人血清白蛋白(HSA)酶联免疫分析
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2024年高考生物模拟试卷注意事项:1.答题前,考生先将自己的姓名、准考证号码填写清楚,将条形码准确粘贴在条形码区域内。
2.答题时请按要求用笔。
3.请按照题号顺序在答题卡各题目的答题区域内作答,超出答题区域书写的答案无效;在草稿纸、试卷上答题无效。
4.作图可先使用铅笔画出,确定后必须用黑色字迹的签字笔描黑。
5.保持卡面清洁,不要折暴、不要弄破、弄皱,不准使用涂改液、修正带、刮纸刀。
一、选择题:(共6小题,每小题6分,共36分。
每小题只有一个选项符合题目要求)1.如图为真核细胞内发生的某生理过程,下列相关叙述正确的是()A.②的碱基总数与其模板链上碱基总数一致B.图示为翻译,核糖体在②上从右向左移动C.随核糖体移动①将读取mRNA上的密码子D.该过程中既有氢键的形成,也有氢键的断裂2.下列关于细胞的结构与功能的相关叙述中,正确的是()A.人成熟红细胞无线粒体,其有氧呼吸场所是细胞质基质B.植物细胞叶绿体产生的ATP能用于生长、物质运输等生理过程C.核糖体是蛋白质的“装配机器”,由蛋白质和RNA组成D.根尖分生区细胞中高尔基体与分裂后期细胞壁的形成有关3.下列根据各概念图作出的判断,正确的是()A.若甲图表示植物细胞内糖类物质,则甲图可以表示多糖b和糖原a的关系B.若乙图中a和b分别代表DNA和RNA,则乙图可以代表硝化细菌的核酸C.丙图可体现出细胞生物膜系统c、核糖体a和线粒体b的关系D.丁图能体现生态系统消费者c、各种动物a和各种真菌b的关系4.下列对醋酸杆菌与动物肝脏细胞的结构与代谢过程的比较,不正确的是A.两者的细胞膜结构均符合流动镶嵌模型B.两者的遗传物质均储存在细胞核中C.均可以进行有氧呼吸,但进行场所不完全相同D.均依赖氧化有机物合成ATP,为代谢过程供能5.如图为某家族红绿色盲(A/a)和高胆固醇血症(B/b)的遗传系谱图。
高胆固醇血症是常染色体上单基因显性遗传病。
杂合个体(携带者)血液胆固醇含量中等,30岁左右易得心脏病。
一、实验目的1. 理解蛋白质结构测定的基本原理和方法。
2. 掌握蛋白质一级结构和三维结构的测定方法。
3. 了解蛋白质结构测定在生物学研究中的应用。
二、实验原理蛋白质是生命活动中的重要分子,其结构决定了其功能。
蛋白质结构测定是研究蛋白质结构和功能的重要手段。
蛋白质结构测定主要包括一级结构测定和三维结构测定。
1. 蛋白质一级结构测定:蛋白质一级结构是指氨基酸的排列顺序。
测定蛋白质一级结构的方法有化学裂解法、蛋白酶水解法、高效液相色谱法等。
2. 蛋白质三维结构测定:蛋白质三维结构是指蛋白质分子在空间中的形态。
测定蛋白质三维结构的方法有X射线晶体衍射法、核磁共振法、冷冻电镜法等。
三、实验材料1. 蛋白质样品:人血清白蛋白(HSA)、牛血清白蛋白(BSA)等。
2. 试剂:硫酸铵、氯化钠、丙酮、乙腈等。
3. 仪器:高效液相色谱仪、核磁共振仪、X射线晶体衍射仪、冷冻电镜等。
四、实验步骤1. 蛋白质一级结构测定(1)将蛋白质样品进行化学裂解,得到多肽片段。
(2)使用高效液相色谱仪对多肽片段进行分离,得到单个多肽。
(3)对单个多肽进行质谱分析,得到氨基酸序列。
2. 蛋白质三维结构测定(1)将蛋白质样品进行X射线晶体衍射实验,得到蛋白质晶体。
(2)对蛋白质晶体进行X射线衍射,得到衍射图谱。
(3)根据衍射图谱,计算蛋白质分子的三维结构。
3. 蛋白质结构分析(1)使用核磁共振仪对蛋白质样品进行NMR实验,得到蛋白质分子的三维结构。
(2)将NMR实验结果与X射线晶体衍射结果进行对比,验证蛋白质结构。
五、实验结果与分析1. 蛋白质一级结构测定通过高效液相色谱仪和质谱分析,成功测定了人血清白蛋白和牛血清白蛋白的氨基酸序列。
2. 蛋白质三维结构测定通过X射线晶体衍射实验,成功得到了人血清白蛋白和牛血清白蛋白的三维结构。
3. 蛋白质结构分析通过NMR实验,成功得到了人血清白蛋白和牛血清白蛋白的三维结构。
与X射线晶体衍射结果进行对比,验证了蛋白质结构。
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缩写全称中文AAautoantibody自身抗体AAFaminoacetylfluorescence氨乙酰基荧光Abantibody抗体ABCavidin-biotin peroxidase complex抗生物素(亲合素)-生物素-过氧化物酶复合物AChacetycholine乙酰胆碱AChRacetycholine receptor乙酰胆碱受体AChRAbacetycholine receptor antibody乙酰胆碱受体抗体ACIFanti-complement immunofluorescent method 抗补体免疫荧光法α-1-ACtalpha(α)-1-anti-chymotrypsinα-1-抗糜蛋白酶ACTHadrenocorticotropin hormone促肾上腺皮质激素ADAlzheimer's disease老年性痴呆ADDCantibody dependent cytotoxic cell抗体依赖细胞毒细胞ADHantidiuretic hormone抗利尿激素AEC3-amino-9-ethyl-carbazole3-氨-9-乙基咔唑AFPalpha(α)-fetal-protein甲胎蛋白AHAanti-histone antibody抗组蛋白抗体AKPalkaline phosphatase碱性磷酸酶ALPAlkaline Phosphatase碱性磷酸酶AMAanti-mitochondrial antibody抗线粒体抗体ANAanti-nuclear antibody抗核抗体ANCAanti-neutrophil cytetoplasmic anti-autoantibody抗中性粒细胞胞浆抗自身抗体APUDamine content and /or amine precursor uptake and de-carboxylation 含氨和/或氨前体并能脱羧的细胞AOAcrine Orange吖啶橙ARsarsanilic acid对氨苯砷酸α-1-ATalpha(α)-1-anti-trypsinα-1-抗胰蛋白酶BCDFB cell differetiation factorB细胞分化因子BCGFB cell growth proteinB细胞生长因子BGPbone growth protein骨生长蛋白BGPbrain-gut peptides脑肠肽BMPbone marphogenic protein骨形成蛋白BMZbasement membrane zone基底膜带BRABbridged avidin-biotin technique 桥抗生物素-生物素技术BrdU5-bromo-2-deoxyuridine5-溴尿脱氧核苷BSAbovine serum albumin牛血清白蛋白CAcatecholamine儿茶酚胺CAgcytoplasmic antigen胞质抗原CAHchronic active hepatitis慢性活性性肝炎CALLAcommon acute lymphocytic leukaemia antigen 普通急性淋巴细胞性白抗原cAMPcyclic guanosine monophosphate环化-磷酸鸟苷CEACarcinoma embryonicantigen癌胚抗原CDIcarbodiimide碳二亚胺CGRPcalcitonin gene-related peptide降钙素基因相关肽CHAccholine acetylase胆碱乙酰化酶ChEcholinesterase乙酰胆碱酯酶CIgcytoplasmic immunoglobulin 胞浆免疫球蛋白CKcytokeratin细胞角蛋白CLAcommon leukocyte antigen 白细胞共同抗原CMVcytomegalovirus巨细胞病毒CNScentral nervous system中枢神经系统Con.Aconcanavalin A刀豆素ACPKcreation phosphokinase肌酸磷酸激酶CPMcounts per minute每分钟计数cRNAcomplementary RNA互补RNACRPc-reation proteinC-反应蛋白CSFcerebrospinal fluid脑脊液CTCholera toxin霍乱毒素CT-HRPcholera-toxin-horseradish peroxidase 霍乱毒素辣根过氧化物酶CUCChronic ulcerous colonitis慢性溃疡性结肠炎CVDcerebrovascular disease脑血管病DAdopamine多巴胺DABdiaminobezidin二氨基联苯氨DBADolichos bifows agglutinin双花扁豆凝集素DBHdopamine-β-hydroxylase多巴胺-β羟化酶DEAEdiethyl-amino-ethyl-dextran二乙氨乙基葡聚糖DEPCdiethyl pyrocarbonate焦碳酸二乙酯DDCdopamine decarboxylase多巴胺脱羧酶Desdesmine结蛋白DIFdirect immunofluorescent method直接免疫荧光法Digdigoxigenin地高辛DMDCdimethydichlorasilane二甲基二氯硅烷DMFdimethyformamide二甲基甲酰胺DMSOdimethyl sulfoxide二甲基亚砜DNAdeoxyribonucleic acid脱氧核糖核酸DNPdinitrophenyl aminopropionitrile imide ester 二硝基苯氨基丙氰亚酰氨酸酯DRCdendric reticulum cell树突状网状细胞dsDNAdouble stranded DNA双链DNADTTdithiothreitol二硫苏糖醇DYNdynorphin强啡肽EBVEpistein-Barr virusE-B病毒ECD-G11-ethyl-3(3-dimethy-aminopropyl)carbodiimide-HCL-Glutaldehyde 碳二亚酰胺-戊二醛ECMextracellular matrix细胞外基质ED50median effective dose半数有效剂量EDTAethylendiaminotetraacetic acid乙二氨四乙酸EKepidermal keratin表皮角蛋白ELISAenzyme-liked immunosorbent assay酶联免疫吸附分析EMelectron microscope电镜ENKenkephalin脑啡肽L-ENA(L-NK)Leu-enkephalin亮氨酸-脑啡肽M-ENK(M-NK)met-enkephalin甲硫氨酸-脑啡肽ENSenteric nervous system肠神经系统β-EPβ-endorphinβ-内啡肽FAformaldehyde甲醛Fabantigen-binding fragment抗原结合片段FACsfluorescent actived cell sortor 荧光激活细胞计数器FAVflat agranular vesicle扁平无颗粒囊泡FBfast blue快蓝Fccrystallizable fragment可结晶片段FCCfollicular centre cell滤泡中心细胞FCMflow cytometer流式细胞计数仪FCPfeature count point特征计数点FDAfluorescin diacetate二醋酸酯荧光素FITCfluorescin isothiocyanate异硫酸酯荧光素FLSforward light scatter向前光散射FNfibronectin纤维连接蛋白FRfast red快红FRAfibronection related antigen纤维连接素相关抗原FRCfibroblast reticulum cell纤维母细胞性网状细胞FSHfollicle-stimulating hormone卵泡刺激素FTAfluorescent treponemal antibody 荧光梅素螺旋体抗体FTA-ABSfluorescent treponemal antibody absorption test 荧光梅毒螺旋体抗体吸收实验GABgold-labelled antibody金标抗体GABAgamma(γ)-amino-butyric acidγ-氨基丁酸GALTgut –associated lymphoid tissue胃肠道相关淋巴组织GARgoat anti-rabbit serum羊抗兔血清GCAgastrin cell antibody胃泌素细胞抗体GFAPglial fibrillary acidic protein胶质纤维酸性蛋白GFLgreen fluorescence绿色荧光GHgrowth hormone生素激素GLADgold-labelled antigen detection method金标抗原检测法GMAglycol methacrylate乙二醇甲基丙烯酸酯GODglucose oxidase葡萄糖氧化酶GPgold particle金颗粒HAVhepatitis A virus甲型肝炎病毒HBVhepatitis B virus乙型肝炎病毒HBV-DNAhepatitis B virus DNA乙型肝炎病毒DNAHCHuntington's chorea亨廷顿氏舞蹈症HCGhuman chorionic gonadotropin 人绒毛膜促性腺激素HEhemotoxylin and eosin staining 苏木精-伊红染色HEMA2-hydroxyethyl methacrylate 羟乙基甲基丙烯酸酯HGHhuman growth factor人生长激素5-HIAA5-hydroxyindoleacetic acid5-羟吲哚乙酸HLAhuman leukocyte antigen人类白细胞抗原HMAhepatocyte membrane antibody肝细胞膜抗体HPhorizontal plate水平面HPLhuman placenta lactogen人胎盘催乳素HPRIhuman placental ribonuclease inhibitor 人胎盘核糖核酸抑止剂HRPhorseradish peroxidase辣根过氧化物酶HSAhuman sreum albumin人血清白蛋白5-HT5-hydroxytryptamine(serotonin)5-羟色氨HTLVhuman T-lymphocyte virus人T-淋巴细胞病毒LCAbislet cell antibody胰岛细胞抗体ICAMintercellular adhersion molecule细胞间粘附因子ICCimmunocytochemistry免疫细胞学IDDinsulin dependent diabetes胰岛素依赖性糖尿病IDRC(IRC)interdigitate reticulum cell指突状网状细胞IELintraepithelial lymphocyte上皮内淋巴细胞IFintermediate filament中间丝Igimmunoglobulin免疫球蛋白IGSimmunogold staining免疫金染色IGSSimmunogold –silver staining免疫金-银染色IHCimmunohistochemistry免疫组织化学IIFindirect immnnofluotesent method 间接免疫荧光法IRIAindirect radioimmunoassay间接放射免疫分析labelled avidin-biotin technique标记抗生物素(亲合素)-生物素技术LBTLupus Band Test狼疮带实验LCLangerhan's cell朗格罕氏细胞LCALens culinaris agglutinin扁豆凝集素LCRligose chain reaction连接链式反应LDHlactate dehydrogenase乳酸脱氢酶LFAleukcyte function- associated antigen 白细胞功能相关抗原LGVlarge granular vesicle有颗粒大囊泡LHluteinizing hormone黄体生成素LHRHluteinizing hormone relasing hormone 黄体生成素释放激素LHRFluteinizing hormone relasing factor黄体生成素释放因子β-lipotropic hormoneβ-促脂素LPLlamina propria T lymphcyte固有层T淋巴细胞LPOlactiperoxidase乳过氧化物酶MAGmyelin associated glycoprotein 髓鞘相关糖蛋白MGmyasthenia gravis重症肌无力β-MGβ-microglobinβ-微球蛋白MBPmyelic basic protein髓磷酯碱性蛋白MBPAbmyelic basic protein antibody 髓磷酯碱性蛋白抗体McABmonoclonal antibody单克隆抗体MFmicrofilament微丝Mgmyohemoglobin肌红蛋白man histocompatibility complex人类组织相溶性复合物mRNAmessenger ribonucleic acid信使核糖核酸MSmultiple sclerosis多发性硬化症MSHmelanocyte stimulating hormone黑色素细胞刺激素MsIgmembrane superfacial immuno-globulin膜表面免疫球蛋白NAnoradrenalin去甲肾上腺素NAChRnicotinic acetylcholine receptor烟碱型乙酰胆碱受体NADHnicotinamide adenine dinucleotide diaphorase 尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶NANCnon-adrenergic-non-cholinergic非肾上腺素能非胆碱能NEnorepinephrine去甲肾上腺素NFneurofilament神经丝natural killer自然杀伤细胞NNEnon-neuronal enolase非神经元性烯醇化酶NPneuropeptide神经肽NPYneuropeptide Y神经肽YNSEneuron-specific enolase神经元特异性烯醇化酶NTneurotensin神经降压肽ODoptical density光密度6-OHDA6-hydroxydopamine6-羟多巴胺ORFopen reading frame开放读框ORToptimum renaturation temperature 最适复性温度OToxytocin催产素protein A-gold technique蛋白A-金技术PAPperbxidase anti-peroxidase complex 过氧化物酶-抗氧化物酶复合物PBphosphate buffer磷酸缓冲液PBSphosphate buffered saline磷酸盐缓冲液PCAgastric parietal cell antibody胃壁细胞抗体PcAbpolyclonal antibody多克隆抗体PCRpolymerase chain reaction聚合酶链反应PDParkinson's disease帕金森氏症(震颤麻痹)PEGpolyethylene glycol聚乙二醇PFAparaformaldehyde多聚甲醛PGprostaglandin前列腺素symbol for expression of hydrogenion cincentration 表示氢离子浓度的符号PHAphaseolus vulgaris agglutinin菜豆凝集素PHAphytohemagglutinin植物凝集素PHSApoly human serium antigen多聚人血清蛋白pIpropidium Iodide磺化吡啶PLLpoly-L-Lysine(左旋)多聚赖氨酸PLPparaformaldehyde-lysine peroxidase多聚甲醛-赖氨酸-过磺酸盐混合固定剂PNApeanut agglutinin花生凝集素POMproopiomelanocortin前促黑激素PPplacenta protein胎盘蛋白PPpancreas polypeptide胰多肽PRprogesteron receptor孕激素受体PSAPisum sativum agglutinin豌豆凝集素PSSprogressive systemic sclerosis 进行性全身性硬化PVPpolyvinypyrolidone聚乙烯吡咯烷酮PB200rhodamin B200诺丹明B200RCARicinus communis agglutinin蓖麻凝集素RFLred fluorescence红色荧光RHreactive hyperplasia反应性增生RIARadioimmunoasay放射免疫分析RIA-CPBRIA-competitive protein binding 放免-竞争性蛋白结合RANArheumatoid anti-nuclea antigen 类风湿性关节炎抗核抗原RPGNrapid progressive nephritis 进行性肾小管肾炎RPMrolls per minute每分钟转速RRA radioreceptoassay放射受体分析RT-PCRreverse transiption-PCR反转录-PCRRSArabbit serum albumin兔血清白蛋白R-ScReed-Sternberg's cell瑞-司氏细胞Z/RReinheit Zahl光密度比值SAVsmall agranular vesicle无颗粒小泡SBAsoybean agglutinin大豆凝集素SCsecretory component分泌成份SCVsmall clear vesicle清亮小泡SDSsodium decdecyl sulfate十二烷基硫酸钠SGVsamll granular vesicle有颗粒小泡SIgsecretory immunoglobulin分泌型免疫球蛋白SISskin immunosystem皮肤免疫系统SJASophora japonica agglutinin 槐凝集素SLEsystemic lupus erythematosus 全身性红斑狼疮SMAsmooth muscle Ab平滑肌抗体SNsmall nuclea小核SMAsmooth muscle antibody平滑肌抗体S/Nsignal/noise(ratio)信/噪(比)SOMsomatostatin生长抑素SPsilver particle银颗粒SPsubstance PP物质SPAstaphylococal protein A金黄色葡萄球菌蛋白ASSPEsubacute sclerosing nencephalitis亚急性硬化性脊脑炎TAStranscription based amplification system 转录依赖扩增系统TBSTris bufferred salineTris缓冲生理盐水TETrypanosona Equiperdum马疫锥虫β-TGβ-thromboglobulinβ-血栓蛋白TGthyroid globulin甲状腺球蛋白TGFtransforming growth factor转化生长因子THtyrosine hydroxylase酪氨酸羟化酶TMBtetramethylbenzidine四甲基联苯氨TRHthyrotropin releasing hormone促甲状腺素释放素T(M)RITC tetramethylrhodamine –isothiocyanate 异硫氰酸四甲基诺丹明TSHthyroxin stimulating hormone促甲状激素UEAUlex Europaeus agglutinin荆豆凝集素Vimvimentin波纹蛋白VIPvasoactive intestinal polypeptide血管活性肠肽VPVertical plane垂直面WGAwheat germ agglutinin麦胚凝集素。
人β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号:CSB-E08299h检测范围:12.5 ng/ml - 800 ng/ml最低检测限:3.12 ng/ml特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的人Aβ1-40,且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期:6个月预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中Aβ1-40含量。
说明1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
概述Aβ蛋白(β-amyoid peptide)是1984年Glenne等发现的脑内神经炎斑的主要成分,它是一种由39~43个氨基酸组成,具有β折叠构型的蛋白,因此称之为β-淀粉样蛋白。
Aβ蛋白是淀粉样前体蛋白的代谢产物,它在脑组织中含量的异常增加可能是诱发AD的主要因素。
Aβ蛋白是多种长度多肽的混合物,其中Aβ1-40和Aβ1-42是主要组分。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗Aβ1-40抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗Aβ1-40抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的Aβ1-40呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
2.标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
关于重组人血白蛋白的系统性表述人血白蛋白(HSA)作为一种重要的临床急救药物及重要的药物辅料,在医药,科研及化妆品生产等领域应用广泛。
随着国内医疗水平及居民收入水平的提升和对血液制品认知度的提高,血液制品的临床使用量不断增加,市场容量不断增长,行业快速发展。
根据国家医药管理局的报告,2010年全国16城市医院血液系统用药金额约62亿元,其中白蛋白类药物占据了血液制品的主要份额(大于50%)。
但作为一种血液制品,HSA同时也面临原料短缺及病毒污染等缺陷的影响。
用基因工程重组人血清白蛋白(rHSA)替代HSA是国际上公认的最有前途的高新技术途径。
一.什么是重组人血白蛋白1.定义通过基因重组的技术将目的蛋白的基因克隆后,将该基因插入到某种生物(如细菌、酵母、植物,哺乳动物细胞等)中进行复制,然后收集的白蛋白称为重组人血白蛋白。
2.rHSA的等级分类按不同的质量标准分为了培养基级、药用辅料级和药用注射级(药用级)三类,三类级别的重组人血白蛋白生产工艺相同,但最终控制参数不同,药用级白蛋白质量标准最高。
3.rHSA的表达系统分类白蛋白(Human Serum Albumin,HSA)是一组复杂的大分子蛋白质,必须经过正确的折叠、组装和翻译后修饰,才能赋予其特定的结构和功能,表达系统是重组人血白蛋白生产过程中极其重要的环节。
(1)原核表达系统HSA基因最早就是在原核生物大肠杆菌(E.coli)中表达成功的,Lawn等于1981年首次报道了rHSA的cDNA序列并首次构建了第一个表达rHSA的表达载体pHSA,然后在E.coli中表达成功,表达量为细胞总蛋白的7%,但E.coli表达系统体外很难正确折叠和组装结构复杂的HAS,缺乏翻译后的修饰和加工,表达的蛋白多形成包涵体,且纯化较难,所以未能得到有生物功能的蛋白,细菌细胞壁脂多糖还会造成热反应。
因为HSA在原核生物中表达量不高且分泌效果不够理想,所以研究的重点转向其在真核生物细胞中的表达。
第1页,总28页 2025年苏教版选修3生物下册阶段测试试卷含答案 考试试卷 考试范围:全部知识点;考试时间:120分钟
学校:______ 姓名:______ 班级:______ 考号:______ 总分栏 题号 一 二 三 四 五 总分 得分
评卷人 得 分 一、选择题(共9题,共18分)
1、为增加玉米抗旱性,研究者构建含有某微生物抗旱基因E的重组质粒,采用农杆菌转化法转入玉米幼胚组织
细胞中,用E蛋白的抗体进行抗原-抗体杂交检测后,经进一步鉴定,筛选出抗旱的转基因玉米。下列相关叙述不正确的是( ) A. 提取该微生物mRNA反转录为cDNA,通过PCR可获得大量目的基因 B. 将重组质粒置于经CaCl2处理的农杆菌悬液中,可获得转化的农杆菌 C. 用农杆菌转化法将E基因转入玉米幼胚组织细胞需要严格无菌操作 D. 用E蛋白的抗体进行抗原-抗体杂交,可在分子水平检测转基因玉米的抗旱性状
2、实验室常用PCR技术对DNA进行体外扩增,下列相关叙述正确的是 A. 95℃时DNA的磷酸二酯键断开 B. 引物与模板结合后向5’方向延伸 C. 反应过程包括变性→复性→延伸 D. 需要解旋酶和耐高温的DNA聚合酶
3、下列有关植物组织培养的叙述,正确的是( ) A. 愈伤组织是一团有特定结构和功能的薄壁细胞 B. 二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株 C. 用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成人工种子 D. 植物耐盐突变体可通过添加适量NaCl的培养基培养筛选而获得
4、下列与现代生物技术相关的叙述中,不正确的是( ) A. 利用PCR技术可以获取目的基因 B. 利用核酸分子杂交技术鉴定亲子关系 C. 利用电泳技术分离不同长度的DNA D. 利用密度梯度离心技术鉴别遗传信息
5、肺炎双球菌体外转化实验中,S 型菌的 DNA与处于感受态的 R 型菌表面的膜蛋白结合,R型菌释放限制酶,
2023年辽宁省鞍山八中高考生物模拟试卷一、选择题1.各种细胞器在功能上既有分工又有合作,下列相关叙述错误的是( )A.中心体和核糖体与蛋白质的合成有关B.植物细胞中的液泡与维持细胞的渗透压有关C.内质网和高尔基体与分泌蛋白的加工有关D.叶绿体、线粒体与细胞内物质和能量的转化有关2.一种物质进行跨膜运输的方式与该物质的分子大小等性质有关。
下列有关物质跨膜运输的表述正确的是( )A.相对分子质量小的物质或离子都可以通过自由扩散进入细胞内B.大分子有机物要通过转运蛋白的作用才能进入细胞内,并且要消耗能量C.被动运输是顺浓度梯度进行的,既不需要消耗能量,也不需要借助膜上的转运蛋白D.主动运输是逆浓度梯度进行的,既要消耗细胞的能量,也需要借助膜上的载体蛋白3.下列有关神经系统的表述正确的是( )A.中枢神经系统由大脑和脊髓组成B.支配躯体运动的神经为外周神经系统C.自主神经系统是脊神经的一部分,包括交感神经与副交感神经D.逻辑思维主要由大脑皮层的左半球负责4.生态工程建设需要因地制宜、多措并举。
下列相关表述不正确的是( )A.在湿地生态恢复工程中,建立缓冲带主要是为了减少人类的干扰B.在某矿区废弃地进行公园化建设时,需要考虑植被与土壤之间的协调C.依据生态工程的循环原理,应该对垃圾进行焚烧处理D.园林既能改善生态环境,又能提高社会和经济效益,体现了生态工程的整体原理5.有些人认为“使用植物生长调节剂处理得到的农产品可被食用”,支持上述说法的证据是( )A.所有的植物生长调节剂本身对人体没有危害B.植物生长调节剂可调控植物细胞的基因表达C.被催熟水果上残留的乙烯利会促进儿童性早熟D.植物生长调节剂的使用均需国家有关部分批准6.下列关于生物进化的叙述,错误的是( )A.适应不仅是指生物对环境的适应,也包括生物的结构与功能相适应B.突变和重组定向改变种群的基因频率C.种群之间的双向迁移,即种群间互有迁入和迁出,会引起种群间遗传差异的减少,种群内变异量增大D.化石是研究生物进化最直接、最重要的证据7.生态学家对某地云杉林中四种林莺的生态需求进行了研究,四种林莺主要觅食树皮和树叶上的昆虫,觅食部位如图。
人解整合素样金属蛋白酶12(ADAM12)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T0.6ng/ml - 16ng/ml使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中解整合素样金属蛋白酶12(ADAM12)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人解整合素样金属蛋白酶12(ADAM12)水平。
用纯化的人解整合素样金属蛋白酶12(ADAM12)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入解整合素样金属蛋白酶12(ADAM12),再与HRP标记的解整合素样金属蛋白酶12(ADAM12)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的解整合素样金属蛋白酶12(ADAM12)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人解整合素样金属蛋白酶12(ADAM12)浓度。
试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品(32ng/ml)0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
16ng/ml 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液8ng/ml 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液4ng/ml 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液2ng/ml 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液1ng/ml 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
化学发光酶免疫分析法定量检测人血清层粘连蛋白徐军;刘佳;郭静霞;赵静;陈霖;宋永继;刘爱霞;戴亮;李伯安【摘要】目的建立检测人血清层粘连蛋白(LN)的化学发光酶免疫分析法(CEIA).方法用3μg/mL抗人LN单抗包被微孔板制成固相抗体,辣根过氧化物酶标记抗人LN单抗浓度为1∶2000,建立检测人血清LN浓度的CEIA法.评价该法的线性范围、灵敏度、稳定性等性能指标;并与ELISA法检测LN进行比对;初步检测100例健康献血员血清LN水平.结果该法线性范围为22~1 635 ng/mL,灵敏度为12.2 ng/mL,批内、批间变异系数均<10%,检测高、中、低值LN血清的回收率分别为100.9%、95.2%和105.0%;试剂在4℃和37℃条件下至少稳定7d;健全性良好;与ELISA法检测LN结果差异无统计学意义(t =0.299,P>0.05);100例健康献血员LN水平为(44.9±16.3) ng/mL.结论成功建立定量检测LN的CEIA法,该法性能较好,可用于临床检测.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2013(031)009【总页数】3页(P645-647)【关键词】化学发光酶免疫分析;层粘连蛋白;肝纤维化【作者】徐军;刘佳;郭静霞;赵静;陈霖;宋永继;刘爱霞;戴亮;李伯安【作者单位】中国人民解放军第三○二医院临床检验医学中心,北京100039;中国人民解放军第三○二医院临床检验医学中心,北京100039;中国人民解放军第三○二医院临床检验医学中心,北京100039;中国人民解放军第三○二医院临床检验医学中心,北京100039;中国人民解放军第三○二医院临床检验医学中心,北京100039;中国人民解放军第三○二医院临床检验医学中心,北京100039;中国人民解放军第三○二医院临床检验医学中心,北京100039;中国人民解放军第三○二医院临床检验医学中心,北京100039;中国人民解放军第三○二医院临床检验医学中心,北京100039【正文语种】中文【中图分类】R446.1层粘连蛋白(laminin,LN)属细胞外基质糖蛋白,参与基膜的构建及细胞的黏附、生长、增殖、迁移和分化等生理功能。
人血清白蛋白的氨基酸序列人血清白蛋白(Human Serum Albumin),简称HSA,是人体中含量最高的一种白蛋白,构成人体约60%的白蛋白。
它可以将来自体外的毒素物质以及体内不需要的物质贮存在其蛋白质结构中。
HSA的氨基酸序列由594个氨基酸残基组成,该序列可以从克隆后从大肠杆菌中提取。
下面是人血清白蛋白的氨基酸序列:1.精氨酸(Arg):RSRAFGVPFSR PSRSRSGSHCR (72个)2.丙氨酸(Ala):SGQGQGSARSR VAQGHGGFDRS (70个)3.缬氨酸(Val):ESSSSSSSSSS AHFSYSRHEDF (70个)4.苏氨酸(Ser):YFSLAISSKGD SDKGGSHSAGH (71个)5.色氨酸(Gly):VHECVDACHEG NPHVEDVAEEL (71个)6.甘氨酸(Glu):GDVVGDGLGFT TAGGALGAVGP (71个)7.谷氨酸(Asp):DLGGTSFHGVW RGSLVSLYSLP (71个)8.缁氨酸(Leu):VFRDYCDGPKH PDLTPTVASDE (71个)9.大肽酸(Trp):KGTEDTTALYS HSATVYPKRAP (71个)10.天冬氨酸(Asn):NGGFGRRLRTG AACMRIGFTAY (71个)11.丝氨酸(Thr):VVDAQGTMRLR RSPEYRDYQQA (71个)12.苯丙氨酸(Phe):SMENTGPVSLS SGTVCGVHCAR (71个)13.赖氨酸(Lys):CYECHCRKFDD RATPGSSSSHQ (70个)14.甲硫氨酸(Met):PSGYSSSAASA CGTKVGATGLG (71个)15.组氨酸(Cys):NCRGRGVHTPF PYVLIFYYYAK (71个)上述是人血清白蛋白中氨基酸组成情况,其中氨基酸搭配是具有一定结构成分的,称为折叠,它可以赋予整个蛋白空间结构及免疫应答能力。
人血清白蛋白(HSA)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
产品编号:CSB-E08970h
检测范围:78 μg/ml - 5000 μg/ml
最低检测限:19.5 μg/ml
特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的人HSA,且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期:6个月
预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中HSA含量。
说明
1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗HSA抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗HSA抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的HSA呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1.酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
2.标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7.辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8.底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10.终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
需要而未提供的试剂和器材
1.标准规格酶标仪
2.高速离心机
3.电热恒温培养箱
4.干净的试管和Eppendof管
5.系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
6. 蒸馏水,容量瓶等
标本的采集及保存
1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可
检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000 g离心15
分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3.细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放
于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则:
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。
只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。
稀释的过程中,应做好详细的记录。
最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为5000 μg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释5000 μg/ml,2500 μg/ml,1250 μg/ml,625 μg/ml,312 μg/ml,156 μg/ml,78 μg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 μg/ml,临用前15分钟内配制。
如配制2500 μg/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)5000 μg/ml的上述标准品加入含0.5ml 样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
生物素标记抗体的稀释原则:
临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:
临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。
每次检测都应该做标准曲线。
如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。
空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加
标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体,甩干,不用洗涤。
每孔加生物素标记抗体工作液100μl(取1μl生物素标记
抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
3.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,200μl/每孔,甩
干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液)100μl,37℃,
60分钟。
5.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,200μl/每孔,甩
干。
6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4
孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔显色不明显,即可终止)。
7.依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
终止液的加入顺序应尽量
与底物液的加入顺序相同。
为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。
在加终止液后15分钟以内
进行检测。
注:
1. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
2. 每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是最后加底物溶液及2N H2SO4。
测量时先用此孔调OD值至零。
3. 为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。
4. 未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。
标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过
氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。
请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5. 建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟。
根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
5. 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数。
6. 在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。
7. 底物请避光保存。
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。