下载文档原格式
奶牛早期妊娠诊断分子筛选研究作者：李志明王彦平郭勇王春伟王相国倪和民来源：《安徽农业科学》2021年第17期摘要 [目的]探究整合素αv β3、TGF-β、HSP10、PAG、IL-10等妊娠因子在荷斯坦奶牛早期妊娠过程中的规律，筛选奶牛早期妊娠诊断标志因子。
[方法]选取49头荷斯坦奶牛，在输精后第7、14、21、28天取外周血，采用荧光定量PCR方法分析整合素αv β3的表达趋势和变化规律，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法分析TGF-β、HSP10、PAG、IL-10的表达趋势和变化规律。
60 d后通过直检对50头荷斯坦奶牛进行怀孕检测。
[结果]50头奶牛中有23頭受孕、26头未受孕。
通过分析受孕和未孕奶牛血液中整合素αv β3基因的表达量，发现整合素αv β3基因在受孕奶牛血液中的表达量高于未孕奶牛，特别是输精后第21、28天受孕奶牛的表达量显著增高（P<0.05）;TGF-β、HSP10、PAG、IL-10蛋白质表达量变化在28 d内不能有效区分怀孕奶牛与未孕奶牛。
[结论]整合素αv β3可作为奶牛早期妊娠诊断标志因子，理论上可将孕检的时间窗口提前到早期妊娠阶段的第21天。
关键词荷斯坦奶牛;整合素αv β3;血液;早期妊娠;诊断中图分类号 S823 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2021）17-0088-04doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.17.024Abstract [Objective] To study the regularit y of pregnancy factors such as integrin αv β3， TGF-β， HSP10， PAG， IL-10 in the early pregnancy of Holstein cows， and screen out the marker factors for the early pregnancy diagnosis of dairy cows.[Method] 49 Holstein cows were selected and peripheral blood was taken on the 7th， 14th ， 21st， and 28th days after insemination. Fluorescence quantitative PCR was used to analyze the expression trend and change laws of integrin αv β3， and the enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） method was used to analyze the expression trend and change laws of TGF-β， HSP10， PAG， and IL-10. After 60 days， 50 Holstein cows were tested for pregnancy by using rectum examination.[Result] Among 50 detected Holstein cows， 23 cows were pregnant and 26 cows were not. By analyzing the expression of integrin αv β3 gene in the blood of pregnant and non-pregnant dairy cows， it was found that the expression of integrin αv β3 gene in the blood of pregnant dairy cows was higher than that of non-pregnant dairy cows，especially the expression level of dairy cows on the 21st and 28th days after insemination increased significantly（P<0.05） . Through analyzing the expression level changes of TGF-β， HSP10， PAG， IL-10 within 28 days， pregnant cows could not effectively distinguished from non-pregnant c ows.[Conclusion] Integrin αv β3 could be used as a diagnostic marker for early pregnancy of dairy cows.In theory， the time window for pregnancy examination could be advanced to the 21st day of early pregnancy.Key words Holstein cows;Integrin αv β3;Blood;Early pregnancy;Diagnosis对于奶牛养殖行业而言，配种效率将直接影响企业效益[1]，主要表现为产奶量降低、护理成本增加2个方面。
母牛妊娠期、妊娠症状与检查方法
一、妊娠期
母牛配种以后，从受精开始，经过发育到成熟的胎儿娩出为止，这段时间称为妊娠期。
牛的妊娠期一般为275~285天，平均为280天。
妊娠期的长短与牛的品种、类型、个体、年龄、饲养管理条件的不同而有差别。
一般饲养管理条件好的比饲养条件差的短，怀母犊比怀公犊的短。
母牛妊娠后，为做好下一步的生产安排及分娩前的准备工作，应大致确定妊娠母牛的预产期。
其推算的方法，预产期可按配犊月份减3，日数加6的公式计算。
例1：3号母牛于2000年5月10日配种，它的预产期为：5－3＝2（月）……预产月份。
10＋6＝16（日）……预产日期
即3号母牛的预产期是在2001年2月16日。
例2：5号母牛于2001年1月28日配种，它的预产期为：月份不够减，须借一年，故加12，则（1＋12）－3＝10（月）；日数加上6已超过1个月的天数，故减去30天，再往月份里加上1个月。
即28＋6－30＝4（日）……预产日期
10＋1＝11（月）……预产月份
所以5号母牛的预产期是在2001年11月4日。
二、妊娠症状
1。
奶牛早期妊娠诊断技术的研究进展陈超，张欣欣，安志高，胡祥维，华丽萍，李可可，杨利国（华中农业大学动物科技学院，武汉 430070）中图分类号：S823.3 文献标识码：A 文章编号：1004-4264（2019）04-0026-04DOI: 10.19305/ki.11-3009/s.2019.04.006摘 要：高效准确的早期妊娠诊断，可以缩短母牛的产犊间隔，从而达到提高母牛繁殖效率的目的。
家畜早期妊娠诊断方法的研究具有悠久的历史，从原始的外部观察法到目前应用最广泛且最直接的直肠检查法，再到后期发展起来的超声波检查法以及近年来研究比较多的易于商业化的间接检测法。
本文对在生产中具有实际应用效果且具有一定发展前景的早期妊娠诊断技术应用现状进行了综述。
关键词：奶牛；早期妊娠诊断；繁殖随着经济的高速发展和生活水平的不断提高，人们对于乳制品的需求量越来越大，要求也越来越高，这也对奶牛养殖业的发展提出了更高的要求，所以为了满足社会发展的需要，需不断推进奶牛养殖的现代化和科学化。
经过半个多世纪的发展，中国奶牛产业已经从传统、落后、粗放的养殖模式转变成规模化、标准化、精细化、产业化养殖的模式，很多先进技术也得到了大力的推广[1]，其中早期妊娠诊断技术在近些年也得到了快速的发展。
早期妊娠诊断技术在畜牧养殖业中一直扮演着重要的角色，特别是在奶牛养殖业中。
母牛在配种后应尽早地确定是否妊娠，这对于保胎、减少空怀、提高母畜的繁殖力是非常重要的[2]。
经过早期妊娠诊断，对于确定怀孕的母牛，尽早提供妊娠母牛所需要的营养与环境，加强饲养管理，能够保证胎儿的正常发育，避免胚胎的早期死亡或流产；对于未妊娠的母牛，找出原因后及时采取措施进行二次配种，对于多次配种不孕的母牛及时淘汰，通过缩短产犊间隔而达到提高母牛繁殖效率的目的。
简便有效的妊娠诊断方法，尤其是早期妊娠的诊断方法，能够大大提高母畜的繁殖效率。
母畜繁殖效率一直是畜牧生产中极为重视的问题，繁殖效率的提高能大大提高畜牧生产的经济效益。
奶牛常见产科疾病的诊断与综合防治作者：徐春玉雷国毅来源：《新农村》2018年第03期本文就较常见的奶牛产科疾病：流产、难产、胎衣不下、子宫内膜炎、乳房炎等做以介绍。
以供参考。
1流产因母体或胎儿的生理发生紊乱或二者间的正常关系被破坏，而使妊娠中断，一般是指在妊娠42-260天内出现妊娠中断或胎儿死亡。
1.1症状：奶牛乳房突现肿大，阴唇肿胀。
乳头里可挤出清亮液体。
阴门处有黏液排出。
需及时检查是干尸、早产、死胎等。
1.2治疗：可皮下注射黄体酮50-100mg。
一天一次。
连用五天。
也可用补肾气、固冲任、调气血安胎的药剂。
如泰山磐石散：白术30g、党参60g、黄芪30g、当归20g、杜仲25g、白芍18g、熟地25g、续断30g、桑寄生25g、阿胶30g、菟丝子30g、补骨脂30g研末。
开水冲调、温灌。
1.3预防：加强饲养管理。
防范损伤母牛，严格用药、防疫制度，危、禁、疑药绝对不用。
严禁自发性传染性等疾病的传播等。
2难产多因母牛骨盆狭窄，早配、胎儿超大或胎位不正。
因而母牛分娩时间就会延长。
使胎儿难于或不能排出，并且平时饲养失调，母牛体弱气衰等造成的。
2.1症状：根据预产期分娩前兆已出现，但久不能排出胎儿，分娩时子宫壁和腹壁的收缩时间长。
间隙短，力量强：或宫颈尚完全张开，胎儿还没进入产道。
胎水已破。
还有的倒生，胎儿又大。
臀部先进产道。
2.2治疗：对阵缩与努责无力的母牛在产道润滑时，可直接以手拽出，不能拽出时，要及时进剖腹产；因胎位不正引发的难产。
需先矫正后设法拽出。
无法矫正的采取截胎术。
还可服用催产剂草药，之后助产。
可取大戟25g、丹参50g、穿山甲50g、滑石100g、桃仁50g、皂角20g、加适量水煎之，以米汤调温灌。
2.3预防：配种不能过早，合理饲养，妊娠末期，适量减少高蛋白质饲料以防胎儿过大，严格干奶时间，及时停奶，适当运动，预产期时，分娩环境要安静。
避免惊吓。
3胎衣不下胎衣不下是母牛娩出胎儿后，胎衣在生理时限内没有排出。
奶牛妊娠毒血症的发生与诊治作者：赵权胜来源：《现代畜牧科技》 2015年第10期赵权胜（黑龙江省杜尔伯特蒙古族自治县连环湖镇畜牧水产服务中心 166251）1 流行特点奶牛妊娠毒血症的发生呈地区性，即常在某些牛场、某些地区内流行，可能是出现单个病牛或者散发。
偶尔在某一段时间内，奶牛产后出现相继发病的现象。
奶牛各胎都能够发生该病，其中在1～6胎发病的为78. 9%左右，在6～10胎发病的为21%左右，即青年奶牛和胎次低的奶牛发病较多。
该病在全年都可发生，其中在12月份至第二年5月份发病的为55%左右，在6～11月份发病的为45%左右，即冬季和春季发病较多。
大多数奶牛从分娩后开始发病，其中产后1～7天发病的为82%左右，7天后发病的为18%左右，且以产后2天发病最多，大约在16%。
奶牛产奶量越高，则发病越多，一般产奶量少于5000kg的不会发病，产奶量为5000～6000kg发病的在29%左右，产奶量为6000～7000kg发病的在26%左右，产奶量超过7000kg发病的在45%左右。
另外，奶牛在干奶期饲喂越多的精料，发病也越多。
2 病因分析奶牛在干奶期进行不恰当的饲养能够引发该病。
奶牛饲喂粗饲料不足，且品种单一、质量较差，因此通过增加精料来弥补粗饲料的不足，造成日粮中添加过多的精料。
有些养殖户，奶牛干奶期的健康状况是通过体况肥胖程度判断，错误的增加喂量进行催膘，导致饲喂量加大。
处于干奶期的奶牛与处于泌乳期的奶牛混和群养，导致奶牛采食过多的精料；另外干奶期延长过多也会造成奶牛肥胖。
奶牛日粮中缺少某些蛋白质，导致生成的载脂蛋白减少，妨碍肝脏中脂肪的移除，进而促使形成脂肪肝。
3 临床及剖检变化临床症状：患病奶牛大多时间心跳、体温、呼吸都处于正常水平，但食欲不振，逐渐停止采食，同时停止反刍，体重迅速减轻，体质逐渐虚弱，最终卧地不起，皮肤弹性变差。
患病奶牛排出干硬的粪便，严重时还表现腹痛和腹泻的现象。
个别患病奶牛伴有神经症状的发生，最后心搏过速和昏迷。
母牛妊娠期为多少天母牛妊娠检查方法有哪些母牛配种后，精子与卵子相融合，形成一个合子（受精卵），叫做受精。
母牛从受精开始进入妊娠期。
下面我们了解一下母牛妊娠期为多少天，以及母牛妊娠检查方法有哪些一、母牛妊娠期为多少天母牛妊娠就是从受精开始到胎儿孕育成熟的过程，所经历的时间称为妊娠期。
母牛妊娠期平均为285天（范围为260～290天），不同品种、个体、年龄、季节、饲养管理条件下的妊娠期也不同。
一般早熟品种比晚熟品种短，奶牛比肉牛短，黄牛比水牛短，饲养条件差的比好的妊娠期长。
二、母牛的妊娠诊断方法为及时准确掌握受配母牛的妊娠情况，对提高母牛繁殖率有非常重要的意义。
妊娠诊断通俗地讲就是对母牛是否妊娠做出判断，对已妊娠的母牛加强饲养管理，防止流产，而对未妊娠的母牛则应找出原因，采取相应的补配措施，及时进行下一情期的配种，从而提高母牛的繁殖率。
妊娠诊断主要有外部观察法、阴道检查法、直肠检查法及其他检查方法。
1. 外部观察法配种后过20～30天没有出现发情表现的,有可能妊娠。
一般情况下母牛怀孕后不再发情，性情温顺安静，食欲增强，毛色变光，体重增加。
初产牛能在乳房内摸到硬块，有的母牛会表现异嗜。
怀孕5～6个月后，腹围增大，在腹壁可触到或看到胎动，特别是在清晨喂饮之前及运动之后。
怀孕8个月时，母牛腹围更大，更易看到胎儿在母牛腹部及脐部撞动。
这种诊断都用在妊娠中后期，不能用做早期妊娠诊断。
2. 直肠检查法直肠检查指用手隔着直肠触摸子宫、卵巢、胎儿和胎膜的变化，并依此来判断母牛是否怀孕。
这种方法主要是根据子宫角的形状、质地、胚泡的大小、部位、卵巢的变化位置及宫中动脉妊娠脉搏的出现等来判定母牛妊娠的孕前期、中期、孕后期。
3. 阴道检查法通过检查阴道黏膜色泽、性状及子宫颈的形状、位置变化来判断母牛是否妊娠。
一般配种一个月后，不出现发情症状，做阴道检查时，已妊娠母牛，用开张器插入阴道时有明显阻力，感到干涩，阴道黏膜苍白，无光泽，子宫颈口偏向一侧，呈闭锁状态，并有暗浓稠的黏液塞封闭。
