小菜蛾泛素基因的克隆与分析

格式：pdf
大小：557.94 KB
文档页数：4

（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＮａｎｊｉｎｇＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００２３，Ｃｈｉｎａ）（２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＧｕｉｚｈｏｕＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＳｃｉｅｎｃｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００６，Ｃｈｉｎａ）
因的功能提供了参考．
［关键词］小菜蛾，泛素基因家族，ＲＮＡ干扰，基因沉默
［中图分类号］￥４８１＋４［文献标志码］Ａ［文章编号］１００１ — ４６１６（２０１３）０３ — ０ｌ１６一ｏ４
ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ — ＰＣＲ）．ＵｓｉｎｇＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ（ＲＮＡｉ），ｔｈｅｉｎｖｉｔｒｏｓｙｓｔｈｅｓｉｚｅｄｄｏｕｂｌｅ — ｓｔｒａｎｄｅｄＲＮＡ
ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＵｂｉｑｉｔｉｎＧｅｎｅｓｏｆＰｌｕｔｅｌｌａＸｙｌｏｓｔｅＵａ（Ｌ．）
ＺｈａｎｇＨｏｎｇ，ＤｕＹａｑｉｏｎｇ，ＬｉＦｅｎｇｌｉａｎｇ，ＺｈｏｕＺｈｏｕ，ＧｕＳｈｕｙｕ，ＣｈｅｎｇＬｕｏｇｅｎ
［摘要］运用ＲＴ — ＰＣＲ技术，从小菜蛾幼虫总ＲＮＡ反转录产物中扩增出泛素基因的ｃＤＮＡ序列．利用ＲＮＡ干扰（ＲＮＡｉ）技术将一段体外合成的与小菜蛾泛素延伸蛋白基因ＵＢＡ５２同源的ｄｓＲＮＡ注入四龄幼虫体内，以抑制小菜蛾ＵＢＡ５２基因的表达．半定量ＲＴ — ＰＣＲ结果显示，７２ｈ后沉默组小菜蛾幼虫体内ＵＢＡ５２基因的ｍＲＮＡ表达量显著下调．本实验成功沉默小菜蛾泛素基因，此ＲＮＡｉ干扰体系的建立为利用此技术分析小菜蛾及其他９月
南京师大学报（自然科学版）
ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＮＡＮＪＩＮＧＮ０ＲＭＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ）
Ｖ０１．３６Ｎｏ．３Ｓｅｐｔ，２０１３
小菜蛾泛素基因的克隆与分析
张宏，杜亚琼，李凤良，周洲，顾曙余，程罗根
（１．南京师范大学生命科学学院，江苏南京２１００２３）（２．贵州省农业科学院植物保护研究所，贵州贵阳５５０００６）
（ｄｓＲＮＡ）ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｔｏｔｈｅＵＢＡ５２ｇｅｎｅｗａｓｍｉｃｒｏｉｎｊｅｃｔｅｄｉｎｔｏ４ｔｈｉｎｓｔａｒｌａｒｖａｅｏｆＰｘｙｌｏｓｔｅｌｌａｔｏｓｕｒｐｒｅｓｓｔｈｅｇｅｎｅｅｘ — ｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｓｅｍｉ — ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ — ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ－ＰＣＲ）ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔＵＢＡ５２ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｒｅｄｕｃｅｄｓｈａｒｐｌｙａｔ７２ｈａｆｔｅｒｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅｕｂｉｑｕｉｔｉｎｇｅｎｅｗａｓｓｉｌｅｎｃｅｄｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｉｎｔｈｉｓ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｃＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｕｂｉｑｕｉｔｉｎｇｅｎｅｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＰｌｕｔｅｌｌａｘｙｌｏｓｔｅｌｌａｂｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｉｒｐｔｉｏｎ

小菜蛾的研究及初步探讨

2.4 小菜蛾泛素基因的研究目标
• 2.4.1 获得小菜蛾的UBI1、UBI2、UBI3和UBI4基因的完整序列. • 2.4.2 得到小菜蛾抗溴氰菊酯品系、敏感品系的泛素化蛋白质组以及在两种不同品系中差异表达的泛素蛋白质及其功能类型. • 2.4.3 根据现有研究资料和数据库，对所筛选并经过验证的差异表达蛋白质的作用方式和生化途径进行分析，阐明小菜蛾对溴氰菊酯的抗性机理，为有效预防和可持续性地治理抗性提供理论基础。
二小菜蛾的生物防治
• 2.1 背景
• 害虫综合治理(IPM)是控制害虫的有效途径和策略,生物防治是 IPM的一个重要组成部分,结合生物防治将各种控制措施有效合理地应用到整个体系中, 也是IPM取得成功的关键.
• 昆虫对杀虫剂的抗药性是在药剂的长期选择作用下，昆虫产生的一种生态适应和进化现象。这种复杂的选择过程显然与多种代谢和调节相关，需要多种蛋白质和酶的参与. • 研究发现:在小菜蛾控制抗药性的过程中有一些泛素-蛋白酶系统发生重要作用 • 泛素-蛋白酶系统(ubiquitin proteasome pathway，UPP)是存在于所有真核生物细胞的调控系统。泛素体系与生物胁迫和非生物胁迫也有着密切的关系。
2.3 小菜蛾的泛素机构基因分析
真核细胞中编码泛素的基因有两种类型，第一类基因编码单体泛素，多个泛素基因在染色体上头尾相接形成多个泛素基因的重复序列，常称为多聚泛素基因。这类基因的表达受环境胁迫、胞内代谢状况和细胞分裂周期等多种因素的调节；第二类基因是一种融合基因，该基因的表达产物是一个泛素分子的C-末端连接着一段由52或76～81 个氨基酸残基组成的扩展肽，扩展肽被特殊的酶切割下来，形成80S核糖体的组分.

小菜蛾泛素延伸蛋白基因的克隆与原核表达

的研究主要集中在高等动植物中，对昆虫泛素研而
主要试剂及工具酶：ＮＡ提取试剂盒、ＲＡＭＶ
究较少。近年来，多种昆虫泛素的基因结构、白反转录酶、ＴｑＤＮＡ聚合酶、胶Ｄ对蛋ｒａ凝ＮＡ回收试剂
素延伸蛋白基因ＰｚｕｉＧｎａｋＮ．Ｊ２４９，苷酸序列全长５７ｂ，中开放阅读框全长３７ｂ，．ｂ（ｅＢｎｏＦ５７８）核￣３ｐ其８ｐ编码
１９氨基酸残基，测分子质量为１．ｕ等电点为９１与已知真核生物泛素延伸蛋白的同源性为９～２个预６７ｋ，．，２９。Ｒ－Ｃ结果显示Ｐ￣ｂ在小菜蛾不同生长发育时期均有表达，中卵期、龄期和预蛹期含量较高，８ＴＰＲａｕｉ其３而
小菜蛾泛素延伸蛋白基因的克隆与原核表达
李晓梅陈永李殉钟国华
华南农业大学昆虫毒理研究室，州５０４广１６２
摘要
利用Ｒ－ＣＴＰＲ和ＲＡＥ技术，小菜蛾（ｕｅｌｙｏｔｌ）幼虫的ｃＡ为模板，隆获得泛Ｃ以Ｐｌｔｌｘｌｓｌ３龄ａｅａＤＮ克
水解酶复合体通路（ｂｑｉｎｐｏｅｓｍｅｐｔｗａ，Ｐｏｇ公司；达载体ｐＴ一２（）ｕｉｕｔｒｔａｏａｈｙｒｍｅａｉ表Ｅ３ａ＋由华南农业

小菜蛾普通气味结合蛋白Ⅰ基因的克隆及原核表达的开题报告

小菜蛾普通气味结合蛋白Ⅰ基因的克隆及原核表达
的开题报告
一、研究背景及目的：
小菜蛾（Platynota stultana）是一种在全世界都广泛分布的重要农
业害虫，以为害瓜、豆科等蔬菜作物而著称。

小菜蛾对植物花香和气味
十分敏感，因此，利用其嗅觉特性，通过研究其感觉系统的分子机制，
为其有效的控制提供重要的科学依据。

小菜蛾普通气味结合蛋白（General odorant-binding protein，GOBP）是其嗅觉感受器官中的一种重要蛋白质，参与了昆虫的嗅觉识别过程。

因此，本研究旨在通过克隆
小菜蛾的GOBP基因，并利用原核表达系统进一步研究其生物学特性和
生物活性。

二、研究内容和方案：
1、小菜蛾GOBP基因的克隆
从小菜蛾感觉器官中提取总RNA，通过反转录PCR方法合成cDNA。

基于序列比对，在已知的昆虫GOBP蛋白序列中设计特异性引物，利用PCR技术扩增得到小菜蛾GOBP基因的全长cDNA序列，并进行生物学信息分析。

2、小菜蛾GOBP基因的原核表达
将小菜蛾GOBP基因的编码序列克隆至原核表达载体上，通过大肠
杆菌表达系统在大肠杆菌中表达大量的小菜蛾GOBP蛋白并进行纯化。

运用Western blot和凝胶过滤层析等方法对其进行生物学活性的评估。

三、研究预期结果和意义：
通过本研究，预计能够获得小菜蛾GOBP的全长cDNA序列，并成
功进行原核表达，得到可溶性且具有生物活性的蛋白。

这将为小菜蛾嗅
觉感受器官的分子机制研究提供重要的工具和基础，同时也有助于为小菜蛾的控制提供科学依据。

小菜蛾颗粒体病毒Px26基因功能的初步分析的开题报告

小菜蛾颗粒体病毒Px26基因功能的初步分析的开题报告1.选题背景和意义小菜蛾（Plutella xylostella L.）是一种全世界广泛分布的重要农业害虫，主要以十字花科蔬菜为食物，对蔬菜生长期和品质产生严重影响。

目前，小菜蛾的防治主要依靠化学农药，但因其对药物的耐药性不断增强，对环境的污染也越来越严重。

因此，通过研究小菜蛾的基因调控机制，寻找新的防治策略，具有重要的理论和应用价值。

小菜蛾颗粒体病毒是一种寄生于小菜蛾颗粒体内的病毒。

以往的研究表明，病毒感染可以引起小菜蛾的死亡和生长发育异常，但目前对其致病机制的了解还不够深入。

而Px26基因是小菜蛾颗粒体病毒中一个蛋白编码基因，前期的序列分析表明其可能与病毒的感染和繁殖有关。

因此，对Px26基因的功能进行深入研究，对进一步了解小菜蛾颗粒体病毒的致病机理，寻找新的治疗或防治小菜蛾的方法有着重要的意义。

2.研究内容和方法本研究旨在对小菜蛾颗粒体病毒Px26基因的功能进行初步分析。

具体研究内容和方法如下：（1） Px26基因的克隆和表达。

根据已有的小菜蛾颗粒体病毒基因组序列，使用PCR方法扩增Px26基因，并将其克隆到表达载体中。

随后将载体转化入表达宿主细胞中表达重组蛋白，并进行蛋白检测和定量。

（2） Px26基因的功能分析。

通过蛋白互作、交互组合和功能验证等方法，对Px26基因在小菜蛾颗粒体病毒感染、繁殖和致病机理中的作用进行研究。

并探讨其与其他相关基因、信号通路的交互作用及信号转导途径的可能机制。

3.研究预期结果和意义本研究通过对小菜蛾颗粒体病毒Px26基因的功能进行深入研究，预期能够得到以下研究结果和取得相应的科学成果：（1）成功克隆和表达小菜蛾颗粒体病毒Px26基因。

（2）发现Px26基因在小菜蛾颗粒体病毒感染、繁殖和致病机理中具有重要的作用。

（3）探究Px26基因与其他相关基因、信号通路的交互作用及信号转导途径的可能机制。

通过以上的研究成果，可以深入了解小菜蛾颗粒体病毒的致病机理和Px26基因在其中的作用机制，为寻找新的防治小菜蛾的方法提供基础数据和理论支持，具有重要的科学意义和实际应用价值。

下载提示

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

【高中生物】功能基因的克隆及生物信息学分析

页数:10
基因克隆原理及实验介绍

页数:19
生物化学及分子生物学(人卫第九版)25基因结构功能分析和疾病相关基因鉴定克隆PPT课件

页数:30
功能基因的克隆及生物信息学分析

页数:8
基因结构与功能分析

页数:107
第五章基因克隆技术

页数:6
功能基因的克隆及生物信息学研究

页数:9
L_乳酸脱氢酶基因克隆及功能分析

页数:5

小菜蛾泛素基因的克隆与分析

合集下载

小菜蛾的研究及初步探讨

小菜蛾泛素延伸蛋白基因的克隆与原核表达

小菜蛾普通气味结合蛋白Ⅰ基因的克隆及原核表达的开题报告

小菜蛾颗粒体病毒Px26基因功能的初步分析的开题报告

文档推荐

最新文档