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大鼠脾切除脾窝异位辅助肝移植动物模型的建立的开题报告一、选题背景脾切除脾窝异位辅助肝移植已成为治疗终末期肝病的常用手段之一。
该手术方案通常实施于具有肝衰竭或肝癌的患者，其目的是使肝功能恢复或延长患者生存时间。
但是，该手术过程中局部缺血再灌注损伤、缺氧缺血等不可避免的副作用会影响肝移植效果和术后恢复。
因此，探究该手术过程的分子机制以及寻找针对这些副作用的治疗方法非常必要。
动物模型是研究器官移植手术的重要方法，大多数使用的动物模型为小鼠和大鼠。
在大鼠中，脾切除和肝移植的手术技术尚未得到广泛应用，需要通过建立合适的动物模型来研究这一手术过程的副作用。
二、研究方法通过建立大鼠脾切除脾窝异位辅助肝移植动物模型，研究该手术过程中对肝脏的影响和副作用。
具体方法如下：1. 动物选取：选择健康的雄性Sprague-Dawley大鼠，体重在200-250g之间。
2. 模型建立：大鼠腹腔内行脾切除手术，并建立脾窝异位辅助肝移植模型。
3. 实验组设置：将大鼠分为3组，分别进行肝移植术后24h、72h和7d取材观察。
4. 生物学指标检测：取肝脏组织样本，测定肝功能和细胞凋亡等生物学指标，包括肝酶、乙醛脱氢酶、超氧化物歧化酶、丙二醛、单核细胞趋化蛋白-1等。
5. 组织病理学检测：病理学检测对肝脏损伤程度进行评估。
三、预期效果1. 成功建立大鼠脾切除脾窝异位辅助肝移植动物模型。
2. 观察不同时间点（24h，72h和7d）的生物学指标和组织病理学变化，分析模型建立后对肝脏功能和形态学的影响。
3. 了解脾切除脾窝异位辅助肝移植的分子机制和副作用，为手术过程的优化提供新的治疗靶点和治疗方法。
四、结论建立大鼠脾切除脾窝异位辅助肝移植动物模型的研究，对深入探究该手术的分子机制和寻找治疗方法具有重要意义。
通过对生物学指标和组织病理学变化的观察和分析，能够发掘更深层次的机制，为临床治疗提供理论上的支持。
大鼠原位肝移植模型建立的技术要点目的探讨大鼠肝移植手术技巧与处理要点, 减少术后并发症，建立稳定的大鼠肝移植模型。
方法Wistar大鼠240只（供受体各120只）行二袖套法原位肝移植。
结果120例大鼠原位肝移植术后48小时存活率88.3 % ,1周存活率86.7%，建立了稳定的大鼠肝移植模型。
结论掌握技术要点与处理方法，是建立稳定的大鼠肝移植模型的保证。
Abstract：ObjectiveTo explore the surgical skills of Orthotopic Liver Transplantation in Rats and reduce the complications. MethodsOrthotopic Liver Transplantation was performed in 240 rats using two-cuff technique.ResultsThe survival rate for 48 hours was 88.3 %, the survival rate for one week was 86.7 %, and established stable liver transplantation model in rats. ConclusionMaster the surgical skills of Liver Transplantation in rats can improve achievement ratio and the steady livability of rats with orthotopic liver transplantation．Key words：Liver transplantation；Model；Rats大鼠原位肝移植是研究免疫耐受、免疫排斥、器官保存、肝脏缺血再灌注损伤等方面常用动物模型，1979年Kamada首次提出了二袖套法建立大鼠肝移植模型，简化了手术方式，提高了生存率[1]。
肝移植麻醉了解历史回顾:1 1963年3月1日，Starzl[2]施行了第1例人类肝移植，病人为一先天性胆管闭锁的3岁儿童21980年，Starzl[6]首先联合应用环孢素和皮质激素抑制免疫排异反应。
在1年时间内，使病人6个月生存率提高1倍，即从原来的35%-40%上升至70%-80%。
31987年Wisconsin大学发明了UW（University of Wisconsin）器官保存液，使肝脏冷缺血时间距离运输供肝成为可能可以延长至24d，这样使远同种异体肝移植的术式:背驮式技术：切除病肝时，保留受体的肝后下腔静脉，将供肝上下腔静脉与受体的3条肝静脉或肝中、肝左静脉所形成的共同开口相吻合，或供、受体肝后下腔静脉行侧吻合，重建肝脏的血液流出道，结扎供肝的肝后下腔静脉。
此技术不论是全肝移植或减体积性减体积性肝植均可采用，在活体部分肝移植时必须采用背驮式技术。
麻醉准备：除了非创伤性监视器外,还需为介入性监护准备2个压力换能器.其中1个换能器通过监测桡动脉以测定动脉内血压.另1个换能器通过放置于右侧颈静脉内的Swan_Ganz导管以监测中心静脉压及肺动脉压.Swan_Ganz导管也可用于心输出量的测定。
快速输液的能力是肝移植麻醉成功的关键：开放上肢两条16G静脉及中心静脉此外,还应该用1至2个加热静脉输液管以提供加温的液体.及使用前液体加温在37度。
术中应尽量保持病人的体温正常,因为低体温进一步恶化了已有凝血障碍的肝脏病人的凝血功能.加热静脉输液管均可在输液之前给液体加温.上,下半身的热气毯均应覆盖于非手术区的体表.手术床需用调温装置保持温暖.室内也应保持温暖,特别是在麻醉诱导期病人尚未被热气毯覆盖时.药品准备：1、麻醉药品：万可松，芬太尼，异丙酚，咪唑安定。
2、主要急救药品：速尿，葡酸钙，胰岛素，NaCHO3,甲强龙，肾上腺素，氯化钾，50%糖水，及其他抢救药物。
3、补液：温的37C（平衡液，贺斯，红细胞悬液），新鲜血浆，白蛋白（并准备：冷沉淀，血小板，凝血酶原复合物等）2006-03-05肝移植血气生化报告表时间PH PaCO2PaO2HCO3BE HCT HB PLT K+Na+Ca++Glu Fib 20:307.37231.627218.3-7237.8 4.70.720:507.263843817.5-9268.8 5.60.81 5.6 21:107.25539.147117.4-10258.5 5.40.7721:207.3874647127.73248.2 5.20.96 6.6 21:307.38342.650325.40227.5 4.5 1.0521:407.31642.247622.5-519 6.594 4.10.8711.1 1.2522:067.35240.547822.5-319 6.54 1.2311.1 23:117.43537.949325.51217.1 3.8 1.3610.7 19:00 4.6 注：无肝期是在20：18----21：25手术期CVP：（cmH2O）手术期尿量及体温变化-ml病史: 1、男49岁身高180cm 体重75kg 血压124/80mmhg2、因肝炎后肝硬化失代偿期，脾功能亢进，门脉高压，食管胃底静脉曲张，终末期肝病入院拟接受肝移植手术。
大鼠原位肝移植模型动物案例供体：Lewis大鼠、DA大鼠；受体：BN大鼠造模方法二袖套一吻合法(门静脉和肝下下腔静脉行袖套法,肝上下腔静脉行吻合法)供肝的获取腹采用10%水合氯醛腹腔麻醉(0.3ml/100g)，十字切口入腹，离断肝脏镰状韧带，将小肠移出腹腔外，以生理盐水纱布覆盖。
游离胃小弯背腹侧的尾状叶盘状乳头突，近肝侧结扎并离断左膈下静脉，结扎并切断左肝至食管高位血管支，结扎右肾上腺静脉丛，并切断右肾动静脉。
游离肝下下腔静脉至左肾静脉上缘，游离肝外胆管并行胆管内插管，经门静脉主干向肝脏内灌注含肝素50U的4℃生理盐水10ml，行肝脏冷灌注。
当肝脏变白时，在靠近左肾静脉入口处剪断肝下下腔静脉，形成灌注液流出道，在膈肌上方横断肝上、下腔静脉，将供肝取出，置于4℃生理盐水内。
血管袖套制备在4℃生理盐水中将门静脉与肝下下腔静脉壁外翻，分别套在外径2.10mm和2.76mm的聚乙烯管上，用5-0丝线环扎固定，完成袖套制备。
受体手术大鼠麻醉后，上腹部直切口入腹，分步游离受体肝脏，游离完毕后将受体肝脏取出。
将供肝自生理盐水保存液中取出置于受体原位，冰生理盐水纱布覆盖肝脏表面，以预置的7-0无损伤线吻合肝上、下腔静脉，吻合时，受体侧连同膈肌环一并缝合，先缝合后壁，从左侧开始，将缝线从血管外缝入腔内，在腔内连续缝合。
针距控制在1mm，至右侧角时，将缝线穿出血管壁，在血管腔外与右侧角缝线打结。
以同一缝线从右侧角连续缝合血管前壁，接近左侧角时，向肝上、下腔静脉内注入4℃生理盐水，驱出血管腔内的空气，至左侧角时，与原缝线打结。
以弯血管夹在吻合口近肝侧钳夹肝上、下腔静脉，更换下小儿Satinsky心耳钳，检查吻合口是否出血。
吻合成功后，经门静脉向供肝内灌注4℃生理盐水10ml，排除肝内的肝素盐水，夹闭肝下下腔静脉，将供肝门静脉套管插入受体门静脉内，开放门静脉及肝上、下腔静脉阻端夹，结束无肝期。
肝下下腔静脉的吻合方法与门静脉相同，最后将供体胆管插入受体胆管插管内，按层缝合腹壁。
大鼠原位肝移植的手术技巧及常见并发症的防治
吴建军;汤卫国;胡进勇;蔡卫华
【期刊名称】《交通医学》
【年(卷),期】2007(21)5
【摘要】目的:探讨大鼠原位肝移植的手术技巧及常见并发症的处理和预防.方法:采用改良二袖套法进行50例大鼠原位肝移植.结果:移植大鼠术后24小时存活率92%,术后1周存活率84%.结论:改良二袖套法大鼠原位肝移植术操作简便,手术成功率高,术后并发症少,模型稳定性好.
【总页数】3页(P489-490,492)
【作者】吴建军;汤卫国;胡进勇;蔡卫华
【作者单位】南通市第三人民医院普外科,江苏,226006;南通市第三人民医院普外科,江苏,226006;南通市第三人民医院普外科,江苏,226006;南通市第三人民医院普外科,江苏,226006
【正文语种】中文
【中图分类】R617
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原位肝移植9例术后早期管理体会
管向东;黄洁夫
【期刊名称】《新医学》
【年(卷),期】1997(028)010
【摘要】目的：总结９例终末期肝病施行原位肝移植术（ＯＬＴ）患者术后外科重症病变（ＳＩＣＵ）管理。
方法：９例ＯＬＴ患者术毕进入ＳＩＣＵ常规实施加强监护治疗。
结果：（１）存活患者术后３￣５天内肝功能迅速改善。
（２）手术后进入ＳＩＣＵ时均呈现低循环容量状态。
（３）存活患者８￣１６小时撤离呼吸机。
（４）５例病人术后早期低钾。
（５）维持稳定的血环孢系Ａ浓度（５００￣８００ｎｇ／Ｌ），排斥反应及ＣｙＡ毒性损害作用减少
【总页数】3页(P514-516)
【作者】管向东;黄洁夫
【作者单位】中山医科大学附属第一医院外科重症病区;中山医科大学附属第一医院外科重症病区
【正文语种】中文
【中图分类】R657.3
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因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
同种异体大鼠肝移植在不同免疫状态下的实验研究目的：观察不同免疫状态下大鼠同种异体移植肝早期的病理变化和受体生存状况的改变。
方法：分三组：A组：n=36，同基因移植组（BN→BN）；B组：n=36，异基因移植+环孢素A（CsA）组；C组：n=36，异基因移植组（Lewis→BN），另外各设亚组观察生存期。
于移植后1、3、5、7、14天检测移植肝排斥反应病理分级，并观察移植鼠存活时间。
结果：①A组；同基因移植肝无明显病理急性排斥反应发生；除第1天外，B组和C组各时间段的排斥分级明显高于A组（P ＜0.05或<0.01）；而C组和B组相比亦有明显增高（P＜0.05或<0.01）。
②A组和B组的生存期平均大于100天，明显长于C组(34.3(3.56天)。
结论：①同基因大鼠肝移植不发生明显的病理急性排斥反应，术后生存状况良好。
②短期应用小剂量环孢素A（CsA）能明显抑制异基因同种大鼠移植肝的病理急性排斥反应，诱导免疫耐受的发生。
③异基因大鼠移植肝早期出现明显的病理急性排斥反应，术后生存状况差，生存期较短。
标签：肝移植；排斥反应；免疫耐受；环孢素A临床器官移植的长期存活率得到明显提高，已成为终末期器官功能衰竭病人的最佳治疗方案。
然而，同种异体排斥反应仍然是器官移植的主要障碍。
大鼠肝移植是目前最常用的肝移植动物试验模型，为临床提供了大量宝贵的试验数据，下面是我们利用近交系Lewis和BN大鼠进行肝移植的一组试验数据。
1材料和方法1.1实验动物1.1.1供鼠近交系Lewis大鼠，雄性，SPF/V AF，体重200～250g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。
1.1.2受鼠近交系BN大鼠，雄性，SPF/V AF，体重200-250g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。
我们采用改进的Kamada等袖套方法建立肝移植模型。
动物均在标准条件下饲养。
1.1.3实验为同种异体移植另外各设亚组观察生存期。
【摘要】目的研究大鼠辅助性原位肝移植模型的手术技巧及术后并发症的预防。
方法30只SD大鼠作供体。
30只SD大鼠为受体。
通过“袖套法”施行大鼠辅助性原位肝移植。
结果24h存活率76％(19/25)；周存活率56％(14/25)。
结论熟练的显徽外科技术是模型成功与否的关键。
【关键词】肝脏；移植；大鼠Parital auxiliary orthotopic liver transplantation in ratsLONG Guang-hui, XIAO Ping, XIE Y ong, et al. Department of Hepatobiliary Surgery，Peking University Shenzhen Hospital，Guangdong，518036[Abstract］Objective To investigate the method and technique of parital auxiliary orthotopic liver transplantation in rats. Methods 30 cases of parital auxiliary orthotopic liver transplantation in SD rats were performed using cuf-tecnique and microsurgery method. The successful rate, operation time and complications were observed. Results The general successful rate was 90%, the survival rate of post-operation 24-hour and one week was 76％(19/25)and 56％(14/25)respectively. Conclusion Meticulous and skilled microsurgical technique is the key to successful operation.[Key words］liver; transplantation; rat近年来，辅助性原位肝移植因其手术创伤相对较小、供体来源比较容易获取以及术后不必长期服用免疫抑制剂等优点已经越来越多地受到临床医生的重视[1]。
但是，该该移植方法目前也有其一定的局限。
其中又以供肝与移植肝功能竞争导致移植肝萎缩最为明显[2]。
因此，建立动物辅助性原位肝移植模型了解供肝与移植肝功能竞争的机理是解决这一难题的重要研究手段。
70年代大鼠原位肝移植模型获得成功后[3,4]。
原位肝移植的动物模型已经逐渐成熟并被实验研究广泛采用。
但是，辅助性原位肝移植的动物模型尚不多见。
本实验采用套管法，参考一些国内、外相关报道的方法，建立大鼠辅助性原位肝移植模型。
1 材料与方法1.1 实验动物SD雄性大鼠30只。
体重180～400g，作供体；SD雄性大鼠30只，体重180～400g，作受体，购自南方医科大学实验室动物室。
常温下饲养，喂固体饲料。
饮自来水。
供体体重小于受体体重约10g左右。
1.2手术过程受体术前禁食12h，不禁饮水。
术前5～20min。
肌注阿托品0.03～0.05mg。
采用氯胺酮麻醉，受体术中辅以持续低流量吸氧。
1.2.1供体手术供体大鼠仰卧位。
固定四肢，备皮及碘伏消毒，取腹部“十”字型切口，进入腹腔，将肠管移出腹腔外。
自肠系膜静脉注入含肝素150U的生理盐水2mL,使大鼠全身肝素化温盐水保护，组织钳钳夹、牵引腹壁及剑突。
充分暴露肝脏。
肝门区游离胆总管，剪开胆总管前壁。
置入硬膜外导管，长约4mm,4-0丝线结扎固定。
胆总管远端切断。
切断镰状韧带、左三角韧带。
8-O丝线缝扎左膈下血管，结扎、切断食道与肝脏之间的交通血管。
切断右三角韧带及肝后的腹膜组织，顺序游离、结扎、切断右肾上腺血管、右肾血管，最后，游离肝下下腔静脉。
阻断腹主动脉远端，近端置人套管针。
剪开膈肌。
阻断胸主动脉，剪开胸内下腔静脉及肾下下腔静脉。
以4℃肝素平衡液O～20 mL注入腹主动脉，同时，用4℃的生理盐水淋洗肝脏，直到肝脏完整切下。
结扎、切断肝动脉。
在左肾静脉汇人下腔静脉上方，切断肝下下腔静脉。
分离、结扎、切断门静脉根部的三个属支(幽门静脉、脾静脉、肠系膜上静脉)，于肠系膜上静脉汇人处下方切断门静脉，环状切断膈肌及胸内下腔静脉，取出供肝。
1.2.2供肝的修整及套管供肝的修整在4℃的平衡液冰浴中进行。
修剪多余的膈肌，肝上下腔静脉两侧用8-0带针线各缝一针。
保护好左肝静脉全程及其汇入的下腔静脉。
贴近肝静脉汇入口处剪除多余的下腔静脉管道。
切除右侧肝脏，仔细结扎肝断面的管道以防出血和胆漏。
保留门静脉与胆总管。
门静脉内插入输液尼龙套管。
门静脉套管直径约2mm，套管上有划痕，以防滑脱．显微镜下向肝下下腔静脉、门静脉套管注入生理盐水，观察管壁是否有破口及肝断面有无出血。
肝下下腔静脉予以结扎。
1.2.3受体手术受体大鼠仰卧位，固定四肢，备皮及碘伏消毒，取腹部“十”字型切口。
进入腹腔。
将肠管移出腹腔外。
温盐水保护。
组织钳钳夹、牵引腹壁及剑突。
充分暴露肝脏．切断镰状韧带、左三角韧带；8-0丝线缝扎左膈下血管。
结扎、切断食道与肝脏之间的交通血管。
切断右三角韧带及肝后的腹膜组织．游离肝门部。
靠近肝脏切断左门静脉。
其远端结扎、近端用静脉血管夹夹闭。
切断肝动脉及左肝管。
自第一肝门向左肝静脉汇入下腔静脉点方向偏左侧画切肝线，切除受体大鼠左肝。
左肝静脉汇入下腔静脉处用静脉血管夹夹，在肝内切断左肝静脉，血管断面两侧用8-0带针线各缝一针牵引。
移出受体左肝，供肝原位置入。
将供肝肝上下腔静脉两侧缝线与受体左肝静脉对应部位缝合结扎作牵引。
用8-0血管缝线顺序缝合静脉后壁、前壁。
暴露供受体的门静脉。
分别在受体门静脉断端两侧各缝合一针向上牵引。
轻微松开门静脉血管夹．排除血栓，生理盐水冲洗供受体门静脉管腔。
同时确认供体门静脉是否有扭曲。
将供体带套管的门静脉置入受体左门静脉内，注入生理盐水排气，以4-O丝线结扎固定。
松开门静脉血管夹，恢复肝脏血供。
肝脏迅速变红。
肠道淤血消失。
将供体的胆管置管引出体外并固定。
将部分大网膜固定包裹于吻合口处，肠管复位后。
37"C的生理盐水冲洗腹腔，双层连续缝合关闭腹腔。
受体术后灯照保温3h，第1天给予10％葡萄糖喂养，第2天恢复正常饮食。
2 结果术后15-30分钟可见胆汁自胆道插管内排出。
麻醉期过后，受体大鼠基本能翻身运动。
2h后自主饮水，3d内精神较差。
行动迟缓，体重下降、饮食量较少；3d后精神恢复，饮食逐渐正常。
供体手术时间为45～60nin。
受体手术时间为40～65 min．30例肝移植大鼠。
术中出现死亡3例死亡率10％(10/30)，此3例均为受体肝、下腔静脉撕裂出血所致。
存活时间最短为3h,24h存活率76％(19/25)；周存活率56％(14/25)。
近期死亡原因为出血、空气栓塞、血管扭曲、血栓形成。
远期死亡原因为腹腔感染、肝脓肿、肠梗阻．3 讨论大鼠辅助性原位肝移植模型是一种难度较大的手术。
需要手术显微镜及熟练的显微外科操作技巧。
术中供肝的游离与切取、灌注、冷保存，受体肝脏的游离、切除。
供肝置人受体后，血管的吻合、术后的保温等，各个环节都会影响大鼠肝移植术后的生存率。
本实验的结果表明，大鼠辅助性原位肝移植的手术死亡率、术后生存率与经典的大鼠原位肝移植模型相比还存在一定的差距[5，6]。
我们认为导致这一现象的原因是多方面的。
它贯穿了整个手术过程。
3.1 供肝的游离、获取在供肝的游离过程中。
应注意对供肝的保护。
游离血管时，首先，须清楚血管的解剖，以防止剥离血管时出现不可逆的大出血，同时还须注意血管走行的变异。
其次，剥离血管要干净。
血管周围不能有残留组织。
左肝门静脉须留出适当的长度，以防血管过度紧张，引起血流不通畅。
肝断面的管道要全部结扎以防术后出血和胆漏。
同时，在修整供肝时，左肝静脉由于紧贴肝组织，因此要将部分肝上下腔静脉保留以利于肝脏血管流出道的吻合。
3.2 供肝的灌注经腹主动脉灌洗。
灌洗液由肝动脉及门静脉流入肝脏，与国外报道的经门静脉灌洗相比，灌洗更充分、完全[7]。
灌注过程中，用4℃的生理盐水淋洗肝脏，使肝脏内外均匀降温。
减轻了供肝缺血再灌注损伤．推注灌洗液要缓慢均匀．灌洗液量以肝脏完全苍白为准。
灌注时要阻断胸主动脉。
以防止灌注液经腹主动脉流回心脏，影响灌注效果。
3.3 供肝的冷保存、套管供肝在4℃的平衡液中保存，整个供肝应完全浸泡在保存液中，液面高于肝脏上缘约lcm。
肝上下腔静脉的缝扎、肝下下腔静脉及门静脉的套管均在保存液中进行，完成上述操作后，在显微镜下经肝下下腔静脉及门静脉推注保存液。
观察血管壁是否有破口。
3.4 受体肝脏的游离、切除受体肝脏上缘左膈下血管的缝扎应紧贴膈肌。
肝动脉与门静脉的分离应钝性进行。
尽可能长地保留左门静脉并紧贴肝门予以切断以便袖套管顺利插入。
胆总管、肝动脉的主干不能受损以免手术失败。
肝断面各种管道要一一结扎以防术后胆漏和出血。
3.5 提高手术技能．缩短手术时间与原位肝移植相比，辅助性原位肝移植不需切断下腔静脉，而且只有部分肝脏切除，它不存在无肝期，受体肠道持续淤血的情况不严重。
因此内毒素可通过肠道静脉系统流入肝脏，加重肝脏损伤影响较小[8]。
但是缩短血管吻合时间，注意吻合质量是其关键。
肝静脉管壁极其菲薄，吻合过程中极易撕裂。
因此，显微无张力吻合显得尤为关键。
还要有适当的针距。
且缝线不能收得过紧。
以免吻合口狭窄。
缩短手术时间。
可减轻炎性物质对血管内皮的损伤。
从而减少血栓的形成。
同时，为防止血栓形成，应尽量避免术中钳夹血管壁造成血管内膜的损伤。
3.6 术中、术后死亡主要原因的预防及处理术中死亡主要原因是出血、血管扭曲、空气栓塞。
出血多见于吻合口和肝断面处．吻合口外敷纱条可预防少量渗血。
对于肝断面的出血，除了要仔细结扎、缝扎肝断面的血管外，移植肝植入后用湿纱布压迫肝断面数分钟可以有效防止创面的渗血。
此外，为防止血管扭曲，插入套管前推注生理盐水确认套管的正确位置，能完全避免血管扭曲的发生。
术后的主要死亡原因是血栓形成、腹腔感染、胆漏、肝脓肿、肠梗阻。
熟练的手术操作可预防血栓形成．腹腔感染及肝脓肿的发生可通过改善手术环境以及术后饲养环境而减少，也可使用抗菌素预防。
关腹前仔细理顺肠管是预防肠梗阻发生的最好方法。
钳夹胆管能引起胆管变形，损伤胆管内壁，轻微的手术操作是关键。
大鼠辅助性原位肝移植是一种复杂、精细的手术。
只有在经过一定的训练后才能完成。
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