植物组织中淀粉含量的测定
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植物组织中淀粉含量的测定_Ⅰ蒽酮硫酸法一、原理淀粉是由葡萄糖残基构成的多糖,在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖,然后在浓硫酸的作用下,使单糖脱水生成糠醛类化合物,利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应,即可进行比色测定。
二、实验材料、试剂与仪器设备(一)实验材料任何植物材料。
(二)试剂o浓硫酸(比重1.84)。
o9.2mol/lhclo4。
o蒽酮试剂,同实验24。
(三)仪器设备电子天平,容量瓶。
100ml4个、50ml2个,漏斗,小试管若干支,电炉,刻度吸管0.5ml1支、2.0ml3支、5ml4支,分光光度计,记号笔。
三、实验步骤1.标准曲线制作同实验24恩酮法。
2.样品提取称取50~100mg粉碎过100目筛的烘干样品,置于15ml刻度试管中,加入6~7ml80%乙醇,在80℃水浴中提取30min,取出离心(3000rpm)5min,收集上清液。
重复提取两次(各10min)同样离心,收集三次上清液合并于烧杯,置于85℃恒温水浴,使乙醇蒸发至2~3ml,转移至50ml容量瓶,以蒸馏水定容,供可溶性糖的测定。
向沉淀中加蒸馏水3ml,搅拌均匀,放入沸水浴中糊化15min。
冷却后,加入2ml冷的9.2mol/l高氯酸,不时搅拌,提取15min 后加蒸馏水至10ml,混匀,离心10min,上清液倾入50ml容量瓶。
再向沉淀中加入2ml4.6mol/l高氯酸,搅拌提取15min后加水至10ml,混匀后离心10min,收集上清于容量瓶。
然后用水洗沉淀1~2次,离心,合并离心液于50ml容量瓶用蒸馏水定容供测淀粉用。
3.测定取待测样品提取液 1.0ml于试管中,再加蒽酮试剂5ml,快速摇匀,然后在沸水浴中煮10min,取出冷却,在620nm 波长下,用空白调零测定光密度,从标准曲线查出糖含量(μg)。
四、结果计算式中。
c——从标准曲线查得葡萄糖量,μg。
vt——样品提取液总体积,ml。
v1——显色时取样品液量,ml。
碘比色法测定淀粉含量
碘比色法是一种常用的测定淀粉含量的方法。
淀粉与碘形成复合物时,会呈现深蓝色的颜色,根据颜色的深浅可以推测淀粉的含量。
测定步骤如下:
1. 准备样品:将待测的样品(如食物、植物组织等)制成适当的浓度,使其能够被较为准确地测定。
2. 提取淀粉:采用热酸提取法或酶解法将样品中的淀粉提取出来。
其中热酸提取法是将样品加入盐酸或硫酸中,加热至淀粉糊状后进行提取。
酶解法则是使用淀粉酶将样品中的淀粉分解为葡萄糖后进行提取。
3. 碘溶液制备:制备适量的碘溶液,一般是用碘酸钾和碘化钾制备。
4. 反应:将提取的淀粉溶液与碘溶液混合,等反应一段时间后,观察溶液的颜色变化。
颜色越深,说明淀粉含量越高。
5. 分光光度计测定:使用分光光度计,将混合溶液置于光管中,通过比较混合溶液的吸光度与已知浓度淀粉溶液的吸光度,可以得出待测样品中淀粉的含量。
需要注意的是,测定淀粉含量时需保证操作准确,并根据测定
的样品选择适当的提取方法。
此外,测定时要排除其他物质对测定结果的干扰,如物质的颜色、光散射等。
植物组织中淀粉含量的测定植物组织中淀粉含量的测定植物是地球上最重要的生命体之一,它们是光能的主要捕获者并将其转化为化学能。
在光合作用中,植物通过将二氧化碳和水转化为葡萄糖等有机分子,来实现自身的生长和维持。
植物在进行光合作用时,会将多余的葡萄糖转化为淀粉,以储存起来。
因此,淀粉在植物中有着重要的生理功能,它不仅可以供给植物在营养不足情况下的能量需求,还可以调控植物的产物分配和生长发育等方面的生理过程。
因此,淀粉含量的测定对于研究植物的生长、代谢调节、环境适应等方面具有非常重要的意义。
1. 淀粉含量测定的原理淀粉是由葡萄糖分子组成的多聚体,可以通过碘化反应测定其含量。
碘化反应是一种特殊的化学反应,使用碘化钾与淀粉反应后形成蓝黑色的化合物,其反应机理如下:碘分子进入淀粉的分子链中,与淀粉分子链中的亚硫酸盐基团结合形成碘化物,形成了生物质和无定型复合物,从而导致总合成化合物的颜色变化。
因此,这种方法可以通过测定淀粉含量所导致的颜色变化来进行测定。
此外,由于淀粉含量测定通常需要提取和清洁样品,所以在测定过程中也可以根据需要进行其他生物化学分析。
2. 淀粉含量测定方法2.1. 淀粉含量测定前的样品处理首先要对植物组织进行样品处理,将挖取的组织粉碎成细粉,然后通过冷醇法沉淀并清洗样品。
然后,将样品在60℃的烘箱中干燥至恒定重。
其中,冷醇法即使用80%酒精进行沉淀,可以将其他碳水化合物等杂质去除。
2.2. 碘化反应法测定淀粉含量将干燥的样品称取1克,加入10毫升水,并加入1毫升1%碘化钾溶液,并震荡均匀。
然后加入50毫升的蒸馏水,继续震荡均匀,静置5分钟。
最后,使用吸光光度计在620nm波长下读取吸光度,并根据标准曲线计算出淀粉含量。
需要注意的是,标准曲线通常是使用淀粉标准品制作,强烈建议使用生物化学检测试剂盒进行测定,以保证结果的准确性和可靠性。
2.3. 比色法测定淀粉含量将样品粉末称取1克,加入10毫升水,并加入1毫升1%碘化钾溶液,并震荡均匀。
大米淀粉含量范围大米淀粉含量范围是指大米中所含淀粉的含量的范围。
淀粉是植物的主要储能物质,也是人类主要的能量来源之一。
而大米作为全球主要的粮食作物之一,其淀粉含量对于人们的日常饮食和健康非常重要。
本文将从大米淀粉的定义、作用、测定方法以及影响因素等方面进行探讨。
一、大米淀粉的定义大米淀粉是指大米中所含的淀粉物质,是一种多聚糖,由α-葡聚糖分子组成。
淀粉分子由两种不同的多聚糖组成,即支链淀粉和直链淀粉。
支链淀粉是由α-1,6-葡聚糖键连接的分支结构,而直链淀粉则是由α-1,4-葡聚糖键连接的线性结构。
二、大米淀粉的作用1. 能量供应:淀粉是人体主要的能量来源之一。
人体消化吸收淀粉后,会分解为葡萄糖,供给身体各个组织和器官使用。
2. 营养均衡:淀粉还是人体膳食纤维的重要来源之一,能够促进肠道蠕动,帮助消化和排便,维持肠道健康。
3. 调节血糖:由于淀粉分解为葡萄糖的速度较慢,能够持续稳定地提供血糖,有助于控制血糖水平的波动。
三、大米淀粉的测定方法常用的大米淀粉测定方法主要有以下几种:1. 碘液染色法:利用碘液与淀粉形成蓝色或紫色复合物的反应,通过测定复合物的吸光度或颜色深浅来定量淀粉的含量。
2. 酶解法:将大米样品中的淀粉通过酶的作用分解为葡萄糖,再利用化学方法对葡萄糖进行测定,从而间接测定淀粉的含量。
3. 高效液相色谱法:利用高效液相色谱仪对大米样品中的淀粉进行分离和定量,具有准确性高、重复性好的特点。
四、影响大米淀粉含量的因素1. 大米品种:不同品种的大米淀粉含量存在差异,一般来说,粳稻的淀粉含量较高,而籼稻的淀粉含量较低。
2. 大米加工方式:大米经过糙米加工后,外层的麸皮和胚乳部分被去除,淀粉含量相对较高。
3. 环境因素:种植地区的气候、土壤和水分等环境因素也会对大米淀粉的含量产生一定影响。
总结起来,大米淀粉含量范围是指大米中所含淀粉的含量的范围。
淀粉作为大米的重要成分之一,对人体健康有着重要的作用。
淀粉的鉴定目的淀粉是一种常见的碳水化合物,广泛存在于植物中。
它在食品工业、医药领域以及科学研究中有着重要的应用价值。
淀粉的鉴定是为了确认所研究的样品中是否存在淀粉,并确定其含量。
下面将详细介绍淀粉的鉴定方法和意义。
一、外观特征通过观察样品的外观特征可以初步判断其是否含有淀粉。
淀粉呈现白色或微黄色的颗粒状或粉末状,质地较为均匀。
在显微镜下观察,淀粉颗粒呈现不同的形态,如圆球形、椭圆形、多角形等。
这些特征可以用来初步判断样品中是否含有淀粉。
二、碘滴定法碘滴定法是常用的淀粉鉴定方法之一。
淀粉与碘反应会形成紫蓝色复合物,根据其颜色的深浅可以判断淀粉的含量。
具体操作方法为:将样品与适量的水混合搅拌,加入几滴碘溶液,观察溶液颜色的变化。
如果溶液变为紫蓝色,说明样品中含有淀粉;如果颜色变化不明显或没有变化,则说明样品中不含淀粉。
三、糖酶法糖酶法是一种利用酶的作用将淀粉分解为糖的方法。
通过测定淀粉分解产生的糖的含量,可以间接判断样品中是否含有淀粉。
常用的糖酶法包括淀粉酶法和淀粉酶-葡萄糖氧化酶法。
淀粉酶法是将样品与适量的淀粉酶反应,然后使用比色法或滴定法测定产生的糖的含量。
淀粉酶-葡萄糖氧化酶法在淀粉酶法的基础上加入了葡萄糖氧化酶,可以更准确地测定样品中的糖含量。
四、红外光谱法红外光谱法是一种无损的淀粉鉴定方法,通过测定样品在红外光谱范围内的吸收谱线,可以判断样品中是否含有淀粉。
淀粉在红外光谱图上有明显的特征峰,可以根据这些特征峰的出现来判断样品中是否含有淀粉。
淀粉的鉴定目的是为了确认样品中是否含有淀粉,并确定其含量。
淀粉作为一种重要的生物大分子,具有多种生物学功能和应用价值。
在食品工业中,淀粉是常见的食品添加剂,用于增加食品的粘稠度、改善食品的质地和口感。
在医药领域,淀粉被用作药丸、片剂等药物的主要成分,起到增加药物稳定性和容易服用的作用。
此外,淀粉还被用于纺织、造纸、胶粘剂等工业领域。
淀粉的鉴定是确定样品中是否含有淀粉的重要方法。
淀粉含量测定的一种简便方法──碘显色法
徐昌杰;陈文峻;陈昆松;张上隆
【期刊名称】《生物技术》
【年(卷),期】1998(8)2
【摘要】本文介绍用80%Ca(NO3)2提取淀粉,用碘显色法测定植物组织中淀粉含量,在淀粉含量为0~100μg/ml范围时,该法工作曲线线性良好。
显色受Ca(NO3)2浓度的影响。
该法操作简便、需时短、显色稳定,实验误差较小。
【总页数】3页(P41-43)
【关键词】植物组织;淀粉;碘显色法
【作者】徐昌杰;陈文峻;陈昆松;张上隆
【作者单位】浙江农业大学园艺系
【正文语种】中文
【中图分类】Q946-33
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实验四植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定一、目的从一份植物样品中系统分离和测定可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质等多种成分,不仅对研究植物体内碳、氮代谢,了解植物的生长发育状况有重要意义,亦可以作为鉴定其品质的重要指标,而且也有助于训练基本操作技能。
二、原理(一)分离提取原理在80-85%的乙醇中,植物组织中的还原糖、蔗糖以及游离氨基酸和叶绿素等溶解,而淀粉及蛋白质沉淀,再用9.2 mol/L高氯酸溶解淀粉(蛋白质沉淀),最后用0.1 mol/L氢氧化钠溶解蛋白质,然后选用适当的方法测定各个提取液中相应物质的含量。
(二)测定原理1.蒽酮比色法——可溶性糖含量测定碳水化合物及其衍生物经浓硫酸处理,生成糠醛,再与蒽酮脱水缩合而生成蓝绿色化合物,在一定范围内其颜色深浅与碳水化合物含量成线性关系。
蒽酮反应的颜色深浅,随温度条件和加热时间而变化,葡萄糖显色高峰在100℃时,加热10 min后出现,而核糖在相同温度下,加热3 min后出现。
此法灵敏度高,糖含量达30 μg即可测定。
2.茚三酮比色法——氨基酸含量测定氨基酸的游离氨基与水合茚三酮作用后,产生二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物,在570 nm下有最大光吸收。
在一定范围内,其颜色深浅与氨基酸的含量呈正比。
3.考马斯亮蓝G-250结合法——蛋白质含量测定考马斯亮蓝在游离状态时呈红色,当与蛋白质结合后变为蓝色,后者最大光吸收在595 nm,在一定范围内(0-1000 μg /mL),其颜色深浅与蛋白质的含量呈正比。
此法快速灵敏,反应在2 min内即达到平衡,室温1h内颜色稳定,而且干扰物也少。
三、实验用品(一)实验材料:植物样品。
(二)器皿:1. 25 mL刻度试管⨯8 ,15 mL试管⨯20;2. 10 mL离心管⨯2;3. 容量瓶:50 mL⨯1 ,25 mL⨯1;4. 移液管:5 mL⨯2,2 mL⨯4,1 mL⨯2,0.1 mL⨯2;5. 恒温水浴锅;6. 离心机;7. 电子天平;8. 分光光度计。
马铃薯中淀粉含量测定(酸水解法)一、实验目的1、了解植物组织中淀粉的提取步骤。
2、掌握植物组织中淀粉含量测定的原理和酸水解法测定淀粉的方法。
3、熟悉722分光光度计的主要用途、工作原理及使用流程。
4、巩固容量瓶、移液管等仪器的使用。
二、实验原理1、淀粉提取,也称为浆渣分离或分离,是淀粉加工中的关键环节,直接影响到淀粉提取率和淀粉质量。
粉碎后的物料是细小的纤维,体积大于淀粉颗粒,膨胀系数也大于淀粉颗粒,比重又轻于淀粉颗粒, 将粉碎后的物料,以水为介质,使淀粉和纤维分离开来。
2、淀粉是食品中主要的组成部分,也是植物种子中重要的贮藏性多糖。
它广泛存在于植物的根、茎、叶、种子等组织中,是人类食物的重要组成部分,也是供给人体热能的主要来源。
淀粉跟稀硫酸在加热的条件下能够完全水解成葡萄糖、麦芽糖等还原糖。
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖在NaOH 和丙三醇存在条件下会被氧化成糖酸及其他产物,3,5-二硝基水杨酸则被还原成桔红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
NO 2OH HOOCNO 2+还原糖NH 2OH HOOCNO 2黄色桔红色该物质在540 nm 波长处有最大吸收,在一定范围内,还原糖的量与桔红色物质的吸收值成正比关系,利用比色法可测定样品中的含糖量。
由于淀粉完全水解成还原糖的量是成正比的,所以,也与桔红色物质的深浅成正比关系。
三、实验仪器与材料、试剂1、仪器3、试剂四、实验内容1、溶液的配制(1)、6 mol/L NaOH 溶液:准确称取12 g NaOH固体,溶于15 mL蒸馏水中,并倒入50 mL 容量瓶中,用蒸馏水分几次清洗烧杯并将清洗的溶液倒入容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度线。
(2)、3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂:准确称取0.63 g DNS,2.1 gNaOH固体充分溶解于50 mL蒸馏水,再加入18.2 g酒石酸钾钠,0.5 g苯酚,0.5 g偏重亚硫酸钠,搅拌溶解,冷却后加蒸馏水定容至100 mL,贮于棕色瓶中备用。
植物组织中淀粉含量的测定_ (2)植物组织游离脯氨酸含量的测定原理植物在逆境条件下,游离脯氨酸便会大量积存,且积存指数与植物的抗逆性有关。
因此,脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。
使用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸,不仅大大减少了其他氨基酸的干扰,快速简便,而且不受样品状态(干或者鲜样)限制。
在酸性条件下,脯氨酸与茚三酮反应生成稳固的红色缩合物,用甲苯萃取后,此缩合物在波长520nm处有一最大汲取峰。
脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。
材料、仪器设备及试剂1.材料植物叶片2.仪器设备分光光度计;水浴锅:漏斗:大试管(20m1);具塞刻度试管(20m1)注射器或者滴管(5~loml)。
3.试剂(1)3%磺基水杨酸溶液(2)甲苯;(3)2.5%酸性茚三酮显色液:冰乙酸与6mo1.l-l磷酸以3:2混合,作为溶剂进行配制,此液在4℃下2~3天有效;‘(4)脯氨酸标准溶液。
准确称取25mg脯氨酸,用蒸馏水溶解后定容至250ml,其浓度为100ug.ml-l。
再取此液10ml,用蒸馏水稀释至looml,即成10μg.ml-1的脯氨酸标准液。
1.标准曲线制作(1)取7支具塞刻度试管按表9.2-1加入各试剂。
混匀后加玻璃球塞,在沸水中加热40min。
(2)取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡,以萃取红色物质。
静置待分层后吸取甲苯层以0号管匀参照在波长520nm 下比色。
(3)以消光值为纵坐标,脯氨酸含量为横坐标,绘制标准曲线,求线性回归方程表9.2.1各试管中试剂加入量试管6脯氨酸标准溶液(m1)0.20.40.81.21.62.0水(m1)1.81.61.20.80.4冰乙酸(m1)2茚三酮显色液(m1)3样品测定(1)脯氨酸提取。
取不一致处理的剪碎混匀植物叶片0.2~0.5g(干样根据水分含量酌减),分别置于大试管中,加入5m13%磺基水杨酸溶液,管口加盖玻璃球,于沸水浴中浸提10min。
淀粉检验方法
淀粉是植物体内的主要储藏形式,它在食品加工中具有重要的作用。
因此,对
淀粉的检验方法显得尤为重要。
下面将介绍几种常用的淀粉检验方法。
首先,常用的淀粉检验方法之一是碘液法。
碘液法是通过碘液与淀粉发生蓝色
复合物来判断淀粉的存在。
具体操作方法是将待检样品溶液滴加碘液,若出现蓝色则表示样品中含有淀粉。
这种方法简单易行,操作方便,是目前广泛应用的淀粉检验方法之一。
其次,还有加热法。
加热法是利用淀粉的糊化特性来进行检验。
将待检样品与
水混合后,加热至一定温度,观察样品的糊化情况来判断其中是否含有淀粉。
这种方法操作简单,无需特殊试剂,但对操作者的经验要求较高。
此外,酶解法也是常用的淀粉检验方法之一。
酶解法是利用淀粉酶对淀粉的特
异性作用来进行检验。
将待检样品与淀粉酶混合后,经过一定时间后观察淀粉的降解情况,从而判断样品中是否含有淀粉。
这种方法对试剂的要求较高,但具有较高的准确性。
最后,还有显微镜法。
显微镜法是通过观察样品在显微镜下的形态来判断其中
是否含有淀粉。
将待检样品制备成薄片后放置在显微镜下观察淀粉的形态特征,如形状、大小等来进行检验。
这种方法操作简单,但需要显微镜设备的支持。
综上所述,淀粉检验方法有碘液法、加热法、酶解法和显微镜法等多种。
不同
的方法各有优劣,可以根据实际需要选择合适的方法进行检验。
在进行淀粉检验时,需要严格按照操作规程进行,以确保检验结果的准确性和可靠性。
希望本文介绍的淀粉检验方法能对相关工作人员有所帮助。
植物组织中淀粉含量的测定2007-01-12 08:55? 蒽酮硫酸法一、原理淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖,在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖,然后在浓硫酸的作用下,使单糖脱水生成糠醛类化合物,利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应,即可进行比色测定。
二、实验材料、试剂与仪器设备(一)实验材料任何植物材料。
(二)试剂浓硫酸(比重 1.84 )。
9.2mol/L HClO 4 。
2%蒽酮试剂,同实验 24 。
(三)仪器设备电子天平,容量瓶: 100 mL 4 个、 50 mL 2 个,漏斗,小试管若干支,电炉,刻度吸管 0.5mL 1 支、 2.0 mL 3 支、 5 mL 4 支,分光光度计,记号笔。
三、实验步骤1. 标准曲线制作取小试管11支从0,10编号,按表24-3加入溶液和蒸馏水。
以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可,见方法一或方法二,绘制相应的标准曲线。
表24-3 各试管加入标准液和蒸馏水量管号1,23,45,67,8 9,10淀粉标准液(ml)0.4 0.8 1.2 1.6 2.0蒸馏水(ml)2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0淀粉含量(mg)40 80 120 160 2002. 样品提取称取 50 , 100 mg 粉碎过 100 目筛的烘干样品,置于 15 mL 刻度试管中,加入 6 , 7 mL 80 ,乙醇,在 80 ?水浴中提取 30 min ,取出离心( 3000 rpm ) 5 min ,收集上清液。
重复提取两次(各 10 min )同样离心,收集三次上清液合并于烧杯,置于 85 ?恒温水浴,使乙醇蒸发至 2 , 3 mL ,转移至50 mL 容量瓶,以蒸馏水定容,供可溶性糖的测定。
向沉淀中加蒸馏水 3 mL ,搅拌均匀,放入沸水浴中糊化 15 min 。
冷却后,加入 2 mL 冷的 9.2 mol/L 高氯酸,不时搅拌,提取 15 min 后加蒸馏水至 10 mL ,混匀,离心 10 min ,上清液倾入 50 mL 容量瓶。
再向沉淀中加入 2 mL 4.6 mol/L 高氯酸,搅拌提取 15 min 后加水至 10 mL ,混匀后离心 10 min ,收集上清于容量瓶。
然后用水洗沉淀 1 , 2 次,离心,合并离心液于 50 mL 容量瓶用蒸馏水定容供测淀粉用。
3. 测定取待测样品提取液 1.0 mL 于试管中,再加蒽酮试剂 5 mL ,快速摇匀,然后在沸水浴中煮 10 min ,取出冷却,在 620 nm 波长下,用空白调零测定光密度,从标准曲线查出淀粉含量( mg )。
四、结果计算 :含量(%)=100*C*VT/V1*1000*W式中: C ——从标准曲线查得淀粉量, mg 。
V T ——样品提取液总体积 , mL 。
V 1 ——显色时取样品液量, mL 。
W ——样品重, g 。
0.9 ——由葡萄糖换算为淀粉的系数。
? 碘 - 淀粉比色法一、原理对于淀粉含量较少的植株样品,也可采用碘–淀粉比色法。
淀粉在加热情况下能溶于硝酸钙溶液中,当碘化钾和硝酸钙共存时,碘能以碘–淀粉蓝色化合物沉淀全部淀粉。
将此沉淀溶于碱液,并在酸性条件下与碘作用形成蓝色溶液进行比色。
二、实验材料、试剂与仪器设备(一)实验材料任何植物材料。
(二)试剂1 ( 80 ,硝酸钙溶液。
2 ( 0.5 ,碘液:称 5.00 g 结晶碘和 10.00 g 碘化钾,放入研钵混合干研,然后加 10 mL 蒸馏水研至全部碘溶解,将溶液全部转入 1000 mL 容量瓶定容后,贮于磨口试剂瓶。
</P>3 ( 5 ,含碘硝酸钙溶液:取 10 mL 80 ,的硝酸钙溶液,加入 160 mL 水再加入 3 mL 0.5 ,的碘液混匀,现用现配。
4 (标准淀粉溶液:称取纯淀粉 50 mg 于研钵中,加 3 mL 80 ,硝酸钙溶液,研细并转移到 100 mL 的三角瓶中,用 15 mL 80 ,的硝酸钙溶液冲洗研钵,无损地收集于三角瓶中。
将三角瓶置于沸水浴中煮沸 5 min ,冷却后全部转入 50 mL 容量瓶中并定容。
此液为 1 mg/mL 的淀粉标准液。
5 ( 0.1 mol/L NaOH 。
6 ( 0.1 mol/L HCl 。
(三)仪器设备分析天平,研钵,容量瓶,量筒,三角瓶,水浴,小漏斗,电炉,离心机,离心管,试剂瓶。
三、实验步骤1 (称取 1 , 3 g 叶片,剪碎放入研钵,加 5 mL 80 ,的硝酸钙溶液,研磨成糊状移入 100 mL 的三角瓶中,用 10 mL 80 ,的硝酸钙冲洗研钵,无损地收集于三角瓶中,瓶口盖上小漏斗,在沸水浴上煮沸 3 , 5 min (叶片含淀粉少的 3 min ,含淀粉多的 5 min ),使样品中淀粉转变为胶体溶液。
2 (给三角瓶中加 20 mL 蒸馏水,混合液转入离心管中离心( 2000 , 3000 rpm ) 2 , 3 min ,将离心后的淀粉胶体浑浊液移入 100 mL 容量瓶(淀粉含量少时,可移入 50 mL 容量瓶),三角瓶及离心沉淀物用 5 , 10 mL 热蒸馏水冲洗并同样离心,离心液并入容量瓶中(共洗 2 , 3 次)定容,即为淀粉提取液。
3 (取 5 , 10 mL 淀粉待测液,加入到盛有 2 mL 0.5 ,碘液的离心管中,混匀静15 min 后离心( 3000 rpm ) 5 min ,弃上清液。
沉淀用 5 ,的含碘硝酸钙溶液置冲洗两次,向冲洗后的沉淀中加入 10 mL 0.1 mol/L 的 NaOH 混匀,将离心管浸入沸水内 5 min ,使沉淀溶解。
将溶液转入 50 mL 容量瓶中,加入 0.3 mL 0.5 ,碘液,用 30 mL 左右的水冲洗并入容量瓶,加入 2 mL 1mol/L 的盐酸,用水定容并显色,在 590 nm 波长处测定光密度。
4 (绘制标准曲线取标准淀粉溶液( 1 mg/mL ) 0 、 0.5 、 1.0 、 2.0 、 3.0 、 4.0 、 5.0 mL 于 6 个离心管中,用 80 ,硝酸钙溶液将各管的体积补足至 5 mL ,再向各管加入 2 mL 0.5 ,碘液,混匀静置 15 min 后离心,其他操作同样品测定步骤,显色后在 590 nm 波长下测定光密度。
此系列溶液的淀粉含量分别为 0 、 0.5 、 1.0 、 2.0 、 3.0 、 4.0 、 5.0 mg ,然后以光密度为横坐标,以淀粉含量为纵坐标绘制标准曲线。
四、结果计算 :含量(%)=100*C*VT/V1*1000*W 式中: C ——从标准曲线查得淀粉量, mg 。
V T ——样品提取液总体积 , mL 。
V 1 ——显色时取样品液量, mL 。
W ——样品重( g )。
III 旋光法(谷物淀粉含量的测定)一、原理: 酸性氯化钙溶液与磨细的含淀粉样品共煮,可使淀粉轻度水解。
同时钙离子与淀粉分子上的羟基络合,这就使得淀粉分子充分地分散到溶液中,成为淀粉溶液。
淀粉分子具有不对称碳原子,因而具有旋光性,可以利用旋光仪测定淀粉溶胶的旋光度(α),旋光度的大小与淀粉的浓度成正比,据此可以求出淀粉含量。
溶提淀粉溶胶所用的酸性氯化钙溶液的pH值必须保持2.30,密度须为1.30,加时间的长短也要控制在一定范围。
因为只有在这些条件下,各种不同来源的淀粉溶液的比旋度,α,才都是203?,恒定不变。
样品中其他旋光性物质(如糖分)须预先除去。
二、材料、仪器设备及试剂:(一)材料:面粉或其他风干样品(二)仪器设备:1. 植物样品粉碎机;2. 离心机;3.分析天平;4. 粗天平;5. 旋光仪及附件;6. 三角瓶;7. 分样筛(100目);8. 布氏漏斗、抽滤瓶及真空泵;9. 离心管;10. 小电炉。
(三)试剂:三、实验步骤:1. 样品准备:(1)称取样品:将样品风干、研磨、通过100目筛,精确称取约2.5g样品细粉(要求含淀粉约2g,请参考附注估计),置于离心管内。
(2)脱脂:加乙醚数ml到离心管内,用细玻棒充分搅拌,然后离心。
倾出上清液并收集以备回收乙醚。
重复脱脂数次,以去除大部分油脂、色素等(因油脂的的存在会使以后淀粉溶液的过滤困难)。
大多数谷物样品含脂肪较少,可免去这个脱脂手续。
(3)抑制酶活性:加含有氯化高汞的乙醇溶液10ml到离心管内,充分搅拌,然后离心,倾去上清液,得到残余物。
(4)脱糖:加80,乙醇10ml到离心管中,充分搅拌以洗涤残余物(每次都用同一玻棒),离心,倾去下清液。
重复洗涤数次以去除可溶性糖分。
2. 溶提淀粉:(1)加醋酸,氯化钙:先用醋酸氯化钙溶液约10ml加到离心管中,搅拌后全部倾入250ml三角瓶内,再用醋酸氯化钙溶液50ml分数次洗涤离心管,洗涤液并入三角瓶内,搅拌玻棒也转移到三角瓶内。
(2)煮沸溶解:先用蜡笔标记液面高度,直接置于加有石棉网的小电炉上,在4min,5min内迅速煮沸,保持沸腾15min,17min,立即将三角瓶取下,置流水中冷却。
煮沸过程中要时加搅拌,勿令烧焦;要调节温度,勿使泡沫涌出瓶外;常用玻璃将瓶侧的细粒擦下;并加水保持液面高度。
3. 沉淀杂质和定容:(1)加沉淀剂:将三角瓶内的水解液转入100ml容量瓶,用醋酸氯化钙溶液充分洗涤三角瓶瓶,并入容量内,加30,ZnSO1ml混合后,再4加15,KFe(CN)61ml,用水稀释至接近刻度时,加95,乙醇一滴以破坏泡4 沫,然后稀释到刻度,充分混合,静置,以使蛋白充分沉淀。
(2)滤清:用布氏漏斗(加一层滤纸)吸气过滤。
先倾清溶液约10ml于此滤纸上,使其完全湿润,让溶液流干,弃去滤液,再倾清溶液进行过滤,用干燥的容器接受此滤液,收集约50ml,即可供测定之用。
4. 测定旋光度:用旋光测定管装满滤液,小心地按照旋光仪使用说明,进行旋光20度的测定。
淀粉(,),α×N×100/{[α]×L×(W,K)}×100 D20 式中:α:用钠光时观测到的旋光度;,α, D:淀粉的比旋度,在这种方法条件下为203?;L:旋光管长度(cm);W:样品质量(g);K:样品水分含量(,);N:稀释倍数;100:换算为百分率。
也可以不用上列公式计算,改用工作曲线来求得淀粉含量,这样准确度高些。
?、淀粉含量的测定一、目的掌握植物组织中淀粉含量测定的原理和方法。
二、原理淀粉用盐酸水解转化成葡萄糖后,测定葡萄糖含量,根据葡萄糖含量换算成淀粉含量。
三、材料、仪器设备及试剂材料、仪器设备及试剂与上述蔗糖的测定相同,另增加碘试剂;100ml、250ml 容量瓶。
碘试剂(碘化钾—碘溶液)的配制:称取碘化钾20g及碘10g溶于100ml蒸馏水中。
使用前需稀释10倍。
四、实验步骤1.葡萄糖标准曲线制作与上述还原糖含量测定相同。