HIV检测技术
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HIV实验室诊断
人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)及其相关标志的检测是预防HIV感染和艾滋病临床治疗中重要的环节,在艾滋病的防治工作中具有重要作用,如艾滋病的诊断、HIV感染的诊断、血源及器官供体的筛选、流行病学调查、艾滋病病人及HIV感染者的病情动态观察、临床治疗疗效考核以及HIV疫苗的安全性和效果鉴定等。
HIV感染标志分为病毒标志、免疫标志和相关标志三大类。病毒标志是指直接从HIV感染者体内分离出病毒或检出HIV组成成分(抗原或核酸)。免疫标志是指HIV感染所产生的HIV抗原、抗体等免疫物质。相关标志是指HIV感染后与艾滋病病情进展有密切关系的某些标志,如CD4细胞、CD8细胞,β2微球蛋白、有关细胞因子等。这些标志的测定可为HIV感染及临床疗效的考核提供极为重要的诊断、治疗和预后指征。目前HIV抗体的检测是艾滋病实验室检测中最常用的方法,因为HIV抗体是患者感染HIV后最容易检出并且持续时间最长的免疫学标志,而且抗体的检测方法大多简便、经济,易于推广应用。
在介绍各种HIV实验室诊断方法之前,为了使实验室工作人员能够有效地确保结果准确、可靠、优质,我们必须对作为一种感染因子的HIV以及由它所导致的致命性危害有基本的认识。实验室工作人员应特别注意病毒的结构、抗原组成,人体的免疫反应,诊断试验的基本原理、试验结果的解释,以及为了准确而有效地提供实验诊断所必需的质量保证措施。如果由于缺乏技术专长或基本知识而造成不正确的试验结果是不可原谅的。现将有关内容扼要介绍如下:
一、人类免疫缺陷病毒(HIV)概述
(一) 艾滋病病原体的发现和命名
年份 事 由 命 名
1981 美国首先在洛杉矶男性同性恋中发现5例以往很罕见的卡氏肺囊虫肺炎和26例卡波济氏肉瘤患者,这些病人均表现有严重的免疫缺陷,但原因不明。 1982年将这种新的疾病命名为“获得性免疫缺陷综合征”
第28卷第3期 2010年6月 实 验 与 检 验 医 学 EXPERIMENTAL AND L B0RAT0RY MEDICINE ・267・
Vo1.28 No.3 Jun.2010
HIV的检测技术及其进展
曾令晓综述
(广西合山市人民医院检验科,广西合山546508)
中图分类号R512.91 文献标识码C 文章编号1674—1 129(2010)03—0267—03
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获得性免疫缺陷综合症(AIDS)简称艾滋病.是由人类免
疫缺陷病毒fHIV)引起的。艾滋病在我国的流行已经进入快速
增长期。预防和控制艾滋病已经刻不容缓。目前,HIV血清学 诊断仍然是AIDS早期诊断的主要依据…,因此建立特异、敏
感、实用的检测方法用于监测、诊断或血液筛查,控制艾滋病
的流行显得最为重要 自1985年第1代HIV抗体检测试剂
问世至今.HIV的实验室检测技术已得到了日新月异的发
展。
1抗体检测 HIV抗体一般在人感染后几周逐渐出现.可延续至终生
口 HIV抗体检测是目前HIV感染诊断的常规方法。步骤包括
初筛实验和确认实验,.最常用的初筛实验和确认实验分别是
酶联免疫吸附试验fELISA) ̄免疫印迹试验fwB1。
1.1初筛试验
1.1.1酶联免疫吸附试验fELISA) 检测HIV抗体的
ELISA是国际上应用最早、发展最快,目前仍然是最常用的
血液筛查检测技术131 基本原理是免疫反应物通过化学或免
疫学的方法形成酶结合物.酶结合物能与待检样品中相应的
抗原或抗体结合成为免疫复合物.然后加入酶底物.经酶的
催化或水解作用.无色底物产生颜色,用肉眼、分光光度计观
察结果 用于HIV抗体检测的ELISA试剂已经发展到第四
代 第一代试剂主要以病毒裂解物或部分纯化的病毒抗原包
被反应板.以检测血清中的抗体。由于包被的抗原不很纯,假
阳性率较高 第二代试剂使用基因工程方法得到的重组抗原
艾滋病(HIV)检测方法汇总
一、 艾滋病简介
艾滋病日的概念来源于1988年,全球卫生部大臣关于艾滋病预防计划的高峰会议上(W orld Summit of Ministers of Health on Programmes for AIDS Prevention)提出的。从此,这个概念被全球各国政府、国际组织和慈善机构采纳。从此,这个概念被全球各国政府、国际组织和慈善机构采纳。 自1981年世界第一例艾滋病病毒感染者发现至今,短短20多年间,艾滋病在全球肆虐流行,已成为重大的公共卫生问题和社会问题,引起世界卫生组织及各国政府的高度重视。为号召全世界人民行动起来,团结一致共同对抗艾滋病,1988年1月,世界卫生组织在伦敦召开了一个有100多个国家参加的“全球预防艾滋病”部长级高级会议,会上宣布每年的12月1日为“世界艾滋病日” (World Aids Day) ;1996年1月,联合国艾滋病规划署(UNAIDS)在日内瓦成立;1997年联合国艾滋病规划署将“世界艾滋病日”更名为“世界艾滋病防治宣传运动”,使艾滋病防治宣传贯穿全年。
二、 艾滋病(HIV)检测方法
(一)抗体检测
主要有酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光试验(IFA)。ELISA用去污剂裂解HIV或感染细胞液提取物作抗原,IFA用感染细胞涂片作抗原进行抗体检测,如果发现阳性标本应重复一次。为防止假阳性,可做Westernblot(WB,蛋白印迹法)进一步确证。
WB法是用聚丙烯酰胺凝胶电泳将HIV蛋白进行分离,再经传移电泳将不同蛋白条带转移于硝酸纤维膜上,加入病人血清孵育后,用抗人球蛋白酶标抗体染色,就能测出针对不同结构蛋白抗体,如抗gp120、gp41、P24抗体,特异性较高。
快速检测法,也称为金标法,也是抗体检测的一种方法,根据免疫层析法的原理,用于HIV抗体检测的定性检测。
(二)抗原检测
HIV磁微粒化学发光法(HIV Magnetic Particle Chemiluminescence Assay)是一种用于检测人体血液样本中HIV抗体的检测方法。该方法结合了磁性微粒技术和化学发光技术,具有高度的敏感性和特异性。
下面是HIV磁微粒化学发光法的基本原理和步骤:
样本处理:将待检测的血液样本进行预处理,通常包括血清或血浆的离心分离,以获取清晰的液体部分。
磁微粒标记:将特定的磁性微粒与HIV抗原或抗体进行结合。这些磁性微粒通常表面上包含有特异性的抗原或抗体,能够与HIV抗体或抗原发生特异性的结合。
洗涤步骤:通过洗涤步骤去除非特异性的反应物和杂质,以减少干扰和背景信号。
化学发光反应:添加化学发光底物,触发化学反应,使标记在磁微粒上的酶释放能量并产生发光信号。
信号检测和分析:利用光学设备或化学发光分析仪器,测量和记录产生的发光信号强度。
结果解读:根据标准曲线或比较待测样本与阴性和阳性对照样本的发光强度,确定样本中HIV抗体的存在与否。
HIV磁微粒化学发光法具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点,被广泛用于HIV感染的诊断和筛查。它可以快速、准确地检测HIV抗体,为临床医生提供重要的诊断依据和决策支持。