性传播疾病的实验室检测 PPT课件

幼女 采集阴道分泌物；
新生儿眼炎患者 采集眼结膜分泌物，对其母亲采集宫颈、尿道及直肠标本。
标本的采集和运送—取材方法
尿道 男性患者
有症状患者可挤出脓性分泌物，用取样拭子蘸取脓 液作涂片或培养。对挤压后无明显分泌物时，采用男 用取材拭子插入尿道 2～3cm，稍用力转动，保留5-10 秒再取出， 以采集到粘膜上皮细胞。 女性患者
染色镜检 结果观察
观察要点
• 细胞类型 • 病原体染色特性、形状、位置
实验室检查—涂片革兰染色
实验室检查—涂片革兰染色
实验室检查—涂片革兰染色
结果报告
实验室检查—涂片革兰染色
临床价值：敏感性和特异性取决于标本的类型
男性淋菌性尿道炎的尿道分泌物标本，其敏感性及特 异性可高达95％～99％，具有诊断价值
标本的采集和运送—取材方法
其他标本 直肠拭子 将取样拭子插入肛门2～3cm，从紧靠肛环边 的隐窝中取材。避免接触粪便。 阴道拭子 青春期前女孩可采集阴道标本。将取样拭子 置于阴道后穹窿10～15秒，采集阴道分泌物。 咽拭子 从咽后壁或扁桃体隐窝取材 眼结膜拭子 翻开下睑取材 尿液 清晨首次尿或禁尿后2小时，取前段尿10-20ml
淋病的实验室诊断
培训主要内容
培训目标
• 标本采集与运送
• 常用检测方法
• 《卫生行业标准WS2682019》增减内容
• 为工作的规范性提供依据
什么是淋病？
由淋球菌感染泌尿生殖系统、肛门直肠、 咽部等 所致的，以化脓性炎症为主要特征的一种性传播 疾病
传染病分类：按照传染病法的划定属于乙类传染 病。淋病作为法定报告病例，是我国目前重点防 控的性传播疾病之一。
淋病的实验室检测现状
2019版 诊断标准

包括VDRL、USR 、RPR、TRUST试验等
性病研究实验室玻片试验（VDRL）：属于沉淀反应，目前应用最广泛。 用心拟脂、卵磷脂、胆固醇为抗原，可作定性和定量试验，操作简单， 费用低，常用作大量病人的筛选及疗效观察。但在一期梅毒时敏感性不 够高，以及弱阳性时判读结果困难为其缺点。
血清不需加热的反应素试验（URS）：此法在国内已逐步推广使用， 也是一种非螺旋体抗原原血清沉淀试验。其原理是在VDRL所用抗原中 加入了EDTA（乙二胺四醋酸）和氯化胆碱，使操作更为简单，更便于 读结果，其敏感性与特异性和VDRL相同。
三、梅毒实验室检查方法
梅毒的临床实验室检测方法较多， 概括起来分为梅毒的病原体检查、 梅毒的血清免疫学检查和梅毒的核 酸检查3大类。
（一）病原体检查方法
即梅毒螺旋体检查，采用暗视野显微镜检查或 直接免疫荧光试验(direct fluorescent antibody test，DFA)，在显微镜下观察梅毒 螺旋体的特征性形态和运动方式。该方法是 诊断早期现症最直接的方法，但由于受到患 者用药、检测仪器状态和检测人员技能等条 件的制约，本方法实际检出率并不高。未检 测到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能 性。本方法费时费力，也不适用于梅毒的大 规模筛查。
6.梅毒螺旋体至今还不能在人工培养基上生长繁殖，目前只能将其接种到兔 睾丸内增殖、传代和保存。以横断分裂的方式进行增殖，世代时间为30 小时～33小时。
7.梅毒螺旋体在体外不易存活，煮沸、干燥，一般的消毒剂如汞剂、石炭酸、 乙醇等很容易将其杀死。在41℃～42℃时经过1小时～2小时也可将其杀 死。
8.低温（-70℃～-196℃）下可保存数年并保持其形态、活、梅毒螺旋体的生物学特性 三、梅毒实验室检查方法 四、梅毒血清学诊断试验 五、梅毒血清学试验的结果解释 六、梅毒实验室操作要求 七、存在的问题

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非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义
非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、 敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。
早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗
效观察、判愈、复发或再感染的指征。
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非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点
非梅毒患者的梅毒血清反应呈阳性，此现象称为梅 毒血清反应假阳性。
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TP—ELISA试验原理
TP—ELISA试验是用重组梅毒螺旋体抗原 包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗 体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标 记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反 应。本法可用于大规模血清检测。
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梅毒免疫层析快速检测方法
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梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义
梅毒免疫层析法-梅毒快速检测 (RT)
荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）
化学发光免疫分析法（CLIA）
梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）
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TPPA/TPHA
TPPA试验原理与TPHA试验基本相同。TPPA试 验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致 敏羊红细胞，此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋 体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏 感性。明胶粒子为洋红色，在操作上也较为方便， 出结果较快。
方法：
暗视显微镜检查
镀银染色法：梅毒螺旋体具有亲银性，可
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被银溶液染色
病原学检查的临床意义
病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体， 在临床可确诊梅毒，且具有快速、 方便、易操作的特点。

试剂储存
建立严格的试剂储存管理制度，确保试剂在有效 期内使用。
设备维护
定期对检测设备进行维护和校准，确保设备性能 稳定可靠。
人员培训与资质认证
培训计划
制定并实施人员培训计划，提高检测人员的专业知识和技能。
资质认证
对检测人员进行资质认证，确保其具备从事性病实验室检测的资格。
人员健康管理
建立人员健康档案，定期进行健康检查，防止因人员健康问题影响 检测结果。
样本处理与运
样本处理
采集的样本需要进行适当的处理， 如离心、过滤、沉淀等，以去除 杂质和不必要的细胞成分，提高 检测的敏感性和特异性。
样本运输
处理后的样本需要按照规定的温度 和时间进行运输，以确保样本的新 鲜度和完整性，同时应避免交叉感 染和污染。
注意事项
样本处理和运输过程中应遵循相关 规定和操作规程，确保样本质量和 安全性。
核酸检测
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聚合酶链式反应（PCR） 通过扩增特定的DNA片段，用于检测淋病奈瑟氏 菌、生殖器疱疹病毒等病原体。
实时荧光定量PCR
在PCR基础上加入荧光标记，实现实时监测，提 高检测的灵敏度和特异性。
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基因测序
对病原体基因进行测序分析，用于高度变异病原 体的检测和分型，如HIV病毒。
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性病实验室检测流 程
采集样本
采集方法
采集样本时应根据不同性病病原体选 择合适的采集方法，如生殖器疱疹可 采集水疱液或溃疡表面渗出物，淋病 可采集尿道分泌物等。
采集部位
注意事项
采集样本时应遵循无菌操作原则，避 免交叉感染和污染，同时应确保采集 的样本量足够用于检测。
采集样本时应选择病原体含量较高的 部位，如生殖器疱疹可采集病变部位 渗出液，淋病可采集尿道口分泌物等。

性。
有些传染病还有季节性或地方性。
常见传染病类型
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02
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按照病原体不同，传染病可分 为病毒性传染病、细菌性传染
病、寄生虫性传染病等。
常见的病毒性传染病包括流感、 艾滋病、病毒性肝炎等。
常见的细菌性传染病包括肺结 核、细菌性痢疾、伤寒等。
常见的寄生虫性传染病包括血 吸虫病、疟疾等。
发病机制和传播途径
丙型肝炎
多数患者无明显症状，部分患者可出现乏力、食欲减退等 症状。实验室检测丙型肝炎病毒抗体阳性，或病毒核酸检 测阳性。
性传播疾病诊断标准
01
梅毒
硬下疳、梅毒疹等皮肤损害表现，可伴有发热、头痛等全身症状。实验
室检测梅毒螺旋体抗体阳性，或暗视野显微镜检查发现梅毒螺旋体。
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淋病
尿道口红肿、流脓性分泌物等尿道炎表现，可伴有发热、头痛等全身症
伤寒
持续发热、表情淡漠、相对缓脉、玫 瑰疹、肝脾肿大等临床表现。实验室 检测伤寒杆菌抗体阳性，或血培养伤 寒杆菌阳性。
血液系统传染病诊断标准
艾滋病
发热、盗汗、淋巴结肿大等急性期症状，随后出现机会性 感染和肿瘤等临床表现。实验室检测HIV抗体阳性，或病 毒核酸检测阳性。
乙型肝炎
乏力、食欲减退、恶心、呕吐等症状，部分患者可出现黄 疸。实验室检测乙型肝炎病毒表面抗原阳性，或病毒核酸 检测阳性。
发热、咳嗽、流涕等卡他症状， 眼结合膜炎，特征性皮疹。实验 室检测麻疹病毒抗体阳性，或病
毒核酸检测阳性。
消化道传染病诊断标准
细菌性痢疾
甲型肝炎
发热、腹痛、腹泻等急性胃肠炎症状， 粘液脓血便。实验室检测痢疾杆菌阳 性。
急性起病，发热、乏力、食欲不振、 恶心、呕吐等症状。实验室检测甲型 肝炎病毒抗体阳性，或病毒核酸检测 阳性。

–性病研究实验室玻片试验（VDRL） –血清不需加热的反应素玻片试验（USR） –快速血浆反应素环状卡片试验（RPR） –甲苯胺红血清不需加热试验（TRUST）
RPR/TRUST
• 原理:
–RPR:以黑色的炭颗粒作为指示标记物 –TRUST:以红色的甲苯胺红颗粒作为指示标记物
• 检测成分：血清梅毒反应素
暗视野显微镜检查
• 制片
标本置于载玻片上，加一滴生理盐水，盖 上盖玻片，在暗室中于暗视野显微镜上油镜 观察
• 观察
先用低倍镜，再转至高倍镜 梅毒螺旋体在暗背景上呈白色发光，螺 旋整齐，运动规律（旋转、伸缩或蛇行 运动）
暗视野显微镜检查
• 结果解释—阳性
–暗视野显微镜查阳性，临床上可确诊梅
梅毒暗视野采样暗视野显微镜检查?制片标本置于载玻片上加一滴生理盐水盖上盖玻片在暗室中于暗视野显微镜上油镜观察?观察?先用低倍镜再转至高倍镜?梅毒螺旋体在暗背景上呈白色发光螺旋整齐运动规律旋转伸缩或蛇行运动暗视野显微镜检查?结果解释阳性暗视野显微镜查阳性临床上可确诊梅毒特别对一期梅毒硬下疳肿大淋巴结二期梅毒皮肤粘膜损害的诊断有重要价值尤其使用于早期梅毒血清学阴性时暗视野显微镜检查?结果解释阴性阴性结果不能排除梅毒?螺旋体数量不足?已用过抗生素或某些外用药?损害接近自然消退?损害不是梅毒?检验人员技术暗视野显微镜检查?特点该方法具有快速方便可靠的特点已被who确定为性病实验室必备项目之一口腔中含有其他密螺旋体与梅毒螺旋体不易区别暗视野显微镜查不推荐于口腔皮损材料梅毒血清学检查?血清学方法是诊断各期梅毒的主要方法包括
RPR/TRUST
• 生物学假阳性：
① 急性或慢性传染病：风疹、麻疹、水痘、疟疾、上呼吸道 感染、病毒性肝炎，活动性肺结核、麻风，肺炎球菌性肺 炎等； ②其它疾病：SLE、类风湿性关节炎、风心病、DLE、肝硬化、 慢性肾炎、系统性硬化症、自身免疫性溶血性贫血等； ③身体状况改变：麻醉剂成瘾、妊娠、年老等

排除梅毒感染
实验室梅毒检验结果分析
新生儿血清RPR和TPPA检测为阳性，不能 诊断为胎传梅毒。
实验室梅毒检验结果分析
胎传梅毒的实验诊断
具有下列实验室四个指标之一，可确诊为胎 传梅毒： 暗视野检查梅毒螺旋体阳性； 患儿非梅毒螺旋体血清抗体滴度持续上升； 患儿非梅毒螺旋体血清学定量试验结果比母 亲高2个稀释度（4倍），(低于或等于该值 并不排除胎传梅毒)； 患儿检出19（s）-IgM
仪器材料
1.试剂：梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）试 剂盒（日本富士100人份），内有： “A”溶解用液； “B”血清稀释液； “C”致敏颗粒（冻干）； “D” 非致敏颗粒（冻干）； “E”阳性质控血清（液体）。
仪器材料
“C”致敏颗粒（冻干） “D” 非致敏颗粒（冻干) 试验前30分钟按说明书规定量加“A”溶液混匀。
操作步骤
加“D” 非致敏颗粒：第3孔加D液25uL，第4
孔加“C” 致敏颗粒25uL。
混合：将反应板置震荡器震荡30秒。 反应：放湿盒内，室温孵育2小时后观察结果。
结果判定：
试验结果未致敏颗粒不出现凝集者， 才可做出结果判定。如果孔内标本非致 敏和致敏颗粒均产生凝集者，标本需做 重吸收试验。
做最后确定。
实验室梅毒检验结果分析
梅毒的诊断：必须依靠病史、临床症状、实 验检查进行综合分析。
实验室检查结果对诊断梅毒起决定性意义。
实验室梅毒检验结果分析
RPR＋、 TPPA-
RPR假阳性
RPR＋、 TPPA + 现症梅毒
RPR－、 TPPA+ 既往感染，极早期梅毒
RPR－、 TPPA-
加样：吸取50ul血清(浆)分别与各圈中盐水作 稀释度后，然后涂布整个圈内。

组织病理学诊断
组织病理学诊断是通过采集病变组织样 本，进行病理学检查，观察组织结构和 细胞形态的变化，从而确定感染性疾病
的一种实验诊断方法。
组织病理学诊断可以用于确诊各种感染 性疾病，如肝炎、肺炎、肿瘤等。
组织病理学诊断的优点是能够直接观察 病变组织和细胞形态的变化，有助于明 确诊断。缺点是需要采集病变组织样本
感染性疾病的传播途径多样，包括空 气传播、接触传播、血液传播等。
感染性疾病是全球范围内的主要疾病 负担，对人类健康构成严重威胁。
实验诊断的重要性
实验诊断是感染性疾病诊断的 重要手段，通过实验室检测可 以快速、准确地确定病原体的 种类和感染程度。
实验诊断有助于指导临床治疗 ，为制定合理的治疗方案提供 科学依据。
微生物培养的优点是能够直接观察病原体的生长和繁殖情况，有助于明确诊断。缺 点是培养时间较长，需要一定的实验室设备和经验。
免疫学检测
免疫学检测是通过检测人体内的抗原或抗体，间接推断是否存在感染的一种实验诊断方法。
常见的免疫学检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、胶体金免疫层析试验、间接免疫 荧光试验等。
THANKS
感谢观看
优化检测流程
对检测流程进行优化，减 少操作环节和时间，降低 误差率，提高检测效率。
标准化试剂和仪器
推动试剂和仪器的标准化 ，确保不同实验室之间的 检测结果具有可比性。
加强实验室质量控制
建立质控体系
制定严格的质量控制标准 和质量管理体系，确保实 验室操作的规范性和数据 的可靠性。
定期质控检查
对实验室的仪器、试剂、 操作过程等进行定期检查 和校准，及时发现并纠正 问题。
多重检测与高通量检测
多重检测

02 诊断标准制定原则
科学性原则
基于充分的科学证据
诊断标准的制定应基于大量的临床数据、实验室研究、流行 病学调查等科学证据，确保标准的准确性和可靠性。
遵循医学原理
诊断标准应符合医学原理，包括疾病的发病机制、病理生理 过程、临床表现等方面的知识，以确保诊断的准确性和有效 性。
实用性原则
易于临床应用
低于正常值，提示免疫系统受损。
04 诊断方法与技术应用
临床表现与体征识别
发热、寒战、乏力等全身症状 皮疹、疱疹、溃疡等皮肤表现 咳嗽、咳痰、呼吸困难等呼吸道症状 恶心、呕吐、腹泻等消化道症状 头痛、意识障碍等神经系统症状
实验室检测技术应用
病原学检测
细菌培养、病毒分离、 真菌鉴定等
免疫学检测
抗体检测、抗原检测、 免疫荧光等
医生经验不足
部分医生对传染病的认识不足，缺乏临床经 验，可能导致误诊。
D
提高诊断准确率对策
加强临床观察
医生应密切观察患者的 症状、体征变化，结合 流行病学史进行综合分 析。
完善实验室检测
提高实验室检测技术水 平，确保检测结果的准 确性和可靠性。
强化医生培训
加强对医生的传染病知 识培训，提高其临床诊 断和治疗能力。
观察患者精神状态、面色、 呼吸等一般状况
测量体温、脉搏、呼吸、血 压等生命体征
评估病情严重程度，确定是 否需要紧急处理
详细询问病史及体格检查
详细询问患者既往病史 、家族史、接触史等相 关信息
进行全面系统的体格检 查，包括皮肤、黏膜、 淋巴结、头颈部、胸部 、腹部、脊柱四肢等
重点检查与传染病相关 的部位，如呼吸道、消 化道、泌尿生殖道等
可量化的评估方法

低
非梅毒螺旋体抗原血清学试验－临床意义
• 早期梅毒经足量规则抗梅毒治疗后滴度变 化
• 一期梅毒可转阴 • 二期梅毒可转阴 • 晚期梅毒治疗后可否转阴？
非梅毒螺旋体抗原血清学试验－临床意义
• 非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性 和特异性较好，适合于大量人群的筛查、产前检查及 健康体检等
• 早期梅毒硬下疳出现1－2周后，血清可呈现阳性 • 治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、
判愈、复发或再感染的指征
非梅毒螺旋体抗原血清学试验－假阳 性
• 技术性假阳性反应 由于标本保存不当（如细菌 污染或溶血） 、试剂质量差或过期、或实验室 操作错误所造成
• 生物学假阳性 反应 是由于患者有其他疾病或 生理状态发生变化，使梅毒血清学试验出现阳 性
RPR(TRUST)-定性试验
• a. 吸取50μL血清或血浆加于卡片圈内 ，并均匀地涂布在整个圈内（每张纸卡有 10个或12个反应圈）；
• b. 将抗原轻轻摇匀，用标准针头吸取 抗原，每个标本加1滴抗原；
• c. 将卡片置水平旋转器旋转8 min， 100±5转/min；
• d. 立即在明亮光线下观察结果。
诊断标准 1 疑似病例：应同时符合1，2和3.2项。 2 确诊病例：应同时符合疑似病例的要求和3.1、3.3 中的任一项。
二期梅毒
• 诊断依据 • 1 流行病学史 • 2 临床表现 • 2.1 皮损呈多形性 • 2.2 全身浅表淋巴结肿大。 • 2.3 可出现梅毒性骨关节损害、眼损害、
内脏及神经系统损害等。
梅毒血清学检测
• 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 • 梅毒螺旋体抗原血清学试验
常见的非梅毒螺旋体抗原血清学试验：
• 1、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR) • 2、甲苯胺红试验(TRUST) • 3、性病研究实验室试验(VDRL)等 • 基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇 • 抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉