protocol of MCAO model
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Protocol of MCAO model
材料
仪器电子秤，电凝器，手术灯。
手术器械（直剪大、弯剪小、眼科弯镊、开睑器、动脉夹2、显微外科剪、三角针、有齿镊、弯头止血钳、眼科直镊），手术缝合线，注射器若干（5ml、2.5ml），烧杯2，广口浅容器；鼠板，棉绳，手套（橡胶、PE、棉布大手套），口罩，手术帽，鼠盒，记录纸，笔，表或手机，垃圾袋。
化学试剂 10%水合氯醛，生理盐水，碘伏，75%酒精，庆大霉素注射液，高糖注射液。
动物 280-340g雄性SD大鼠
具体步骤
制作缺血再灌注模型
1、禁食。
造模前一天晚上禁食（否则胃肠胀气严重，易肠梗阻）
2、麻醉。
10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠。
固定于鼠板。
备皮，消毒。
3、分离血管。
沿颈部正中线剪开皮肤，用弯头止血钳和眼科镊钝性分离筋膜，至肌肉层。
沿胸锁乳突肌和胸骨锁骨肌的肌间隙分离肌肉，暴露颈总动脉，以开睑器撑开切口，保证视野。
用眼科镊打开动脉鞘，分离颈总动脉，注意不要伤及迷走神经。
向头部方向继续分离颈外动脉和颈内动脉（注意颈内动脉分离干净有利于后面插线的顺利进行），根据需要电凝甲状腺上动脉，在颈外动脉近头端结扎，根据需要电凝枕动脉，于其上方头端电凝断颈外动脉。
4、插线。
准备好显微外科剪、线栓和手术短线，用动脉夹夹闭颈总动脉和颈内动脉近头端，用显微外科镊与颈外动脉成45°角剪开一个小口，深度约为颈外动脉直径的一半。
将线栓从小口经颈外动脉插入颈内动脉，去除颈内动脉的动脉夹，继续向对侧鼻尖方向插入，手下感到略有阻力，线栓在颈总动脉分叉处至大脑中动脉的长度为16-20mm。
5、缝合。
于颈外动脉根部结扎固定线栓，去除颈总动脉动脉夹，确定无出血、渗血后缝合。
注意线栓一端留在伤口外，不要不小心拔出。
6、拔线。
于大鼠下肢外侧注射0.5ml庆大霉素注射液。
俯卧于鼠笼，用白炽灯照射保温，待2小时后将线栓拔出约2mm再灌注，剪掉皮肤外线栓。
拔线时注意控制手下力度，刚开始时阻力较大，之后阻力减小，有时大鼠挣扎，容易将线栓全部拔出。
7、调护。
将高糖溶液10ml加蒸馏水至150ml，予每三只大鼠。
体会及注意事项
1、如果遇到小动脉出血，不用慌张，用备好的大小合适的棉球压迫止血即可。
2、插线时注意避免意外的动脉喷血，因为动脉压较高，一定要先夹闭好动脉夹，使用之前也应检查动脉夹的松紧。
3、术中保持大鼠呼吸道通畅。
将大鼠舌头拉出，防止堵塞呼吸道。
分离气管上方肌肉，使用开睑器时减少对气管的牵扯。
尽量减少对迷走神经的刺激。
4、尽量减小对大鼠颈部肌肉组织的损伤，术后清理伤口内的血块，缝合时注意对齐皮肤。
5、使用电凝器时注意避开其它血管、组织，以免不必要的损伤及出血。
6、注意腹腔注射的角度和深度。
太小太浅，容易变成皮下注射；太大太深容易损伤肝脏、肾脏等，伤及肠道，易增加术后胀气、肠梗阻风险。
7、插线时注意角度和深度。
角度不当，容易插入翼颚动脉，深度只能达到14mm。
深度不够，难以造模成功；而太深则容易，刺穿动脉，导致颅内出血、大鼠死亡。
8、插线深度不够遇到阻力时，将线栓退出，调整角度，并注意减小颈外动脉的紧张度，重新插入往往可以成功。
9、分离血管时要注意动作轻柔、仔细，以防伤及动脉导致渗血甚至出血，动脉分离的干净有助于视野的清晰和后面插线的成功。
10、不到最后全部完成，不可掉以轻心，过早松懈容易导致低级错误的发生。
11、术中和术后一天注意保温，可以降低死亡率。
国外文献术中大鼠体温保持在37℃。
12、拔线时大鼠处于麻醉状态可以降低死亡率。
13、插线成功的关键在于解剖知识的掌握和血管分离。
血管分离的好、解剖知识清楚，插线会十分的顺利，1次就可完成。
当然线栓要选择粗细适当的。
一开始练习时可以用细一点的线栓（但是要有一定的韧度，太软不好插线），这样可以排除线栓这个影响因素。
