CrylAb基因转化甘蔗及转基因抗虫植株的获得

第1篇一、实验目的1. 理解基因工程转化实验的基本原理和方法。

2. 掌握基因工程转化实验的操作步骤和技巧。

3. 通过实验，验证基因转化效果，为后续研究提供基础数据。

二、实验原理基因工程转化实验是将目的基因导入受体细胞的过程。

根据受体细胞的不同，转化方法也有所区别。

本实验采用农杆菌介导转化法，将目的基因导入植物细胞。

三、实验材料1. 受体植物：小麦植株2. 转化质粒：含目的基因的质粒3. 农杆菌：具有转化能力的农杆菌菌株4. 实验试剂：氯化钙、CaCl2溶液、IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）、抗菌素等5. 实验仪器：超净工作台、无菌操作箱、移液器、离心机、培养箱、显微镜等四、实验步骤1. 农杆菌活化与扩大培养（1）将冻存的农杆菌菌株复苏，在含有抗菌素的LB培养基中扩大培养。

（2）将培养好的农杆菌转移到无菌条件下，用移液器吸取适量菌液，加入含有转化质粒的LB培养基中。

（3）将菌液在摇床上振荡培养过夜。

2. 农杆菌转化（1）将小麦叶片进行表面消毒，用无菌移液器吸取适量菌液，滴在叶片表面。

（2）将叶片放入无菌培养皿中，在黑暗条件下共培养3-5天。

3. 农杆菌侵染与再生（1）将共培养后的叶片转移到含有抗菌素的培养基上，进行再生培养。

（2）待再生植株长出后，进行筛选，去除未转化植株。

4. 转化植株PCR检测（1）提取转化植株的总DNA。

（2）设计目的基因的引物，进行PCR扩增。

（3）观察PCR产物，判断转化效果。

五、实验结果与分析1. 农杆菌活化与扩大培养实验中，农杆菌菌株在LB培养基中生长良好，菌液呈均匀浑浊状。

2. 农杆菌转化共培养后，小麦叶片出现明显的不定芽，表明农杆菌已成功侵染植物细胞。

3. 农杆菌侵染与再生再生培养过程中，部分植株长出不定芽，表明农杆菌已成功转化植物细胞。

4. 转化植株PCR检测PCR检测结果显示，部分转化植株扩增出目的基因片段，表明基因转化成功。

六、实验结论本实验采用农杆菌介导转化法，成功将目的基因导入小麦植株。

2014年农业转基因生物安全证书批准清单序号审批编号申报单位项目名称有效期1 农基安证字（2014）第037号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉CRIZ140204在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日2 农基安证字（2014）第038号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉CRIZ140206在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日3 农基安证字（2014）第039号河北省农林科学院旱作农业研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉衡棉1670在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日4 农基安证字（2014）第040号国家半干旱农业工程技术研究中心转cry1Ab/crylAc基因抗虫棉夏早2号在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日5 农基安证字（2014）第041号山东鑫秋农业科技股份有限公司转crylAb/crylAc基因抗虫棉鑫秋1号在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日6 农基安证字（2014）第042号山东鑫秋农业科技股份有限公司转crylAb/crylAc基因抗虫棉鑫秋116在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日7 农基安证字（2014）第043号山东鑫秋农业科技股份有限公司转crylAb/crylAc基因抗虫棉鑫秋117在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日8 农基安证字（2014）第044号山东鑫秋农业科技股份有限公司转crylAb/crylAc基因抗虫棉鑫秋119在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日9 农基安证字（2014）第045号邯郸市农业科学院转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉邯郸109在黄河流域生产应用安全证书2015年4月15日至2020年4月15日10 农基安证字（2014）第046号邯郸市农业科学院转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉邯棉802在黄河流域生产应用安全证书2015年4月15日至2020年4月15日111 农基安证字（2014）第047号邯郸市农业科学院转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉邯棉6101在黄河流域生产应用安全证书2015年4月15日至2020年4月15日12 农基安证字（2014）第048号河南省农业科学院经济作物研究所河南省中创种业短季棉有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉银山14号在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日13 农基安证字（2014）第049号河南省农业科学院经济作物研究所河南省中创种业短季棉有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉豫棉50在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日14 农基安证字（2014）第050号河南省农业科学院经济作物研究所河南省中创种业短季棉有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉豫棉54在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日15 农基安证字（2014）第051号河南省农业科学院经济作物研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉豫棉508在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日16 农基安证字（2014）第052号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中棉001在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日17 农基安证字（2014）第053号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中棉1038在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日18 农基安证字（2014）第054号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中棉CJ79在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日19 农基安证字（2014）第055号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中棉425在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日20 农基安证字（2014）第056号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉MH335223在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日21 农基安证字（2014）第057号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉MH410433在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日22 农基安证字（2014）第058号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中M02在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日23 农基安证字（2014）第059号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中M03在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日224 农基安证字（2014）第060号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中M04在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日25 农基安证字（2014）第061号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉CRI082在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日26 农基安证字（2014）第062号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中棉所54在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日27 农基安证字（2014）第063号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中棉9131在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日28 农基安证字（2014）第064号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中棉9213在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日29 农基安证字（2014）第065号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中棉9421在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日30 农基安证字（2014）第066号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中棉9934在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日31 农基安证字（2014）第067号中棉种业科技股份有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中杂306在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日32 农基安证字（2014）第068号邯郸市农业科学院转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉邯M263在黄河流域棉区生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日33 农基安证字（2014）第069号山东鑫秋农业科技股份有限公司转crylAb/crylAc基因抗虫棉鑫秋115在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日34 农基安证字（2014）第070号山东圣丰种业科技有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉山农SF06在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日35 农基安证字（2014）第071号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉CRIZ140205在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日36 农基安证字（2014）第072号开封市农林科学研究院转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉汴棉827在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日337 农基安证字（2014）第073号河北省农林科学院滨海农业研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉滨棉518在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日38 农基安证字（2014）第074号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉CRIZ140201在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日39 农基安证字（2014）第075号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉CRIZ140203在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日40 农基安证字（2014）第076号高阳县硕丰棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉硕丰棉5号在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日41 农基安证字（2014）第077号济阳县鲁优棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉玉君5号在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日42 农基安证字（2014）第078号江苏徐淮地区徐州农业科学研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉徐D619在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日43 农基安证字（2014）第079号山东爱农种业有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉鲁创棉117在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日44 农基安证字（2014）第080号河北农业大学转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉冀农大23号在黄河流域生产应用安全证书2015年4月15日至2020年4月15日45 农基安证字（2014）第081号河北农业大学转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉冀农大棉24号在黄河流域生产应用安全证书2015年4月15日至2020年4月15日46 农基安证字（2014）第082号河北农业大学转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉冀农大棉25号在黄河流域生产应用安全证书2015年4月15日至2020年4月15日47 农基安证字（2014）第083号山东省博兴县金种子有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉金种子135在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日48 农基安证字（2014）第084号天津金世神农种业有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉金农308在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日49 农基安证字（2014）第085号中国农业科学院生物技术研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉GK12在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日450 农基安证字（2014）第086号中国农业科学院生物技术研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中生棉1号在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日51 农基安证字（2014）第087号中国农业科学院生物技术研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中生棉3号在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日52 农基安证字（2014）第088号河南科技学院转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉百棉9号在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日53 农基安证字（2014）第089号河南科技学院转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉百棉15在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日54 农基安证字（2014）第090号河南科技学院转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉百棉56在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日55 农基安证字（2014）第091号河南科技学院转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉百棉86在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日56 农基安证字（2014）第092号河北省农林科学院粮油作物研究所河北冀丰棉花科技有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉冀丰1271在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日57 农基安证字（2014）第093号石家庄市农林科学研究院转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉冀石265在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日58 农基安证字（2014）第094号天津金世神农种业有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉金农棉518在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日59 农基安证字（2014）第095号河北省河间市国欣农村技术服务总会转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉GK39在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日60 农基安证字（2014）第096号河北省河间市国欣农村技术服务总会转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉GKz21在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日61 农基安证字（2014）第097号河北省河间市国欣农村技术服务总会转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉国欣棉25在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日62 农基安证字（2014）第098号山东棉花研究中心转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉鲁棉238在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日563 农基安证字（2014）第099号山东棉花研究中心转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉鲁棉1141在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日64 农基安证字（2014）第100号山东棉花研究中心转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉鲁棉1142在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日65 农基安证字（2014）第101号山东棉花研究中心转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉鲁棉1143在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日66 农基安证字（2014）第102号山东棉花研究中心转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉鲁棉研27号在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日67 农基安证字（2014）第103号山东棉花研究中心转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉鲁杂201在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日68 农基安证字（2014）第104号山东棉花研究中心转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉鲁杂202在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日69 农基安证字（2014）第105号山东棉花研究中心转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉鲁杂216在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日70 农基安证字（2014）第106号山东棉花研究中心转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉K836在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日71 农基安证字（2014）第107号山东棉花研究中心转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉鲁棉541在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日72 农基安证字（2014）第108号山东棉花研究中心转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉鲁棉542在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日73 农基安证字（2014）第109号山东棉花研究中心转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉鲁棉543在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日74 农基安证字（2014）第110号湖北省农业科学院经济作物研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉C111在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日75 农基安证字（2014）第111号湖北省农业科学院经济作物研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉EZ9在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日676 农基安证字（2014）第112号湖北富悦农业集团有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉FY108在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日77 农基安证字（2014）第113号淮南绿亿农业科技研究所合肥丰乐种业股份有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉GKz43在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日78 农基安证字（2014）第114号湖南隆平高科亚华棉油种业有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉H1103在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日79 农基安证字（2014）第115号湖北省农业科学院经济作物研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉KB2326在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日80 农基安证字（2014）第116号国营全椒县棉花原种总场转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉Q2056在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日81 农基安证字（2014）第117号安徽省农业科学院土壤肥料研究所安徽皖垦种业股份有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉皖垦棉1号在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日82 农基安证字（2014）第118号安徽省农业科学院棉花研究所安徽宇顺种业开发有限公司转crylAb/crylAc基因抗虫棉皖棉研11A7在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日83 农基安证字（2014）第119号安庆市宇顺种业研究所转cry1Ac基因抗虫棉宇杂棉7号在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日84 农基安证字（2014）第120号安徽宇顺种业开发有限公司转cry1Ac基因抗虫棉宇杂棉8号在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日85 农基安证字（2014）第121号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中棉001在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日86 农基安证字（2014）第122号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中棉CJ03B在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日87 农基安证字（2014）第123号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉CRIZ140103在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日88 农基安证字（2014）第124号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉CRIZ140104在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日789 农基安证字（2014）第125号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中棉9134在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日90 农基安证字（2014）第126号中棉种业科技股份有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中杂棉108在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日91 农基安证字（2014）第127号湖南隆平高科亚华棉油种业有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉慈抗杂3号在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日92 农基安证字（2014）第128号安徽宇顺种业开发有限公司安徽省农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉YZ868在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日93 农基安证字（2014）第129号湖北省农业科学院经济作物研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉ZD2040在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日94 农基安证字（2014）第130号当涂县棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉当杂02-3在长江流域生产应用安全证书2015年4月15日至2020年4月15日95 农基安证字（2014）第131号当涂县棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉当杂04-4在长江流域生产应用安全证书2015年4月15日至2020年4月15日96 农基安证字（2014）第132号当涂县棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉当杂TA-8在长江流域生产应用安全证书2015年4月15日至2020年4月15日97 农基安证字（2014）第133号合肥丰乐种业股份有限公司转cry1Ac基因抗虫棉丰杂218在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日98 农基安证字（2014）第134号武汉隆福康农业发展有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉隆福棉316号在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日99 农基安证字（2014）第135号安徽省长金种子研发有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉长金棉11号在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日100 农基安证字（2014）第136号创世纪种业有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉创072在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日101 农基安证字（2014）第137号创世纪种业有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉创075在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日8102 农基安证字（2014）第138号黄冈市农业科学院转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉冈86在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日103 农基安证字（2014）第139号黄冈市农业科学院转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉冈0996在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日104 农基安证字（2014）第140号江苏神农大丰种业科技有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉SN1106在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日105 农基安证字（2014）第141号江苏徐淮地区徐州农业科学研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉徐D412在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日106 农基安证字（2014）第142号江苏徐淮地区徐州农业科学研究所江苏徐农种业科技有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉徐D821在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日107 农基安证字（2014）第143号荆州市霞光农业科学试验站转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉荆霞141在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日108 农基安证字（2014）第144号四川省农业科学院经济作物育种栽培研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉KH25在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日109 农基安证字（2014）第145号四川省农业科学院经济作物育种栽培研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉SH78在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日110 农基安证字（2014）第146号四川省农业科学院经济作物育种栽培研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉川杂棉41在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日111 农基安证字（2014）第147号湖北惠民农业科技有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉华惠20在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日112 农基安证字（2014）第148号湖北惠民农业科技有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉华惠124在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日113 农基安证字（2014）第149号湖北富悦农业集团有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉富棉616在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日114 农基安证字（2014）第150号中国农业科学院生物技术研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中生棉9号在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日9115 农基安证字（2014）第151号华中农业大学转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉华棉3908在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日116 农基安证字（2014）第152号华中农业大学转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉华棉9153在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日117 农基安证字（2014）第153号华中农业大学转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉华棉A111在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日118 农基安证字（2014）第154号华中农业大学转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉华杂棉5号在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日119 农基安证字（2014）第155号华中农业大学转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉华杂棉H922在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日120 农基安证字（2014）第156号安庆市稼元农业科技有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉稼棉821在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日121 农基安证字（2014）第157号安庆市稼元农业科技有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉稼元4号在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日122 农基安证字（2014）第158号荆州农业科学院转crylAb/crylAc基因抗虫棉荆棉91在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日123 农基安证字（2014）第159号荆州农业科学院转crylAb/crylAc基因抗虫棉荆棉0436在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日124 农基安证字（2014）第160号荆州农业科学院转crylAb/crylAc基因抗虫棉荆杂棉88在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日125 农基安证字（2014）第161号安徽全新种业有限公司安徽省农业科学院棉花研究所转crylAb/crylAc基因抗虫棉抗杂棉11A2在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日126 农基安证字（2014）第162号安徽省农业科学院棉花研究所转crylAb/crylAc基因抗虫棉皖棉研258在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日127 农基安证字（2014）第163号合肥丰乐种业股份有限公司转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉乐华棉9号在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日10128 农基安证字（2014）第164号河北省河间市国欣农村技术服务总会转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉GK39在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日129 农基安证字（2014）第165号河北省河间市国欣农村技术服务总会转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉GKz21在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日130 农基安证字（2014）第166号河北省河间市国欣农村技术服务总会转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉国欣棉17号在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日131 农基安证字（2014）第167号河北省河间市国欣农村技术服务总会转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉国欣棉18号在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日132 农基安证字（2014）第168号江苏省泗棉种业有限责任公司宿迁市农业科学研究院转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉泗阳493在长江流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日133 农基安证字（2014）第169号武汉惠华三农种业有限公司湖北省农欣农业科技有限公司转crylAc基因抗虫棉X6028在长江流域生产应用安全证书2015年4月15日至2020年4月15日134 农基安证字（2014）第170号山东鑫秋农业科技股份有限公司转crylAb/crylAc基因抗虫棉鑫秋1号在西北内陆生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日135 农基安证字（2014）第171号中国农业科学院棉花研究所转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉中棉9978在西北内陆生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日136 农基安证字（2014）第172号山东棉花研究中心转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉鲁6269在西北内陆生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日137 农基安证字（2014）第173号山东棉花研究中心转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉鲁棉541在西北内陆生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日138 农基安证字（2014）第174号山东棉花研究中心转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉鲁棉542在西北内陆生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日139 农基安证字（2014）第175号山东棉花研究中心转cry1Ab/cry1Ac基因抗虫棉鲁棉543在西北内陆生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日140 农基安证字（2014）第176号山东棉花研究中心转crylAb/crylAc基因抗虫棉鲁杂235在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日11141 农基安证字（2014）第177号山西省农业科学院棉花研究所转crylAc基因抗虫棉运B259在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日142 农基安证字（2014）第178号山西省农业科学院棉花研究所转crylAc基因抗虫棉运H13在黄河流域生产应用的安全证书2015年4月15日至2020年4月15日12。

2024年高中生物新教材同步选择性必修第三册第3章基因工程第2节基因工程的基本操作程序第2节基因工程的基本操作程序第1课时目的基因的筛选与获取和基因表达载体的构建课程内容标准核心素养对接1.阐明基因工程的原理和基本操作程序。

2.尝试进行PCR的基本操作并用电泳鉴定PCR的产物。

1.科学思维——对基因工程的基本程序有整体的认识。

2.科学探究——能复述PCR技术的原理和基本过程，了解扩增目的基因的方法。

知识点1目的基因的筛选与获取1.筛选合适的目的基因2.获取目的基因的方法3.利用PCR获取和扩增目的基因（1）PCR的含义：PCR是聚合酶链式反应的缩写，它是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。

（2）条件：一定的缓冲溶液（一般要添加Mg2＋）、DNA模板、分别与两条模板链结合的2种引物、4种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶以及能自动调控温度的仪器。

（3）过程（4）PCR产物的鉴定：常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定。

知识点2基因表达载体的构建1.构建基因表达载体的目的（1）使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代。

（2）使目的基因能够表达和发挥作用。

2.基因表达载体的组成3.基因表达载体的构建过程（1）首先用一定的限制酶切割载体。

（2）然后用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA 片段。

（3）再利用DNA连接酶将目的基因片段拼接到载体的切口处（如图所示）。

（1）目的基因一定是编码蛋白质的基因（×）（2）DNA聚合酶能够从引物的5′端开始连接脱氧核苷酸（×）（3）每一次循环后目的基因的量可以增加一倍，呈指数形式扩增（√）（4）真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2＋激活。

因此，PCR反应缓冲溶液中一般要添加Mg2＋（√）（5）PCR过程不需要解旋酶（√）（6）基因表达载体中含有启动子和密码子（×）（7）终止子相当于一盏红色信号灯，使翻译在所需要的地方停下来（×）教材P78图示拓展1.结合下图分析PCR过程中DNA链复制的方向是怎样的。

转基因筛选实验报告1. 实验目的本实验旨在通过转基因技术筛选出具有目标基因的转基因植物，并验证其功能表达。

同时，对转基因技术的应用进行探究与分析。

2. 实验方法2.1. 材料准备- 野生型植物种子- 目标基因载体- 转化载体（包含选择标记基因）- 催化剂（如乙酰丙酮）- 局部细菌感染试剂2.2. 实验步骤1. 制备植物组织培养基，包括必需的无机盐、营养物质以及植物激素。

2. 将野生型植物种子在无菌条件下在培养基上培养，保持温湿度合适。

3. 将目标基因载体和转化载体分别在乙酰丙酮的催化作用下加入植物组织培养基中。

4. 收取转基因植株，将其转移到相应的培养基中继续培养。

5. 利用PCR等方法对转基因植株进行基因分析，验证是否成功转化目标基因。

6. 进行型和酶解析实验，验证目标基因的功能表达情况。

3. 实验结果经过一段时间的培养和筛选，我们成功获得了若干转基因植株。

通过PCR实验验证，其中的部分植株确实成功转化了目标基因。

进一步的酶解析实验结果显示，这些转基因植株中的目标基因被成功表达，产生了相应的功能酶。

4. 实验分析通过转基因技术的应用，我们成功地筛选出了具有目标基因的转基因植物。

这为进一步研究和应用提供了重要的基础。

转基因技术的应用不仅可以用于改良作物品种，提高农作物的抗病虫能力和产量，还可以用于生物医学研究，产生用于疾病治疗的蛋白质等。

然而，转基因技术也面临一些争议和风险。

一方面，转基因植物可能对环境产生不可逆转的影响，对生态系统造成潜在风险。

另一方面，转基因植物可能引发食品安全问题，对人体健康构成潜在威胁。

因此，在推广应用转基因技术的过程中，需要更加严格的监管和安全评估。

5. 结论通过转基因筛选实验，我们成功获得了具有目标基因的转基因植物，并验证了目标基因的功能表达。

这为转基因技术的应用提供了实验依据和理论基础。

转基因技术具有广阔的应用前景，但也需要高度重视风险评估和监管措施，确保其安全使用。

甘蔗组织培养技术研究进展目录一、内容概览 (2)二、甘蔗组织培养技术概述 (2)三、甘蔗组织培养技术的研究现状 (4)1. 国际研究现状 (5)2. 国内研究现状 (6)四、甘蔗组织培养技术的主要方法 (7)1. 外植体的选择和处理 (8)2. 培养基的制备与优化 (9)3. 培养条件及过程控制 (11)五、甘蔗组织培养技术的应用与成果展示 (12)1. 甘蔗品种改良中的应用 (13)2. 甘蔗病虫害防治中的应用 (14)3. 甘蔗基因工程中的应用及成果展示 (15)六、甘蔗组织培养技术存在的问题与挑战 (16)1. 技术难题及限制因素 (17)2. 技术推广与应用中的挑战与机遇 (19)七、甘蔗组织培养技术的发展趋势与展望 (20)1. 技术发展方向及创新点预测 (21)2. 技术推广与应用前景展望 (23)八、结论与建议 (24)1. 研究总结与主要观点 (25)2. 对未来研究的建议与展望 (26)一、内容概览甘蔗组织培养技术近年来取得了显著的研究进展，成为了植物组织培养领域的一大热点。

这项技术利用甘蔗的幼嫩组织或器官作为外植体，在无菌条件下进行培养，使其生长成完整植株或特定器官。

甘蔗组织培养技术不仅具有繁殖速度快、效率高的优点，还能有效地防止病虫害的发生，提高甘蔗的产量和品质。

在甘蔗组织培养过程中，研究者们通过优化培养基成分、改变培养条件、引入基因工程手段等策略，实现了对甘蔗基因表达的调控和改良。

这些研究成果为甘蔗的遗传改良和新品种培育提供了有力支持。

甘蔗组织培养技术还在甘蔗的病虫害防治、抗逆性评价以及品质鉴定等方面发挥着重要作用。

随着科技的不断进步，甘蔗组织培养技术将继续向更高水平发展，为甘蔗产业的可持续发展做出更大的贡献。

二、甘蔗组织培养技术概述随着生物技术的不断发展，组织培养技术在农业领域的应用越来越广泛。

甘蔗作为世界上最大的糖料作物之一，其组织培养技术的研究和应用具有重要的经济和生态价值。

转基因玉米对5种储藏物昆虫的影响作者：卢少华高诗梦鲁玉杰来源：《安徽农业科学》2023年第23期摘要［目的］研究转基因玉米种子对储藏物昆虫的影响。

［方法］通过比较转基因玉米和非转基因玉米营养成分的差异，分析转基因玉米对5种储藏物昆虫取食偏好性、体重和体长的影响。

［结果］转基因玉米较非转基因玉米有更高的蛋白质含量，二者主要营养成分含量差别不大；与非转基因玉米相比，赤拟谷盗、锈赤扁谷盗和玉米象显著偏好选择转基因玉米，而米象和锯谷盗显著偏好选择非转基因玉米；转基因玉米对5种储藏昆虫的体长均没有显著影响，但取食转基因玉米饲料后赤拟谷盗、锈赤扁谷盗和锯谷盗的体重分别增加了约0.55、0.64和0.42倍，玉米象和米象的体重分别降低了约26.78%和33.15%。

［结论］转基因玉米对不同昆虫的选择偏好性影响不同，增加了粉食性昆虫的体重，降低了蛀蚀性昆虫的体重。

该研究结果将为指导转基因玉米的品种选育以及其产后储存期间害虫的防治提供科学依据。

关键词转基因玉米；储藏物昆虫；抗虫玉米；抗除草剂玉米；害虫防治中图分类号 TS 255.6 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2023）23-0158-04doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.23.037Effects of Transgenic Maize on Five Kinds of Storage InsectsLU Shao-hua1，GAO Shi-meng1，LU Yu-jie1，2（1.School of Food and Strategic Reserves，Henan University of Technology，Zhengzhou，Henan 450001；2.School of Grain Science and Technology，Jiangsu University of Science and Technology，Zhenjiang，Jiangsu 212100）Abstract ［Objective］ To study the effects of transgenic maize on storage insects.［Method］Through comparing the differences of main nutritional components between transgenic maize and non-transgenic maize，the effects of transgenic maize on feeding preference，body weight and body length of five kinds of storage insects were analyzed.［Result］The protein content in transgenic maize was significantly higher than that in non-transgenic maize，but there were small differences in the content of other main nutrients between transgenic maize and non-transgenic maize.Tribolium castaneum，Cryptolestes ferrugineus，Sitophilus zeamais significantly preferred to transgenic maize，while Sitophilus oryzae and Oryzaephilus surinamensis significantly preferred to non-transgenic maize.The transgenic maize had no significant effect on the body length of five kinds of storage insects.After feeding with transgenic maize，the body weight of T.castaneum，C. ferrugineus and O.surinamensis increased by about 0.55，0.64 and 0.42 times respectively，while the the body weight of S.zeamais and S.oryzae decreased by 26.78% and 33.15% respectively.［Conclusion］Transgenic maize had different effects on the choice preference of different kinds of storage insects，it increased the body weight of powder-feeding insects and decreased the body weight of xylophagous insects. The research results would provide the scientific basis for guiding the breeding，prevention and control of pests in transgenic maize during the post-harvest stage of transgenic maize.Key words Transgenic maize;Storage insects;Insect-resistant maize;Herbicide-tolerantmaize;Pest control基金项目河南工业大学高层次人才基金项目（2020BS031）；国家重点研发计划项目（2019YFC1605304）。

福建农林大学2014年硕士研究生“分子生物学实验技术”考试试卷学号： _____ 姓名：___________ 成绩：___________1、结合你的专业实际，谈谈目前分子生物学技术在作物品种遗传改良方面的应用情况、效果以及今后的发展趋势。

（20分）答：作物遗传育种学就是研究选育和繁殖作物优良品种的理论与技术的一门学科。

随着现代分子生物学技术的发展，分子生物学技术在作物品种遗传改良方面的应用越来越广泛，并取得了良好的效果。

主要表现在：⑴分子标记在育种上的应用，通过寻找与目标性状紧密连锁的分子标记，可实现分子标记辅助育种，对目标性状实行更有效操作，从而加速作物品种改良进程.近年来，出现了限制性片段长度多态性（RFLP）、随机扩增多态性（RAPD）、扩增片段长度多态性（AFLP）、简单序列重复（SSR）、简单序列重复间区（ISSR）等十几种分子标记技术.在目标性状的选育方面，在抗病育种上，小麦抗锈病；玉米抗大小斑病；水稻抗白叶枯病，甘蔗抗花叶病等方面都取得了显著成效。

在作物品质育种方面，玉米、小麦、大麦、高蛋白、高赖氨酸选育；油菜高含油量、低芥酸选育；提高棉花纤维长度、强度选育；提高廿蔗糖分含量选育等获得较大进展。

⑵分子标记辅助育种在品种改良方面的应用：分子标记的辅助选择育种随着越来越多的作物品质性状分子标记的建立，分子标记辅助育种已成为提高常规育种对作物品质改良的有利工具并首先在玉米和大豆等作物上得到成功应用.分子标记辅助选择（MAS）是现在分子育种中最重要的环节之一。

近年来基因组研究的迅速发展为许多农作物提供了大最分子标记技术和多种多样的检测手段，使得MAS应用于作物遗传改良已成为现实，并已取得了长足进展，主要集中体现在以下几个方面。

①基因聚合：作物的有些农艺性状（抗病等）表达呈基因累加作用，即集中到某一品种屮同效基因越多则性状表达越充分。

基因聚合就是将分散在不同品种中的优良性状基因通过杂交、冋交、复合杂交等手段聚合到同一个品种中。

押江苏卷基因工程1、（2023江苏卷） 为了将某纳米抗体和绿色荧光蛋白基因融合表达，运用重组酶技术构建质粒，如图1所示。

请回答下列问题：（1）分别进行PCR扩增片段F1与片段F2时，配制的两个反应体系中不同的有______，扩增程序中最主要的不同是______。

（2）有关基因序列如图2．引物F2-F、F1-R应在下列选项中选用______。

A. A TGGTG------CAACCAB. TGGTTG------CACCATC. GACGAG------CTGCAGD. CTGCAG------CTCGTC’（3）将PCR产物片段与线性质粒载体混合后，在重组酶作用下可形成环化质粒，直接用于转化细菌。

这一过程与传统重组质粒构建过程相比，无需使用的酶主要有_______。

（4）转化后的大肠杆菌需采用含有抗生素的培养基筛选，下列叙述错误．．的有_______。

A. 稀释涂布平板需控制每个平板30~300个菌落B. 抗性平板上未长出菌落的原因一般是培养基温度太高C. 抗性平板上常常会出现大量杂菌形成的菌落D. 抗性平板上长出的单菌落无需进一步划线纯化（5）为了验证平板上菌落中的质粒是否符合设计，用不同菌落的质粒为模板，用引物F1-F和F2-R进行了PCR扩增，质粒P1~P4的扩增产物电泳结果如图3．根据图中结果判断，可以舍弃的质粒有______。

（6）对于PCR产物电泳结果符合预期的质粒，通常需进一步通过基因测序确认，原因是______。

2、（2022江苏卷）纤毛是广泛存在细胞表面结构，功能异常可引起多种疾病。

因此，研究纤毛形成的作用机制具有重要意义。

请回答下列问题。

（1）纤毛结构如图1所示，由细胞膜延伸形成的纤毛膜主要由中心体转变而来，中心体在有丝分裂中的功能是__________________。

（2）某病人肾小管上皮细胞纤毛异常，为了分析纤毛相关基因X 是否发生了变异，对基因X 进行了PCR 扩增与产物测序。

新疆农业科学2010,47(3):495-498Xinjiang Agricultural SciencesBt杀虫蛋白在转基因抗虫棉中的表达王冬梅,李建平,孟庆玉(新疆农业科学院核技术生物技术研究所,乌鲁木齐830091)摘要:=目的>评价转基因抗虫棉的生物安全性。

=方法>利用3个由花粉管通道法获得的转Bt基因的抗虫棉品系,通过Southern杂交技术研究了抗虫棉的插入数,通过棉铃虫饲喂、半定量RT-PC R和E LISA测定了抗虫棉的Bt杀虫活性的时间和空间的动态变化。

=结果>B t基因在抗虫棉中为1~2个拷贝数;Bt蛋白杀虫活性的时空动态表现为在不同生育期的同一器官中,苗期叶片的表达比花铃期的叶片强,在同一生育期内,不同器官表达不同,叶片和铃壳的表达高于苞叶、花和雌雄蕊。

=结论>Bt杀虫蛋白在转基因抗虫棉中的抗性具有时空表达特异性。

关键词:转基因抗虫棉;棉铃虫;抗性中图分类号:S562103513文献标识码:A文章编号:1001-4330(2010)03-0495-04Expression of Bt(Bacillus thuringiensis)InsecticidalProtein in Transgenic Bt CottonWANG Dong-mei,LI Jian-ping,MENG Qing-yu(Institute o f Nuclear and Biological Technology,Xinjiang Academy o f Agricultural Sciences,Urumqi,830091, China)Abstract:=Objective and Method>For biosecurity of transgenic insect-resistante cotton,the insert copy and spatio-temporal change of insecticidal activities and draft distance of three transgenic cotton lines transferring B t gene were evaluated.=Result>There is one or two c opy in insect-resistant cotton by southern blotting.The correc t death ratio of boll w orm and content of Bt insecticidal protein were studied through laboratory bioassay and ELISA.In the different growth stages of the same plant,the insecticidal ac tivities of the lea ves of seedling stage were stronger than those of the leaves of flowering stage and bolling stage,and in the different tissue of the same period,the e xpression of leaves and boll was higher than bracts,flowers and pistil and stamen.s.=C onclusion>The insec t resistance of Bt protein in transgenic c otton has the specific te mporal and spatial e xpression.Key words:transgenic insect-resistance c otton;boll w orm;resistance0引言=研究意义>棉花是世界上种植最多的经济作物之一,因其独有的棉纤维而关系到人们的生活。