枫叶色素含量的季节性变化测定实验方案
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枫叶变红的研究报告1. 研究背景枫叶变红是枫树在秋季时叶片颜色由绿色转变为红色的自然现象。
这一现象引起了人们的极大兴趣,并且吸引了大量科学家的研究。
本报告旨在探讨枫叶变红的原因和机制,并总结已有的研究成果。
2. 研究目的本研究的目的是深入了解枫叶变红的过程和机制,为进一步研究气候变化对枫树的影响提供科学依据,并为树木生理学和生态学领域的研究提供参考。
3. 研究方法本研究采用了实地观察和实验室分析的方法。
首先,我们在不同地理位置的枫树群落中进行了枫叶变红的长期观察和记录。
然后,我们收集了大量的叶片样本,并使用光谱仪、显微镜、色差计等工具对叶片的颜色和结构进行了详细分析。
同时,我们还对环境因素、植物激素和基因表达进行了一系列实验。
4. 研究结果4.1 枫叶变红的观察结果经过多年观察和记录,我们发现枫叶变红通常发生在秋季温度逐渐降低、日照时间变短和天气干燥的环境下。
变红的过程从叶片边缘开始,逐渐向叶片中央延伸。
同时,叶片的颜色由绿色转变为黄色、橙色,最终变为鲜红或紫红色。
4.2 枫叶变红的结构和生理变化通过对变红和绿色叶片的比较,我们发现变红的叶片中含有更多的花青素和类胡萝卜素。
这些色素在夏季起到光合作用的防护作用,而在秋季起到抗氧化剂的作用。
同时,变红的叶片中的叶绿素含量逐渐降低,而红色素的合成增加。
4.3 环境因素的影响研究结果表明,温度、日照和水分是枫叶变红的重要环境因素。
温度的下降和日照时间的减少,会触发植物体内激素的变化,从而导致叶片的颜色变化。
此外,干燥的天气会加速叶片中的色素合成过程,使叶片更快地变红。
4.4 基因调控机制研究发现,枫叶变红还受到一系列基因的调控。
一些基因的表达在变红过程中显著上调,而另一些基因的表达被抑制。
这些基因调控了色素的合成、叶片的衰老和细胞死亡等关键过程。
5. 结论通过对枫叶变红的研究,我们得出了以下结论:1.枫叶变红是一种适应环境的生理现象,可增加树木抵抗低温和干燥等压力的能力。
枫叶色素含量的季节性变化测定实验方案实验原理:枫叶中的色素,当叶子中所含的叶绿素占主导地位时,绿色就为主色调,抑制了其他色素展现本来面目。
入秋后,气温逐渐下降,叶绿素的合成速度受阻,破坏却与日俱增,到后来叶片中只剩下花青素、类胡萝卜等色素,于是它们便有机会尽情展现自己的如花娇颜。
另外,随着秋季不断降温,尤其是霜降之后,为适应即将到来的寒冷气候,叶肉内积累了较多的糖分,这些糖分经过复杂的反应,形成了花青素,也由此形成了秋叶变红的重要基础花青素:花青素是具有2-苯基苯并吡喃阳离子结构的衍生物,广泛存在于植物中的水溶性天然色素。
花青素在自然状态下常与各种单糖形成糖苷,称为花色苷。
溶液PH不同,花色苷的存在形式也不同。
对于一个给定的PH值,在花色苷的4种结构之间存在着平衡:蓝色的醌式(脱水)碱,红色的花烊正离子,无色的甲醇假碱和查尔酮。
花色苷在PH值很低时,其溶液呈现最强的红色。
随着PH值的增大,花色苷的颜色将褪至无色,最后在高PH值时变成紫色或蓝色。
PH示差法测定花色苷含量的依据是花色苷发色团的结构转换是PH的函数,起干扰作用的褐色降解物的特性不随PH变化。
因此在花青素最大吸收波长下确定两个对花青苷吸光度差别最大但是对花色苷稳定的PH值。
根据Fuleki T经验公式花青素含量(mg/100g)=△TO.D/(avE%1cm ×W ×10);△TO.D=△A×DV×VF; △A=A(pH1.0)-A(pH4.5).其中:DV-----稀释体积;VF-----稀释倍数;W------样品重量;A-----总吸光值;avE%1cm------平均消光系数代入数值计算:叶绿素a.b:叶绿素是由叶绿酸、叶绿醉和甲醇组成的二醇酷,是四毗咯衍生物,其中的叶琳环是处于二氢形式,中心的金属原子为镁。
蔬菜中的叶绿素有叶绿素a和叶绿素b两类。
叶绿素在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿素蛋白质,由多种叶绿素蛋白复合物构成叶绿体,当细胞死亡之后,叶绿素就游离出来。
10121910122 生物科学专业方莹绿叶中色素的提取和分离实验报告姓名:班级:实验时间:枫叶在不同季节会显现出不同的颜色,我们在感受色彩斑斓的世界的同时,也会产生这样的疑问:为什么叶片会呈现不同的颜色呢?其实叶片的颜色与其所含色素有关,那么叶片中究竟含有哪些色素,它们的相对含量又是怎样的呢?今天我们就以菠菜的绿叶为例进行探究吧!一、实验原理1、色素提取的原理:叶绿体中的色素能溶于中,故可用提取色素。
2、色素分离的原理:叶绿体中的色素不只一种,且它们在层析液中的溶解度不同。
溶解度大的色素,在滤纸上随层析液的扩散速度;反之,则。
此方法也称为法。
二、实验目的1、进行绿叶中色素的提取和分离。
2、探究绿叶中含有几种色素。
三、材料用具1、实验材料新鲜的绿叶(菠菜绿叶)2、药品试剂无水乙醇,层析液(由石油醚、丙酮、苯混合而成)、二氧化硅、碳酸钙。
3、器材设备干燥的定性滤纸,试管,棉塞,试管架,研钵,玻璃漏斗,尼龙布,毛细吸管,剪刀,药匙,量筒,天平。
四、实验步骤课前预习实验步骤,并完成相应填空:实验步骤、1越细越好,尽量去除叶脉等部分。
2无水乙醇。
前两种是粉末状药品,各加少许,时是1、取菠菜新鲜叶片5g,洗净,擦干,去掉中脉,分。
、上的滤纸条一端剪去两个角使之呈理,于里边扩散的速度,条离这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。
、最好之前用铅笔轻轻地画一道线,放置色素带重叠,好几次,弄破纸条。
用铅笔可以划得整齐,这样让每一种色素都有次。
、置于烧杯中的层析液中,不要将滤液细线浸没在层析液中,因为溶剂,五、结果分析1、滤纸条上有几条不同颜色的色带?其排序怎样?宽窄如何?这说明了什么?请在下图画出你所观察到的色素在滤纸条上的分布情况2、你的结果与老师总结的结果相同吗?如果不同,可能的原因有哪些?3、结合你的实验结果与教师讲解内容,完成相应表格或填空:②色素的位置和功能叶绿体中的色素存在于。
叶绿素a和叶绿素b主要;胡萝卜素和叶黄素主要吸收,起着的作用。
枫叶的彩色变化教案教案标题:枫叶的彩色变化教学目标:1. 能够理解枫叶的彩色变化是由于叶绿素逐渐减少、其他色素逐渐显现的过程。
2. 能够描绘枫叶的彩色变化,并描述其中的科学原理。
3. 能够培养学生观察和记录的能力,以及对自然现象的好奇心。
教学内容:1. 枫叶的形态特征和生长环境。
2. 枫叶的彩色变化过程及其科学原理。
3. 枫叶的观察和记录方法。
教学准备:1. 枫叶标本或图片。
2. 彩色铅笔、画笔、纸张等绘画工具。
3. 实验器材:酒精、滤纸、显微镜等。
教学过程:引入:1. 引发学生对枫叶彩色变化的兴趣,可以使用图片或实物展示枫叶的不同颜色。
2. 提问学生是否注意到枫叶的颜色变化,并引导他们思考枫叶为什么会变色。
探究:1. 通过简单的实验,展示叶绿素和其他色素在枫叶中的存在。
a. 将一片枫叶放入酒精中,观察酒精的颜色变化。
b. 将酒精中的枫叶取出,放在滤纸上晾干。
c. 使用显微镜观察晾干后的枫叶,观察叶绿素和其他色素的存在情况。
讲解:1. 解释叶绿素在夏季时起主要作用,使枫叶呈现绿色。
2. 随着秋季的到来,光照减少,气温下降,树木逐渐停止养分吸收。
3. 叶绿素逐渐减少,其他色素如类胡萝卜素、花青素等逐渐显现,使枫叶呈现黄、橙、红等色彩。
实践:1. 学生观察校园或周边地区的枫叶,记录不同枫叶的颜色和形态特征。
2. 学生使用彩色铅笔或画笔绘制枫叶的彩色变化图。
总结:1. 回顾枫叶的彩色变化过程,并让学生回答为什么枫叶会呈现不同的颜色。
2. 引导学生总结彩叶变化的科学原理。
拓展:1. 鼓励学生进一步了解其他植物的彩色变化,比如银杏、槭树等。
2. 学生可以了解不同气候条件下枫叶的变化情况,进一步探究影响枫叶彩色变化的因素。
评价:1. 观察记录的准确性和详细程度。
2. 绘制的彩色变化图是否准确反映了枫叶的变化过程。
3. 对枫叶彩色变化原理的理解程度。
教学延伸:1. 在户外进行枫叶观察活动,让学生亲身体验枫叶彩色变化的过程。
2024年观察叶子中含有哪些色素大班教案一、教学内容本节课选自教材《自然观察》第五章第三节,主要内容为观察叶子中含有哪些色素。
通过学习,学生将了解叶绿体色素的种类、分布和功能,掌握使用简单实验方法观察和提取叶绿素。
二、教学目标1. 让学生了解叶绿体色素的种类、分布和功能,提高学生的生物知识水平。
2. 培养学生观察、思考、分析问题的能力,提高学生的实践操作能力。
3. 激发学生对自然科学的兴趣,培养学生的环保意识。
三、教学难点与重点1. 教学难点:叶绿体色素的提取和观察方法。
2. 教学重点:叶绿体色素的种类、分布和功能。
四、教具与学具准备1. 教具:显微镜、滤纸、剪刀、镊子、滴管、酒精、碘液、叶绿素溶液。
2. 学具:每组一台显微镜、滤纸、剪刀、镊子、滴管、酒精、碘液、叶绿素溶液。
五、教学过程1. 导入:通过展示不同季节树叶颜色的变化,引导学生思考:为什么树叶会变色?引出本节课的主题。
2. 知识讲解:(1)介绍叶绿体色素的种类、分布和功能。
(2)讲解叶绿体色素的提取和观察方法。
3. 实践操作:(1)分组进行叶绿素提取实验,教师巡回指导。
(2)使用显微镜观察叶绿素提取液,识别叶绿体色素。
4. 例题讲解:讲解如何通过观察叶绿素提取液来判断叶绿体色素的种类。
5. 随堂练习:让学生尝试分析不同树叶中叶绿体色素的种类。
六、板书设计1. 叶绿体色素的种类、分布和功能。
2. 叶绿素提取和观察方法。
3. 例题解析。
七、作业设计1. 作业题目:观察分析家中绿植的叶子,判断其中叶绿体色素的种类。
2. 答案:根据观察结果,描述叶绿体色素的种类。
八、课后反思及拓展延伸1. 反思:本节课通过实践操作,让学生掌握了叶绿体色素的提取和观察方法,提高了学生的实践能力。
2. 拓展延伸:引导学生思考叶绿体色素在植物生长中的作用,以及如何保护植物叶绿素,提高环保意识。
重点和难点解析一、教学内容中的难点与重点1. 叶绿体色素的提取和观察方法(1)提取方法:在实验过程中,使用酒精作为溶剂,将叶绿素从叶片中提取出来。
枫叶色素含量的季节性变化测定实验方案实验原理:枫叶中的色素,当叶子中所含的叶绿素占主导地位时,绿色就为主色调,抑制了其他色素展现本来面目。
入秋后,气温逐渐下降,叶绿素的合成速度受阻,破坏却与日俱增,到后来叶片中只剩下花青素、类胡萝卜等色素,于是它们便有机会尽情展现自己的如花娇颜。
另外,随着秋季不断降温,尤其是霜降之后,为适应即将到来的寒冷气候,叶肉内积累了较多的糖分,这些糖分经过复杂的反应,形成了花青素,也由此形成了秋叶变红的重要基础花青素:花青素是具有2-苯基苯并吡喃阳离子结构的衍生物,广泛存在于植物中的水溶性天然色素。
花青素在自然状态下常与各种单糖形成糖苷,称为花色苷。
溶液PH不同,花色苷的存在形式也不同。
对于一个给定的PH值,在花色苷的4种结构之间存在着平衡:蓝色的醌式(脱水)碱,红色的花烊正离子,无色的甲醇假碱和查尔酮。
花色苷在PH值很低时,其溶液呈现最强的红色。
随着PH值的增大,花色苷的颜色将褪至无色,最后在高PH值时变成紫色或蓝色。
PH示差法测定花色苷含量的依据是花色苷发色团的结构转换是PH的函数,起干扰作用的褐色降解物的特性不随PH变化。
因此在花青素最大吸收波长下确定两个对花青苷吸光度差别最大但是对花色苷稳定的PH值。
根据Fuleki T经验公式花青素含量(mg/100g)=△TO.D/(avE%1cm ×W ×10);△TO.D=△A×DV×VF; △A=A(pH1.0)-A(pH4.5).其中:DV-----稀释体积;VF-----稀释倍数;W------样品重量;A-----总吸光值;avE%1cm------平均消光系数代入数值计算:叶绿素 a.b:叶绿素是由叶绿酸、叶绿醉和甲醇组成的二醇酷,是四毗咯衍生物,其中的叶琳环是处于二氢形式,中心的金属原子为镁。
蔬菜中的叶绿素有叶绿素a和叶绿素b两类。
叶绿素在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿素蛋白质,由多种叶绿素蛋白复合物构成叶绿体,当细胞死亡之后,叶绿素就游离出来。
幼儿园秋季枫叶观察教案一、教学目标1. 让幼儿了解秋季枫叶的特点和颜色变化。
2. 培养幼儿观察和探索的能力。
3. 引导幼儿体验自然的美好,促进感知能力的发展。
4. 提高幼儿对自然的兴趣,激发他们对环境保护的意识。
二、教学准备1. 枫叶标本或图片。
2. 枫叶手工制作材料。
3. 放大镜、教学PPT或图片。
4. 木板、画架、水彩颜料、画笔等画画用具。
三、教学过程1. 导入教师引导幼儿回顾昨天的活动,介绍秋季枫叶的特点,以及枫叶的颜色变化,激发幼儿的好奇心和兴趣。
2. 观察带领幼儿到校园或周边的公园,让他们用放大镜观察不同颜色和形状的枫叶,观察并比较不同种类的枫叶的特点。
3. 讨论回到教室,教师与幼儿一起讨论观察到的枫叶特点,比如颜色、形状、大小等,鼓励幼儿用自己的语言描述枫叶的特点。
4. 制作教师引导幼儿用彩纸、剪刀等材料制作枫叶手工,让他们通过动手的方式加深对枫叶的了解,培养他们的动手能力和创造力。
5. 绘画教师向幼儿介绍水彩画的基本技巧,然后让幼儿在画纸上画出自己所见到的枫叶图案,激发他们的艺术天赋和想象力。
6. 总结教师引导幼儿回顾今天的活动,让他们用自己的话总结所学到的知识和经验,加深对枫叶的理解和记忆。
四、活动延伸1. 可以引导幼儿收集不同颜色的枫叶标本,制作成季节性的展示墙,让幼儿在观察的过程中感受到秋天的变化。
2. 可以组织幼儿参加户外的枫叶观察活动,在自然中学习,加深对枫叶的了解。
3. 可以播放与枫叶相关的儿歌或故事,增加幼儿的学习乐趣。
五、教学评估通过观察幼儿在活动中的表现,听取他们对枫叶的描述,评估他们的观察、思维和表达能力。
同时也可以通过制作的手工和绘画作品,评价幼儿对枫叶的理解和表达能力。
六、教学反思教师对本次活动进行总结,分析幼儿的学习情况和反馈,为今后的教学改进提出建议和思考。
七、教学心得本次活动不仅仅是一堂自然科学课,更是一堂让幼儿感受自然美的课程。
通过观察、讨论、制作和绘画等多种方式,让幼儿在活动中得到了知识的启迪,也培养了他们的观察力、动手能力和创造力,同时激发了他们对大自然的热爱和保护意识。
第1篇一、实验目的通过本次实验,了解和掌握叶子变色的原理,探究环境因素对叶子颜色变化的影响,加深对植物生理学中色素代谢过程的理解。
二、实验原理植物叶子中的主要色素包括叶绿素、叶黄素、胡萝卜素和花青素等。
其中,叶绿素是植物进行光合作用的关键因素,其含量在春夏季节较高,使得叶子呈现出绿色。
随着季节的变化,叶绿素的合成减少,其他色素逐渐显现出来,导致叶子颜色发生变化。
本实验通过观察不同环境条件下叶子颜色的变化,分析影响叶子变色的因素,进一步揭示叶子变色的原理。
三、实验材料1. 实验植物:常绿树、落叶树各一棵2. 实验工具:剪刀、放大镜、透明容器、温度计、湿度计、光照计3. 实验试剂:蒸馏水、pH试纸、氮、磷、钾等无机盐溶液四、实验步骤1. 观察实验植物的叶子颜色,记录初始状态。
2. 分别对常绿树和落叶树进行以下实验:(1)温度实验:将实验植物分别放置在不同温度条件下(如20℃、25℃、30℃),观察并记录叶子颜色变化。
(2)湿度实验:将实验植物分别放置在不同湿度条件下(如50%、60%、70%),观察并记录叶子颜色变化。
(3)光照实验:将实验植物分别放置在不同光照条件下(如全光照、半光照、遮光),观察并记录叶子颜色变化。
(4)氮、磷、钾实验:将实验植物分别施用不同浓度的氮、磷、钾溶液,观察并记录叶子颜色变化。
3. 对比分析不同实验条件下实验植物的叶子颜色变化,总结影响叶子变色的因素。
五、实验结果与分析1. 温度实验:在20℃条件下,实验植物的叶子颜色变化不明显;在25℃条件下,叶子颜色逐渐由绿色变为黄色;在30℃条件下,叶子颜色变为红色。
说明温度对叶子变色有显著影响,高温有利于红色素的合成。
2. 湿度实验:在50%湿度条件下,实验植物的叶子颜色变化不明显;在60%湿度条件下,叶子颜色逐渐由绿色变为黄色;在70%湿度条件下,叶子颜色变为红色。
说明湿度对叶子变色也有一定影响,高湿度有利于红色素的合成。
3. 光照实验:在全光照条件下,实验植物的叶子颜色变化不明显;在半光照条件下,叶子颜色逐渐由绿色变为黄色;在遮光条件下,叶子颜色变为红色。
第1篇一、实验目的本实验旨在探究植物叶子在秋季变色的原因,分析不同植物种类叶子落色的特点,以及环境因素对叶子落色过程的影响。
二、实验原理植物叶子的颜色主要来源于其中的色素,如叶绿素、类胡萝卜素、花青素等。
随着季节变化,气温降低,日照时间缩短,植物体内激素水平发生变化,导致这些色素的合成和降解过程发生变化,从而引起叶子颜色的变化。
三、实验材料与用具1. 实验材料:- 秋季不同种类的落叶植物叶子(如枫叶、银杏叶、槐叶等)- 水培植物(如盆栽菊花、月季等)- 水桶、剪刀、塑料袋、天平、温度计、湿度计、光照计2. 实验用具:- 研钵、研杵、滤纸、酒精、丙酮、蒸馏水、试管、烧杯、显微镜、照相机四、实验方法与步骤1. 叶子采集:在秋季选择不同种类的落叶植物,采集健康、无病虫害的叶子。
2. 叶子处理:将采集的叶子放入塑料袋中,标注种类和采集时间,带回实验室。
3. 叶子浸泡:将叶子放入烧杯中,加入适量的酒精和丙酮,浸泡一段时间,使色素溶解。
4. 色素提取:将浸泡后的叶子过滤,收集滤液。
5. 色素分离:利用层析法将滤液中的不同色素分离。
6. 色素鉴定:观察分离后的色素带,确定叶绿素、类胡萝卜素、花青素等色素的存在。
7. 环境因素影响实验:- 温度:在不同温度条件下(如低温、常温、高温)培养水培植物,观察叶子落色情况。
- 湿度:在不同湿度条件下(如高湿度、低湿度)培养水培植物,观察叶子落色情况。
- 光照:在不同光照条件下(如强光、弱光、无光)培养水培植物,观察叶子落色情况。
8. 数据记录与分析:记录实验过程中观察到的现象,对实验结果进行分析。
五、实验结果与分析1. 不同种类叶子落色特点:- 枫叶:秋季变红,红色逐渐加深,最后变为暗红色。
- 银杏叶:秋季变黄,黄色逐渐加深,最后变为暗黄色。
- 槐叶:秋季变黄,黄色逐渐加深,最后变为暗黄色。
2. 环境因素对叶子落色过程的影响:- 温度:低温有利于叶子落色,高温会延缓叶子落色过程。
枫叶色素含量的季节性变化测定实验方案
实验原理:
枫叶中的色素,当叶子中所含的叶绿素占主导地位时,绿色就
为主色调,抑制了其他色素展现本来面目。
入秋后,气温逐渐下降,叶绿素的合成速度受阻,破坏却与日俱增,到后来叶片中只剩下花
青素、类胡萝卜等色素,于是它们便有机会尽情展现自己的如花娇颜。
另外,随着秋季不断降温,尤其是霜降之后,为适应即将到来
的寒冷气候,叶肉内积累了较多的糖分,这些糖分经过复杂的反应,形成了花青素,也由此形成了秋叶变红的重要基础
花青素:花青素是具有2-苯基苯并吡喃阳离子结构的衍生物,
广泛存在于植物中的水溶性天然色素。
花青素在自然状态下常与各
种单糖形成糖苷,称为花色苷。
溶液PH不同,花色苷的存在形式也
不同。
对于一个给定的PH值,在花色苷的4种结构之间存在着平衡:蓝色的醌式(脱水)碱,红色的花烊正离子,无色的甲醇假碱和查
尔酮。
花色苷在PH值很低时,其溶液呈现最强的红色。
随着PH值
的增大,花色苷的颜色将褪至无色,最后在高PH值时变成紫色或蓝色。
PH示差法测定花色苷含量的依据是花色苷发色团的结构转换是PH的函数,起干扰作用的褐色降解物的特性不随PH变化。
因此在
花青素最大吸收波长下确定两个对花青苷吸光度差别最大但是对花
色苷稳定的PH值。
根据Fuleki T经验公式
花青素含量(mg/100g)=△TO.D/(avE%1cm ×W ×10);
△TO.D=△A×DV×VF; △A=A(pH1.0)-A(pH4.5).
其中:DV-----稀释体积;VF-----稀释倍数;W------样品重量;A-
----总吸光值;avE%1cm------平均消光系数代入数值计算:
叶绿素 a.b:叶绿素是由叶绿酸、叶绿醉和甲醇组成的二醇酷,是四毗咯衍生物,
其中的叶琳环是处于二氢形式,中心的金属原子为镁。
蔬菜中的叶
绿素有叶绿素a和叶绿素b两类。
叶绿素在植物细胞中与蛋白质结
合成叶绿素蛋白
质,由多种叶绿素蛋白复合物构成叶绿体,当细胞死亡之后,叶绿
素就游离出来。
叶绿素是一种不稳定的物质.不耐光、热、酸、
不溶于水,易溶于碱、乙醉与乙醚,在碱性溶液中,皂化为叶绿素
碱盐。
叶绿素a、b在长波的最大吸收峰分别在663nm、645nm,据Lamber-Beer 定律,可得浓度C与光密度D间的关系式:
D663=82.04Ca +9.27Cb
D645=16.75Ca +45.6Cb (浓度单位:
g/mL)
叶绿素a的浓度:Ca= 12.72D663 – 2.59D645
叶绿素b的浓度:Cb= 22.88D645 – 4.68 D663
总叶绿素的浓度:Ct = 20.29D645 +8.02D663 (浓度单位:mg/L)
材料与用品:枫叶提取液,乙醇95%(AR),盐酸仪器:PHs-3B
型酸度计,紫外分光光度计丙酮、石英砂、碳酸钙分光光度计、天平、剪刀、研钵、移液管、漏斗、大试管
实验步骤:
1.花青素测定:
1,将花青素取液稀释至一定的体积,用稀氢氧化钠和稀盐酸调节PH,观察提取液在不同PH下的颜色变化。
对提取液进行200~800nm
全波长扫描,绘制光谱图
取枫叶花青素提取液用5%HCL-EtOH(15:85)溶液稀释至一定
体积,进行光谱扫描,确定最大吸收波长。
紫外可见吸收光谱
3.PH示差法中PH的选择
在选定PH时应考虑以下因素:在此两个PH处测定的花青素的
吸收值差异应是最显著的;单一PH的轻微变动,对花青素吸光值的
影响是极小的;花青素在所处的两个PH下,应是相当稳定的。
由于
花青素只有在酸性介质中是稳定的,因此只测定PH小于7条件下花
青素吸光值的变化。
PH为1.0时,花青素以红色的2-苯基苯并吡喃
的形式存在PH为4.5时,花青素以无色的甲醇假碱的形式存在。
因
此选择PH为1.0和4.5。
4.平衡时间的确定
因为花青素在溶液介质中存在4种结构形式,这4种结构形式在某一PH下处于动态平衡,当PH改变时,动态平衡发生转移,总的趋势是PH降低时,平衡向红色的2-苯基苯并吡喃阳离子移动;PH升高时平衡向蓝色醌式移动。
一定时间后达到一个新的平衡。
因此提取液用缓冲液稀释后,必须静置一段时间,等动态平衡处于稳定后,才能测定吸光值。
花青素在缓冲液中的吸光度值与时间的变化关系(λ= nm)
结果表明,花青素在缓冲液中的吸光度值随时间变化,在
PH1.0( )基本稳定,在PH4.5时( )基本稳定。
所以综合考虑,选择平衡时间为
5.火棘果花青素含量的测定移取浓缩液2ml,用5%HCL-EtOH稀释、定容至100ml,分别移取10ml,用PH1.0和PH4.5的缓冲液稀释至100ml,平衡()min,在波长处测定吸光值。
根据Fuleki T经验公式
花青素含量(mg/100g)=△TO.D/(avE%1cm ×W ×10);
△TO.D=△A×DV×VF; △A=A(pH1.0)-A(pH4.5).
2.叶绿素a.b测定:
称1.25g叶用丙酮研磨
↓
匀浆过滤(用80%丙酮洗研钵及残渣,合并滤液)
↓
滤液用80%丙酮定容至25mL
↓
适当稀释后测A645、A663
1 取样:称取1.25g剪碎的叶片(提供的样品即为剪碎后冻于-80℃的叶片)放入研钵中。
注意取样时要避开大的叶脉。
2 研磨提取:向研钵中加入80%丙酮2.5ml,以及少许(约0.002g)CaCO
3 (中和酸性,防止叶绿素酯酶分解叶绿素) 和石英砂,研磨成匀浆,再加入3ml 80%丙酮,继续研磨至组织变白,在暗处静止
3~5min后,用一层干滤纸过滤到25ml容量瓶中,用滴管吸取80%丙酮将研钵洗净,清洗液也要过滤到容量瓶中,并用80%丙酮沿滤纸的周围洗脱色素,待滤纸和残渣全部变白后,用80%丙酮定容至刻度。
3 读取吸光度:取厚度为lcm的洁净比色皿,注意不要用手接触比色皿的光面,先用少量色素提取液清洗2~3次,注意清洗时要使清洗液接触比色皿内壁的所有部分,然后将色素提取液倒入比色皿中,液面高度约为比色皿高度的4/5,将撒在比色皿外面的溶液用滤纸吸掉(注意不能擦),再用擦镜纸擦干擦净。
将比色皿放入仪器的比色皿架上,注意不要将溶液撒入仪器内。
第一个位置放盛有80%丙酮的比色皿,做为空白对照。
将仪器波长分别调至663、645nm处,以80%丙酮做为空白对照调透光率100%,分别测定溶液在上述2个波长下的吸光度。
每个样品重复测定3次。
注意,每次在转换波长时,都要用80%丙酮调透光率100%。
结果计算:
根据Fuleki T经验公式
(1)花青素含量(mg/100g)=△TO.D/(avE%1cm ×W ×10);
△TO.D=△A×DV×VF; △A=A(pH1.0)-A(pH4.5).
其中:DV-----稀释体积;VF-----稀释倍数;W------样品重量;A-----总吸光值;avE%1cm------平均消光系数代入数值计算:
(2)
D663=82.04Ca +9.27Cb
D645=16.75Ca +45.6Cb (浓度单位:g/mL)
叶绿素a的浓度:Ca= 12.72D663 – 2.59D645
叶绿素b的浓度:Cb= 22.88D645 – 4.68 D663
总叶绿素的浓度:Ct = 20.29D645 +8.02D663 (浓度单位:mg/L)
14级生物科学植物生理学研究性实验第二组()小组
组员:黄志高(20140704011044)陈星艳(20140704011044)
李浩民(20140704011044)母哲(20140704011044)
施俊雄(20140704011044)冯欢(20140704011044)。