生物化学实验考核试题库
一、理论考核题
1盐析和盐溶（3分）2电泳（3分）3层析（色谱）（3分）4酶的活力单位（3分）5比活力（3分）6分子筛效应（3分）7电泳的原理（4分）
8离子交换层析的原理（4分）9亲和层析的原理（4分）
10凝胶过滤层析的原理（4分）
11吸附层析的原理（4分）
12透析技术的基本原理及其应用（4分）
13聚丙烯酰胺凝胶电泳的主要优点及用途（6分）
14按层析过程的机理，层析法分哪四类按操作形式不同又分哪三类（7分）
15普通离心机的使用注意事项（6分）
16可见分光光度计的使用注意事项（6分）
17蛋白质含量测定的常用方法有那些（6分）
18粗脂肪的提取和含量测定的基本原理（6分）
19索氏提取器是由哪几部分组成的（6分）
20粗脂肪的提取和含量测定的简要操作步骤（6分）
21粗脂肪的提取实验中如何减少误差（6分）
22凯氏定氮法测定总氮量的基本原理（6分）
23凯氏定氮实验中用到的主要器材有哪些（6分）
24核酸的含量测定常用的方法有哪些（6分）
25双倒数法测定米氏常数的基本原理（6分）
26双倒数法测定米氏常数的实验中，决定实验成败的因素有哪些关键因素是什么（7分）27生物细胞的破碎的常用方法有哪些（6分）
28酶的制备及提取过程中常注意哪些事项（6分）
29蛋白质的分离常用的方法有哪些（6分）
30甲醛滴定法测定氨基酸的基本原理（6分）
31为什么SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用来测定未知蛋白质的相对分子质量（6分）
32连续聚丙烯酰胺凝胶电泳与不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳有什么不同（6分）
33聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点（6分）
34琼脂糖凝胶电泳的优点（6分）
35提取某种植物组织中的总DNA时，使用的细胞提取液中的主要试剂成分是什么各有什么作用（7分）
36如何证明提取到的某种核酸是DNA还是RNA（6分）
37聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白时，使用的电泳缓冲液PH＝，那么样品应点在哪端为什么（6分）
二、技能或实验操作考核题
38说明纸层析和离子交换层析分离氨基酸混合物的方法是根据氨基酸的什么性质列出纸层析和柱层析的一般操作步骤。（10分）
39凝胶电泳的一般操作步骤（11分）
40普通离心机的使用操作（示范）（10分）
41可见分光光度计的使用操作（示范）（10分）
42如果要105摄氏度干燥某种物质，如何使用干燥箱（示范）（10分）
43要称取某种药品，如何使用天平（示范）（10分）
44要配制500ml L的NaOH溶液应如何配制（10分）
45配制1L L的HCl溶液应如何配制（已知浓盐酸比重是L，重量百分比浓度为％）（11分）46分别配制出10µg/ml，5µg/ml，2µg/ml，1µg/ml的DNA标准溶液，应如何配制（尽可能节约）（10分）
答案：
1、盐析和盐溶：盐析：在蛋白质溶液中加入一定量的高浓度中性盐(如硫酸氨),使蛋白质溶解度降低并沉淀析出的现象称为盐析。盐溶：加入少量中性盐可增加蛋白质的溶解度,即盐溶现象。
2、电泳：带电粒子在直流电场中向着所带电性相反的电极移动的现象。
3、层析（色谱）：用不同物质在不同相态的选择性分配,以流动相对固定相中的混合物进行洗脱，使混合物各组分以不同速度移动，从而达到分离的一种物理方法。
4、酶的活力单位：是指在特定条件下(25℃、最适的pH值和底物浓度),每分钟可催化1微摩尔(10-6摩尔)底物转化所需要的酶量。
5、比活力：代表酶制剂的纯度。根据国际酶学委员会规定比活力用每毫克蛋白所含的酶活力单位数表示。
6、分子筛效应：凝胶本身具有三维网状结构,大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大,小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时,按照分子量大小“排队,凝胶表现分子筛效应。
7、电泳的原理：电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。
8、离子交换层析的原理：离子交换层析法是以具有离子交换性能的物质作固定相,利用它与流动相中的离子能进行可逆的交换性质来分离离子型化合物的一种方法。
9、亲和层析的原理：亲和层析是应用生物高分子与配基可逆结合的原理,将配基通过共价键牢固结合于载体上而制得的层析系统。这种可逆结合的作用主要是靠生物高分子对它的配基的空间结构的识别。
10、凝胶过滤层析的原理：一种利用带孔凝胶珠作基质，按照分子大小分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术。凝胶过滤层析具有分子筛效应。
11、吸附层析的原理：组份在吸附剂表面吸附固定相是固体吸附剂,各能力不同而进行分离的方法。
12、透析技术的基本原理及其应用：
13、聚丙烯酰胺凝胶电泳的主要优点及用途：①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N，N'甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝胶有格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物，没有或很少带有离子的侧基，因而电渗作用比较小，不易和样品相互作用。
②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质，在聚合前可调节单体的浓度比，形成不同程度交链结构，其空隙度可在一个较广的范围内变化，可以根据要分离物质分子的大小，选择合适的凝胶成分，使之既有适宜的空隙度，又有比较好的机械性质。一般说来，含丙烯酰胺%的凝胶，机械性能适用于分离分子量范围不1万至100万物质，1万以下的蛋白质则采用含丙烯酰胺15-30%的凝胶，而分子量特别大的可采用含丙烯酰胺4%的凝胶，大孔胶易碎，小孔胶则难从管中取出，因此当丙烯酰胺的浓度增加时可以减少双含丙烯酰胺，以改进凝胶的机械性能。
