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高肺血流性肺动脉高压大鼠中CTGF表达及法舒地尔的干预作用

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󰀁第48卷󰀁第2期󰀁Vo.l48󰀁No.2󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁山󰀁东󰀁大󰀁学󰀁学󰀁报󰀁(医󰀁学󰀁版)JOURNALOFSHANDONGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES)󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁2010年2月󰀁Feb.2010󰀁

收稿日期:2009-09-28基金项目:山东省自然科学基金资助课题(Y2007C040),山东省科技攻关计划(2007GG30002001)。作者简介:苏宏(1984-),女,硕士研究生,主要从事小儿先天性心脏病的研究。通讯作者:王一彪(1963-),男,教授,主要从事小儿先天性心脏病的研究。E-mai:lwangyibiao@sdu.edu.cn󰀁文章编号:1671-7554(2010)02-0023-05

高肺血流性肺动脉高压大鼠中CTGF表达及

法舒地尔的干预作用

苏宏1,王一彪1,马宇1,朱晓波1,2,王进3,陈鸥4,冯晓丽1

(1.山东大学第二医院儿科,济南250033;2.山东大学医学院,济南250012;3.山东中医药大学第二附属医院儿科,济南250001;4.山东大学护理学院,济南250012)

摘要:目的󰀁研究结缔组织生长因子(CTGF)在高肺血流性肺动脉高压大鼠模型中的表达及法舒地尔对其的调控作用。方法󰀁将75只Wistar大鼠分为对照组、2个分流组和2个分流+法舒地尔干预组,每组15只。对照组于第4周测量右心室平均收缩压(RVSP)、2个分流组和2个分流+法舒地尔干预组分别于第2周和第4周测量RVSP。采用Westernblot法和免疫组化检测各组肺动脉中CTGF、转化生长因子󰀁1(TGF-󰀁1)的含量以及Rho激酶的活性。结果󰀁分流组大鼠第2周及第4周肺动脉明显增厚(P<0.01)、重塑,RVSP增加(P<0.01),CTGF及TGF-󰀁1表达增加(P<0.01),且Rho激酶活性增强(P<0.01)。应用法舒地尔干预后,肺动脉Rho激酶活性明显降低(P<0.01),且CTGF和TGF-󰀁1在肺动脉中的表达较分流组明显降低(P<0.01)、肺血管重塑较分流组显著减轻(P<0.01)。结论󰀁CTGF,TGF-󰀁1参与了高肺血流性肺动脉高压的发病过程,且Rho激酶信号转导通路对肺血管的重塑及CTGF,TGF-󰀁1的表达有着重要的调控作用。关键词:结缔组织生长因子;转化生长因子󰀁1;法舒地尔;肺动脉高压;大鼠,Wistar中图分类号:R725.4󰀁󰀁󰀁文献标志码:A

ResearchofCTGFexpressionandregulationbyfasudilinthe

pumlonaryhypertensionratmodel

SUHong1,WANGY-ibiao1,MAYu1,ZHUXiao-bo1,2,WANGJin3,CHENOu4,FENGXiao-li1

(1.DepartmentofPediatrics,SecondHospitalofShandongUniversity,Jinan250033,China;2.SchoolofMedicineShandongUniversity,Jinan250012,China;3.DepartmentofPediatrics,SecondAffiliatedHospitalofShandongUniversityofChineseMedicine,Jinan250001,China;4.SchoolofNursing,ShandongUniversity,Jinan250012,China)

Abstract:Objective󰀁Toinvestigatetheexpressionsofconnectivetissuegrowthfactor(CTGF)andtransforminggrowthfactor-󰀁1(TGF-󰀁1)inpulmonaryvascular,andtofindiffasudi,laRhokinaseinhibitor,hasprotectiveeffectonthishighbloodflowinducedpulmonaryhypertensionmodelanditspossiblemechanism.Methods󰀁Theratmodelofpulmonaryhypertensionwasestablishedbyrightcarotidartery-externaljugularveinshuntoperation.75maleWisterratswererandomlydividedintothecontrolgroup,the2-weekshuntmodelgroup,the4-weekshuntmodelgroup,the2-weekfasudilgroupandthe4-weekfasudilgroup(15ineachgroup).Therightventriclesystolicpressure(RVSP)andsmallpulmonaryarterialmorphologicchangesineachgroupwerestudiedwithamicroscopeformorphometricanalysis.TheExpressionsofCTGFandTGF-󰀁1wereinvestigatedbyWesternblotandimmunohistochemistry.Results󰀁Pulmo-naryarterialmorphologicchangesinthe2shuntgroupsshowedthatWT%,RVSP,CTGFexpressionandTGF-󰀁1󰀁24󰀁山󰀁东󰀁大󰀁学󰀁学󰀁报󰀁(医󰀁学󰀁版)48卷2期󰀁

expressionincreasedsignificantly.Howeverinthe2fasudilgroups,CTGFandTGF-󰀁1expressionsdeceasedmoresig-nificantlythaninthecorrespondingshuntgroups.Conclusion󰀁Fasudilmaypartlypreventthedevelopmentofpulmona-ryhypertensionandpulmonaryvascularremodelinganddecreaseexpressionsofCTGFandTGF-󰀁1inhighflowinducedpulmonaryhypertension.Keywords:Connectivetissuegrowthfactor;Transforminggrowthfactor-󰀁1;Fasudi;lPulmonaryhypertension;Rats,Wistar

󰀁󰀁小儿左向右分流性先天性心脏病常引起难治性

的肺动脉高压,肺动脉平滑肌的增生重塑,大量胶原

的合成是肺动脉高压的显著特征。而结缔组织生长

因子(CTGF)在胶原合成和细胞增殖中有着重要的

作用。如果CTGF表达过度,血管平滑肌细胞的生

长率和迁移率都将明显增加[1]。CTGF在体内和体

外均有促进血管生成的作用[2]。本研究通过建立大鼠高肺血流性肺动脉高压大鼠模型,观测CTGF及其

相关调控因子转化生长因子󰀁1(TGF-󰀁1)的表达,并

应用Rho激酶抑制剂法舒地尔进行干预,旨在进一步

探讨高肺血流性肺动脉高压肺动脉重塑的机制。

1󰀁材料与方法

1.1󰀁材料󰀁普通级雄性Wistar大鼠75只,体质量

180g~200g,由山东大学实验动物中心提供。兔抗大鼠TGF-󰀁1多克隆抗体、兔抗大鼠CTGF多克隆

抗体、兔抗大鼠P-MYPT-1多克隆抗体、SABC免疫

组化试剂盒均购于武汉博士德生物工程有限公司。

1.2󰀁方法

1.2.1󰀁动物分组与左向右分流的大鼠肺动脉高压模型的制备󰀁按随机原则将大鼠分为对照组、分流2周

组和分流4周组、分流+法舒地尔干预(30mg/kg)2

周组和4周组,每组15只。分流组通过套管法建立

高肺血流性肺动脉高压的动物模型。对照组大鼠仅做假手术,于第4周处死。大鼠术前6h禁食,10%

水合氯醛50mg/kg腹腔注射麻醉,固定于手术板

上,备皮(颈部皮肤),肝素1mg/kg腹部皮下注射

防凝。自胸骨上缘至下颌骨下方做颈部正中切口,

显露右颈外静脉,在其第一个属支处切断并结扎远端,近心端留牵引线备用。游离右侧颈总动脉,以小

血管夹夹住近心端,距颈内、外动脉分叉0.5cm处

结扎,切断颈总动脉,近心端动脉用微型剪纵行剪开

血管壁1mm,滴加稀释的罂粟碱1滴,将颈总动脉

末端分成两部分,8-0尼龙线牵引颈总动脉通过套管,将颈总动脉断端翻转固定于套管之外,备用。纵

形剪开右颈外静脉,滴加稀释的罂粟碱,将颈总动脉插入颈外静脉内,结扎。剪去颈外静脉的远端和套管的延长部分。开放动脉夹可见颈外静脉近心端有红色血流通过并出现明显的搏动及膨起。

1.2.2󰀁血流动力学测量󰀁处死动物前,进行血流动

力学测定。将大鼠以10%水合氯醛50mg/kg腹腔

麻醉后固定于手术台上,用一充盈肝素溶液的聚乙

烯管(外径0.82mm),从分离的右颈外静脉经右心房插入至右心室,导管接压力换能器,通过多导生理

记录仪(Gould3400,Spacelabs公司)记录右心室收

缩压(RVSP),分流组及分流+法舒地尔干预组大

鼠在测压前应注意观察右侧颈外静脉与颈总动脉连

接处的血流是否通畅。1.2.3󰀁肺组织及形态学分析󰀁动物测压后放血处

死动物,迅速剪下大鼠肺脏,取左肺下叶在4%的多

聚甲醛中固定,用于脱水后做石蜡包埋,并制作切

片。其余的肺组织在冰上分离其肺动脉至最远端,清洗后置于-80󰀁冰箱中备用。各组大鼠左肺中

段的石蜡切片,HE染色后在光学显微镜下观察肺

小动脉形态学改变并摄片。应用电子计算机图像分

析仪对各组动物肺组织切片中同一部位、外径为

50~200󰀁m之间的肺小动脉进行图像分析,取平均值,计算管壁厚度与血管外径比值(WT%)。血管

外径为横断面上外弹力膜之间的平均距离,管壁厚

度为外弹力膜到内弹力膜之间的距离。至少测量

10个动脉血管厚度占血管外径的比值,计算血管中

膜厚度所占血管外径的百分比。1.2.4󰀁Westernblot分析及Rho激酶活性检测󰀁

Rho激酶通过磷酸化Thr-696激活P-MYPT-1,故

Rho激酶的活性用MYPT-1磷酸化的程度来反映。

取冻存肺动脉置于300󰀁L的蛋白提取液中制成匀

浆,冰浴,15000r/min离心10min。取上清液为蛋白提取液,用于测定TGF-󰀁1和CTGF蛋白的含量。

在十二烷基硫酸钠存在下的聚丙烯酰氨凝胶电泳

(SDS-PAGE)电转硝纤膜,封闭,滴加一抗。室温孵

育3h后,TBST洗膜。然后用辣根过氧化物酶耦联

的二抗,室温孵育1h,TBST洗膜后加入ECL底物显色液显色、压片、洗片。采用QuantityOne4.40

图像分析软件扫描测定吸光度值。以󰀁-actin作为

内参,目的蛋白显色条带灰度与󰀁-actin显色条带的

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法舒地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响研究

法舒地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响研究

法舒地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响研究

目的：研究法舒地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响。方法：使用大脑中动脉线栓法制作大鼠大脑脑缺血再灌注损伤模型120只，缺血1.5 h再灌注24 h。采用随机分配法分为法舒地尔治疗组、假手术组、模型组，每组40只。法舒地尔治疗组术前注射用药法舒地尔，再次给药时间为术后24 h。评定三组大鼠的神经功能和神经细胞损伤程度、脑含水量、脑梗死体积和过氧化物酶的活性强度，应用ELISA及免疫组织化学法检测HMGB1免疫阳性细胞不同时间点表达水平的动态变化。结果：法舒地尔治疗组的大鼠神经缺陷评分明显低于模型组，梗死体积明显小于模型组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。法舒地尔治疗组大鼠的过氧化物酶的活性强度、脑含水量和阳性颗粒表达结果均低于模型组，前者的炎症反应明显轻于后者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：法舒地尔通过抑制HMGB1的相应表达而抑制大鼠的炎症反应，减轻并改善脑缺血再灌注损伤对大鼠神经功能缺损。

标签： 法舒地尔； 脑缺血再灌注损伤； 炎症反应

脑缺血再灌注损伤是缺血性脑血管病在生理和病理上的重要环节，而脑缺血再灌注损伤的重要中心环节为过度的炎症反应，高迁移率族蛋白的表达程度可用来反映法舒地尔对炎症反应的医治程度，高迁移率族蛋白通过破坏凝血、抗凝血和血脑屏障、促进神经细胞凋亡等加重脑损伤[1-2]。本文通过构造模型研究法舒地尔对于脑缺血再灌注损伤的神经功能和炎症反应的影响，探讨法舒地尔在脑缺血再灌注损伤的作用机制，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

选自2015年4-9月，实验动物：雄性SD大鼠120只，体重200～250 g，清洁级，来源于笔者所在学校实验动物学部，所有大鼠均置于相同的环境下进行饲养，温度（25.0±0.5）℃，相对湿度（60.0±1.5）%，并提供适宜的食物和水。

1.2 实验方法

脑缺血再灌注模型制作：将120只大鼠平均分为法舒地尔治疗组、模型组和假手术组三组，制作脑缺血再灌注损伤模型，对大鼠进行麻醉后分离其右侧的颈内、外和颈总动脉，结扎翼腭动脉。在颈总动脉处切开一小口，将一根4-0的硅胶尼龙线轻轻插入该小口处，遇到阻力时停止插入，遇到阻力代表硅胶尼龙线的尖端已进入大脑的前动脉，此时关闭大脑中动脉的起始处。阻闭2 h后，将麻醉状态下的大鼠从其颈总动脉中抽出缝线行再灌注。注意事项：手术过程中使用烤灯保持大鼠体温为37 ℃。法舒地尔治疗组的大鼠在术前注射法舒地尔15 mg/kg，术后12 h再次给药，模型组等量注射0.9%氯化钠溶液，其他条件保持一致。

法舒地尔对阿霉素致大鼠心肌损伤的保护作用

法舒地尔对阿霉素致大鼠心肌损伤的保护作用

法舒地尔对阿霉素致大鼠心肌损伤的保护作用

董文哲;阮林;何并文;彭丹晖;文韬;梁新强;杜学柯;陈肖东

【期刊名称】《中国癌症防治杂志》

【年(卷),期】2015(7)3

【摘 要】目的：探讨法舒地尔（fasudil，Fas）干预对阿霉素（adriamycin，ADM）所致大鼠心肌损伤的保护作用，为ADM化疗的心肌保护用药提供实验依据。方法将32只SD大鼠随机分为4组：A组（空白对照组），B组（ADM组），C组[ADM+Fas 2.5 mg/（kg·d）组]，D组[ADM+Fas 10 mg/（kg·d）组]，每组8只。分别于T1（实验开始前）、T2（实验第3天）、T3（实验第15天）、T4（实验第20天）四个时点采集大鼠血液标本，用ELASA法检测大鼠血清氨基末端B型利钠肽原（NT-pro BNP）、心型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）、心肌肌钙蛋白I（cTnI）的水平（简称三联指标）；观察各组大鼠心肌组织病理学变化并进行评分。结果优大鼠血清NT-pro BNP、H-FABP、cTnI的水平比较：A组大鼠中三联指标在T1、T2、T3、T4四个时间点的水平比较无明显差异（P>0.05）；B组大鼠中，T2、T3、T4时间点的三联指标均明显高于T1，差异均有统计学意义（P均<0.05）；C组、阅组大鼠中，T2、T3、T4时间点的三联指标均明显高于T1（P均约0.05），而T4比T2时间点明显降低，二者差异有统计学意义（P<0.05）。悠大鼠心肌组织病理学评分：与A组相比，B组、C组、D组大鼠心肌组织病理学评分均明显增高（P约0.05）；与B组相比，C组、D组大鼠心肌组织病理学评分均明显降低（P<0.05），其中D组明显低于C组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论法舒地尔干预对阿霉素所致大鼠的心肌损伤具有一定的保护作用。%Objective The aim of this study was to explore the potential myocardial protective effects of Fasudil in a rat model of

法舒地尔对压力超负荷大鼠心脏的肌成纤维细胞表型分化的影响

法舒地尔对压力超负荷大鼠心脏的肌成纤维细胞表型分化的影响

法舒地尔对压力超负荷大鼠心脏的肌成纤维细胞表型分化的影响

赵凌杰;张蓓蓓;赵智明;张静;郭郡浩

【期刊名称】《中国心血管杂志》

【年(卷),期】2015(20)4

【摘 要】目的： Rho 激酶介导的肌动蛋白细胞骨架重组在肌成纤维细胞(MFB)表型分化中具有重要作用。本实验拟观察 Rho 激酶抑制剂法舒地尔对压力超负荷大鼠心脏 MFB 表型分化的影响。方法采用腹主动脉缩窄法建立压力超负荷诱导的心肌纤维化大鼠模型。假手术组(Sham 组)仅分离但不予结扎腹主动脉。术后4周末,将存活大鼠按随机数表法分为模型组(Model 组)、法舒地尔高剂量组(FH 组)和法舒地尔低剂量组(FL 组)。药物干预4周末,观察大鼠心肌病理学改变,并检测心肌羟脯氨酸(HYP)含量,评估心肌纤维化程度；酶联免疫吸附法检测血浆和心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量；免疫组织化学法分析心肌磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶蛋白亚基1(p-MYPT1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达。结果 Model 组大鼠心肌纤维化程度较 Sham 组明显加重,AngⅡ含量显著升高,p-MYPT1(0.063±0.009比0.029±0.014)、α-SMA(0.034±0.009比0.004±0.003)、OPN(0.043±0.007比0.012±0.006)和

TGF-β1(0.058±0.019比0.019±0.009)的表达均明显升高(均为 P ﹤0.01)； FH

组和 FL 组大鼠心肌纤维化程度较Model 组减轻,AngⅡ含量均显著下降,p-MYPT1(0.029±0.013和0.040±0.011)、α-SMA(0.016±0.006和0.027±0.007)、OPN(0.018±0.004和0.036±0.006)和 TGF-β1(0.022±0.013和0.039±0.014)的表达也不同程度下降(P ﹤0.01或 P ﹤0.05)。结论法舒地尔改善压力超负荷大鼠心肌纤维化的作用至少与部分抑制 MFB 表型分化有关。%Objective Rho kinase

肺动脉高压药物联合治疗的进展

肺动脉高压药物联合治疗的进展

９２　心肺ＪｌｉＬ管病杂志２０１２年１月第３１卷第１期Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ＆Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｊａｎｕａｒｙ　２０１２，Ｖｏ１．３１，Ｎｏ．１　

ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－５０６２．２０１２．０１．０２８　

肺动脉高压药物联合治疗的进展　

王生浩刘双　

（关键词］肺动脉高压；药物联合治疗　

［中图分类号］Ｒ５４３．２　［文献标识码］Ａ　（文章编号］　１００７－５０６２（２０１２）０１－０９１－０３　

肺循环高压（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，ＰＨ）是一组由异源　

性疾病和不同发病机制引起的以肺血管阻力持续增高为特　

征的临床——病理生理综合征　，主要表现为右心室后负荷　

增加，活动耐力下降，严重者最终发展为右心衰竭而死亡。　

ＰＨ是最严重的具有潜在破坏力的慢性肺循环疾病。近２０　

年来，ＰＨ的发病机制、分类诊断及治疗都取得了令人瞩目的　

进展，已成为当今医学研究的前沿和热点。２００８年戴纳波恩　

特（Ｄａｎａ　Ｐｏｉｎｔ）会议新的临床诊断分类将ＰＨ分为６大类　：　

１．肺动脉高压（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ａｒｔｅｒｉａｌ　ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，ＰＡＨ）；２．肺　

静脉闭塞性疾病（ＰＶＯＤ）和／或肺毛细血管瘤病（ＰＣＨ）；　

３．左心疾病所致的肺动脉高压；４．肺部疾病和／或低氧所致　

的肺动脉高压；５．慢性血栓栓塞性肺动脉高压（ＣＴＥＰＨ）；６．　

原因不明和／或多种因素所致的肺动脉高压。　

一、肺动脉高压治疗现状　随着对ＰＡＨ发病机制认识的不断深入，目前针对ＰＡＨ　

已突破传统的吸氧、强心、利尿、钙离子拮抗剂和抗凝等治　

疗，与美国国立卫生研究院（ＮＩＨ）８０年代的注册登记研究相　

比，ＰＡＨ患者的预后已明显改善，主要归功于１０余年来靶向　

治疗药物的研发与推广使用。最近一份包括２３个临床随机　

对照试验的荟萃分析表明单一靶向药物治疗ＰＡＨ取得一定　

疗效　：药物治疗组较安慰剂对照组的住院率降低６１％，病