兔抗人红细胞免疫血清的制备

一、实验目的1. 探究兔子血清中抗体的产生及其特异性。

2. 分析兔子血清抗体与其他动物血清抗体的交叉反应性。

二、实验原理1. 兔子血清抗体实验基于抗原-抗体特异性结合原理。

将抗原物质注入兔子体内，兔子体内产生针对该抗原的特异性抗体。

2. 将兔子血清抗体与不同动物的血清进行混合，观察沉淀反应，分析抗体特异性及交叉反应性。

三、实验材料1. 实验动物：兔子（体重约2.5kg）2. 实验试剂：抗原（如卵蛋白）、兔抗人血清抗体、人血清、黑猩猩血清、狒狒血清、蜘蛛猴血清、猪血清、羊血清3. 实验器材：注射器、离心机、移液器、培养皿、显微镜等四、实验方法1. 兔子血清抗体制备（1）将抗原（如卵蛋白）注入兔子体内，免疫兔子。

（2）免疫后一周，采集兔子血液，分离血清。

（3）用ELISA法检测兔子血清抗体滴度，确定抗体产生。

2. 抗体特异性及交叉反应性分析（1）将兔子血清抗体与不同动物的血清进行混合，如人血清、黑猩猩血清、狒狒血清、蜘蛛猴血清、猪血清、羊血清。

（2）观察混合液是否产生沉淀反应，分析抗体特异性及交叉反应性。

五、实验结果1. 兔子血清抗体制备（1）免疫后一周，采集兔子血液，分离血清。

（2）ELISA法检测兔子血清抗体滴度，抗体滴度为1:32000。

2. 抗体特异性及交叉反应性分析（1）将兔子血清抗体与人血清混合，产生沉淀反应。

（2）将兔子血清抗体与黑猩猩血清混合，产生轻微沉淀反应。

（3）将兔子血清抗体与狒狒血清、蜘蛛猴血清、猪血清、羊血清混合，未产生沉淀反应。

六、实验讨论1. 兔子血清抗体实验成功制备了针对抗原的特异性抗体，表明兔子体内能够产生针对特定抗原的免疫反应。

2. 兔子血清抗体与人血清产生沉淀反应，表明兔子血清抗体具有特异性，可以识别并结合人血清中的抗原。

3. 兔子血清抗体与黑猩猩血清产生轻微沉淀反应，表明兔子血清抗体具有一定的交叉反应性，但与狒狒血清、蜘蛛猴血清、猪血清、羊血清无交叉反应，说明抗体特异性较高。

血清制备原理
血清制备是一种从动物（通常是哺乳动物）的血液中得到的透明液体，其中包含大量的抗体和其他血浆蛋白质。

血清常常被用于实验室研究、临床诊断和治疗等领域。

血清制备的过程主要包括以下步骤：
1. 选择合适的动物供体：通常选择小鼠、兔子、猪等动物作为供体。

供体选择通常基于其体积、免疫反应性和商业可获得性等因素。

2. 免疫刺激：将特定抗原或疫苗注射到动物供体体内，以刺激其免疫系统产生抗体。

注射剂量和时间可根据具体要求进行调整。

3. 收集血清：在一定时间后，通过采集供体动物的血液来获取血清。

最常见的方法是从动物的静脉中采集血液，然后将血液置于离心机中进行离心分离，将血浆与红细胞分离。

4. 血清的保存和处理：分离后的血浆可以通过多种方法进行保存和处理，例如添加抗生素以防止细菌生长、冻干或冷冻在低温下保存。

在血清制备过程中，关键的一点是在注射抗原之后充分免疫供体动物，以激发免疫系统产生大量的抗体。

动物的免疫系统会对抗原做出反应，并产生特异性抗体。

这些抗体会被释放到血液中，从而形成抗体丰富的血清。

血清的制备非常重要，因为血清中含有大量的抗体和其他免疫相关因子，可以被用来检测特定抗原的存在、了解免疫反应机制以及进行疾病的诊断和治疗。

由于血清的制备需要动物供体，并在涉及抗原注射的过程中涉及动物实验伦理问题，因此在实际操作中需要严格遵守伦理规范和法律法规。

兔抗人红细胞免疫血清的制备兔抗人红细胞免疫血清的制备摘要：目的制备兔抗人红细胞免疫血清并鉴定其效价。

方法将经过生理盐水洗涤、离心、去上清后配成的红细胞悬液皮下多点（10处）注射于家兔靠近淋巴结处，在20天内经过免疫间隔时间的不同后，心脏采血并分离血清，倍比稀释、经过灭火补体与不灭活补体的凝集试验和溶血试验来判断兔抗人红细胞免疫血清的效价。

结果凝集试验在(++)1:64抗血清稀释处出现凝集,溶血试验在1:512稀释处出现少量凝集。

结论在凝集试验中抗血清的效价为1:64.关键词：兔抗人红细胞血清凝集试验抗体分子是生物学和医学领域用途最广泛的蛋白质分子，抗体作为疾病预防、诊断和治疗的重要生物制剂已有百余年历史。

抗体在医药生物技术领域中的应用日趋广泛，地位越来越重要，而抗体的制备技术也是众多研究者们关注的问题，目前制备多克隆抗体主要是通过免疫动物所得，但是怎样才能制备得到高效价的抗体呢，免疫血清效价的高低受多重因素的的影响，免疫的途径及免疫的时间不同和分离的彻底与否都会影响抗血清的效价。

本组通过免疫时间的不同来免疫家兔，并用凝集实验和溶血试验来判断抗体效价，快速经济的制备抗血清制备方法为实验教学使用提供帮助，更好的了解和加深抗原抗体反应及抗体效价的鉴定和影响因素。

1 材料和方法1.1实验对象选用健康、适龄、健壮、无感染的家兔1.2实验材料生理盐水人红细胞采血针止血带碘液酒精棉签真空管水平式离心机水浴箱注射器试管吸管实验分组三个大组（1个班一个大组）4人一组实验过程和方法一、颗粒性抗原的制备（2%~5%RBC的制备）（1）静脉采血2-3ml，注入抗凝管中，轻轻混匀。

（2）洗涤RBC 将上述抗凝血移至10ml试管中，加入NS 6-7ml，混匀，2500r/min离心5min,去上清。

重复上述操作三次，最后一次去上清后，将红细胞配制成2%~5%的RBC悬液。

二免疫家兔2、取上述RBC悬液1ml免疫家兔。

免疫部位：静脉、皮内、皮下等。

兔血清抗体分离纯化抗血清纯化的目的是尽量除去抗血清中与目的抗体不相关的成分，以防止抗体外的其他血清成分对试验结果产生影响。

因此只能根据不同目的的要求，从抗血清中除去容易干扰的有关成分，或提取相应的免疫球蛋白。

抗血清纯化的方法主要有粗提法和精制法两个过程。

粗提法主要常用硫酸铵盐析法，精制法分非特异性和特异性两种类型。

非特异性方法如葡聚糖凝胶过滤法、离子交换层析法，其方法均系基于蛋白质分子的物理性质。

特异性方法如免疫吸附法，其方法基于抗原抗体的特异性反应。

一、盐析法(Salt fractionation)（粗提）【实验原理】当用中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对于水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质水分子周围的水化膜减弱甚至消失；同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，使蛋白质分子间聚集而沉淀。

不同蛋白质由于所带电荷不同以及水化程度不同，加入不同浓度的中性盐可分段从溶液中沉淀出来。

蛋白质在不同浓度的盐溶液中相对溶解度不同，血清γ球蛋白在一定浓度盐溶液中易于沉淀，而白蛋白则不易沉淀，据此可将二者分离。

盐析法：硫酸铵分级沉淀【主要试剂与仪器】实验材料：兔血清（20 ml-200 ml）试剂：饱和硫酸铵溶液（用前以 5 mol/L NaOH调至pH7.4）、0.01 mol/L Ph7.4 磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffered Saline PBS）、奈氏试剂实验器材：三角瓶、烧杯、各种吸管、小试管、量筒、布氏漏斗、透析袋（用前用PBS或双蒸水煮沸10 min）等仪器：搅拌器、离心机、电泳仪等【溶液配制】a、饱和硫酸铵溶液的配制：取500 ml蒸馏水加热至70～80 ℃，称(NH4)2SO4400～425 g溶于蒸馏水中，搅拌20 min，趁热过滤，冷却，配制好的饱和硫酸铵溶液，瓶底应有结晶析出，在使用前用28%的氨水调pH至7.4。

兔抗人血清白蛋白使用方法兔抗人血清白蛋白使用方法人血清白蛋白作为血浆容量扩充剂用途广泛，是当前的研究热点之一。

人血清白蛋白（Human Serum Albumin，简称HSA）是人血浆中的蛋白质。

在体液中人血清白蛋白可以运输脂肪酸、胆色素、氨基酸、类固醇激素、金属离子和许多治疗分子等：同时维持血液正常的渗透压。

在临床上人血清白蛋白可用于治疗休克与烧伤，用于补充因手术、意外事故或大出血所致的血液丢失，也可以作为血浆增容剂。

二抗和一抗的区别：第一抗体就是平常所说的抗体，即能和抗原特异性结合。

第二抗体是能和抗体结合的，即抗体的抗体。

主要用于检测抗体的存在。

一抗是针对抗原的抗体，二抗是针对一抗的抗体。

即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。

也就是说，抗原进入机体刺激机体免疫系统产生免疫应答，由B细胞可以产生与相应抗原发生特异性结合的特殊蛋白质。

一抗二抗都是一种可以特异结合别的物质的基团，而且一抗可以至少结合两种其他基团（底物和二抗）。

中文名称：兔抗人血清白蛋白英文名称：Polyclonal Rabbit Anti-HSA蛋白浓度：5mg/ml包含成分：0.01M PBS、PH:7.2、N稳定剂制备方法：高纯度HSA经过多次免疫健康雄性白兔而得来，免疫血清双扩散效价不低于1：32纯化方法：HSA亲和纯化交叉反应：没有记录产品纯度：以和HSA反应的抗体计不低于总蛋白的95%储存方法：请-20℃避光保存注意事项：避免反复冻融，如防腐剂对实验有影响，可以透析去除。

透析后冷冻会降低效价。

有效期限：请您再管体注明有效期内使用。

动物免疫血清的制备
动物免疫血清是指通过让动物产生免疫反应，收集动物血液中富含抗体的部分，并经过特定处理以去除不需要的成分而得到的制剂。

其制备过程一般分为以下几个步骤：
1. 选材。

选用适合特定疫苗的动物，如马、羊、兔等，使其产生足够的免疫力。

2. 免疫。

将特定疫苗注入动物体内，观察其产生的免疫反应，直至血清中含有足够浓度的抗体。

3. 收集血清。

采用无菌技术将动物血样收集入无菌容器中，待其凝结后离心分离血清。

4. 去除杂质。

用硫酸铵或其他化学物质去除血清中的非免疫球蛋白。

5. 贮存。

将血清进行无菌灭菌，并储存于低温条件下，以保持抗体的活性和稳定性。

动物免疫血清在人类免疫治疗和疾病预防中具有广泛的应用，如治疗流感、肺炎、肝炎等疾病，预防各种疾病的感染。

兔红细胞抗体的制备与鉴定兔红细胞抗体是指兔体内产生的能够与红细胞相结合的抗体，其制备与鉴定是血清学、分子生物学等领域中重要的科研技术之一。

以下是对该技术的介绍和分析。

一、兔红细胞抗体的制备1、实验动物的选取兔是目前最常用的实验动物之一。

兔子本身性格温顺，易于饲养且不耐寒，对环境要求较高，具有较高的生殖能力，其产生的抗体种类也较为多样。

因此，选择兔子作为实验动物进行兔红细胞抗体的制备是合适的选择。

2、免疫原的选择通常情况下，在制备兔红细胞抗体之前，需要先进行抗原的选择。

抗原的选择一般需要考虑到抗原的来源、性质、纯度等因素，并需根据需要进行筛选。

目前，常用的抗原包括自身组织抗原、异种组织抗原、细菌、病毒等多种物质。

3、制备方法(a) 制备过程兔红细胞抗体的制备过程一般分为以下几个步骤：免疫动物、采集兔血清、分离红细胞以及红细胞的溶解和沉淀。

(b) 实验操作在实验操作上，需要进行兔的体重测定、抗原的准备、抗原的免疫、血清的分离和处理等步骤。

同时，也需要对实验条件进行控制，如温度、光线、通风等因素。

二、兔红细胞抗体的鉴定1、免疫层析法免疫层析法是通过在固定相上引入抗原，以检测兔血清中产生兔红细胞抗体的方法。

在这种方法中，采用的固定相一般是胶体、树脂、葡聚糖和海藻酸等。

2、凝集反应法凝集反应法是通过在试管中加入抗原，以观察血清在抗原作用下是否出现凝集的方法。

凝集反应法有多种类型，如直接凝集反应法、间接凝集反应法、红细胞凝集反应法等。

3、酶联免疫吸附试验法酶联免疫吸附试验法首先需要将抗原覆盖在微孔板或固定在固体相上，接着加入适当稀释的检测血清，再加入特异性的二抗和底物，通过检测光密度差异以确定抗体的产生情况。

三、兔红细胞抗体的应用由于兔红细胞抗体制备方法简单，操作容易，因此在许多领域中都有着广泛的应用。

兔红细胞抗体用于疾病诊断、测定血型、检测某些病原体、红细胞表面抗原等方面。

此外，兔红细胞抗体也可用于制备单克隆抗体等相关技术。

西安医学院教案（专业课程）课程名称临床免疫学与检验班级检本1008 专业，层次检验，本科教师武永红专业技术职务讲师授课方式（大，小班，实习）实验学时8学时授课题目（章，节）兔抗人全血清的制备、纯化与鉴定基本教材或主要参考书王兰兰，许化溪主编.临床免疫学检验.第5版：人民卫生出版社，2012 刘辉．临床免疫学与检验实验指导第3版：人民卫生出版社，2009 曹励民．免疫学检验实验指导．自编教材，2011教学目的：1.掌握抗血清制备的一般程序，动物实验的基本要求和基本操作，ELISA试剂盒的制备与ELISA测定原理2.熟悉用盐析法和凝胶过滤层析法进行蛋白纯化的一般流程及其操作要点。

教学内容：1．兔抗人全血清的制备2．硫酸铵盐析3．凝胶过滤层析4．ELISA法检测抗体相对活性及效价教学方法：启发式教学；讲授重点内容。

教具：板书示教教学重点、难点：1. ELISA法检测抗体相对活性及效价教研室审阅意见（教研室主任签名）年月日教学内容教学手段时间分配兔抗人全血清的制备、纯化与鉴定（一）兔抗人全血清的制备（二）硫酸铵盐析（三）凝胶过滤层析（四）ELISA法检测抗体相对活性及效价（一）兔抗人全血清的制备1.免疫原的制备混合人全血清+弗氏完全佐剂→油包水状态混合人全血清是指至少8人，且含有ABO所有血型的混合血清；佐剂是指先于抗原或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的物质，简称佐剂。

弗氏不完全佐剂（羊毛脂+石蜡油）；弗氏完全佐剂（羊毛脂+石蜡油+卡介苗）2.免疫家兔间隔一周一次，每次1～1.5mL，共3次，免疫途径：后足掌，静脉。

饲养及卫生，取兔地点，托盘不离笼，分组⑴笼上挂标牌，编号，注明免疫原、兔王⑵铺报纸，抓取，上实验台，安抚⑶.剪毛⑷消毒⑸注射⑹归笼，清理实验台，实验室3.试血与放血试血：耳缘静脉采血，做双向免疫扩散试验测效价>1/16方可；放血：戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，颈内动脉插管。