58 3.8.3 使用水解探針監控P C R ...............................................60 3.8.4 使用H y b P r o b e 探針監控P C R ............................................62 3.8.5 使用S i m p l e P r o b e 探針基因分型. (64)C操作頁1. 介紹................................................................................................67 2. 系統的啟動.......................................................................................68 3. 準備和開始L i g h t C y c l e r ® 480儀器的運轉.............................................69 4. 更換L i g h t C y c l e r ® 480熱迴圈器 (72)修訂史D軟體頁前言5修訂史6L i g h t C y c l e r ®480 儀器操作手冊-操作手冊1.0版1. L i g h t C y c l e r ® 480基礎軟體概述.........................................................81 1.1 L i g h t C y c l e r ® 480基礎軟體用戶介面通則..........................................81 1.2 L i g h t C y c l e r ® 480基礎軟體的啟動..................................82 1.3 L i g h t C y c l e r ® 480基礎軟體主視窗...................................................85 1.4 選擇與流覽特性...........................................................................90 1.4.1 流覽器....................................................................................90 1.4.2 查詢表....................................................................................94 1.4.3 樣品選擇與樣品表.....................................................................98 1.5 導出與導入檔與物件.....................................................................100 2. 試驗的編程與運行........................................................................109 2.1 試驗的編程....................................................................................110 2.1.1 設定檢測格式...........................................................................112 2.1.2 定義程式與溫度靶.....................................................................113 2.1.3 定制線上資料顯示.....................................................................117 2.2 試驗運行.......................................................................................118 2.3 輸入樣品資訊.................................................................................120 3. 試驗分析概述..............................................................................126 3.1 分析步驟概述.................................................................................127 3.2 使用分析視窗.................................................................................129 3.2.1 選擇濾光器組合與顏色補償.........................................................130 3.2.2 在分析中處理樣品.....................................................................131 3.2.3 使用圖表.................................................................................132 3.2.4 添加分析注解...........................................................................132 3.2.5 對分析進行刪除或重新命名.........................................................133 4. 進行絕對定量分析........................................................................134 4.1樣品交叉點................................................... ..............................135 4.2 關於標準曲線的作用........................................................................136 4.3 提供標準曲線.................................................................................138 4.4 使用絕對定量方法...........................................................................140 5. 進行溶解曲線分析........................................................................144 5.1 使用溶解曲線特徵進行D N A 產物及其基因型的鑒定.................................144 5.1.1 定義溶解程式...........................................................................145 5.1.2 溶解溫度分析的內容..................................................................145 5.2 進行溶解溫度調用分析..................................................................146 6. 進行顏色補償分析........................................................................152 6.1 進行顏色補償試驗...........................................................................153 7. 使用範本與巨集..............................................................................156 7.1 製作與使用範本..............................................................................156 7.2 製作與使用宏.................................................................................156 8. 使用子功能表.................................................................................162 9. 使用圖表....................................................................................164 9.1 列印，導出與複製圖表.....................................................................165 9.2 進行變焦和變位元以查看圖表詳細內容 (169)D軟體 頁10. 生成報告 (171)修訂史11.使用選項工作 (174)11.1使用圖解選項 (175)11.1.1設定圖表表頭與標籤類型 (176)11.1.2設定螢光圖表內容 (177)11.1.3設定標準曲線圖表的外觀 (178)11.1.4設定溫度圖表的內容與外觀 (179)11.1.5覆蓋默認的圖表選項 (180)11.2使用樣品選項 (183)11.2.1更改所有試驗的樣品選項 (183)11.2.2重新設置默認的圖表選項 (185)11.3生成一個單獨的選項專案並將其設為默認 (187)11.4設定用戶選項 (188)12.管理工具 (189)12.1管理用戶訪問 (190)12.1.1用戶帳戶 (190)12.1.2組 (191)12.3.3角色 (191)12.1.4高級用戶角色的特權 (192)12.1.5本地管理員角色的特權 (193)12.1.6用戶訪問物件 (194)12.1.7管理用戶、組和角色 (197)12.1.8使用角色 (202)12.1.9更改密碼 (203)12.2報告的設置 (203)12.3.資料庫資訊 (204)12.4.儀器 (207)12.4.1定義儀器 (209)12.5檢測格式 (210)13.診斷工具 (213)14.L i g h t C y c l e r®480基礎軟體的安裝與維護 (214)14.1初始啟動步驟 (215)14.2L i g h t C y c l e r®480基礎軟體的安裝 (216)14.3保存一個已有的資料庫和安裝附加資料庫 (219)14.4登錄到不同資料庫 (223)14.5用一個資料庫檔替換一個已存在的同名資料庫 (224)14.6在L i g h t C y c l e r®480基礎軟體中整合一個恢復的資料庫檔使之成為附加資料庫 (225)14.7刪除L i g h t C y c l e r®480的基礎軟體 (228)14.8F L E X n e t許可證管理員 (229)前言7修訂史8L i g h t C y c l e r ®480 儀器操作手冊-操作手冊1.0版E 維護頁1. 常規維護.................................................. .........237 2. 儀器清潔操作指南 ...................................................237 2.1 常規清潔.................................................. ........ 237 2.2 預防性維護.................................................. ...... 237 3 更換氙氣燈................................................. ........238 4 更換風道灰塵篩檢程式......................................... ........242 5 更換保險絲 ..................................................... (244)F 附錄頁1. 訂購資訊.......................................................................................251 2. 索引................................... .. (253)前言修訂史前言9一、修訂史版本修訂時間1.02005年9月© 版權2005， R o c h e D i a g n o s t i c s G m b H . 版權所有.本手冊資訊可以在未經通知的情況下變更。

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LightCycler480_系统操作快速指南2.1

LightCycler480_系统操作快速指南2.1

罗氏应用科学部/分子诊断部rLightCycler® 480实时荧光定量PCR系统操作快速指南 V 2.0说明及版本历史1.基本界面及图标1.1.Overview界面1.2.New Experiment 界面1.3.Navigator 界面2.PCR及结果分析2.1.开机2.2.运行一次PCR实验2.2.1.PCR程序的设定2.2.2.样本的编辑2.2.3.程序的运行2.3.实验结果的分析2.3.1.绝对定量分析2.3.2.相对定量分析2.3.3.基因分型分析2.3.4.Tm calling2.4.结果报告3.数据管理及模块化操作3.1.历史数据的处理3.2.应用Template和Macros简化实验流程4.用户管理5.日常维护6.Troubleshooting本指南用于本指南用于简要说明简要说明LightCycler® 480 系统软件系统软件的界面及操作要点的界面及操作要点的界面及操作要点，，对初学者了解系统软件有所帮助统软件有所帮助。

但荧光定量PCR 是一个相对较为复杂和精确的定量方法是一个相对较为复杂和精确的定量方法，，要求使用者对仪器仪器、、软件和实验设计有比较系统深入的了解软件和实验设计有比较系统深入的了解，，方能对方能对实验的设计实验的设计实验的设计、、操作及分析运用自如操作及分析运用自如。

因此请各位使用者在初步了解本软件的操作要点后因此请各位使用者在初步了解本软件的操作要点后，，尽快通过完整的操作手册尽快通过完整的操作手册，，熟悉系统相关软件和实验设计关软件和实验设计、、分析分析。

版本历史1.0 2007-3-272.02007-8-22第一部分 基本基本界面及界面及界面及图标图标概述概述：：一、 O verview 界面Exit ：关闭LC480软件Log off ：从目前使用的数据库中退出并可登陆其他的数据库Overview ：点击该图标进入点击该图标进入““Overview ”界面Navigator ：点击该图标进入点击该图标进入““Navigator ”界面界面，，可进行数据的导入导出等操作可进行数据的导入导出等操作，，详见详见。

LightCycler480荧光定量PCR技术原理-软件介绍

LightCycler480荧光定量PCR技术原理-软件介绍


5 cycle = 32 Amplicon
6 cycle = 64 Amplicon
7 cycle = 128 Amplicon
Roche Applied Science
3
实 时 荧 光定量PCR技术
通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对
PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过 程，结合相应的软件可以对结果进行分析，计 算待测样品的初始模板量。

Roche Applied Science
31
绝对定量（标准曲线）－Summary
•
先决条件 标准品浓度已知 外标准品与样品有相同的 PCR-扩增效率
N＝N02n=N0En logN=
N： N0： N： E： 扩增产物量; 启始模板量; 循环数; 扩增效率
logEn+logN0 -nlogE +logN
logN0=

Cp =n = －logN0/logE +logN/logE (Y=kx+b )
结论：Cp值与模板起始浓度的负对数成线性关系
Roche Applied Science
19
Universal ProbeLibrary通用探针库
技术要点

把传统的水解探针由25-35nt减至8-9nt，报告基团用Fluorescein 标记，并使用了低背景的BHQ（Black hole quencher）淬灭基团 熔解温度取决于所用的LNA（locked nucleic acid technology， 锁定核苷酸）技术——核苷的2、4位形成环氧亚甲基桥结构，提 高短探针Tm值，使其Tm值高于引物达到qPCR的要求。
Roche Applied Science
Roche罗氏LightCycler480实时荧光定量PCR

Roche罗氏LightCycler480实时荧光定量PCR

型号：LightCycler® 480产品介绍Roche罗氏LightCycler 480实时荧光定量PCR系统可以让你实现实时在线的高通量快速荧光定量PCR循环，可同时检测96或384孔板样品。

结果可以通过PCR循环过程中实时荧光采集和软件分析进行定量和基因型的分析。

复杂的光学检测系统可以进行多重PCR检测，并适用于多种检测模式。

超过10年的实时定量PCR系统与试剂研发的丰富经验，凝聚成今日业界的巅峰之作。

主要特性：1.高灵敏度：可检测单拷贝基因2.动力学范围广：可同时检测到1－1010个拷贝DNA3.高重复性：CV%<0.15%4.高分辨率：轻松区分1000与2000拷贝浓度差异5.高速：40分钟完成40个PCR循环（384孔板）6.技术创新：采用Therma-BaseTM热循环专利技术和先进的光学检测系统，彻底消除边缘效应，保持稳定优异的检测结果。

7.全能：分析模式多样，绝对定量、相对定量、基因分型（溶解曲线法和终点法）、高分辨率溶解曲线分析，同时适用几乎所有检测模式（染料检测、水解探针（TaqMan探针）、杂交探针、简单探针等）8.开放式平台：可使用市面上绝大多数荧光染料以及第三方提供的8 连管，96孔板和384孔板9.灵活：可互换的96孔、384孔加热模块，用户可自行更换，无需工程师到场10.自动化平台：配以LIMS系统及自动进样机械臂，可实现远程操作及全自动化运行。

技术指标产品应用1.绝对定量2.相对定量3.终点法基因分型4.溶解曲线法基因分型5.DNA甲基化研究6.Micro RNA研究7.HRM基因扫描......。

RocheLightCycler中文操作说明

RocheLightCycler中文操作说明

LightCycler® 480 中文操作说明罗氏医学仪器公司 / 应用科学部门February 2008目录一. 启动机器与软件 3二. 软件设定 --- 开启新实验 5三. 样品编辑9四. 结果分析12五. 报告18六. 数据转移至其它计算机(数据输出与输19 入)七. 使用者管理19一．启动机器与软件•启动机器1.机器主开关位于机器右后方。

2.机器正面两个警示灯代表机器状态。

待警示灯 (右) 由闪烁橘色灯转变成稳定橘色灯，警示灯 (左) 由橘色转变成绿色 (约三分半钟)，表示机器已经启动完成。

3.按压机器正面上唯一的按钮，放入已经封膜完成之 96 或 384 孔盘。

放置完成后，左右两警示灯都呈现绿色。

•启动软件1.开启计算机，并以正确的使用者名称与密码登入 Windows。

User name: OPERATORPassword: LC4802.开启 LightCycler 480 软件，并输入正确的使用者与密码。

二．软件设定-- 开启新实验•设定新实验1.软件开启后，会进入主画面。

点选“New Experiment”。

2.出现实验设定窗口。

任何时候需要回主画面的话，点选画面右边的按钮。

•设定实验❖若要套用设定好的实验步骤 (Template)，请跳至 6.。

1.在实验设定画面上方，先选择适当的 Detection Forma t。

选项包含:另外可再点选“Customize” 勾选所需的滤片组合。

2.输入反应体积: 96 well plate 范围为 10-100 ul，而 384 well plate 范围为 5-20 ul。

3.设定实验步骤 (Program)•设定 program，包含有 Pre-incubation, Amplification (PCR), Melting curve (optional) 与 Cooling。

利用『+』与『－』增加或删除步骤。

•设定循环数目 (Cycle) 与分析模式。