沙门氏菌的检测方法

食品沙门氏菌检测

沙门氏菌为肠道细菌科，即引发食物中毒细菌。根据既有研究结果表明，因沙门氏菌导致的食物中毒病例占比较高，所以对食品中沙门氏菌检测的重要性逐渐突显出来，并且备受关注。而对食品沙门氏菌的检测需从多个角度展开分析，以解决食品安全问题。

1 沙门氏菌有哪些生物学特性？

沙门氏菌会对人和动物的健康带来严重危害，是十分常见的致病菌。此病菌的型别诸多且抗原复杂，其对于外界环境的抵抗性较为明显，而且能够在食品中存活较长时间，在粪便内的存活时间达到1-10个月之久。

沙门氏菌的传播路径一般包括肉产品、禽和蛋等，在身体状况的基础上，还和菌株血清型存在一定关联，会严重危害老人与孩童，或者是免疫有缺陷的人。所以说，有必要对容易被污染的食品进行分类型地管理，以免沙门氏菌对我们的身体健康造成负面影响。

2 检测沙门氏菌的国标方法如何？

现阶段，根据国家规定对沙门氏菌进行检测的方法被称作是国标方法。而这种检测方法的步骤较为繁杂，需经过增菌→增菌→分离→生化试验→血清学检定等多个环节完成。正是因为国标检测沙门氏菌的程序复杂，所以需要耗费较多的时间与精力，一般在4-7天之间才能够获得所要的检测结果。

3 采用分子生物学方法检测沙门氏菌

第一种，扩增片段长度多态性技术的应用。这种对沙门氏菌进行检测的技术相对便利且快速，可以获得稳定且可靠性较高的结果，因而在检测微生物方面的应用较为常见。在众多研究中，针对沙门氏菌株展开了扩增片段长度多态性指纹分析，并了解到血清型的差异所获得的扩增片段长度多态性指纹图也有所差异，具有较高的分辨率，进而对不同的菌株进行有效地区分。

第二种，聚合酶连反应技术的应用。聚合酶连反应技术本身敏感性与特异性较为突出，且应用十分便捷，同样被使用在检测微生物方面。大部分研究者通过对聚合酶连反应技术的合理运用，开展了沙门氏菌的检测工作。在对聚合酶连反应技术进行应用的过程中，对食品中的沙门氏菌进行检测，在和增强化学发光反应相互结合的基础上，即可实现交杂扩增产物的目的，最终实现了检测方法的成功研发。

沙门氏菌检验及分析

一、 简介

沙门氏菌是一种能引起人类和动物肠道感染的细菌，也可以引起食品中毒。它主要通过食品、饮用水和接触感染物传播。对于食品中的沙门氏菌进行检验和分析，对保障食品安全至关重要。

二、检验方法

1.纳氏肠杆菌培养基法

用纳氏肠杆菌培养基法检验食品中的沙门氏菌，是一种常用的方法。它利用富含养分的培养基，使得沙门氏菌能够在培养基中迅速生长，并形成典型的菌落。检验人员可以根据菌落的形态、颜色和大小等特征来识别沙门氏菌的存在。

2.血液平板培养法

血液平板培养法是另一种常用的检验方法。将待测样品涂抹在富含养分的血液平板上，再将平板置于恒温培养箱中培养一段时间，观察是否有典型的沙门氏菌菌落的产生。

3. PCR法

PCR法是一种较为快速、敏感的检验方法。通过PCR技术可以快速对样品中的沙门氏菌进行检测，结果准确可靠。这种方法对实验条件和检验人员的要求较高，但可以提高检测的速度和准确性。

三、分析结果

通过上述方法进行检验后，需要进行有关分析。针对检验结果，进行有关的分析可以有效地判断食品中是否存在沙门氏菌污染，并确定污染的程度。

1. 菌落计数

通过检验方法得到的菌落数可以反映食品中的沙门氏菌污染程度。一般来说，菌落数越多，说明沙门氏菌污染越严重。

2. 菌株鉴定

对分离出的菌株进行鉴定，可以确定其是否为沙门氏菌。根据鉴定结果，可以进一步分析菌株的来源和特性。

3. 毒素检测 有些沙门氏菌会产生毒素，对食品中的毒素进行检测，可以确定食品中是否存在具有毒素产生能力的沙门氏菌。

四、 实验注意事项

在进行沙门氏菌检验及分析时，有一些实验注意事项需要遵守。

1. 实验室操作

检验和分析工作要在严格的实验室条件下进行，保证实验室内的环境洁净，避免交叉污染。

样品编号 样品名称

检验依据 GB 4789.4-2010 沙门氏菌检验

检验环境 温度： ℃ 湿度： %RH 检验日期

检验地点 □无菌室1 □无菌室2 □阳性对照室 □微生物限度室

仪器设备名称及编号 电子天平: 有计量合格标识，并在检定/校准有效期内.

恒温培养箱: 有计量合格标识，并在检定/校准有效期内.

电热恒温水浴锅： 有计量合格标识，并在检定/校准有效期内.

样品制备 □固体和半固体样品：称取25g样品225mL BPW中，均质1min-2min

□液体样品：吸取25ml样品至盛有225mL BPW的无菌锥形瓶中,振荡混匀

前增菌 将上述样品混匀液于36℃培养8h-18h

增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取 1 mL，转种于 10 mL TTB 内，于 ℃培养 h。同时，另取 1 mL，转种于 10 mL SC 内，于 ℃培养 h；

检验项目 菌落形态

分离培养 BS琼脂 培养条件

HE琼脂 培养条件

生化试验 培养条件 现象 初步判定

三糖铁琼脂

赖氨酸脱羧酶试验培养基

营养琼脂平板

生化反应初步鉴定

生化群的鉴别

血清学鉴定 鉴定 现象 阴性对照

多价菌体抗原（O）

多价鞭毛抗原（H）

检验结果 □25g(mL)样品中未检出沙门氏菌

□25g(mL)样品中检出沙门氏菌

备注 K：产碱，A：产酸；＋：阳性，－：阴性；＋（－）：多数阳性，少数阴性；＋/－：阳性或阴性。

沙门氏菌免疫学检测方法

沙门氏菌的免疫学检测方法为酶联免疫法，利用抗原-抗体之间的特异性结合反应为基础，用免疫力放大技术来鉴定病原菌。灵敏度和特异性比较高，在增菌以后可以在短时间内检测出来。

酶联免疫法全称为酶联免疫法吸附测定法，英文缩写为ELISA，是一种酶标记测定方法，可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，是一种敏感性高、特异性强、重复性好的定量的实验诊断方法。

酶联免疫法原理是已经被包被在聚苯乙烯板上的固相包被的抗原或抗体与过量待检测的抗体或抗原反应，一部分结合形成固相抗原抗体复合物，另一部为多余的游离抗体或抗原，通过洗板，保留固相抗原抗体复合物，洗去多余游离抗体或抗原，再加入酶标记的抗体，形成固相抗原抗体酶标记抗体复合物，洗去多余酶标抗体，加入底物，此时酶催化底物显色，颜色的深浅与待测的抗体或抗原含量成正比或反比。

酶联免疫法现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病，寄生虫病及非传染病等各方面的免疫诊断，也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，如检测结核抗体、EB病毒抗体、HIV抗体、乙肝病毒抗原、破伤风抗毒素、流感病毒的抗原、梅毒抗体等。

酶联免疫法虽然应用广泛，但也存在一定的局限性，手工操作步骤繁琐，而且影响因素多，易出现假阳性结果等，因此有很多项目被兴起的化学发光法所取代。