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流式细胞术分析PMA诱导THP1分化为巨噬细胞的表型特征一、本文概述流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种在液流中快速分析单个细胞的多参数特性的强大技术。
该技术通过标记特异性抗体与细胞表面或内部抗原的结合，结合流式细胞仪的高通量分析能力，使我们能够精确测量细胞群体的表型特征。
在生物医学研究中，流式细胞术广泛应用于细胞分化、细胞周期、细胞凋亡、信号转导等多个领域。
本文旨在利用流式细胞术分析佛波酯（Phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA）诱导人急性单核细胞白血病细胞系THP-1分化为巨噬细胞的表型特征。
我们将通过流式细胞术检测分化过程中细胞表面标志物的表达变化，如CDCD68等，以及细胞内分子如肿瘤坏死因子TNF-α、白介素IL-1β等的表达情况，从而全面揭示PMA诱导THP-1细胞向巨噬细胞分化的分子机制。
通过本文的研究，我们期望能够为深入理解巨噬细胞分化过程中的分子事件提供新的视角，并为开发针对巨噬细胞相关疾病的治疗策略提供理论依据。
本文还将探讨流式细胞术在细胞分化研究中的应用价值，以期为生物医学领域的研究人员提供有益的参考。
二、材料与方法1 细胞系：人单核细胞系THP-1，购自美国ATCC（American Type Culture Collection）。
2 试剂：佛波酯（Phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA），购自Sigma-Aldrich公司；RPMI 1640培养基、胎牛血清（FBS）、青霉素/链霉素双抗，购自Gibco公司；流式细胞术抗体，包括但不限于CDCDHLA-DR等，购自BD Biosciences或eBioscience公司。
3 仪器：流式细胞仪（如FACS Canto II，BD Biosciences）；二氧化碳培养箱；离心机；倒置显微镜。
1 细胞培养：THP-1细胞在含有10%胎牛血清、1%青霉素/链霉素双抗的RPMI 1640培养基中，于37℃、5% CO2的条件下培养。
doi:10.3969/j.issn.1000⁃484X.2020.07.009中药饮片鹿血晶对巨噬细胞的免疫调节作用研究①李京蔓 潘宇晨② 夏晓雨 李 丹③ 窦 环 侯亚义③ (南京大学医学院,南京210093) 中图分类号 R932 文献标志码 A 文章编号 1000⁃484X (2020)07⁃0810⁃05①本文为中央高校基本科研业务费专项资金(021*********)和江苏省 六大人才高峰”高层次人才项目(YY⁃021)㊂②共同第一作者㊂③南京大学生命科学学院,南京210093㊂作者简介:李京蔓,女,在读硕士,主要从事细胞与分子免疫方面的研究,就读于南京大学生命科学学院,南京210093,E⁃mail:2718075809@㊂通讯作者及指导教师:窦 环,女,博士,高级工程师,主要从事细胞与分子免疫方面的研究,E⁃mail:douhuan @㊂侯亚义,男,博士,教授,主要从事细胞与分子免疫方面的研究,E⁃mail:yayihou @㊂[摘 要] 目的:探讨鹿血晶(DBC)对小鼠巨噬细胞系RAW 264.7的免疫调节作用及其可能机制㊂方法:CCK⁃8法检测细胞活力;流式细胞术及免疫荧光法检测巨噬细胞对大肠杆菌的吞噬能力;qRT⁃PCR 法检测炎症因子iNOS㊁IL⁃1β㊁IL⁃6的mRNA 表达水平;ELISA 法检测培养基上清中iNOS㊁IL⁃1β㊁IL⁃6含量;Western blot 法检测转染NF⁃κB 信号通路蛋白表达㊂结果:鹿血晶能够提高LPS 刺激下的RAW 264.7细胞活力(P <0.05);鹿血晶能抑制LPS 刺激下RAW 264.7细胞的炎症因子表达和释放(P <0.05);鹿血晶能够抑制LPS 刺激下RAW 264.7细胞内磷酸化IKK⁃α/β和磷酸化P65蛋白的表达;鹿血晶促进RAW 264.7细胞对大肠杆菌的吞噬能力(P <0.05)㊂结论:鹿血晶能够增强巨噬细胞吞噬大肠杆菌的能力,并且在不影响细胞活力的同时作用于NF⁃κB 信号通路,抑制炎症状态下巨噬细胞炎症因子的表达与释放㊂[关键词] 鹿血晶;巨噬细胞;免疫调节Immunoregulating effects of deer blood crystal on macrophagesLI Jing⁃Man ,PAN Yu⁃Chen ,XIA Xiao⁃Yu ,LI Dan ,DOU Huan ,HOU Ya⁃Yi .Nanjing University Medical School ,Nanjing 210093,China[Abstract ] Objective :To investigate the immunoregulating effect of deer blood crystal(DBC)on mouse macrophage line RAW264.7and to explore the possible mechanism.Methods :CCK⁃8assay was used to detect cell viability.Flow cytometry and immunofluo⁃rescence were used to detect the phagocytic index.qRT⁃PCR assay was used to detect the mRNA level of inflammatory cytokines iNOS,IL⁃1β,IL⁃6,ELISA assay was used to detect the contents of iNOS,IL⁃1β,IL⁃6in the supernatant of the culture medium.Western blot was used to detect the expression of protein in the NF⁃κB signaling pathway.Results :The cell viability of RAW 264.7cells with LPS stimulation was increased by DBC (P <0.05).The expression and release levels of inflammatory cytokines in DBC+LPS group were sig⁃nificantly lower than those in the LPS group (P <0.05).The expression of phospho⁃IKK⁃α/βand phospho⁃P65protein in DB+LPS group was lower than that in LPS group.The phagocytic ability of RAW 264.7cells against E.coli increased after DBCtreatment.Conclusion :DBC enhances the ability of macrophages to engulf E.coli,and inhibits macrophages releasing inflammatory factors induced by LPS via NF⁃κB signaling pathway without affecting cell viability.[Key words ] Deer blood crystal;Macrophages;Immunoregulation 自古以来,我们中国人就重视养生保健㊂宋元时期,以动物乳汁㊁血液为代表的液体补品开始流行,贵族间盛行喝鹿血, 养巨鹿日刺其血和酒以饮”㊂清朝皇帝喝鹿血,将其作为壮阳㊁养生补品来服用㊂鹿血晶系鹿血经炮制加工干燥后制得的产品㊂鹿血泛指鹿科动物梅花鹿和马鹿的血液,其主要化学成分包括蛋白质㊁氨基酸㊁酶类㊁维生素㊁脂肪酸及激素类等物质[1,2]㊂近年来的研究表明,鹿制品如鹿血㊁鹿角盘等具有延缓衰老㊁抗疲劳㊁增强免疫力㊁抗氧化㊁消炎镇静等功能[3,4]㊂固有免疫系统是机体低于外界病原体的有力屏障[5],巨噬细胞作为一种重要的固有免疫细胞,能够通过释放炎症因子,杀伤外来病原体并将其吞噬,保护机体免遭侵害[6]㊂对巨噬细胞的免疫功能进行适当调节能够帮助机体抵抗疾病[7]㊂本文旨在研究鹿血晶对小鼠巨噬细胞系RAW 264.7的免疫调节作用及其可能机制,为鹿血晶作为保健中药材的应用提供科学依据㊂1 材料与方法1.1 材料 RAW264.7细胞系购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库;鹿血晶冻干粉来自苏州红冠庄国药股份有限公司(批号:S1810012);DMEM高糖培养基㊁青霉素㊁链霉素及FBS均购自美国Gibco;CCK⁃8试剂购自日本DOJINDO;一氧化氮检测试剂盒购自上海碧云天;IL⁃1βELISA检测试剂盒购自北京达科为生物技术有限公司;IL⁃6 ELISA检测试剂盒购自南京福麦斯生物技术有限公司;磷酸化IKK⁃α/β及磷酸化P65抗体均购自美国CST;GAPDH抗体购自美国Proteintech;FITC荧光素购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司;反转录试剂购自南京诺唯赞生物科技有限公司㊂1.2 方法1.2.1 细胞培养 在生物安全柜中,将RAW 264.7细胞接种于直径60mm细胞培养皿中,加入3ml含10%FBS㊁1%双抗的DMEM培养基,置于37℃㊁5%CO2培养箱中培养,贴壁生长㊂每1~2d 换一次液,细胞数大于1×107ml-1时按1∶5或1∶6传代一次,使细胞保持圆整㊁透亮的形态,取对数生长期细胞用于实验㊂1.2.2 鹿血晶水溶液的制备 向20ml去离子水中加入1g鹿血晶冻干粉末,充分混匀后于37℃水浴加热至无明显颗粒状物质存在㊂再次混匀后用200目尼龙滤布过滤掉不溶物,滤液在超净台内用0.22μm孔径的滤器过滤,得到无菌鹿血晶水溶液㊂1.2.3 CCK⁃8实验 使用终浓度为0㊁31.25㊁62.5㊁125㊁250㊁500㊁1000㊁2000㊁4000μg/ml的鹿血晶水溶液处理RAW264.7细胞,1h后加入LPS (100ng/ml)刺激,置于37℃㊁5%CO2培养箱中培养㊂24h后,弃去上清,每孔加入10μl CCK⁃8试剂和90μl DMEM培养基,置于37℃㊁5%CO2培养箱中培养,至颜色变为橙黄色㊂放入酶标仪,于450nm 波长下测定吸光度A450,细胞活力计算方式为:细胞活力(%)=[A450(加药)-A450(空白)]/[A450 (空白对照)-A450(空白)]×100%㊂1.2.4 qRT⁃PCR实验 将RAW264.7细胞接种于24孔细胞培养板中,贴壁生长至汇合度为50%~ 60%,加入鹿血晶水溶液使其终浓度为250㊁500㊁1000μg/ml,培养1h后,加入LPS使终浓度为100ng/ml,培养24h后,Trizol法提取总RNA㊂RNA用适量DEPC水溶解,Nanodrop测定RNA浓度和纯度,依据反转录试剂说明书将其反转录成cDNA,程序为50℃15min㊁85℃5s㊁4℃∞㊂qRT⁃PCR实验操作如下:(1)10μl qRT⁃PCR反应体系:5μl cDNA㊁4μl PowerUp SYBR Green Master Mix(Thermo Fisher Scientific)㊁1μl引物(正义链0.5μl㊁反义链0.5μl)㊂(2)qRT⁃PCR反应程序(采用三步法):①预变性:55℃2min㊁95℃10min;②循环40次,72℃时收集信号:95℃30s㊁60℃30s㊁72℃30s;③熔解曲线:95℃15s㊁60℃30s㊁95℃15s;采用Applied BioSystems7300 Sequence Detection System进行检测并分析,以GAPDH为内参,根据各个基因的Ct值结果,以2-ΔΔCt法计算,得到目的基因的相对表达量㊂1.2.5 一氧化氮检测和ELISA实验 将RAW 264.7细胞接种于24孔细胞培养板中,贴壁生长至汇合度为50%~60%,加入鹿血晶水溶液使其终浓度为250㊁500㊁1000μg/ml,培养1h后,加入LPS 使终浓度为100ng/ml㊂培养24h后,收集培养基, 7500g离心5min,小心吸取上清到新EP管中,依照试剂盒说明书对培养基上清中的一氧化氮㊁IL⁃1β和IL⁃6含量进行检测㊂1.2.6 Western blot实验 将RAW264.7细胞接种于6孔细胞培养板中,贴壁生长至汇合度为80%~ 90%,加入鹿血晶水溶液使其终浓度为250㊁500㊁1000μg/ml,培养1h后,加入LPS使终浓度为100ng/ml,培养30min后,提取总蛋白㊂上样20μl 于10%聚丙烯酰胺凝胶(SDS⁃PAGE),以80V恒压电泳,待溴酚蓝指示剂跑出浓缩胶后加压至120V,直到溴酚蓝泳出分离胶下缘㊂350mA恒流冰浴转移2h㊂将转膜后的PVDF膜放入5%BSA封闭液中低速摇床封闭2h㊂用洗膜缓冲液(tris buffered saline tween,TBST)高速摇床洗膜15min,连续4次㊂制作孵育袋,加入5%BSA稀释的一抗液,4℃低速摇床孵一抗过夜㊂用TBST洗膜4次后,浸泡于5% BSA稀释的二抗液,低速摇床孵二抗2h㊂用TBST 洗膜4次后,曝光仪曝光㊁拍照㊁软件分析图像㊂1.2.7 大肠杆菌吞噬实验 将RAW264.7细胞接种于24孔细胞培养板中,贴壁生长至汇合度为70%~80%,加入鹿血晶水溶液使其终浓度为500μg/ml,培养1h后,每孔加入5×107个FITC标记的大肠杆菌,共同培育6h㊂收集细胞进行流式细胞术检测,用FITC的平均荧光强度(MFI)表示吞菌能力的大小,或固定㊁制片,于荧光共聚焦显微镜下观察㊁拍照㊂1.3 统计学处理 所有数据采用GraphPad Prism5 Demo(GraphPad Software Inc.,La Jolla,CA,USA)进行分析,以x±s表示㊂ANOVA和unpaired t⁃tests用于分析统计学意义,以P <0.05为差异有统计学意义㊂2 结果2.1 鹿血晶提高炎症状态下RAW 264.7细胞的细胞活力 使用不同浓度的鹿血晶处理RAW264.7细胞,而后加入LPS(100ng /ml)进行刺激,24h 后通过CCK⁃8法进行检测,结果如图1所示㊂与LPS 组相比,鹿血晶不会损伤炎症状态下巨噬细胞的细胞活力,且125~4000μg /ml 浓度范围内的鹿血晶对其活力均有明显提高㊂结果表明,一定浓度的鹿血晶能够提高LPS 刺激下的RAW 264.7细胞活力㊂2.2 鹿血晶抑制炎症状态下RAW 264.7细胞炎症因子mRNA 的表达 通过qRT⁃PCR 实验检测鹿血晶对LPS 刺激下RAW 264.7细胞炎症因子iNOS㊁IL⁃1β㊁IL⁃6的mRNA 表达水平的影响,结果如图2所示㊂与LPS 组相比,低(250μg/ml)㊁中(500μg/ml)㊁高(1000μg /ml)三个浓度的鹿血晶水溶液均能够明显抑制LPS 诱导的RAW 264.7细胞中iNOS㊁IL⁃1β㊁IL⁃6表达水平的上调,且呈剂量依赖性㊂结图1 鹿血晶对RAW 264.7细胞活力的影响Fig.1 Effects of deer blood crystal on viability of RAW264.7cellsNote:**.P <0.01,***.P <0.001.图2 鹿血晶对RAW 264.7细胞内炎症因子表达的影响Fig.2 Effects of deer blood crystal on inflammatory cytokines expression of RAW 264.7cellsNote:*.P <0.05,**.P <0.01,***.P <0.001.果表明,鹿血晶能够抑制LPS 刺激下巨噬细胞炎症因子的表达㊂2.3 鹿血晶抑制炎症状态下RAW 264.7细胞炎症因子的释放 收集鹿血晶和LPS 共同处理后RAW 264.7细胞的培养基上清,通过ELISA 实验检测鹿血晶对RAW 264.7细胞炎症因子一氧化氮(NO)㊁IL⁃1β㊁IL⁃6释放量的影响,结果如图3所示㊂与LPS 相比,低(250μg /ml )㊁中(500μg /ml )㊁高(1000μg /ml)三个浓度的鹿血晶水溶液均能够明显抑制RAW 264.7细胞在LPS 诱导下NO 和IL⁃6的释放,且呈剂量依赖性,但对IL⁃1β无明显作用㊂结果表明,鹿血晶能够抑制LPS 刺激下巨噬细胞炎症因子的释放㊂2.4 鹿血晶抑制炎症状态下RAW 264.7细胞NF⁃κB 信号通路的活化 通过Western blot 实验检测鹿血晶对炎症状态下RAW 264.7细胞内NF⁃κB 信号通路蛋白表达的影响,结果如图4所示㊂与LPS 组相比,鹿血晶能够明显降低炎症状态下RAW 264.7细胞内磷酸化IKK⁃α/β和磷酸化P65蛋白的表达,说明鹿血晶能够抑制LPS 引起的NF⁃κB信号通路图3 鹿血晶对RAW 264.7细胞内炎症因子释放的影响Fig.3 Effects of deer blood crystal on inflammatory cytokines release of RAW 264.7cellsNote:**.P <0.01,***.P <0.001.图4 鹿血晶对RAW 264.7细胞内NF⁃κB 相关蛋白表达的影响Fig.4 Effects of deer blood crystal on NF⁃κB⁃relatedproteins expression in RAW 264.7cellsNote:*.P <0.05,**.P <0.01,***.P <0.001.图5 鹿血晶对RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌能力的影响Fig.5 Effect of deer blood crystal on ability of RAW 264.7cells to phagocytose E.coliNote:**.P<0.01.的活化㊂结果表明,鹿血晶通过NF⁃κB信号通路影响巨噬细胞炎症因子的表达与释放㊂2.5 鹿血晶能够促进RAW264.7细胞对细菌的吞噬作用 利用500μg/ml鹿血晶预处理RAW264.7细胞后,加入标记FITC荧光素的大肠杆菌刺激,6h 后通过流式细胞术检测RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌的能力,结果如图5A所示㊂与未加入鹿血晶而仅仅加入大肠杆菌刺激的E.coli组相比,鹿血晶能够明显提高RAW264.7细胞内FITC的平均荧光强度㊂免疫荧光试验得到了同样的结果,如图5B 所示㊂结果表明,鹿血晶能够提高巨噬细胞吞噬大肠杆菌的能力㊂3 讨论鹿血晶系鹿血经炮制加工干燥后制得的产品㊂鹿血具有抗衰老㊁补气补血㊁调节免疫㊁促进伤口愈合等功效[3,4]㊂本次研究,我们证明了一定浓度范围内的鹿血晶不会降低炎症状态下巨噬细胞系RAW264.7的细胞活力,甚至能够提高其细胞活力㊂这说明鹿血晶作为一种保健品,适量服用不会对身体产生毒性,具体服用剂量还需要通过动物实验以及药代动力学研究获得㊂巨噬细胞作为一种重要的固有免疫细胞,能够通过释放炎症因子,杀伤外来病原体并将其吞噬,保护机体免遭侵害[6]㊂免疫力低下的人如婴幼儿㊁老年人等更容易受到病原体的感染[8,9]㊂通过检测RAW264.7细胞对大肠杆菌的吞噬能力发现,鹿血晶能够促进巨噬细胞吞噬大肠杆菌,这意味着鹿血晶能够提高巨噬细胞的免疫防御能力㊂炎症是一把双刃剑,可控的炎症有利于抵御外来病原体的入侵,但持续的炎症往往会造成组织损伤㊁伤口无法愈合㊁发热,甚至演化成癌症[10,11]㊂因此,炎症发生与炎症消散之间需要建立微妙的平衡,必要时需要药物辅助㊂巨噬细胞是炎症的重要参与者,其过度激活会造成持续的炎症㊂本次研究中发现,鹿血晶能够显著抑制LPS诱导的炎症状态下RAW264.7细胞炎症因子iNOS㊁IL⁃1β㊁IL⁃6的表达与释放,说明鹿血晶具有抑炎作用㊂NF⁃κB信号通路是介导免疫细胞参与炎症反应的重要通路,它的活化能够引起免疫细胞产生和释放炎症因子[12,13]㊂Western blot实验结果表明,鹿血晶能够抑制炎症状态下RAW264.7细胞内的NF⁃κB信号的活化,说明鹿血晶能够通过抑制巨噬细胞NF⁃κB信号通路的活化从而发挥抑炎作用㊂综上,鹿血晶能够增强巨噬细胞吞噬大肠杆菌的能力,并且在不影响细胞活力的同时作用于NF⁃κB信号通路,抑制炎症状态下巨噬细胞炎症因子的表达与释放㊂参考文献:[1] Bah 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巨噬细胞极化及其信号通路的研究进展杨正弦; 王涛; 苗春木【期刊名称】《《检验医学与临床》》【年(卷),期】2019(016)015【总页数】4页(P2252-2255)【关键词】巨噬细胞极化; 经典活化; 替代性活化; 信号通路【作者】杨正弦; 王涛; 苗春木【作者单位】重庆市綦江区中医院普外科重庆401420; 重庆医科大学附属第二医院肝胆外科重庆400010【正文语种】中文【中图分类】R329.28机体内巨噬细胞来源广泛，由血液中的单核细胞、骨髓中的造血干细胞和胸腺内的早期T淋巴细胞分化而来，其中血液中的单核细胞穿出血管进入结缔组织分化形成巨噬细胞是最主要的途径。
巨噬细胞分布于全身组织，具有组织特异性，包括存在于肝组织中的KCs(Kuppfer细胞)、肺组织中的肺泡巨噬细胞、脑组织中的小胶质细胞、脂肪组织中的脂肪组织巨噬细胞、骨组织中的破骨细胞和腹腔中的腹腔巨噬细胞等。
巨噬细胞作为机体固有免疫的重要组成部分，具有吞噬和杀灭病原微生物、处理并提呈抗原、介导特异性免疫应答、清除衰老细胞、修复损伤的功能，同时也是维持自身代谢稳定的关键因素[1]。
巨噬细胞还具有在炎症因子诱导下分化异常的特点，称之为巨噬细胞的极化。
巨噬细胞的极化所涉及的诱导因子、信号通路、转录因子相互交叉，极为复杂，且在特殊条件下巨噬细胞极化的两个极端可以相互转化，构成了一种动态变化的过程。
1 巨噬细胞极化的特点1.1 巨噬细胞的M1型、M2型极化巨噬细胞的极化可分为两个极端，即经典活化(M1型)和替代性活化(M2型)。
目前在构建巨噬细胞极化模型时，多通过使用细菌脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞构建巨噬细胞M1型极化的细胞模型，而白细胞介素-4(IL-4)刺激巨噬细胞则可使巨噬细胞分化为M2型巨噬细胞[2]。
处于休眠状态下的巨噬细胞在干扰素-γ(IFN-γ)和LPS刺激下极化为M1型巨噬细胞，产生包括IL-1、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮合酶(iNOS)在内的促炎因子和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、C-C motif 趋化因子2-4(CCL2-4)、C-X-C motif 趋化因子配体8-11(CXCL8-11)等趋化因子，介导强烈的炎性反应和Th1免疫应答。
《雷帕霉素诱导经Nrf2途径增强肿瘤相关巨噬细胞功能在膀胱癌进展中的作用》一、引言膀胱癌是一种常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率均较高。
近年来，肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）在肿瘤进展中的作用受到了广泛关注。
其中，Nrf2（核因子E2相关因子2）信号通路在调节巨噬细胞功能方面发挥着重要作用。
雷帕霉素作为一种重要的免疫调节药物，被证实能够通过激活Nrf2信号通路来增强肿瘤相关巨噬细胞的功能。
本文旨在探讨雷帕霉素诱导经Nrf2途径增强肿瘤相关巨噬细胞功能在膀胱癌进展中的作用。
二、文献综述（一）膀胱癌与肿瘤相关巨噬细胞膀胱癌的发生与肿瘤微环境中的免疫细胞密切相关，其中肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）在肿瘤进展中发挥着重要作用。
TAMs 能够分泌多种生长因子、细胞因子和酶类等，促进肿瘤细胞的生长、侵袭和转移。
（二）Nrf2信号通路与巨噬细胞功能Nrf2信号通路是一种重要的抗氧化和抗炎信号通路，能够调节巨噬细胞的极化和功能。
在巨噬细胞中，Nrf2能够通过调控抗氧化酶和抗炎因子的表达，从而发挥抗氧化和抗炎作用。
此外，Nrf2还能够促进巨噬细胞的极化，使其向M2型转化，进一步增强其抗肿瘤功能。
（三）雷帕霉素与Nrf2信号通路的关联雷帕霉素是一种免疫调节药物，能够通过抑制mTORC1（哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1）来发挥其作用。
近年来研究发现，雷帕霉素能够激活Nrf2信号通路，从而调节巨噬细胞的功能。
三、研究内容（一）实验设计本研究采用体外和体内实验相结合的方法，探究雷帕霉素诱导经Nrf2途径增强肿瘤相关巨噬细胞功能在膀胱癌进展中的作用。
首先，通过体外实验观察雷帕霉素对巨噬细胞中Nrf2信号通路的影响；然后，通过体内实验观察雷帕霉素对膀胱癌肿瘤生长和转移的影响及其与巨噬细胞的关系。
（二）实验方法与结果1. 体外实验：采用巨噬细胞系作为研究对象，观察雷帕霉素对巨噬细胞中Nrf2信号通路的影响。
结果显示，雷帕霉素能够显著激活Nrf2信号通路，促进巨噬细胞的极化和功能增强。
巨噬细胞在动脉粥样硬化中作用的研究进展黄影;朱丽华【期刊名称】《实用心脑肺血管病杂志》【年(卷),期】2017(025)005【摘要】Atherosclerosis (AS)is the main pathological basis of cardiovascular disease,macrophages,lymphocytes,vascular endothelial cells and smooth muscle cells play important roles in the genesis and development of AS.In recent years,researches about role of macrophage autophagy and miRNA in regulating activity of macrophages in the genesis and development of AS are common.This paper reviews the progress on the role of macrophages in AS.%动脉粥样硬化(AS)是心血管疾病的主要病理基础,而巨噬细胞、淋巴细胞、血管内皮细胞及平滑肌细胞等在AS的发生发展过程中发挥着重要作用.近年来,关于巨噬细胞自噬及miRNA对巨噬细胞的活性调节作用等在AS发生发展过程中作用的研究报道较多.本文主要综述了巨噬细胞在AS中作用的研究进展.【总页数】4页(P1-4)【作者】黄影;朱丽华【作者单位】430060湖北省武汉市,武汉大学人民医院心内科;430060湖北省武汉市,武汉大学心血管病研究所【正文语种】中文【中图分类】R543.5【相关文献】1.巨噬细胞自噬在动脉粥样硬化中作用的研究进展 [J], 密泗宇;周影;王静巧;童茂清;陈晓敏2.巨噬细胞极化在冠状动脉粥样硬化发生发展中的作用研究进展 [J], 孟董超;王东;宋娟;卢彦珍3.巨噬细胞在动脉粥样硬化及血管炎症中作用的研究进展 [J], 代长良;田野4.巨噬细胞自噬在系统性红斑狼疮早发动脉粥样硬化中作用的研究进展 [J], 莫海露;莫汉有5.动脉粥样硬化中巨噬细胞介导胞葬作用的研究进展 [J], 廖思聪;于杨;王大新;秦树存因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
流式细胞术分析PMA诱导THP-1分化为巨噬细胞的表型特征彭卓颖;李想;丛喆;薛婧【摘要】目的用流式细胞术明确单独使用PMA诱导THP-1细胞分化而来的巨噬细胞的分化情况.方法首先用PMA刺激THP-1细胞分化为巨噬细胞,再分别使用LPS、IFN-γ和IL-6将细胞诱导为M1型巨噬细胞,用IL-4、IL-13和IL-6将细胞诱导为M2型巨噬细胞.显微镜下观察三种细胞的形态学改变,并用流式细胞术检测各细胞主要CD分子表达的差异.结果当THP-1分化为巨噬细胞后变为贴壁生长,细胞形态呈较规则的圆形或椭圆形;M1和M2细胞形态不规则,细胞突起较明显,细胞颗粒度较大.巨噬细胞表面与抗原提呈功能相关的CD分子的表达均较低,大部分呈阴性;而M1和M2细胞表面这些CD分子的表达均较高.结论单独使用PMA刺激THP-1细胞所分化而来的巨噬细胞抗原提呈能力较弱,基本处于静息状态.%Objective To identify the characteristics of the subtype of PMA-induced THP-1 macrophages by flow cytometry analysis. Methods THP-1 monocytic cells differentiate into macrophages promoted by PMA, then induced into M1 and M2 by adding different cytokines, such as LPS,IL-6 and IFN-γ for THP-1-M1, IL-4,IL-13 and IL-6 for THP-1-M2. Morphology of cells were observed under a microscope and the expression of CD14, CD68, CD16, CD80, CD86, CD163, CD206, CD209, CD83, CD1a, CD11c, HLA-DR were detected by flow cytometry. Results The macrophages stimulated by PMA became adherent;THP-1-M1 and THP-1-M2 lost their spherical morphology, appeared more irregular with many obvious projections. The expression of CD83, CD1a, CD11c, HLA-DR which had the function ofantigen presenting on the surface of THP-1-Mφwere very low, and most of them were negative, but those of THP-1-M1 and THP-1-M2 were very high. Conclusions The macrophages differentiated from THP-1 stimulated by PMA are weak in antigen presenting function.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2017(027)010【总页数】7页(P10-15,22)【关键词】THP-1;巨噬细胞;佛波酯;流式细胞术【作者】彭卓颖;李想;丛喆;薛婧【作者单位】北京协和医学院比较医学中心,中国医学科学院医学实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室,北京 100021;北京协和医学院比较医学中心,中国医学科学院医学实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室,北京 100021;北京协和医学院比较医学中心,中国医学科学院医学实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室,北京 100021;北京协和医学院比较医学中心,中国医学科学院医学实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室,北京 100021【正文语种】中文【中图分类】R-33巨噬细胞(macrophage，Mφ)是一类由血液中单核细胞分化而来的固有免疫细胞，在机体免疫反应中发挥重要作用[1]。
肿瘤相关巨噬细胞的研究进展和临床应用李佳妮;王卓;孙瑞;杨勇【摘要】Macrophage which surrounds tumor cells is termed tumor associated macrophage(TAM). TAM takes part in tumorinitiation,invasion,metastasis and suppression of anti - tumor immune response. The amount of TAM,to a certain de-gree,can predict the prognosis of cancer patients. So far,some new medicine had been used in clinical treatment targeting TAM.%浸润在肿瘤细胞周围的巨噬细胞被称为肿瘤相关巨噬细胞（TAM）。
肿瘤相关巨噬细胞能够促进肿瘤发生、侵袭与转移、及抑制机体抗肿瘤免疫等。
肿瘤相关巨噬细胞的数量在一定程度上可作为判断肿瘤患者预后的指标。
目前，已有一些针对肿瘤相关巨噬细胞实现抗肿瘤作用的新药在临床投入使用。
【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2016(035)004【总页数】3页(P237-239)【关键词】肿瘤相关巨噬细胞;肿瘤微环境;分子机制;临床应用【作者】李佳妮;王卓;孙瑞;杨勇【作者单位】中国药科大学药物科学研究院新药安全评价研究中心，江苏南京211198;中国药科大学药物科学研究院新药安全评价研究中心，江苏南京 211198;中国药科大学药物科学研究院新药安全评价研究中心，江苏南京 211198;中国药科大学药物科学研究院新药安全评价研究中心，江苏南京 211198【正文语种】中文【中图分类】R730.3肿瘤相关巨噬细胞（Tumor associated macrophage，简称TAM）是泛指在肿瘤发生过程中浸润于肿瘤并影响其发展转归的巨噬细胞［1－2］。
[文章编号] 1007-3949(2010)18-09-0687-04#实验研究#RA W 264.7巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及鉴定周云,沃兴德,卢德赵(浙江中医药大学生命科学学院,浙江省杭州市310053)[关键词] RAW 264.7细胞; 泡沫细胞; 胆固醇酯; 氧化型低密度脂蛋白[摘 要] 目的 以小鼠巨噬细胞RAW 264.7为对象,建立简便而又准确的泡沫细胞诱导及鉴定方法。
方法 将实验分为正常对照组和不同浓度氧化型低密度脂蛋白与细胞孵育组,在以孵育时间为24h 的前提下,用MTT 法和流式细胞术来确定诱导泡沫细胞的氧化型低密度脂蛋白合适浓度区间范围,并用总胆固醇试剂盒和游离胆固醇试剂盒测定不同程度泡沫细胞内胆固醇酯含量。
结果 氧化型低密度脂蛋白浓度范围为20~30mg /L 时,细胞存活率已受到显著抑制,并随着氧化型低密度脂蛋白浓度的增高细胞凋亡率和坏死率逐渐增大,起初以细胞凋亡为主,当氧化型低密度脂蛋白浓度大于40m g /L 时凋亡的细胞不断坏死。
20m g /L 和30m g /L 氧化型低密度脂蛋白与RAW 264.7细胞共孵育24h ,细胞内胆固醇酯比重分别为66.26%和71.19%,而10m g /L 的氧化型低密度脂蛋白诱导24h 的泡沫细胞不典型,40mg /L 以上的氧化型低密度脂蛋白诱导的泡沫细胞泡沫化程度严重,贴壁不牢,大部分细胞破裂或凋亡,脂滴散布于细胞外。
结论 20~30m g /L 氧化型低密度脂蛋白诱导的RAW 264.7巨噬泡沫细胞模型稳定且形态较完整,符合泡沫细胞的形态学特征。
[中图分类号] R36[文献标识码] AThe M odel Estabilis h m ent and Identification of RA W 264.7M acrophage -D erived Foa m CellZHOU Yun ,W O X i ng -D e ,and LU D e -Zhao(C oll ege of L ife S cience ,Zheji ang Trad itiona lC hinese M e d icine Un iversit y,H ang zhou,Zheji ang 310053,Ch ina )[KEY W ORDS] RAW 264.7Ce lls ; F oa m Ce l;l Cho lestero l Ester ; O x i d ized L ow D ensity L i poprote i n [ABSTRACT ] A i m To establis h t he model o f mur i ne m acrophage RAW 264.7derived foa m ce ll and i dentif y the m w ith si m p le and accura te m ethod . M ethod s T he exper i m ent was dev ided i nto no r ma l contro l group and si x exper i m en -ta l groups of d ifferent concentra tion o f ox i dized l ow density li poprote i n (ox -LDL )incubated w it h ce l.l On the incubati on ti m e for 24hours thatMTT m e t hod and flow cytome try (FC M )w ere used t o deter m i ne t he suitable rang e o f ox -LDL concen -tration ,then measure intra -cell u l ar cho l esterol ester i n different l eve l of m ac rophag e f o a m ce llw ith tota l cho leste ro l and free cho lestero l k it . R esu lts Ce ll v i ab ility had been si gn ifi cantl y i nhi b ited when ox -LDL concentrati on w as a t the rang e o f 20~30m g /L ,when ox -LDL concen trati on w as g reater than 40m g /L,apoptosis cell s conti nuous l y necrosis .O x -LDL a t t he concen trati on of 20and 30m g /L ,incubated w ith ce ll fo r 24hours ,t he propo ti on o f i ntra -ce llular cholestero l este r were 66.26%and 71.19%. F oa m ce ll i nduced by 10m g /L of ox -LDL w as not t yp i ca,l and by 40m g /L o f ox-LDL o r m ore ,severe degree of foa m ce ll l ed to ce lls fl oa ti ng ,m ost ce lls we re rupture o r apoptos i s ,lipi d drop l et d i spersed i n ex tra -cell u -l ar . Con cl u si on O x -LDL a t the concentra ti on rang e o f 20~30m g /L ,i ncuba ted w ith RAW 264.7for 24h ,i nduced foam cell has good m orpho l ogy ,and m ode l stab ilit y ,m ee t the m orpho logy feature of f o a m cel.l[收稿日期] 2010-07-23 [修回日期] 2010-09-05[基金项目] 国家自然科学基金资助(30873366)[作者简介] 周云,硕士研究生,主要从事中药抗动脉粥样硬化研究,E-m ail 为z houyun04yy @163.co m 。
