甘油明胶封片液

一、实验目的

1. 熟悉石蜡切片的基本原理和操作步骤。

2. 掌握石蜡切片在组织学研究和病理学诊断中的应用。

3. 学习利用石蜡切片观察鱼类组织的结构和特点。

二、实验原理

石蜡切片技术是一种重要的组织学制片方法，其原理是将组织标本进行脱水、浸渍、浸蜡等过程，使其在石蜡中充分浸渍，然后用微型切片机将其切成薄片，最终制成组织学切片，以供观察。石蜡切片具有切片均匀、厚度可调、易于染色等优点，广泛应用于组织学、病理学等领域。

三、实验材料与仪器

材料：

1. 新鲜鱼类组织样本

2. 4%多聚甲醛固定液

3. 乙醇（75%、85%、90%、95%、无水）

4. 二甲苯

5. 石蜡

6. 脱水盒

7. 吊篮

8. 脱水机

9. 包埋机

10. 石蜡切片机

11. 摊片机

12. 载玻片

13. 烤片机 仪器：

1. 显微镜

2. 图像采集系统

3. 图像处理软件

四、实验步骤

1. 取材与固定：

- 将新鲜鱼类组织样本迅速放入4%多聚甲醛固定液中，固定24小时以上。

- 取出固定后的组织样本，用手术刀将目的部位组织修平整，放入脱水盒中。

2. 脱水：

- 将脱水盒放入吊篮中，置于脱水机内，依次使用75%、85%、90%、95%乙醇进行脱水，每级乙醇脱水1小时。

- 最后用无水乙醇脱水30分钟。

3. 透明：

- 将无水乙醇取出，用醇苯进行透明处理，5-10分钟。

- 依次使用二甲苯进行透明处理，每次5-10分钟。

4. 浸蜡：

- 将浸好蜡的组织放入包埋机内进行包埋，将融化的石蜡倒入包埋框中，待蜡凝固后取出组织块。

- 将组织块置于石蜡切片机上，切成厚度为4-5微米的切片。

5. 展片与烤片：

- 将切片漂浮于摊片机40℃温水上，将组织展平。

- 用载玻片将组织捞起，放入60℃烤箱内烤片，待水烤干蜡烤化后取出。

6. 染色与封片：

- 使用苏木精-伊红染色液对切片进行染色。 - 染色完成后，用蒸馏水冲洗切片，然后用甘油明胶封片。

索莱油红O说明书

索莱油红O又名苏丹红5B，苏丹染料对脂质染色的机制一般认为是物理上的溶液作用或吸附作用,借溶液作用使脂肪染色即先把苏丹染料溶于有机溶剂中，这种染料在冰冻切片内脂质的溶解度较在原溶剂中的溶解度更大，所以染料就从有机溶剂转移入脂质而使脂肪染色，油红O染色可用于显示组织器官的脂肪变性和类脂质的异常沉着，鉴别和诊断脂肪组织中所发生的肿瘤及其性质等。

储存条件及有效期：5-35℃保存，原包装未开封试剂的有效期为18个月，在有效期内的已开封试剂建议在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。

样本要求：冰冻切片或碳蜡切片，厚度约6-10μm。

检验方法：1、冰冻切片厚约若干μm，裱贴于玻片，蒸馏水稍洗；2、切片入60%异丙醇若干秒；3、配制油红O染色工作液：取适量的油红O储存液和油红O稀释液，按2：1比例混合，即为油红O染色工作液，静置若干分钟，尽量吸取上层液体染色；4、入油红O染色工作液浸染若干钟，用60%异丙醇稍洗去多余染色液，流水洗若干秒；5、苏木素染色液染色若干分钟，流水冲洗若干分钟；6、用滤纸将切片周围水分吸干，用阿拉伯糖胶或甘油明胶封片。

油红O脂类染色法

关键词： 油红O

脂类

染色法 2012-01-05 10:10 来源：互联网 点击次数：18601

油红 O属于偶氮染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，与甘油三酯结合呈小脂滴状。脂溶性染料能溶于组织和细胞中的脂类，它在脂类中的溶解度比在溶剂中大。当组织切片置人染液时，染料则离开染液而溶于组织内的脂质(如脂滴)中，使组织内的脂滴呈橘红色。

一、油红O染液的配制

1．油红O 1g

异丙醇 100ml

2．油红O 足量

异丙醇 100ml

配成油红O饱和溶液，使用时以油红O饱和液一份加蒸馏水两份，过滤后使用。

二、染色程序

1．切片用甲醛―钙固定10分钟；

2．蒸馏水洗；

3．60％异丙醇浸洗；

4．1由红O染液10分钟(染液可回收再利用)；

5． 60％异丙醇分色至背景五色；

6．蒸馏水洗；

7．Mayer苏木精复染；

8．自来水洗(蓝化)1～3分钟；

9．蒸馏水洗；

10．甘油明胶封片。

结果：组织细胞中脂滴呈橘红色，核呈蓝色。 1. 染色液的配制

材料：油红染料 棕色可密封瓶 异丙醇 研钵 漏斗 定性滤纸

称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封（或锡箔纸包裹避光）4℃保存，为储存液，可长期保存。用时取6ml加三蒸水4ml混匀，定性滤纸过滤，稀释后数小时内用完。

2.10%中性甲醛的配制

材料：中性甲醛（多聚甲醛） 密封瓶

称取1g中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密封，在60度水浴中过夜才能溶解。配好的溶液1个星期内有效，最好4度保存。

3.染色对象 间充质细胞脂肪诱导后不同时间段。

4.培养载体 3毫升培养瓶。如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑。

5.染色步骤：

5.1 先小心轻缓倒去培养夜。

5.2 用pbs轻缓漂洗（不洗没问题）。

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应用树胶印模玻片封制法制作寄生虫卵标本

宗红英，钟沁萍

（武汉大学基础医学院 实验教学中心，湖北 武汉 430071）

0　引言

迄今为止，寄生虫卵玻片标本的制作早期曾采用甘油

透明法或甘油明胶封片法，优点是封片标本不易浑浊，但

有时因虫卵透明时间久而结构略有失真，且标本制作周期

较长，因此以后较少应用。尔后有人采用中性树胶直接封

片法制作寄生虫虫卵玻片标本，运用于实验教学，效果较

好。但因制片时是用两片盖玻片夹虫卵悬液于其间再行中

性树胶封片，有时树胶中有机溶剂会从两盖玻片间隙渗入

虫卵悬液形成浑浊，影响镜下观察[1]。而后有人采用滤纸

（蜡纸）打孔凡士林封边或桃胶封边及清漆画圈封边等方

法制作寄生虫卵标本片，但标本片制作过程略繁琐。本室

曾采用水溶性琼脂糖为介质进行虫卵玻片标本制作，也取

得较好的实验教学效果。因此近年来，我们针对以往寄生

虫卵标本制片的优缺点，在工作实践中对虫卵玻片标本制

作法进一步改进，采用实验操作更为简便的树胶印模玻片

封制法制作寄生虫卵玻片标本，取得较好的结果。

1　实验材料

1.1　常规收集寄生虫卵。经5%福尔马林固定，离心浓缩

后保存备用。

1.2　实验玻片。选用市售免擦洗常规载玻片、方形盖玻

片（18 mm×18 mm和24 mm×24 mm两种，江苏世泰

实验器材有限公司生产）。

1.3　中性树胶液。国产中性天然树胶（上海标本模型厂

生产)，市售为液态成品，粘稠度应适中。若过高，可加

入二甲苯适当稀释。

2　制作方法

2.1　树胶印模玻片。取内径约12 mm，长10 cm，壁厚

约1 mm空心圆玻管一支，蘸取适量中性树胶，垂直竖立

接触于洁净载玻片1/3处，略停顿后向上轻缓移开玻管，

中性树胶因粘滞作用而在载玻片上形成一个树胶印模圆圈