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微生物的实验室培养
一、培养基
1．概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。
2．种类：(按物理性质分)
3．营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
二、无菌技术
1．获取纯净培养物的方法
获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，具体操作如下：
(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。
(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
2．消毒和灭菌
(1)概念：[填表]
比较项目理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭
消毒较为温和物体表面或内部的部分微生物不能灭菌强烈物体内外所有的微生物能
(2)常用方法：[连线]
三、大肠杆菌的纯化培养
1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
(1)操作步骤：
计算→称量→溶化→灭菌→倒平板
(2)倒平板的方法及注意事项：
①请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。
②甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。
③丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。
2．纯化大肠杆菌
(1)纯化原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。
(2)接种方法：
①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
(3)培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37_℃恒温箱中，培养12 h和
24 h后，分别观察、记录。
四、菌种的保存[连线]
1．不同培养基的具体配方不同，但一般都含( )
A．碳源、磷酸盐和维生素
B．氮源和维生素
C．水、碳源、氮源和无机盐
D．碳元素、氧元素、氢元素、氮元素
解析：选C 培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还应考虑pH、特殊营养物质及O2等条件。
2．获得纯净培养物的关键是( )
A．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌
B．接种纯种细菌
C.适宜环境条件下培养
D．防止外来杂菌的入侵
解析：选D 获得纯净培养物的关键是防止外来微生物的污染。
3．下列关于消毒和灭菌方法的选择，对应错误的是( )
A．培养基——高压蒸汽灭菌
B．牛奶——煮沸消毒
C．接种环——灼烧灭菌
D．实验者双手——化学消毒
解析：选B 对牛奶应采用巴氏消毒法进行消毒。
4．下列叙述错误的是( )
A．右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯火焰附近B．倒平板整个过程应在酒精灯火焰旁进行
C．打开培养皿的皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖
D．为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置
解析：选C C项应是用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全打开，以防杂菌污染。
5．下列有关稀释涂布平板法的叙述，错误的是( )
A．首先将菌悬液进行一系列的梯度稀释
B．然后将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培养基的表面
C．在适宜条件下培养
D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落
解析：选D 稀释涂布平板法是将菌悬液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。只有在稀释度足够高的菌悬液
里，聚集在一起的微生物才能被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个的菌落。
核心要点一| 培养基及无菌技术
1．培养基配制的原则
(1)目的要明确：不同的微生物需求不同，根据培养目的进行配制。
(2)营养要协调：营养物质的浓度和比例要适宜。营养物质浓度过低不能满足微生物营养需要，过高对微生物的生长有抑制作用。
(3)pH要适宜：各种微生物适宜生长的pH范围不同，如细菌的适宜pH约为6.5～7.5、放线菌的适宜pH约为7.5～8.5、真菌的适宜pH约为5.0～6.0。为维持pH的相对恒定，可在培养基中加入缓冲剂，常用的缓冲剂是磷酸氢二钾—磷酸二氢钾。
2．培养基的成分
营养物质定义作用主要来源
碳源凡能提供碳元素的物
质
构成生物体细胞的物质
和一些代谢产物，有些也
是异养生物的能源物质
无机碳源：CO2、NaHCO3
等；有机碳源：糖类、
脂肪酸、花生粉饼、
石油等
氮源凡能提供氮元素的物
质
合成蛋白质、核酸以及含
氮的代谢产物
无机氮源：N2、NH3、
铵盐、硝酸盐等；有
机氮源：尿素、牛肉
膏、蛋白胨等
生长因子生长必不可少的微量
有机物
是酶和核酸的组成成分
维生素、氨基酸、碱
基等
水—不仅是优良的溶剂，而且
可维持生物大分子结构
的稳定
培养基、空气、代谢
产物
无机盐为微生物提供除碳、
氮以外的各种重要元
素，包括大量元素和
微量元素
是细胞的组成成分、生理
调节物质、某些化能自养
菌的能源，酶的激活剂等
无机化合物
[名师点拨] 几种微生物的营养和能量来源
微生物碳源氮源能源蓝藻CO2NH＋4、NO－3等光能
