高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺的含量

高效液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺三聚氰胺（Melamine）是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂，广泛用于木材加工、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革等行业，为白色晶体。

三鹿奶粉事件引发了对三聚氰胺检测的广泛关注，国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会相继发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》（GB/T22400-2008）的国家标准。

本文参考了以上标准并进行配制条件优化，建立了液相色谱检测法，前处理简单，检测限、精密度、重现性以及回收率均符合国家标准。

1 实验部分1.1 仪器与试剂LC1600高效液相色谱仪（含UV1600紫外-可见检测器1台，P1600高压恒流泵1台，上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；AT-330色谱柱温箱（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；FA2004分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；TGL-16G-A离心机（上海安亭科学仪器厂）；三聚氰胺标准品(>99%，上海安谱)；辛烷磺酸钠(色谱纯，北京百灵威)；磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯，美国Tedia)、纯净水(杭州娃哈哈)。

1.2 标准品溶液配制精密称取三聚氰胺标准品，溶于50％的甲醇水溶液，配制称1.422mg/ml的标准储备液，于4℃避光保存。

根据实验需要，用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作液。

1.3 样品前处理称取2g酸奶样品与50ml具塞离心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混匀后超声提取15min。

取提取液250ul，加入0.1mol/l盐酸750ul，混匀，以12000r/min离心5min，取上清液，0.22um滤膜过滤，作为HPLC 测定溶液。

1.4 色谱条件：色谱柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)流动相：乙腈/缓冲盐=15/85（缓冲盐：10mM辛烷磺酸钠水溶液，含0.1％磷酸）流速：1.0ml/min波长：240nm温度：40℃进样量：20μl2 实验结果2.1 精密度实验取浓度为0.569μg/ml三聚氰胺标准工作液，按上述色谱条件，连续进样5次，以各成分峰面积计算RSD(%)，所得结果如表1所示：保留时间相对标准偏差（RSD）为0.23％，峰面积RSD为0.57％。

牛奶中三聚氰胺的检测方法牛奶是我们日常生活中常见的食品之一，而牛奶中是否含有三聚氰胺成为了人们关注的焦点。

三聚氰胺是一种有毒化学物质，长期摄入可能对人体健康造成危害，因此对牛奶中三聚氰胺的检测成为了必不可少的工作。

一、高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）。

HPLC-MS技术是目前较为常用的牛奶中三聚氰胺检测方法之一。

该技术结合了高效液相色谱（HPLC）和质谱（MS）两种分析手段，能够对样品中的三聚氰胺进行高效、快速、准确的检测。

首先通过色谱柱将样品中的混合物分离，然后再通过质谱进行定性和定量分析，能够有效地避免其他成分对三聚氰胺检测的干扰，提高了检测的准确性和可靠性。

二、酶联免疫吸附法（ELISA）。

ELISA法是一种常用的免疫学分析方法，也可以用于牛奶中三聚氰胺的检测。

该方法利用酶标记抗体与待检测物发生特异性反应，再通过底物显色从而对三聚氰胺进行定性或定量检测。

ELISA法具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点，但也存在着对样品的预处理要求较为严格、易受其他成分干扰等缺点。

三、红外光谱法。

红外光谱法是一种基于样品对红外辐射的吸收、散射、透射等现象进行分析的方法，也可以用于牛奶中三聚氰胺的检测。

通过测定样品在红外光谱区的吸收峰，可以得到样品中三聚氰胺的含量信息。

该方法操作简便、分析速度快，但对仪器的精度要求较高，且受样品基质的影响较大。

四、原子吸收光谱法。

原子吸收光谱法是一种常用的重金属元素分析方法，也可以用于三聚氰胺的检测。

该方法通过样品中三聚氰胺原子吸收光谱的特征进行定性和定量分析，具有操作简便、分析速度快的优点。

但是该方法对样品的预处理要求较高，且仪器设备成本较高。

在进行牛奶中三聚氰胺检测时，应根据实际情况选择合适的检测方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保检测结果的准确性和可靠性。

同时，加强对牛奶生产企业的监督检查，提高牛奶质量安全水平，对保障消费者的健康具有重要意义。

固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量一、引言三聚氰胺是一种无机化合物，常用于工业制造和农业生产中，然而高浓度的三聚氰胺会对人体造成严重危害，特别是对婴儿和幼儿的影响更为严重。

由于近年来液态奶中三聚氰胺事件的频繁发生，因此对液态奶中三聚氰胺含量的检测显得尤为重要。

固相萃取一高效液相色谱法是目前常用的一种高效、准确的检测方法。

本文将介绍使用固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量的方法和结果。

二、实验材料和仪器1. 实验材料：液态奶样品、甲醇、乙腈、乙酸、二氯甲烷、硅胶2. 仪器：高效液相色谱仪、固相萃取柱、离心机、显微天平、pH计、紫外可见分光光度计等三、实验方法1. 样品处理：首先将液态奶样品样瓶放在冰箱中冷藏，取出一定量的样品后使用显微天平称取出适量样品，并将其加入样品离心管内。

然后加入适量的甲醇，进行振荡混合，最后使用离心机离心沉淀，得到混合物的过滤液。

2. 固相萃取：将得到的过滤液加入到固相萃取柱中，使用甲醇等洗脱混合物，得到固相萃取柱的萃取液。

3. 色谱分析：将获取到的固相萃取液置于高效液相色谱仪中进行色谱分析，根据三聚氰胺的特征峰进行定性和定量分析。

四、实验结果经过实验验证，使用固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量的结果显示，样品中三聚氰胺的含量为xmg/kg，达到了食品卫生安全标准。

五、实验结论通过该实验结果可以得出结论：固相萃取一高效液相色谱法是一种准确可靠的测定液态奶中三聚氰胺含量的方法。

该方法操作简便，结果准确，可以满足食品安全检测的需求。

六、实验改进尽管该方法已经得到了实验结果的验证，但在实际操作中还是存在一些可以改进的地方。

例如固相萃取柱的选择、色谱分析条件的优化等方面可以进行进一步的改进，以提高该方法的灵敏度和稳定性。

高效液相色谱(HPLC-UV)法测定奶粉中三聚氰胺的含量一、实验目的：测量奶粉中三聚氰胺的含量是否达标。

二、仪器：高效液相色谱仪，离心机，固相萃取装置，柱温箱，紫外检测器，C18柱，超声波清洗器，pH 计，电子天平，氮气吹干仪，涡旋混合器；5mL移液管1支,1mL刻度移液管1支，25mL容量瓶1个，100mL容量瓶6个，100mL烧杯1个，微量进样器一支。

三、试剂：三聚氰胺标准品，1%三氯乙酸，氨水，柠檬酸，庚烷磺酸钠（色谱纯），甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），二次水，甲醇水溶液（准确量取50mL甲醇和50mL水，混合备用），5%氨化甲醇（量取5mL氨水和95mL甲醇混合备用），离子对缓冲溶液（准确称取2.10g柠檬酸和2.02g 庚烷磺酸钠加水溶解后调节pH=3，定容至1L备用），三聚氰胺储备液（准确称取100mg三聚氰胺，在100mL容量瓶中用甲醇水溶液定容），净化柱（固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯），氮气。

四、实验步骤：1.样品预处理：准确称取2g样品，用10mL 1%三氯乙酸溶解后转移至25ml容量瓶中，乙腈定容。

超声提取10分钟后离心，干过滤。

用5mL移液管准确移取5mL过滤后的溶液过净化柱，依次用3mL水和3mL甲醇洗涤并抽干后后用约6mL 5%氨化甲醇洗脱。

洗脱液用氮气吹干后用1mL流动相定容，涡旋混合1分钟后经0.20 μm有机相滤膜过滤后进样。

2.色谱条件：C18 色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），以离子对缓冲溶液+乙腈（85+15）作为流动相，流量为1.0 ml/min，柱温为35 ℃，检测波长为240 nm，进样量为20 μl。

3. 标准曲线的绘制：将三聚氰胺标准储备液（1.00×10^3 mg/L）用甲醇-水溶液（1+1）逐级稀释得到浓度为1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00 mg/L的标准系列溶液，以峰面积（y）对浓度（x）绘制标准曲线。

2010级化学教育仪器化学综合性与设计性实验—高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺的含量——2012-06-03一、实验题目：乳制品中三聚氰胺的含量的测定（高效液相色谱法）二、摘要、关键词：[摘要]三聚氰胺是一种三嗪类含氮杂环有机化合物,被用作化工原料。

它是白色单斜晶体,为建立乳制品中三聚氰胺含量的高效液相色谱测定方法, 通过超声提取,离心, 结合高效液相色谱进行样品测定。

A液：0.9508 g辛烷磺酸钠（5mmol/L）+ 1.0640 g柠檬酸（pH=3-4）用高纯水品配制1L溶液；B液：甲醇；色谱条件：30%B+70%A。

色谱柱：CNWSIL C18液相色谱柱（4.6×250mm，5 µm）,检测波长：240nm。

[关键词] 高效液相色谱; 三聚氰胺; 乳制品三、引言1、对三聚氰胺的概述：三聚氰胺(Melamine) (化学式:C3H6N6 ) ,俗称密胺、蛋白精,国际纯粹与应用化学联合会命名为「1 ,3 ,5 - 三嗪- 2 ,4 ,6 - 三氨基」,是一种三嗪类含氮杂环有机化合物,被用作化工原料。

它是白色单斜晶体,几乎无味,微溶于水(311g/PL常温) ,可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等,对身体有害,不可用于食品加工或食品添加物。

三聚氰胺的结构式如下：三聚氰胺最主要的用途是作为生产三聚氰胺甲醛树脂(MF) 的原料。

三聚氰胺还可以作阻燃剂、减水剂、甲醛清洁剂等。

该树脂硬度比脲醛树脂高, 不易燃,耐水、耐热、耐老化、耐电弧、耐化学腐蚀,有良好的绝缘性能、光泽度和机械强度,广泛运用于木材、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革、电气、医药等行业。

蛋白质主要由氨基酸组成。

蛋白质平均含氮量为16 %左右,而三聚氰胺的含氮量为66 %左右。

通用的蛋白质测试方法“凯氏定氮法”是通过检测含氮量来估算蛋白质含量,因此,添加三聚氰胺会使得食品的蛋白质测试含量偏高,从而使劣质食品通过食品检验机构的测试。

牛奶中三聚氰胺的检测方法牛奶是我们日常生活中常见的饮品，但是近年来，关于牛奶中是否含有三聚氰胺的问题引起了人们的关注。

三聚氰胺是一种有毒化学物质，长期摄入可能对人体健康造成危害。

因此，对牛奶中三聚氰胺的检测方法变得尤为重要。

本文将介绍几种常见的牛奶中三聚氰胺的检测方法，希望能对大家有所帮助。

首先，常见的检测方法之一是高效液相色谱法。

这种方法利用高效液相色谱仪对牛奶样品中的三聚氰胺进行定量分析。

具体操作步骤是将样品制备成溶液，然后通过色谱柱进行分离，最后利用色谱检测器进行检测。

这种方法操作简便，准确性高，因此被广泛应用于牛奶中三聚氰胺的检测。

其次，质谱法也是一种常用的检测方法。

质谱法是利用质谱仪对样品中的化合物进行分析，通过化合物的质荷比来确定其分子结构和含量。

对于三聚氰胺的检测，质谱法具有高灵敏度和高准确性的优点，能够有效地检测出牛奶中极微量的三聚氰胺。

因此，质谱法也是一种常见的牛奶中三聚氰胺检测方法。

除了以上两种方法外，还有一种常用的检测方法是酶联免疫吸附法。

这种方法利用酶标仪对样品中的三聚氰胺进行检测，通过酶标仪测定样品中三聚氰胺的含量。

酶联免疫吸附法操作简便，不需要昂贵的仪器设备，因此被广泛应用于牛奶中三聚氰胺的快速检测。

综上所述，牛奶中三聚氰胺的检测方法主要包括高效液相色谱法、质谱法和酶联免疫吸附法。

这些方法各有优缺点，可以根据实际情况选择合适的方法进行检测。

在日常生活中，我们应该选择有资质的检测机构对牛奶进行定期检测，确保牛奶的质量安全，保障我们的健康。

希望本文对大家对牛奶中三聚氰胺的检测方法有所帮助。

固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量一、引言三聚氰胺是一种有机化合物，化学式为C3H6N6，是一种白色结晶性固体，可溶于水和乙醇，主要用作工业生产中的原料，如氰酸酯树脂、氰酸脂和脲醛树脂等。

但由于其高氮含量，三聚氰胺还可以在一定条件下成为一种良好的氮肥料。

三聚氰胺在奶制品中的使用引起了广泛的争议。

2008年，中国发生了因三聚氰胺被加入奶粉中而导致大量儿童发生尿路结石的事件，震惊了全国。

由于三聚氰胺过量摄入会对人体肾脏造成严重危害，因此对奶制品中三聚氰胺的含量进行准确检测和控制成为了至关重要的工作。

二、实验目的本实验旨在利用固相萃取-高效液相色谱法对液态奶中三聚氰胺进行含量测定，以确保奶制品中三聚氰胺的安全性。

三、实验原理固相萃取技术是一种分离和富集化合物的方法，其原理是利用吸附剂（固相萃取柱）对样品中的目标化合物进行富集，并通过一系列的洗脱步骤将目标化合物从吸附剂上洗脱出来。

在本实验中，我们将使用固相萃取技术将液态奶中的三聚氰胺富集到吸附剂上，并进行洗脱处理以得到纯化的三聚氰胺化合物。

高效液相色谱法是一种分离和定性化合物的方法，其原理是利用固定在色谱柱上的填料对化合物进行分离，通过流动相的作用使化合物在填料中进行逐步分离，并通过检测器对分离后的化合物进行检测和定量。

在本实验中，我们将使用高效液相色谱法对洗脱后的三聚氰胺进行检测和定量分析。

四、实验步骤1. 样品准备：将液态奶样品装入适当的容器中，以备后续的固相萃取处理。

2. 固相萃取：将样品经过预处理后注入固相萃取柱中，利用固相萃取柱对三聚氰胺进行富集。

3. 洗脱处理：使用洗脱液将固相萃取柱中富集的三聚氰胺进行洗脱处理，得到纯化的三聚氰胺化合物。

4. 高效液相色谱分析：将洗脱后的三聚氰胺样品注入高效液相色谱仪中，利用色谱仪对三聚氰胺进行检测和定量分析。

5. 数据处理：根据高效液相色谱仪得到的检测结果，计算出液态奶中三聚氰胺的含量。

五、实验结果根据实验数据分析，我们得到了液态奶中三聚氰胺的含量为x mg/L。