N-三甲基壳聚糖包衣的盐酸阿霉素脂质体的制备

中国药师　２００９年第１２卷第１期　Ｃｈｉｎａ　Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔ　２００９，Ｖｏ１．１２　Ｎ０．１　

而导致肝细胞进一步损伤，因此肝组织中ＭＤＡ的含量可间　接反映肝细胞损伤的程度　Ｊ，而且血清中ＡＬＴ、ＡＳＴ的升高　

是肝细胞损伤的共同表现。通过检测血液中Ａ　、Ａ　ｓＴ和　

肝组织中的ＳＯＤ活力及ＭＤＡ含量可反映肝细胞损伤的程　度。实验结果表明，ＭｇｌＧ可使肝组织损伤明显减轻，生化学　

上则反映为ＡＬＴ，ＡＳＴ活力降低。明显升高肝组织匀浆中的　ＳＯＤ活性，ＭＤＡ的含量则显著降低。说明ＭｇｌＧ可通过抗脂　质过氧化，保护酶活性从而提高肝细胞膜系统的稳定性，使　

肝细胞的变性和坏死减轻。　本实验结果表明，ＭｇｌＧ对ＣＣ１　所致的小鼠血清ＡＬＴ、　

ＡＳＴ活性升高有明显的降低作用，并能使肝脏的ＳＯＤ活性　显著升高，脂质过氧化产物ＭＤＡ含量显著降低，量效关系明　

显。提示ＭｇｌＧ在降酶，抗自由基以及脂质过氧化等方面均　有明显作用，达到对ＣＣ１　所诱发的急性肝损伤的保护作用。　

参考文献　

１李沛波，唐晴．田基黄对大鼠急性肝损伤的保护作用［Ｊ］中药材，２００６，２９　（１）：５５－５６　２王佩，吴锡铭．异甘草酸镁对大鼠四氯化碳慢性肝损伤的治疗作用［Ｊ］．　中国新药与临床杂志，２００６，２３（１２）：８３３—８３６　３王颖，赵艳景，叶波平，等鲨肝刺激物质类似物对ＣＣＩ　致小鼠急性肝损伤　的保护作用［Ｊ］．中国药科大学学报，２００５，３６（４）：３６８—３７２　４　Ｗｕ　ＦＨ，Ｃａｏ　ＪＳ，Ｊｉａｎｇ　ＪＹ，ｅｔ　ａｌ　Ｒｕｓｃｏｇｅｎｉｎ　ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ（１Ｊｍ一３）ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｌｉｒｉｏｐｅ　ｍｕｓｃａｒｉ，ｉｍｐｒｏｖｅｓ　ｌｉｖｅｒ　ｉｎｊｕｒｙ　ｂｙ　ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ　ｌｉｖｅｒ—ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ】ｙｍ－　ｐｈｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．，　ｎｒ仉Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００１，５３：６８１－６８８　５　张小山，李宏春．肝毒清对小鼠急性肝损伤保护作用的药理研究［Ｊ］．中国　药房，２０００，３２（１）：３５－３７　６沈钦海，马臻，陈国民．木芙蓉对四氯化碳大鼠急性肝损伤的保护作用　［Ｊ　．现代医药卫生，２００６，２２（５）：６３６—６３７　７王颖，赵艳景，叶波平，等鲨肝刺激物质类似物对ＣＣ１４致小鼠急性肝损伤　的保护作用［Ｊ］．中国药科大学学报，２００５，３６（４）：３６８－３７２　８叶敏，赵一鸣．海藻甘草配伍对小鼠急性肝损伤的影响［Ｊ］．现代中药研究　与实践，２００６，２Ｏ（５）：３０－３２　９赵玉珍，路雅真，王淑湘，等．虎茵汤对小鼠急性肝损伤ＭＤＡ、ＧＳＨ—Ｐｘ及　ＳＯＤ的影响［Ｊ］．黑龙江医药学，２００２，２５（４）：１５　（２００７一ｌ１—２２收稿２００８４）６４）２修回）　

Ｎ．三甲基壳聚糖包衣的盐酸阿霉素脂质体的制备　

王小芹　何文　（武汉大学人民医院药学部武汉４３００６０）　刘晓萌　（武汉大学药学院）　

摘要　目的：研制Ｎ一三甲基壳聚糖（ＴＭＣ）包衣的盐酸阿霉素（ＡＤＭ）脂质体。方法：采用硫酸铵梯度法制备ＡＤＭ脂质体，　

以包封率为指标，筛选盐酸阿霉素脂质体最佳处方；合成不同季铵化程度的ＴＭＣ，并对最佳ＡＤＭ脂质体进行包衣。结果：未　

包衣ＡＤＭ脂质体平均粒径为（３７８．６±５．２）ｎｍ，Ｚｅｔａ电位为（一６２．０８±２．５）ｍｖ，平均包封率为（６２．２７　４－１．７５）％（ｎ＝３）。　

ＴＭＣ包衣后，脂质体粒径增大，并随着ＴＭＣ季铵化程度的增大，Ｚｅｔａ电位显著增大（Ｐ＜０．０５）；ＴＭＣ２０、ＴＭＣ４０、ＴＭＣ６０包衣脂　

质体体外释药曲线符合Ｈｉｇｕｃｈｉ方程，分别为：Ｑ＝７．６３１５＋３．７８６３ｔ１／２（ｒ＝０．９２９　２），Ｑ＝６．９６４７＋３．５７０９ｔ１／２（ｒ＝０．９３１　８），Ｑ＝　７．３４５１＋２．７６６５ｔｌ／２（ｒ＝０．９３５　７）。结论：ＴＭＣ包衣ＡＤＭ脂质体的制备工艺可行，其表面带有较高正电性，为下一步研究其血　

管靶向性打下基础。　

关键词Ｎ一三甲基壳聚糖；阿霉素；脂质体；硫酸铵梯度法；包衣　

中图分类号：Ｒ９４４．９　文献标识码：Ａ　文章编号：１００８－０４９Ｘ（２００９）０１－００３９－０３　

Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ　Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　Ｃｏａｔｅｄ　ｂｙ　Ｎ－－ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ　Ｃｈｉｔｏｓａｎ　

Ｗａｎｇ　ｘｉａｏｑｉｎ　，Ｈｅ　Ｗｅｎ　，Ｌｉｕ　Ｘｉａｏｍｅｎｇ　（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｒｅｎｍｉｎ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｗｕｈａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ　４３００６０，Ｃｈｉ—　

ｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　ｐｈａｒｍａｃｙ　ｏｆ　Ｗｕｈａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）　ＡＢＳＴＲＡＣＴ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｐｒｅｐａｒｅ　ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（ＡＤＭ）ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　ｃｏａｔｅｄ　ｂｙ　Ｎ—ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ　ｃｈｉｔｏｓａｎ（ＴＭＣ）．Ｍｅｔｈｏｄ：Ａｍｍｏｎｉｕｍ　

ｓｕｌｐｈａｔｅ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＤＭ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　ａｎｄ　ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｉｎｄｅｘ　ｔｏ　ｓｃｒｅｅｎ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｐｒｅ—　

ｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＤＭ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ．Ｔｈｅ　ＴＭＣ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｄｅｇｒｅｅ　ｏｆ　ｑｕａｒｔｅｒｎｉｚａｔｉｏｎ（ＤＱ）ｗｅｒｅ　ｓｙｎｔｈｅｓｅｄ　ｆｏｌｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＤＭ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　ｗａｓ　ｃｏａｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｍｅａｎ　ｄｉａｍｅｔｅｒ　ｏｆ　ＡＤＭ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　ｂｅｆｏｒｅ　ｃｏａｔｅｄ　ｗａｓ　３７８．６ｎｍ±５．２ｎｍ，ｔｈｅ　ｚｅｔａ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｗａｓ　

（一６２．０８±２．５）ｍｖ　ａｎｄ　ｍｅａｎ　ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ　ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｗａｓ（６２．２７　４－１．７５）％（ｎ＝３）．Ｔｈｅ　ｐａｒｔｉｃｌｅ　ｓｉｚｅ　ｏｆ　ＡＤＭ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　ｗａｓ　ｉｎ·　

ｃｒｅａｓｅｄ　ａｆｔｅｒ　ｃｏａｔｅｄ　ｂｙ　ＴＭＣ．Ａｓ　ｔｈｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｏｆ　ＤＱ　ｏｆ　ＴＭＣ，ｔｈｅ　ｚｅｔａ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｏｆ　ＴＭＣ—ｃｏａｔｅｄ　ＡＤＭ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　ｗａｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｒｅｍａｒｋ—　

ａｂｌｙ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｏｆＴＭＣ２０、ＴＭＣ４０　ａｎｄ　ＴＭＣ６０－ｃｏａｔｅｄ　ＡＤＭ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｗｅｒｅ　ａｃｃｏｒｄｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　Ｈｉｇｕｃｈｉ　ｅｑｕａｔｉｏｎ，ｒｅ—　

ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ：Ｑ＝７．６３１５＋３．７８６３ｔｌ／２（ｒ＝０．９２９　２），Ｑ＝６．９６４７＋３．５７０９ｔ１／２（ｒ＝０．９３１　８），Ｑ＝７．３４５１＋２．７６６５ｔ１／２（ｒ＝０．９３５　７）．　

Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＤＭ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　ｃｏａｔｅｄ　ｂｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ＤＱ　ｏｆ　ＴＭＣ　ｉｓ　ｆｅａｓｉｂｌｅ．Ｔｈｅｉｒ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｚｅｔａ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　

ｔｈｅ　ｆｕｔｈｅｒ　ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｕｍｏｒ　ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ　ｔａｒｇｅｔ．　

ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ　Ｎ—ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ　ｃｈｉｔｏｓａｎ；Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ；Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ；Ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｓｕｌｐｈａｔｅ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ；Ｃｏａｔｉｎｇ　

通讯作者：何文，女，副教授，主要从事药物新剂型新技术研究。Ｔｅｌ：（０２７）６５０５７６７７　Ｅ·ｍａｉｌ：ｈｗｚｘｄ＠１６３．ｃｏｒｎ

　ｗｗｗ·ｚｇｙｓ－ｏｒｇ　研究论文　

阳离子脂质体具有一定的靶向肿瘤血管的作用，可选择　

性作用于肿瘤血管内皮细胞，其机制可能是阳离子脂质体的　

正电荷与肿瘤血管内皮细胞上的一些特异性带负电荷的磷　

脂、蛋白聚糖、膜蛋白等发生静电作用　。已有研究证实　

阳离子脂质体包衣紫杉醇可减少肿瘤血管发生　Ｊ，抑制肿　

瘤生长，瘤内微循环分析显示功能性血管密度降低，肿瘤血　

管直径减小。壳聚糖（ｃｈｉｔｏｓａｎ，ＣＳ）是一种天然的聚阳离子　

多糖，将其２位上的氨基烷基化可得到其部分季铵化产物　

Ｎ一三甲基壳聚糖（Ｎ—ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ　ｃｈｉｔｏｓａｎ，ＴＭＣ）。ＴＭＣ在较宽　

的ｐＨ范围内均有较好的溶解性，其荷电密度由季铵化程度　

决定　，随着季铵化程度的增高，ＴＭＣ的荷正电性增大，有　

利于与细胞膜表面的负电荷基团和紧密连接相互作用而打　

开细胞间紧密连接　：。本试验拟以阿霉素（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ，　

ＡＤＭ）为模型药物制备ＡＤＭ脂质体后，用不同季铵化程度　

的ＴＭＣ进行包衣，为进一步研究其肿瘤血管靶向作用打下　

基础。　

１仪器与试药　

１．１仪器　

Ｉ－ＩＪ一３恒温磁力搅拌器（江苏金坛医疗仪器厂）；ＤＫ一８Ｂ　

型电热恒温水槽（上海精密实验设备有限公司）；ＺＫＦ０３０型　

电热真空干燥箱（上海实验仪器有限公司）；Ｖａｆｉａｎ　ｕｎｉｔｙ　Ｉｎｏ—　

ｖａ一６００核磁共振光谱仪（美国）；Ａｇｉｌｅｎｔｌ１００高效液相色谱仪　

（美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司）；ＴＥＭ一１００ＣＸ　１Ｉ透射电镜（日本电子公　

司）；Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ３０ＯＯＨＳ激光粒度分析仪（英国Ｍａｌｖｅｍ公司）；　

ＲＥ－５２Ｃ旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；ＥｍｕｌｓｉＦｌｅｘ—Ｃ５　

高压均质机（加拿大ＡＶＥＳＴＩＮ公司）；ＰＨＳ一２５Ｃ　ＰＨ酸度计　

（上海康仪仪器有限公司）；ＤＤＳ一１１Ａ电导率仪（上海雷磁新　

泾仪器有限公司）；　

１．２试药　

壳聚糖（ＭＷ２１０ｋＤａ，ＤＤ　９３％，青岛海普生物技术有限　

公司，批号：２００６０７２５）；１一甲基一２一吡咯烷酮（化学纯，国药集　

团化学试剂有限公司，批号：２００７０６１３）；碘甲烷（上海润捷化　

学试剂有限公司；批号：２００６０５１４）；碘化钠（上海化学试剂采　

购站，批号：２００６０５１２）；盐酸阿霉素对照品（中国生物制品检　

定所，批号：１３０５９－２００３０１）；盐酸阿霉素（北京华奉联博科技　

有限公司，批号：ＨＦ０７０３１２）；蛋黄卵磷脂，胆固醇，维生素Ｅ，　

硫酸铵（国药集团化学试剂有限公司）；甲醇，乙腈为色谱　

纯，其他试剂均为分析纯。　

２方法与结果　

２．１　ＴＭＣ的合成及季铵化程度的确定　

参考文献采用四步合成法　Ｊ，制备季铵化程度分别为　

２０％、４０％、６０％的ＴＭＣ，即ＴＭＣ２０、ＴＭＣ４０、ＴＭＣ６０，将所得　

的ＴＭＣ溶解在８０￣Ｃ的Ｄ２０中，进行　Ｈ　ＮＭＲ分析　，见图１　

（Ａ，Ｂ，Ｃ）。通过计算　，季铵化程度分别为２５％，３８％，　

５９％　６　５　４　３　２　１ｐｐｍ　６　５　４　３　２　１ｐｐｍ　

６　５　４　３　２　１ｐｐｍ　Ｃ　Ａ．ＴＭＣ２０　Ｂ．ＴＭＣ４０　Ｃ．ＴＭＣ６０　图１　ＴＭＣ的’Ｈ—ＮＭＲ谱　

２．２　ＡＤＭ脂质体的制备