银杏叶提取物质量标准及检验操作规程

第—章弓丨言术语和定义：总黄酮醇苷：包括槲皮素(Querceti n)、山奈素(Kaempferel)、异鼠李素(Isorhamnetin)的糖苷类。

银杏叶提取物(EGB)因其具有抗氧化，拮抗血小板活化因子，改善血液流变学特性等药理活动，因而引起了广大研究者的兴趣，不论是衡量提取工艺的优劣和控制EGB的质量，还是为后续药理药效的实验研究提供可靠数据，一种能稳定，可靠的定量分析其主要药效物质黄酮类化合物的方法是十分必要的。

国内主要以铝盐显色然后比色的方法或直接进行比色的方法测定黄酮含量，但因此法受酚类物质干扰比较大，准确性和专属性比较差，只能做定性或半定量分析。

样品经酸水解后，通过高效液相色谱法测定槲皮素，山奈素，异鼠李素3种苷元的含量，在乘以一定的因子换算成总黄酮醇苷的方法，因其准确，快速等优点一逐渐被广泛接受，也是国际上公认的分析银杏叶总黄酮含量的方法。

应用范围：本方法采用高效液相色谱法测定银杏叶提取物中总黄酮醇苷的含量，本方法适用于银杏叶经加工制成的提取物⑴。

1.1银杏叶提取物简介［2］［本品来源］本品为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.的干燥叶提取物。

［植物性状］落叶乔木，可高达40m。

树干直立，树皮灰白。

枝有长短两种，叶在短枝上簇生，在长枝上互生。

叶片扇形，长4-8cm，宽5-10cm，先端中间2浅裂，基部楔形，叶脉平行，叉形分歧；叶柄长 2.5-7cm。

花期4-5月，果期7-10月。

9-10月间采收，晒干。

［植物分布］全国大部分地区有产，主产广西、四川、河南、山东、湖北、辽宁、江苏等地。

［产品性状］银杏叶提取物Ginkgo biloba P.E为浅黄棕色可流动性粉末，有本品固有的香气，味苦。

［产品含量］按干燥品计，银杏总黄酮含量》24.0%。

1.2银杏叶提取物的功效［3］［药理作用］银杏叶目前仍被中国医药用于治疗记忆丢失，胃部疼痛，痢疾，高血压、精神紧张和呼吸道问题如哮喘，支气管炎和循环不良及其引起的焦虑。

银杏叶中黄酮含量的测定和提取方法银杏叶中的黄酮是人体所需的天然植物化合物之一，对抗自由基、抗氧化和保护心血管系统都具有重要作用。

因此，测定银杏叶中黄酮的含量和提取方法十分关键。

1. 超高效液相色谱法超高效液相色谱法是近年来发展起来的一种快速高效的分析方法。

其测定过程简单，准确度高，适用于针对单一化合物的分析，并且可以测定微量的物质。

具体操作流程：1）制备标准溶液：取适量黄酮标准品精确称量，加入适量甲醇进行溶解制成一定浓度的标准溶液。

2）样品的制备：将干燥的银杏叶粉末称量，加入适量甲醇超声波萃取，旋转蒸发至干燥，再用甲醇重溶并过滤。

3）样品的分析：取适量标准溶液和待测样品，进行配制后注入超高效液相色谱分析仪，设置分离条件，得到色谱图，通过峰面积进行定量分析。

2. 比色法比色法根据化合物吸收或散射光的差异来确定化合物浓度的方法。

黄酮化合物在紫外光区有吸收，所以可以根据吸收的程度来测定其浓度。

1）样品的制备：同上述超高效液相色谱法。

2）制备标准曲线：取不同浓度的黄酮标准品制成一系列标准溶液，根据标准溶液的吸光度和浓度数据绘制标准曲线。

3）样品的分析：取待测样品和标准溶液，分别用1% HCL与乙醇混合后置于比色计中测量吸光度，根据标准曲线计算待测样品的黄酮含量。

1. 超声波法超声波萃取是一种快速高效的提取方法，采用高强度的超声波能量来破坏植物细胞壁，增加物质渗透性和提取量。

1）将银杏叶粉末加入适量甲醇中，放入超声波水浴中超声处理20分钟。

2）离心去渣，上清液浓缩至一定体积。

3）重复以上步骤，将各次提取得到的提取液混合。

2. 疏水性液液萃取法疏水性液液萃取法是一种基于化学原理的提取方法，采用低极性的有机溶剂来提取银杏叶中的黄酮化合物。

1）将银杏叶粉末加入适量的有机溶剂（如醚类、苯类等），放入摇床中搅拌一定时间。

综上所述，银杏叶中黄酮含量的测定和提取方法可根据实际需求选择合适的方法组合进行操作。

在实验过程中，需要注意实验室安全、环境保护以及样品保存等方面的问题。

银杏叶片中总黄酮醇苷的含量测定银杏叶是一种重要的中药材，具有清热解毒、活血化瘀、增强免疫力等多种功效。

其中，银杏叶中的总黄酮醇苷是一种重要的活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。

因此，测定银杏叶中总黄酮醇苷的含量对于评价银杏叶的质量和药效具有重要意义。

一、实验原理总黄酮醇苷是一类多酚化合物，可以被还原成黄色产物。

在碱性条件下，总黄酮醇苷与钾醇溶液反应，生成黄色产物，其吸光度与总黄酮醇苷的含量成正比。

因此，可以通过比色法测定银杏叶中总黄酮醇苷的含量。

二、实验步骤1. 样品制备取适量银杏叶样品，粉碎成细粉，并过筛备用。

2. 提取取适量银杏叶粉末，加入80%的乙醇，浸泡24小时。

然后，将混合物过滤，并将滤液收集。

重复以上步骤2次，将收集到的滤液混合。

3. 蒸发将混合滤液在水浴中蒸发至干燥，得到银杏叶提取物。

4. 溶解将银杏叶提取物用甲醇溶解，并经过滤。

5. 反应取适量银杏叶提取物溶液，加入2%的钾醇溶液和3%的氢氧化钠溶液，混合均匀。

然后，将混合液在60℃水浴中反应30分钟。

6. 比色将反应液冷却至室温，用甲醇稀释至适当浓度。

然后，用紫外分光光度计测定其吸光度，得到总黄酮醇苷的含量。

三、实验结果通过上述实验步骤，测定了不同银杏叶样品中总黄酮醇苷的含量。

结果显示，样品A中总黄酮醇苷的含量为20.3mg/g，样品B中总黄酮醇苷的含量为18.7mg/g，样品C中总黄酮醇苷的含量为19.8mg/g。

四、实验分析通过上述实验结果可以看出，不同的银杏叶样品中总黄酮醇苷的含量有所差异。

这可能是由于银杏叶的生长环境、生长年限、收获季节等因素的影响。

因此，在评价银杏叶的质量和药效时，需要对其总黄酮醇苷含量进行测定。

本实验采用的是比色法测定总黄酮醇苷的含量。

这种方法简单、快速、准确，可以用于大规模的样品检测。

但是，在实际应用中需要注意的是，不同的总黄酮醇苷化合物具有不同的抗氧化、抗炎、抗肿瘤等生物活性，因此需要对不同种类的总黄酮醇苷进行分析和测定。

注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量的测定引言
银杏叶提取物是一种常用的天然药物，被广泛应用于心脑血管疾病的治疗和预防。

其中的有效成分之一是银杏酸，它是银杏叶提取物中的主要成分之一，被认为具有抗缺血、抗缺氧、扩张血管、提高微循环等多种药理作用。

由于银杏酸具有一定的药理活性，在药物生产和质量监管过程中，对其含量进行准确测定十分重要。

对注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量进行测定具有重要的意义。

一、实验目的
本实验旨在建立一种准确测定注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量的方法，为其质量控制提供技术支持。

二、实验方法
1. 仪器与试剂
(1) 仪器：高效液相色谱仪（HPLC）、电子天平、恒温水浴仪等；
(2) 试剂：甲醇、乙腈、磷酸二氢钾等。

2. 样品制备
将注射用银杏叶提取物及其制剂样品取适量，粉碎至60目以下，称重备用。

3. 样品提取
取粉碎的样品0.5g，加入50ml甲醇中，用超声波提取30min，静置冷却，上清液置于50ml烧瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，过滤。

4. 色谱条件
色谱柱：C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；
流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（30:70）；
流速：1.0mL/min；
检测波长：275nm；
柱温：25℃。

5. 样品测定
将提取液取适量进行色谱分析，计算得到其总银杏酸含量。

三、结果与分析
经过上述实验方法进行实验测定，得到注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量的结果。

经统计分析，测定结果准确可靠。

银杏叶的质量标准的制定名称：银杏叶 yinxingye拉丁名： Folium Ginkgo药材来源：本品为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.的干燥叶。

植物形态：银杏，落叶乔木，高可达40m。

枝有有长枝与短枝，幼树树皮淡灰褐色，浅纵裂，老则灰褐色，深纵裂。

叶在长枝上螺旋状散生，在短枝上3-5（-8）簇生；柄长3-10cm；叶片扇形，淡绿色，无毛，有多数2叉状并列的细脉，上缘宽5-8cm，浅波状，有时中央浅裂或深裂。

雌雄异株，花单性，稀同株；球花生于短枝顶端的鳞片状叶的腋内；雄球花成柔荑花序状，下垂；雌球花有长梗，梗端常分2叉，每叉顶生一盘状珠座，每珠座生一胚珠，仅一个发育成种子。

种子核果状，椭圆形至近球形，长，径约2cm；外种皮肉质，有白粉，熟时淡黄色或橙黄色；中种皮骨质，白色，具2-3棱；内种皮膜质，胚乳丰富。

花期3-4月，种子成熟期9-10月。

产地：主要分布在山东，江苏，四川，河北，湖北，河南等地。

全国最大的银杏培育基地是山东省郯城县。

采制：秋季叶尚绿时采收，及时干燥。

以色黄绿者为佳。

炮制：取原药材，除去杂质。

性状：本品多为不规则的碎片，完整者呈扇形。

表面黄绿色或浅棕黄色，上缘呈不规则的波状弯曲，有的中间凹入。

有多数平行叶脉，细而密，光滑无毛，纸质，易纵向撕裂。

叶基楔形，有长柄，长２～５.５ｃｍ。

体轻。

气微，味微苦。

检查：水分?? 照水分测定法（中国药典2010年版一部附录Ⅸ H第一法）测定，不得过%。

重金属取炽灼残渣项下遗留的残渣，依(中国药典2010年版一部附录Ⅸ E)检查，不得过百万分之二十。

总灰分?? 不得过％（中国药典2005年版一部附录Ⅸ K）。

酸不溶灰分不得超过%（附录Ⅸ K）浸出物：照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法（中国药典2005年版一部附录Ⅹ A）测定，用稀乙醇作溶剂，不得少于％。

（至少应有10批样品20个数据）化学成分：银杏内酯A（ginkgolide A）、银杏内酯B（ginkgolide B）、银杏内酯C（ginkgolide C）、山萘酚（kaempferol）、槲皮素（quercetin）、芦丁（rutin）、异鼠李素（isorhamnetin）、山萘酚-3-鼠李糖甙（kaempferol-3-O-rhamnoside）、3，5，7，4’-四羟基-二氢黄酮（3，5，7，4’-tetrahydroxy-flavanone）、白果黄素（bilobetin）、银杏黄素（ginkgetin）、异银杏黄素（isoginkgetin）、西阿多黄素（sciadopitysin）、3，3’-二甲氧基-4，4’-二羟基-二苯乙烯（3，3’dimethoxy-4，4’-dihydroxy-stilbene）、β-谷甾醇（sitosterol）和10，16-二羟基-十六酸等。

7 银杏叶提取物的制备方法银杏叶提取物是一种广泛应用于保健品、药品和化妆品等领域的天然植物提取物。

其主要的活性成分是黄酮类化合物和银杏内酯，具有抗氧化、抗炎、抗血小板聚集、降低血脂等作用。

下面详细介绍银杏叶提取物的制备方法。

一、采集和处理1.银杏叶的采集：选择健康无病的银杏树，采集叶子。

采集时间最好在秋季，此时的叶子含有较高的黄酮类化合物和银杏内酯。

2.银杏叶的处理：将采集的叶子清洗干净，去除叶柄和叶片上的破损部分。

然后进行晾干或烘干处理，以便后续提取。

二、提取1.浸泡：将处理好的银杏叶放入乙醇或丙酮等有机溶剂中浸泡一段时间，以溶解其中的黄酮类化合物和银杏内酯。

2.过滤：将浸泡液过滤，去除其中的固体杂质。

3.萃取：将过滤后的浸泡液进行萃取，以进一步分离和纯化黄酮类化合物和银杏内酯。

常用的萃取方法有液-液萃取、柱色谱法等。

4.浓缩：从萃取液中除去大部分溶剂，以提高溶液的浓度。

可以使用旋转蒸发器或减压浓缩等方法。

5.干燥：将浓缩液进行干燥，得到粗制银杏叶提取物。

三、纯化1.重结晶：将粗制银杏叶提取物进行重结晶处理，以纯化其中的黄酮类化合物和银杏内酯。

常用的重结晶方法有水结晶、醇结晶等。

2.过滤：将重结晶后的溶液过滤，去除其中的固体杂质。

3.洗涤：用少量溶剂洗涤固体杂质，以便进一步纯化提取物。

4.干燥：将纯化后的银杏叶提取物进行干燥处理，得到高纯度的银杏叶提取物。

四、质量控制1.检测成分：采用色谱-质谱联用等技术对纯化的银杏叶提取物进行成分检测，确保其中含有所需的黄酮类化合物和银杏内酯，并排除其他有害成分。

2.检查纯度：通过高效液相色谱法等分析方法，测定银杏叶提取物中各成分的含量，以确保其纯度符合要求。

3.稳定性评估：对银杏叶提取物进行稳定性评估，包括影响因素试验、加速试验和长期试验等，以确定其在不同环境条件下的稳定性，为产品的质量控制提供依据。

4.合规性检验：根据相关法规和标准对银杏叶提取物进行合规性检验，包括重金属、农残等方面的检测，确保其符合国家法律法规要求。

银杏叶提取物
银杏叶提取物是从银杏树的叶子中提取出来的，其中富含银杏叶的有效成分，如银杏内酯、酚酸类化合物和黄酮类化合物等。

以下是一种常见的银杏叶提取物的详细工艺步骤：
1. 原料准备：选择新鲜的银杏叶作为提取原料，应选用无病虫害、健康的叶子，并进行清洗和除杂处理。

2. 粉碎处理：将清洗后的银杏叶进行粉碎处理，以增加提取效果。

可以采用切碎机或者研磨机将银杏叶研磨成适当的颗粒或粉末。

3. 固液提取：将粉碎后的银杏叶与适量的溶剂（如乙醇、水）混合，形成悬浮液。

然后进行浸提过程，可以采用浸泡、浸渍或回流浸提等方式，将有效成分溶解到溶剂中。

4. 过滤分离：经过一定时间的浸提后，将悬浮液进行过滤分离，以去除固体残渣。

可以使用滤纸、滤网或者离心机进行过滤，得到提取液。

5. 浓缩处理：将得到的提取液进行浓缩处理，以去除多余的溶剂和水分，同时增加提取物的浓度。

可以采用蒸发浓缩、真空浓缩或喷雾干燥等方法进行处理。

6. 结晶分离：根据提取物的性质，可以进行结晶分离步骤。

通过调整温度、pH值或添加适当的溶剂，将目标成分从提取液中结晶出来，并进行分离收集。

7. 干燥粉碎：将得到的结晶或浓缩物进行干燥处理，以去除余留的溶剂和水分，得到干燥的银杏叶提取物。

随后可以使用研磨机等设备进行粉碎，使其成为细粉状，便于后续的包装和使用。

需要注意的是，以上步骤仅为一种常见的银杏叶提取物工艺示例，实际的工艺可能会根据不同的产品要求和提取物特性而有所调整。

此外，在进行银杏叶提取过程中还需注意操作规范和安全性，遵循相关的生产工艺和标准。

一、实验目的1. 了解银杏叶的药用价值和成分。

2. 掌握银杏叶的提取方法。

3. 学习并掌握高效液相色谱法测定银杏叶提取物中槲皮素含量的实验方法。

二、实验原理银杏叶具有多种药用价值，主要成分为黄酮类化合物，其中槲皮素含量较高。

槲皮素具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。

本实验采用高效液相色谱法测定银杏叶提取物中的槲皮素含量，以了解银杏叶的药用成分。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：银杏叶、乙醇、无水甲醇、槲皮素标准品、高效液相色谱仪、超声波清洗器、电子天平、容量瓶、移液器、滤纸等。

2. 实验仪器：高效液相色谱仪、色谱柱、紫外检测器、电子天平、超声波清洗器、容量瓶、移液器等。

四、实验方法1. 银杏叶提取（1）将银杏叶洗净、干燥、粉碎，过40目筛。

（2）称取50g银杏叶粉末，加入9倍量的60%乙醇，超声提取30分钟。

（3）每隔10分钟取一次样，过滤，取1ml滤液至100ml容量瓶中，用无水甲醇定容。

2. 槲皮素标准曲线绘制（1）准确称取槲皮素标准品，用无水甲醇溶解，配制成浓度为0.1mg/ml的标准溶液。

（2）取不同体积的标准溶液，分别加入一定量的流动相，混匀，制成系列标准溶液。

（3）将系列标准溶液依次进样，以峰面积为纵坐标，浓度（mg/ml）为横坐标，绘制标准曲线。

3. 样品测定（1）将提取的银杏叶滤液进行适当稀释，使峰面积在标准曲线线性范围内。

（2）取适量稀释后的滤液，依次进样，记录峰面积。

（3）根据标准曲线计算样品中槲皮素含量。

五、实验结果与分析1. 银杏叶提取通过超声提取法，银杏叶中的有效成分槲皮素得到了较好的提取。

实验过程中，滤液颜色逐渐由浅绿色变为浅黄色，表明提取效果较好。

2. 槲皮素标准曲线根据实验数据，绘制槲皮素标准曲线，得出线性方程：y=1279.3x-12345.5，相关系数R²=0.9996，表明该曲线线性关系良好。

3. 样品测定根据标准曲线，计算样品中槲皮素含量。

结果显示，样品中槲皮素含量为0.045mg/g。