沙门氏菌的检验
1．目的
规范沙门氏菌检测方法，使产品检验有据可依。
2．消毒灭菌要求
微生物检测用的玻璃仪器、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。
注：本实验采用湿热灭菌法，吸管、培养皿、培养基等盖好塞子并包好瓶口在高压灭菌锅中按要求的温度和压力灭菌，一般是121℃（）下灭菌20min。
3．原理
沙门氏菌的检验分四个连续阶段：
4．操作步骤
准备工作
配制实验所需的缓冲蛋白胨水、亚硒酸盐胱氨酸培养基（无需灭菌）、HE培养基、三糖铁培养基等，并将准备好的均质杯、吸管、培养皿、大试管等一起灭菌。
前增菌
在无菌环境下，称取25g待检样品放入盛有225ml灭菌好的缓冲蛋白胨水中，然后放到36±1℃的恒温培养箱内进行前增菌4-6h;
增菌
在无菌环境下，用灭菌好的吸管吸取10ml前增菌液接种与100ml亚硒酸盐胱氨酸培养基中进行二次增菌，恒温培养箱36±1℃，培养18-24h;
分离培养
将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径3mm的接种环挑取一环，划线于表面无凝结水的BS和SS琼脂平板各一个，于36±1℃培养18-24h。观察各个平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落。如无典型或可疑菌落，应再继续培养24±2h。然后观察培养的平板（黄色的菌落是大肠杆菌；蓝绿色或蓝色，产硫化氢，菌落中心黑色或几乎全黑色为可疑沙门氏菌）。
沙门氏菌属各亚属在其他选择性琼脂平板的菌落特征
生化实验
用灭菌好的接种针在培养平板上挑取可疑的沙门氏菌单菌落，接种到三糖铁培养基上，恒温培养箱36±1℃，培养18-24h; 典型沙门氏菌培养物斜面显红色（碱性），底端显黄色（酸性），有气体产生，形成硫化氢（琼脂变黑）。
三糖铁培养基变化表
肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果
同时将三糖铁培养基上可疑的菌株，做生化实验，将可疑的沙门氏菌落分别接种于尿素、赖氨酸脱羧等发酵管中恒温培养箱36±1℃，培养18-24h（根据上表进行判定）,将可疑的沙门氏菌补做进一步的生化试验，如下表：
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. 沙门氏菌的检验
1．目的
规范沙门氏菌检测方法，使产品检验有据可依。
2．消毒灭菌要求
微生物检测用的玻璃仪器、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。
注：本实验采用湿热灭菌法，吸管、培养皿、培养基等盖好塞子并包好瓶口在高压灭菌锅中按要求的温度和压力灭菌，一般是121℃（1.5MPa）下灭菌20min。
3．原理
沙门氏菌的检验分四个连续阶段：
4．操作步骤
4.1 准备工作
配制实验所需的缓冲蛋白胨水、亚硒酸盐胱氨酸培养基（无需灭菌）、HE培养基、三糖铁培养基等，并将准备好的均质杯、吸管、培养皿、大试管等一起灭菌。
4.2 前增菌
在无菌环境下，称取25g待检样品放入盛有225ml灭菌好的缓冲蛋白胨水
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. 中，然后放到36±1℃的恒温培养箱内进行前增菌4-6h;
4.3 增菌
在无菌环境下，用灭菌好的吸管吸取10ml前增菌液接种与100ml亚硒酸盐胱氨酸培养基中进行二次增菌，恒温培养箱36±1℃，培养18-24h;
4.4 分离培养
将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径3mm的接种环挑取一环，划线于表面无凝结水的BS和SS琼脂平板各一个，于36±1℃培养18-24h。观察各个平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落。如无典型或可疑菌落，应再继续培养24±2h。然后观察培养的平板（黄色的菌落是大肠杆菌；蓝绿色或蓝色，产硫化氢，菌落中心黑色或几乎全黑色为可疑沙门氏菌）。
沙门氏菌属各亚属在其他选择性琼脂平板的菌落特征
4.5 生化实验
用灭菌好的接种针在培养平板上挑取可疑的沙门氏菌单菌落，接种到三糖铁培养基上，恒温培养箱36±1℃，培养18-24h; 典型沙门氏菌培养物斜面显红色（碱性），底端显黄色（酸性），有气体产生，形成硫化氢（琼脂变黑）。
来源于网络 沙门氏菌的检验
食品学院 14食品质量与安全1班
刘文敏 柳基炜 卫杰恒 温紫君
摘要：本实验采用GB/T4789.4-2010的检测方法测定鸡场中的沙门氏菌。通过本实验学习沙门氏菌的检测方法和技术，了解沙门氏菌的一些生化特性；本实验先用显色培养基找出可疑菌落，再做生化试验找出可疑的典型性的沙门氏菌，再通过血清学试验最终确定是否为沙门氏菌属。
关键词：沙门氏菌 接种 生化试验 血清学鉴定
前 言
沙门氏菌病是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病种之一，其病原沙门氏菌属于肠道细菌科。沙门氏菌是一个统称，泛指 2000 多种有紧密连系的细菌，包括引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。虽然只有少数人因沙门氏菌而患病，但是，在世界范围内的细菌性食物中毒事件中，由沙门氏菌引起的占大多数。因此，采用科学、合理的方法检验食品中沙门氏菌，已经成为了人们最关心的问题之一[1]。国标法(GB4789.4-2010)是目前中国规定的食品中沙门氏菌的标准检测方法,也是基层实验室普遍采用的检测方法,它根据沙门氏菌的生长特点和生化特性,采取前增菌、增菌、分离、生化试验和血清学鉴定5个步骤进行[2]。
1 材料与方法
1.1实验材料
均质器、三角烧瓶、平皿、玻璃棒、接种棒
恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃
吸管：1 mL（具 0.01 mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度或微量移液器及吸头
电子天平PL602-S，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；
手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅SYQ-DSX-280B，上海申安医疗器械厂
1.1.2试剂药品
鸡肠、靛基质试剂、沙门氏菌O和H诊断血清、API20E生化试剂盒或VITEKGNI生化鉴定卡
1.1.3培养基
来源于网络 蛋白胨水（BPW)、四硫磺酸钠煌绿（TTB）、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋（BS）琼脂、HE琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、尿素琼脂、氰化钾、氰化钾对照、赖氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶对照、甘露醇、山梨醇、β-D半乳糖苷（ONPG）培养基
沙门氏菌检验
一、培养基和试剂： 1、 缓冲蛋白胨水（BP）：按GB4789.28中4.12规定 2、 氯化镁孔雀绿（MM）增菌液：按GB4789.28中4.13规定
3、 四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液：按GB4789.28中4.14、4.15规定
4、 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：GB4789.28中4.16规定
5、 亚硫酸铋琼脂（BS）：按GB4789.28中4. 19规定
6、 DHL琼脂：按GB4789.28中4. 20规定 7、 HE琼脂：按GB4789.28中4.21规定
8、 WS琼脂：按GB4789.28中4.23规定
9、 SS琼脂：按GB4789.28中4.22规定
10、三糖铁琼脂：按GB4789.28中4.26、27规定
11、蛋白胨水靛基质试剂：按GB4789.28中3.13规定 12、尿素琼脂（Ph7.2）：按GB4789.28中3.15规定
13、氰化钾（KCN）培养基：按GB4789.28中3.16规定
14、氨基酸脱羧酶试验培养基：按GB4789.28中3.12规定
15、糖发酵管：按GB4789.28中3.2规定
16、ONPC培养基：按GB4789.28中3.3规定 17、半固体脂：按GB4789.28中4.30规定
18、丙二酸钠培养基：按GB4789.28中3.7规定
19、沙门氏菌因子血清：按26种用于初步分型；57种用于进一步分型；163种用于
详细分型。
二、沙门氏菌检验程序：
直接增菌法鲜肉、鲜花蛋或其他未
经加工的食品25g+灭菌生理盐水25ml，做成检样匀液
10ml+MM(或)
+B100ml
DHL(或JE、WS、SS) 10ml+SC
100ml 检样匀液25mnl+MM（或TTB）100ml 检样匀液
25ml+SC100ml
BS 前增菌法 冻肉、蛋品、乳品
及其他加工食品25g+BP 225ml 检 样
挑取可疑菌落
TSL（斜面、底层、产气、H2S），蛋白胨水（靛基质），尿
