实验十四细胞免疫功能测定
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天然免疫功能的检测实验报告天然免疫是特异性免疫的基础,并参与和影响特异性免疫,因此检测机体天然免疫功能的状态,是评价机体免疫功能的重要组成部分。
一、中性粒细胞吞噬功能检测中性粒细胞吞噬细菌的现象称为小吞噬现象,可以通过体外实验观察其吞噬细菌的情况并测定吞噬功能。
【材料】白色葡萄球菌18小时肉汤培养物、抗凝人血、小试管、玻片、吸管、毛细吸管、瑞氏染色液。
【方法】1、用酒精棉球消毒耳垂后,取血4滴(约0。
2ml),收集于肝素(50u、ml)抗凝管中,混匀。
2、加入白色葡萄球菌18小时肉汤培养物2滴(约0。
1ml,12亿菌、ml)。
3、充分混匀,置37℃孵育10分钟后取出。
4、取—滴全血-白色葡萄球菌混合液置于洁净的载玻片上,推成薄血片,空气中自然干燥。
5、瑞氏染色:瑞氏染液数滴覆盖血膜,染1分钟,再加等量pH6。
8PBS与染液混合,染10~15分钟,注意勿使染液干涸。
用蒸馏水冲洗,冲洗时平持玻片,在一端加水,使染料“漂”走。
空气中自然干燥或滤纸印干。
6、油镜观察,可见中性粒细胞吞噬葡萄球菌。
如染色正确,可见细胞核及被吞噬细菌染成紫色,而中性粒细胞的细胞浆则为淡红色。
【结果】观察100个中性粒细胞,分别记录吞噬细菌的中性粒细胞数和每个中性粒细胞吞入的细菌数。
计算公式为:二、巨噬细胞吞噬功能检测巨噬细胞吞噬异物的现象又称为大吞噬现象。
此试验通过检测巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用,了解巨噬细胞的吞噬功能。
【材料】小白鼠、灭菌肉汤培养基、1%鸡红细胞悬液、Hank液、肝素、瑞氏染液。
【方法】1、试验前一天,于小白鼠腹腔内注射灭菌肉汤培养基1ml。
2、试验当天,小白鼠腹腔内注入1%鸡红细胞悬液1ml,轻揉腹部,使鸡红细胞分散。
3、30分钟后,腹腔内注入Hank液2ml,轻揉腹部,然后吸取腹腔液注入盛有1mlHank液(内含肝素10单位)试管中,37℃静置30分钟,1500转、分,离心10分钟。
4、取沉淀物作涂片,自然干燥,瑞氏染色,镜检。
实验四免疫学实验一、机体体液免疫功能测定(一)凝集反应【目的】了解玻片凝集试验、试管凝集试验及胶乳间接凝集抑制试验的操作过程、结果分析和实际应用。
【原理】颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体在一定电解质存在的条件下发生特异性结合并出现肉眼可见的凝集块的现象称为凝集反应。
凝集反应既可用已知抗体检查和鉴定未知的抗原(如鉴定细菌),也可用已知抗原检查血清中相应的抗体;既可用作定性检测,又可用于定量检测。
凝集反应分两种。
一种是颗粒性抗原与抗体直接结合出现的凝集现象,称为直接凝集反应;另一种是将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关的载休颗粒表面,再与相应的抗体结合而出现的凝集反应,称为间接凝集反应。
如将抗体吸附于载体颗粒表面,再与相应的抗原结合而出现的凝集反应则称为反向间接凝集反应。
1、玻片凝集反应【材料】伤寒诊断血清、伤寒沙门菌及大肠埃希菌培养物、载玻片、生理盐水等。
【方法】①取载玻片1张,左侧加生理盐水1滴,中间及右侧各加伤寒诊断血清1滴;②用接种环取伤寒沙门菌培养物少许,分别与盐水及中间的伤寒诊断血清混匀。
同法取大肠埃希菌培养物与右侧伤寒诊断血清混匀;③轻轻摇动玻片1~2min后,观察结果;④观察后,将玻片直接投入消毒缸,不要冲洗,以防污染。
【结果】出现凝集物者为阳性反应,均匀混浊无凝集物者为阴性反应。
【注意事项】玻片凝集反应①用接种环取一种试剂前后均需进行烧灼,不可有杂菌污染以及前一试剂残留。
②用接种环取细菌时应先烧灼灭菌,待冷却后方可挑取细菌。
③用接种环加细菌于血清中后,应先烧灼接种环,再取细菌加入另一血清中。
【结果分析】左:中:右:应用:2、试管凝集反应试管凝集反应为半定量试验,常用已知抗原检测患者血清中相应抗体的效价。
【材料】伤寒诊断血清(抗体)、伤寒菌液(抗原)、生理盐水(NS)、刻度吸管、试管等。
【方法及结果】见表试管凝集反应的方法试管 1 2 3 4 5 67生理盐水(ml) 0.9 0.5 0.5 0.5 0.5 弃去0.50.5伤寒诊断血清(ml) 0.1 0.5 0.5 0.5 0.50.5 +NS 0.5血清稀释倍数1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320对照菌液(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.50.5血清最终稀释倍数1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640对照56℃ 4小时,4℃冰箱过夜,次日观察结果结果效价【结果判断】见表手持试管,对光观察管内液体混浊度及管底沉淀物之性状。