猪传染性胸膜肺炎菌影疫苗研制

阶段） ▪ 弱毒活疫苗 （人工缺失或灭活某一种或几
疫苗
灭活苗 亚单位疫苗
弱毒活疫苗
（菌影）疫苗
优点
缺点
安全，易于生产
同型保护，交叉保护性 差，只能减少死亡率， 不能阻止感染和发病
包含毒素等分泌性成分，生产过程繁琐，成本高 交叉保护性好
安全性差，有返祖的可
能，因为毒力因子众多，
免疫原性及交叉保护性 好，能够阻止在呼吸道 定居
＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋
攻毒保护情况——攻毒
组别
临床症状 发病数 死亡数 保护率
肺损伤
（）
呼吸率增加， 体温升高
（）
灭活苗 体温升高，咳
（）
嗽，呼吸困难
（）
对照组 体温升高，咳
()
（）
嗽，呼吸困难
＋：肺损伤； ＋＋ ：肺损伤； ＋＋＋：肺损伤；＋＋＋＋：％损伤
细胞因子产生情况
γ
※*
※※**
*
※*
*
*
※** *
※*** **
※*** **
攻毒
攻毒
* 与对照比相比差异显著（<）；* *与对照比相比差异极显著（<）； * * *与对照比相比差异极显著 （<）； ※ 与灭活苗组相比差异显著（<） ；※ ※与灭活苗组相比差异极显著（<）
淋巴细胞亚类
※** ※*
病理组织学观察
攻毒后死亡猪剖杀，14天存活猪 采血、剖杀
脏器细菌载量
数据分析
免疫后抗体动态变化
※***
**
※*** **
**
**
*
* **
攻毒
* 与对照比相比差异显著（<）；* *与对照比相比差异极显著（<）； * * *与对照比相比差异极显著 （<）； ※ 与灭活苗组相比差异显著（<） ；※ ※与灭活苗组相比差异极显著（<）
▪ 生产工艺简单，不需添加佐剂，可冻干保存，不需冷链条 件运输和保存。
及菌影透射电镜照片
重组菌株——（）
正常细菌
菌影
及菌影扫描电镜照片
正常细菌
菌影
对断奶仔猪的安全性试验
正常剂量及大剂量免疫情况
批次 接种剂量（） 猪数
猪体反应
体温
体重
精神、食欲正常 精神、食欲正常 精神、食欲正常 精神、食欲正常 精神、食欲正常 精神、食欲正常
疫苗的优点
▪ 是一种基因工程死苗，不含任何核酸成分，安全； ▪ 由于疫苗利用的是基因工程方法使菌体裂解灭活，没有经
过物理或化学的变性过程（如甲醛灭活处理），所以菌体 表面构象与活菌相似，提呈的是天然抗原决定簇，免疫原 性好；
▪ 可以激发特异的体液免疫和细胞免疫应答；交叉保护能力 优于灭活苗；
▪ 优良的佐剂效应，菌影细胞表面含有脂多糖和肽聚糖，具 有佐剂作用；诱导的免疫反应水平达到或超过福氏完全佐 剂；
扫描电镜
透射电镜
., ,
., ,
制作流程示意图
插入 穿梭载体中
pXXX-E
提取ΦX174 PCR DNA
PCR
Lysis E
插入pBV-220中
pBV-E
电转化
宿主菌
℃ 诱导表达
Ghost
目前，国外已经成功制备成菌影的细菌包括大肠杆菌、鼠 伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、肺炎克雷伯氏杆菌、支气管败 血博特氏杆菌、幽门螺旋杆菌、霍乱弧菌、胸膜肺炎放线杆 菌、流感嗜血杆菌、溶血巴氏杆菌、多杀巴氏杆菌、绿脓杆 菌、恶臭假单胞菌等。说明只要具备合适的遗传操作系统，基 于噬菌体裂解基因Ｅ的裂解系统几乎适用于所有的革兰氏阴性 细菌。目前我们实验室已成功制备了胸膜肺炎放线杆菌和副猪 嗜血杆菌的菌影。
正常 正常 一过性升高 正常 正常 一过性升高
正常 正常 正常 正常 正常 正常
不同剂量免疫对仔猪体温的影响
不同剂量免疫对仔猪体重的影响
对怀孕母猪的安全性试验
正常剂ห้องสมุดไป่ตู้及大剂量免疫情况
批次 接种剂量（）
猪数
猪体反应
体温
精神、食欲、产仔正常 精神、食欲、产仔正常 精神、食欲、产仔正常 精神、食欲、产仔正常
我国疫苗研究进展
▪ 灭活苗 (全菌体通过加热或用甲醛灭活后制 备的一种疫苗)
▪ 血清、、型三价苗（武汉科前） ▪ 血清、、型三价苗（中农威特） ▪ 血清、二价苗（山东华宏） ▪ 亚单位疫苗（主要毒力因子及保护性抗原为
主要组分的疫苗） ▪ 保猪利®爱普克（ , ）（ Ⅰ＋ Ⅱ＋ Ⅲ＋ ） ▪ 哈尔滨兽医研究所 （目前处于临床前研究
猪病论坛
猪传染性胸膜肺炎菌影疫苗的研制
王春来 细菌动物病创新团队 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
深圳
概述
▪ 病 原 菌：胸膜肺炎放线杆菌（）
▪ 疾病特征：肺脏出血、坏死以及与胸膜
▪
发生纤维素性粘连
▪ 危 害：世界范围内的多发病、常见病
▪
规模化猪场猪呼吸系统综合
征
▪
（）的主要病原之一
急性爆发：致死率可高达％
*
* ※*
攻毒
攻毒
* 与对照比相比差异显著（<）；* *与对照比相比差异极显著（<）；※ 与灭活苗组相比差异显著（<）
攻毒保护情况——攻毒
组别
临床症状 发病数 死亡数 保护率
肺损伤
（）
呼吸正常或呼 吸率增加
（）
灭活苗 体温升高，咳
（）
嗽
（）
对照组 体温升高，咳
()
（）
嗽，呼吸困难
＋：肺损伤； ＋＋ ：肺损伤； ＋＋＋：肺损伤；＋＋＋＋：％损伤
正常 正常 正常 正常
不同剂量免疫对怀孕母猪体温的影响
免疫效力试验
45头4-6周健康断奶仔猪
App ghost（BGs, 15头） 灭活苗（IB, 15头）
PBS 对照组（PC, 15头）
免疫2次，间隔2周，1ml/头（ 5×10 9 CFU/ml ）
0、7、14、21、 28、35天分别采血
2免后14天用App 1、5、7型气管攻毒，5头/组/型，1ml/头，1x107-8CFU/ml
慢性感染：高发病率，患猪表现为生长迟 滞、饲料利用率低、日增重明显 下降等，可谓损失巨大。
包括个血清型，各个血清型间毒力差 异较大，但引起的疾病症状相同。
主要毒力因子：
毒素（ Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 和Ⅳ ） 荚膜多糖（） 脂多糖内毒素（） 外膜蛋白（） 转铁蛋白结合蛋白（） 粘附素（） 蛋白酶（） 铁摄取调控因子（）
只缺失一个或几个毒力 因子尚不能使毒力减弱 到安全使用的水平，所
以目前尚无一种活疫苗
被批准上市
兼具灭活苗的安全性和 活苗的有效性，能够阻 止在呼吸道定居
未知
猪传染性胸膜肺炎菌影疫苗的研制
（菌影）简介
近年来出现的一种新概念、新技术
一种没有细胞浆和核酸的空细菌体
利用噬菌体Φ 裂解基因 在革兰氏阴性细菌中表达 后，该基因编码蛋白在细菌细胞膜和胞壁上可形 成穿膜孔道，在渗透压的作用下使菌体破裂，细 菌内细胞浆和核酸等成分通过此孔道被排出，形 成的一种空的细菌外壳，即为“菌影”，也称 “菌蜕”。