小鼠肾脏细胞系的建立

•医学继续教育•肾脏类器官的建立及其应用吴杭迪"王钢"综述刘志红审校2摘要近年来，类器官作为区别于传统二维细胞以及模式动物的一种全新研究手段开始受到学术界的关注，并开始在肾脏疾病领域应用。

本文将对近期肾脏类器官的诱导方法，模型建立及其在疾病研究、药物有效性及肾毒性检测以及再生医学领域的应用进行综述。

关键词肾脏类器官诱导方法应用Generation of kidney organoid and its applicationsWU Hangdi八,WANG Gang2*,LIU Zhihong1'21Zhejiang University School of Medicine,Hangzhou310058.China2National Clinical Research Center of Kidney Diseases,Jinling Hospital,Nanjing University School of Medicine,Nanjing 210016,China*WU Hangdi and WANG Gang are considered to be first authorsABSTRACT Recently,organoids have become a research focus owing to their advantages over the traditional2D cell and animal models.In the field of nephrology,the protocols for generating kidney organoids have been gradually established.This review focuses on the different protocols and the applications of kidney organoids in disease modeling,drug screening as well as regenerative medicine.Key words kidney organoid differentiation protocol application类器官(Organoid)是一种由多能干细胞诱导分化形成的体外3D结构,包含多种细胞类型以及细胞外基质，在结构及功能上与体内器官相似相较于2D细胞培养，类器官的优势在于其不仅能表现出更接近生理条件下的细胞类型组成，而且能够反映细胞间以及细胞与细胞外基质间的相互作用。

2型糖尿病鼠类模型的研究进展高秀莹，周迎生【摘要】【摘要】小鼠、大鼠糖尿病模型对基础与临床防治研究十分重要，不同的研究目标对应不同的动物模型载体。

本文就目前常用的2型糖尿病鼠类模型的构建、主要疾病特征及应用等进行评述，为研究者了解、选择适合的动物模型提供参考。

【期刊名称】中国实验动物学报【年(卷),期】2014(000)004【总页数】6【关键词】【关键词】 2型糖尿病；动物模型；鼠类综述·进展糖尿病已成为全球性的公共健康问题，据IDF统计2013年全球糖尿病患者达3.82亿，预计至2035年全球糖尿病患者将增至5.92亿[1]。

在我国，糖尿病成为继肿瘤、心脑血管病之后的第三大严重危害人们健康的慢性疾病，2010年我国糖尿病患者已达9240万[2]，其中超过90%的患者为2型糖尿病。

2型糖尿病的发病机制尚未明确，建立一种既符合人类2型糖尿病发病特点，又稳定、实用的动物模型在2型糖尿病研究中起着至关重要的作用。

鼠类作为目前应用最广的糖尿病动物模型，因其体积小、生长周期短、经济易得、易于实现基因修饰等，较其他种属有着无可比拟的优势。

目前2型糖尿病鼠类模型主要分为三大类：自发性2型糖尿病模型、诱发性2型糖尿病模型、转基因/基因敲除2型糖尿病模型。

本文对近年来国内外较常用的2型糖尿病鼠类模型构建、主要疾病特征、确立标准及其应用进行概述，为研究者提供参考。

1 2型糖尿病鼠类模型分类1.1 自发性2型糖尿病模型该模型动物未经过任何有意识的人工处置，多数采用有自发性糖尿病倾向的近交系纯种动物，按照饲养条件喂养，自发成模，最接近人类疾病的发病过程。

该模型可分为肥胖自发性2型糖尿病模型和非肥胖自发性2型糖尿病模型，因2型糖尿病患者多伴肥胖，故以前者应用居多。

1.1.1 肥胖自发性2型糖尿病模型常用的肥胖自发性糖尿病模型包括单基因遗传背景的ob/ob小鼠、db/db小鼠、Zucker糖尿病肥胖大鼠(Zucker diabetic fatty rat,ZDF)和多基因背景的KK/Ay小鼠、OLETF大鼠。

肿瘤动物模型的构建第一类是皮下移植瘤顾名思义，这种模型的建立是将肿瘤细胞或肿瘤组织直接种植在小鼠的皮下。

种植的点也有讲究，一般选择血运淋巴回流丰富的腹股沟和腋窝。

可根据实验设计选择移植点，统一移植点的位置，除了遵守实验统一的条件外，待肿瘤成熟后收集肿瘤时留下照片证据也显得美观。

裸鼠（Balb/c 鼠，无毛发，T 淋巴细胞缺陷）是比较常见和常用的实验用鼠，尤其是在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。

裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。

当然，这种肿瘤模型也有缺陷，即不能很准确的模拟正常人体肿瘤发生发展的过程。

肿瘤细胞移植时的简要步骤：首先准备好要移植的肿瘤细胞（细胞量根据不同肿瘤略有不同，我们所用的前列腺癌细胞系每个移植点一般选择1x106左右；肿瘤细胞可与基质胶1:1 混匀后用 1 ml 注射器吸取，基质胶能够给肿瘤细胞提供营养环境，有助于肿瘤细胞生长）。

戴无菌手套后，将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤，然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际。

将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒 3 次。

右手持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器，在腹股沟或腋窝的位置，45 度斜角进针，注意不要突破腹膜，将针头保持于皮下位置。

然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下，将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下（肿瘤细胞量约1x106），快速退针，左手食指轻压针孔约1 min 后将小鼠放回饲养笼中，注意将小鼠侧放于垫料上，防止其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。

2～3 h 后观察小鼠是否苏醒。

如果是利用肿瘤组织（人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，则需要首先将肿瘤组织用无菌PBS（或1640 培养基）洗涤 3 次，然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3 体积的小块（种植前可裹基质胶）备用。

将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上，四肢用胶带固定，将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒3 次，然后用眼科剪剪开约0.5 cm 小口，小镊子将皮下筋膜与皮肤分开，然后将肿瘤组织放入贴近腹股沟或腋窝的深部，每个位置放置2～3 块肿瘤组织，注意不同组间统一放置肿瘤组织块数以保持一致。

8 Experimental research | 试验研究0 引言在我国养殖业和野生动物保护范围中，水禽占有重要的一席之地，通常运用传代细胞系研究病毒感染并制作抗体或疫苗。

在水禽方面，相关论文较为稀少，在养殖鹅的疾病中，特别是星状病毒所引起的禽类痛风[1]上还没有较为成熟的研究。

大部分病毒都会有其特定的亲和的组织部位，每种病原对不同生物的组织亲和性也不同，禽类中目前研究较为完善的鸡细胞系与鹅类疾病的研究并不适配，同时由于没有SPF 鹅胚导致分离病毒时总会被母源抗体影响难以进一步分离病毒，是研发疫苗的一道难关。

利用SV40-LT 质粒转导细胞，SV40病毒即为猿猴空泡病毒40，源于恒河猿猴的肾脏细胞，人们发现sv40病毒是一种小DNA 肿瘤病毒，根据相关文献介绍，SV40病毒可转化细胞的功能，即进入到细胞中可使细胞转化并使增殖能力加强，部分细胞获得无限增殖[2]。

相关研究表明，SV40病毒的细胞转化特性主要与早期蛋白T 抗原有关，SV40-LT 抗原通过与肿瘤抑制基因的产物相结合使其失活来介导细胞的永生化[3]，因此SV40LT 抗原被广泛用于肿瘤发病机制的研究和转基因动物模型的建立，且由于其具有较强的细胞转化功能，常被用来建立永生化细胞系[4-5]。

研究将SV40-LT 抗原基因转导进入基金项目：利用SV40-LT 载体构建水禽肾或胚胎成纤维细胞系，项目编号：202010225017作者简介：李清欣（1997-），女，山东菏泽人，在读硕士研究生，研究方向：野生动物传染病。

通信作者：张彦龙（1968-），男，吉林长春人，副教授，博士，研究方向：野生动物传染病。

利用SV40-LT载体构建鹅肾细胞系李清欣，颜安，苏明欣，况思溶，张彦龙（东北林业大学，哈尔滨 150040）摘要：近年我国的水禽养殖业迅速发展，但对于鸭鹅等水禽的疾病防控主要专注于禽流感、新城疫等疾病。

自2017年起于我国养鹅场突然爆发的雏鹅痛风至死亡等的疾病，由于缺乏适宜的实验室宿主系统，对病毒的分离鉴定及后续疫苗的开发产生深远影响。

胆维丁乳对酵母多糖所致多器官功能障碍综合征小鼠肾脏作用的研究孙灿;刘凯;赵晴;孔娟【摘要】目的研究胆维丁乳对酵母多糖所致多器官功能障碍综合征小鼠肾脏的作用.方法选取C57BL/6源性的野生小鼠36只,随机分为对照组、胆维丁乳组、酵母多糖组、胆维丁乳+酵母多糖组,每组9只,室温饲养,按组别分别自由饮水或添加胆维丁乳喂养14 d.2周后,酵母多糖组、胆维丁乳+酵母多糖组腹腔注射酵母多糖混悬液,对照组、胆维丁乳组腹腔注射等量0.9％氯化钠溶液,18h后处死各组小鼠,分别进行HE染色,观察肾脏组织病变情况;Western blot技术检测炎症因子蛋白表达;用TRizol法按照试剂说明书提取总RNA,用反转录试剂盒将RNA反转录成cDNA;采用SPSS 16.0进行统计学处理.结果胆维丁乳+酵母多糖组小鼠炎症因子IL-6、IL-18蛋白及mRNA的表达、尿素及肌酐水平高于酵母多糖组(P＜0.05),且肾脏组织病理学改变较严重.结论对于正常生长的小鼠,给予胆维丁乳不会加重小鼠的肾脏负担;对于已经发生急性肾损伤的小鼠,胆维丁乳的摄入会加重肾脏损伤.【期刊名称】《实用药物与临床》【年(卷),期】2016(019)012【总页数】5页(P1457-1461)【关键词】胆维丁乳;酵母多糖;急性肾损伤【作者】孙灿;刘凯;赵晴;孔娟【作者单位】中国医科大学附属盛京医院临床营养科,沈阳110004;辽河油田总医院儿科一病区,辽宁盘锦124010;中国医科大学附属盛京医院临床营养科,沈阳110004;中国医科大学附属盛京医院临床营养科,沈阳110004【正文语种】中文多器官功能障碍综合征(Multiple organ dysfunction syndrome，MODS)是当机体受到感染、休克、创伤、胰腺炎等多种打击后发生的临床综合征，发病机制复杂，是ICU危重症患者的主要死亡原因，MODS时急性肾损伤进展快，并影响预后。

MODS是多种打击诱发的临床综合征，加上治疗因素干扰，其病理过程和临床特征模拟十分困难[1-2]。

小鼠 Lewis肺癌原位模型的建立李宁;张晓晔;蒋中秀;刘洋;李雪娇【摘要】目的：利用Matrigel与Lewis制备细胞混悬液注射于小鼠左肺内，建立小鼠Lewis肺癌原位模型，评价其肿瘤生长情况、转移情况，以期建立更稳定、更接近于人肺癌生长情况的小鼠肺癌原位模型。

方法将处于对数生长期的Lewis 肺癌细胞混悬于Matrigel中，接种于C57BL/6近交系小鼠左肺内。

分别于第4、7、10、13、16天各处死5只小鼠，观察其局部成瘤率、肿瘤生长情况、中位生存期及肿瘤转移情况，并对各阶段小鼠行肺部，肝脏，肾脏，脾脏病理切片检查。

结果术后第7天解剖的5只小鼠中，3只小鼠肺上可见小的瘤结节形成，其余2只肺上未见肉眼成瘤，行病理HE染色检查在显微镜下可见2只小鼠肺脏有小的瘤结节形成。

术后第10天以后处死的所有小鼠肺上均有肉眼成瘤，术后第13天，所有小鼠肺原位成瘤并伴有血性胸腔积液、胸腔内转移。

术后第25天，有1只小鼠出现上述转移的同时还出现了心包膜转移及肾脏远处转移。

5只小鼠生存期分别为17 d、20 d、22 d、22 d、25 d，小鼠中位生存期为21.2 d（17～25 d）。

成瘤率100％。

结论利用Matrigel法成功建立小鼠Lewis肺癌原位模型，稳定性好，成瘤率高，并具有远处转移的特性，更接近于人肺癌的发生、发展过程。

%Objective To establish a mouse model of orthotopic Lewis lung carcinoma using Matrigel, to evaluate the tumor growth and metastasis, and to provide a more stable mouse model of orthotopic lung cancer, which is more similar to human lung cancer.Methods Logarithmic phase of cultured Lewis lung cancer cells were suspended in Matrigel, vac-cinated into the left lung of inbred C57BL/6 mice.Five mice were killed on the 4th, 7th, 10th, 13th, and 16th days, re-spectively, and to observe the mediansurvival, tumor formation rate, tumor growth, and metastasis.Pathological changes of the mouse lung, liver, kidney and spleen were examined.Results In 5 mice killed on the 7th postoperative day, small tumor nodules were observed on the lung in three mice and no tumor was visible by gross inspection in the other two mice, but small tumor nodules were observed under the microscope.For all the mice killed on the 10th postoperative day, tumors were visible to the naked eye on the lung of all the five mice.On the 13th day, orthotopic tumor was observed on the lung with bloody pleural effusion and pleural metastasis in all the five mice.On the 25th day, in addition to the pleural metasta-sis, one mouse had pericardial metastasis and renal metastasis.The survival periods of the 5 mice were 17 d, 20 d, 22 d, 22 d, and 25 d, respectively, with a median survival period of 21.2 d (17-25 d), and the tumor formation rate was 100%.Conclusions Mouse models of orthotopic Lewis lung carcinoma is successfully established using injection of tumor cells suspended in Matrigel.This model is more similar to the growth of human lung cancer, with good stability, high tumor formation rate and characteristics of distant metastasis, therefore, is worthy of further application.【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】5页(P79-83)【关键词】小鼠;肺癌;动物模型;Matrigel;Lewis细胞【作者】李宁;张晓晔;蒋中秀;刘洋;李雪娇【作者单位】中国医科大学附属盛京医院，沈阳 110004;中国医科大学附属盛京医院，沈阳 110004;中国医科大学附属盛京医院，沈阳 110004;中国医科大学附属盛京医院，沈阳 110004;中国医科大学附属盛京医院，沈阳 110004【正文语种】中文【中图分类】Q95-33目前，在肺癌的动物实验中，大多使用小鼠皮下种植肺癌细胞系，在皮下形成肺癌肿瘤结节的动物模型，如孙秋艳等[1]用体外培养的Lewis细胞悬液注射于小鼠左侧腋下，形成皮下肿瘤；Xu等[2]应用A549肺癌细胞悬液加入等量的Matrigel 中，注射至裸鼠的皮下组织亦可形成肿瘤模型。