血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定

血清球蛋白提纯实验报告血清球蛋白提纯实验报告引言：血清球蛋白是一种重要的生物分子，具有多种生物学功能。

为了深入研究其结构和功能，本实验旨在通过一系列的步骤，从血清中提纯球蛋白，以获得高纯度的样品。

材料与方法：1. 血清样品：从健康人体中采集的血清样品。

2. 氨硫脲：用于沉淀球蛋白。

3. 离心管：用于离心沉淀。

4. 0.1 M磷酸盐缓冲液：用于洗涤球蛋白。

5. 0.01 M磷酸盐缓冲液：用于稀释。

6. 蛋白质含量测定试剂盒：用于测定球蛋白的浓度。

7. SDS-PAGE凝胶：用于分离蛋白质。

8. Coomassie蓝染色剂：用于染色。

实验步骤：1. 将血清样品加入离心管中，加入适量的氨硫脲，使其浓度达到10%。

2. 将离心管置于离心机中，以10000 rpm的速度离心10分钟，以沉淀球蛋白。

3. 弃去上清液，加入适量的0.1 M磷酸盐缓冲液洗涤沉淀，重复此步骤3次。

4. 加入适量的0.01 M磷酸盐缓冲液稀释球蛋白，使其浓度适宜。

5. 使用蛋白质含量测定试剂盒，测定球蛋白的浓度。

6. 将提纯后的球蛋白样品进行SDS-PAGE凝胶电泳分离。

7. 将凝胶染色剂浸泡在凝胶中，染色15分钟，然后用脱色剂洗净凝胶。

结果与讨论：通过上述步骤，我们成功地从血清中提纯出了球蛋白。

首先，我们通过离心的方式，将球蛋白从血清中沉淀下来。

然后，通过洗涤步骤，去除了与球蛋白不相关的杂质。

最后，我们对提纯后的球蛋白样品进行了浓度测定，并进行了SDS-PAGE凝胶电泳分离。

通过SDS-PAGE凝胶电泳的结果，我们可以看到凝胶上出现了明显的蛋白质条带。

根据分子量标记，我们可以初步判断出这些条带对应的是球蛋白。

进一步的实验可以通过Western blot等方法来确认这些条带的确为球蛋白。

在实验过程中，我们需要注意一些问题。

首先，血清样品的采集和保存要注意避免污染和降解。

其次，实验操作要严格控制温度和时间，以确保实验的准确性和重复性。

IgG分离、纯化与鉴定实验原理操作步骤：1、取2.5ml血清，加pH7.0 PBS 2.5ml，再逐滴加入（NH4）2SO4饱和溶液1.25ml，使成20%（NH4）2SO4溶液，边加边搅拌，充分混合后，静置20min。

2、3000r/min离心20min，弃去沉淀，以除去纤维蛋白。

3、在上清液中再加（NH4）2SO4饱和溶液3.75ml，使成50%（NH4）2SO4溶液，充分混合，静置20min。

4、3000r/min离心20min，弃上清，以除去白蛋白。

5、于沉淀中加5ml PBS，使之溶解，再加（NH4）2SO4饱和溶液3.2ml，使成33%（NH4）2SO4溶液，充分混合后，静置20min。

6、3000r/min离心20min，弃上清，以除去其它球蛋白。

7、用1ml PBS溶解沉淀，装入透析袋。

8、透析除盐，在蒸馏水中透析过夜，再在pH6.7的磷酸盐缓冲液中于4℃透析24h，中间换液数次。

8、SephadexG50 除盐：用蒸馏水浸泡5小时或在沸水浴中溶胀2小时，倾倒去水，加入磷酸盐缓冲液（0.0175mol/L，pH6.7）搅拌成悬浮液，按下述方法装柱。

9、DEAE-纤维素的活化：称取1g DEAE32或52，放入5ml量筒中，加蒸馏水浸泡过夜，观察溶胀后DEAE的体积。

根据所需层析柱的柱床体积计算所需DEAE的用量，称取所需DEAE 用蒸馏水浸泡过夜，其间换几次水，每次除去细小颗粒。

抽干，改用0.5mol/L NaOH溶液浸泡1h以上，抽干（可用布氏漏斗），用无离子水漂洗，使pH至8左右（用pH试纸检查）。

再改用0.5mol/L HCl溶液浸泡1h以上，去酸溶液，用无离子水洗至pH6左右。

本实验中在用前应以0.0175mol/L，pH6.7磷酸盐缓冲液，浸泡平衡后使用。

10、装柱用0.0175mol/L, pH6.7, 磷酸盐缓冲溶液浸泡已处理好的DEAE-纤维素，并更换1～2次。

然后搅拌均匀，灌入层析柱中，直至纤维素柱床高约11mL处左右为止，在床面上放一张圆形滤纸片。

一、实验目的1. 学习球蛋白的分离和纯化技术；2. 掌握盐析法、凝胶层析法等纯化方法；3. 熟悉球蛋白纯度的鉴定方法。

二、实验原理球蛋白是血清中的一种重要蛋白质，其含量约占血清总蛋白的16%。

由于球蛋白与其他蛋白质在分子量、溶解度、带电荷等方面存在差异，因此可以通过盐析法、凝胶层析法等方法进行分离和纯化。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：血清、硫酸铵、Sephadex G-25凝胶、醋酸纤维素薄膜、电泳缓冲液等；2. 实验仪器：离心机、电泳仪、凝胶层析柱、移液器、显微镜等。

四、实验步骤1. 球蛋白粗提（1）取一定量的血清，加入适量的硫酸铵，搅拌均匀；（2）静置一段时间，使球蛋白沉淀；（3）离心分离，收集沉淀；（4）将沉淀溶解于适量的去离子水中，得到球蛋白粗制品。

2. 球蛋白纯化（1）将球蛋白粗制品加入适量的Sephadex G-25凝胶柱中；（2）用去离子水进行洗脱，收集洗脱液；（3）用紫外分光光度计检测洗脱液中的蛋白质含量，确定最佳洗脱条件。

3. 球蛋白纯度鉴定（1）取适量纯化后的球蛋白，进行醋酸纤维素薄膜电泳；（2）用标准蛋白质分子量对照，观察球蛋白的电泳图谱；（3）根据电泳图谱，判断球蛋白的纯度。

五、实验结果与分析1. 球蛋白粗提实验结果显示，通过盐析法从血清中成功提取了球蛋白，沉淀量约为1.2g。

2. 球蛋白纯化实验结果表明，通过凝胶层析法成功纯化了球蛋白，蛋白质纯度达到90%以上。

3. 球蛋白纯度鉴定通过醋酸纤维素薄膜电泳，观察到纯化后的球蛋白在相应位置呈现出明显的条带，与标准蛋白质分子量对照一致，说明球蛋白纯度较高。

六、实验结论1. 本实验成功从血清中提取了球蛋白，并通过盐析法、凝胶层析法等方法进行了纯化；2. 纯化后的球蛋白纯度较高，可用于进一步的研究和应用。

七、实验讨论1. 盐析法是一种简单、有效的球蛋白粗提方法，但纯度较低；2. 凝胶层析法是一种高效、简便的球蛋白纯化方法，但操作较为复杂；3. 醋酸纤维素薄膜电泳法是一种常用的球蛋白纯度鉴定方法，操作简便，结果准确。

血清γ- 球蛋白的分离、纯化与鉴定【目的】1 ．掌握盐析 - 层析法提纯血清γ- 球蛋白的原理和技术。

2 ．熟悉电泳比较法定性γ- 球蛋白的方法。

3 ．了解扫描定量γ- 球蛋白的方法。

【原理】蛋白质的分离、纯化是研究蛋白质化学性质及生物学功能的重要手段。

根据不同蛋白质的分子量、溶解度以及在一定条件下带电荷性状的差异来分离、纯化各种蛋白质。

1 ．γ- 球蛋白的分离、纯化（ 1 ）盐析：清蛋白与球蛋白的稳定性不同，故可用盐析法对血清蛋白质初步分离。

在半饱和硫酸铵溶液中，清蛋白不沉淀，球蛋白沉淀，离心所得的沉淀即是球蛋白混合物。

（ 2 ）脱盐：球蛋白混合物中的硫酸铵会妨碍进一步分离纯化，应除去。

脱盐的方法有多种，本试验采用凝胶过滤。

在凝胶过滤中，柱中的填充料是高度水化的惰性多聚物，最常用的有葡聚糖凝胶（ Sephadex Gel ）和琼脂糖凝胶 (Agarose Gel) 等颗粒。

葡聚糖凝胶是具有不同交联度的网状结构物，它的“ 网眼” 大小可以通过交联剂与葡聚糖的配比来达到。

不同型号的葡聚糖凝胶可用来分离和纯化不同分子大小的物质。

把葡聚糖凝胶装在层析柱中，不同分子大小的蛋白质混合液借助重力通过层析柱时，比“ 网眼” 大的蛋白质分子不能进入网格中，而被排阻在凝胶颗粒之外，随着洗脱剂在凝胶颗粒的外围而流出。

比‘ 网眼 ' 小的分子则进入凝胶颗粒内部。

这样，由于不同大小的分子所经路程距离不同而得到分离。

大分子物质先被洗脱出来，小分子物质后被洗脱出来。

所以含硫酸铵的蛋白值溶液通过层析柱时，先被洗脱出层析柱的是球蛋白，小分子硫酸铵由此法分离除去（参见第 2 篇第 2 章图 2-3 ）。

（ 3 ）纯化：γ- 球蛋白与α 、β- 球蛋白（以及微量的清蛋白），等电点不同，所以采用离子交换层析，从球蛋白混合物中分离、提纯出γ- 球蛋白。

用于蛋白质分离的层析材料多是离子交换纤维素，它们的优点是对蛋白质的交换容量较一般的离子交换树脂大，而且品种较多，可以适用于各种分离目的。

鱼类血清中免疫球蛋白的分离与鉴定鱼类是世界上最重要的经济水生动物之一，其免疫系统的稳定和健康是保障其生长和发展的关键。

其中免疫球蛋白是重要的免疫分子之一，其在鱼类的免疫反应中起着重要的作用。

因此，对鱼类血清中免疫球蛋白的分离和鉴定研究具有重要意义。

一、鱼类血清中免疫球蛋白的种类与结构鱼类血清中的免疫球蛋白主要包括IgM、IgD、IgT等。

其中，IgM是鱼类体内最丰富的免疫球蛋白，同时也是最早被发现的免疫球蛋白。

IgD在鱼类体内数量相对较少，而IgT则是近年来研究的热点之一。

免疫球蛋白的结构与哺乳动物的IgG相似，有两个重链和两个轻链组成。

不同的是，鱼类IgM的中间链是由多个单独的VH和VL组成的，并形成一个聚集体。

此外，鱼类的免疫球蛋白并不是由免疫细胞合成产生，而是由肝脏、脾脏、肠道等多种组织细胞产生。

二、鱼类血清中免疫球蛋白的分离方法常用的鱼类血清中免疫球蛋白的分离方法包括电泳、高效液相色谱和免疫亲和层析等。

在鱼类免疫球蛋白的分离中，电泳是最常用的方法之一。

分离过程中，可通过改变电场或pH值等条件来分离IgM、IgD和IgT等不同形式的免疫球蛋白。

高效液相色谱分离法则是将血清样品通过短柱层析分离，这种方法具有分离效率高、分离线性好等优点。

同时，它也方便后续的免疫学研究。

免疫亲和层析分离法则是利用多肽和抗原结合来选择性地分离出特定的免疫球蛋白。

不过，现在免疫亲和层析技术的应用还不太成熟，需要更多的改进和完善。

三、鱼类血清中免疫球蛋白的鉴定方法鱼类血清中免疫球蛋白的鉴定方法主要包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、西方印迹等。

酶联免疫吸附试验是目前应用最广泛的鱼类血清中免疫球蛋白的检测方法之一。

它利用特异性抗体对免疫球蛋白进行检测，对检测结果的灵敏度和准确性都非常高。

西方印迹法则是通过特异性抗体，可以将鱼类血清中的免疫球蛋白在胶体电泳中分离出来。

然后，将其转移到聚丙烯酰胺凝胶上，并使用特异性抗体进行检测。

一、实验目的1. 掌握血清球蛋白的提取和纯化方法；2. 熟悉盐析法、凝胶层析法等分离纯化技术；3. 了解血清球蛋白的生物学功能和应用。

二、实验原理血清球蛋白是人体免疫系统中的一种重要蛋白质，具有多种生物学功能。

本实验采用盐析法和凝胶层析法对血清球蛋白进行提取和纯化，通过比较纯化前后球蛋白的生物学活性，验证实验结果的可靠性。

三、实验材料1. 血清样本：取健康人血清，低温保存；2. 试剂：硫酸铵、醋酸纤维素薄膜、凝胶层析柱、染色剂等；3. 仪器：离心机、电泳仪、凝胶成像仪等。

四、实验步骤1. 盐析法提取血清球蛋白（1）取一定量血清样本，加入适量的硫酸铵，搅拌均匀；（2）静置沉淀，离心分离，收集沉淀物；（3）将沉淀物溶解于适量的去离子水中，得到初步纯化的血清球蛋白溶液。

2. 凝胶层析法纯化血清球蛋白（1）将凝胶层析柱装满Sephadex G-25凝胶；（2）将初步纯化的血清球蛋白溶液加入凝胶层析柱，收集流出的溶液；（3）收集含有血清球蛋白的洗脱液，进行蛋白浓度测定。

3. 醋酸纤维素薄膜电泳鉴定血清球蛋白纯度（1）制备醋酸纤维素薄膜，将其固定在电泳槽中；（2）取一定量的血清球蛋白溶液，加入适量电泳缓冲液，制成样品；（3）进行电泳，观察血清球蛋白的迁移情况，分析纯度。

五、实验结果与分析1. 盐析法提取血清球蛋白：实验结果表明，通过盐析法可以有效地提取血清球蛋白，提取率约为80%。

2. 凝胶层析法纯化血清球蛋白：实验结果显示，经过凝胶层析法纯化后，血清球蛋白的纯度得到了显著提高，纯度达到90%以上。

3. 醋酸纤维素薄膜电泳鉴定血清球蛋白纯度：电泳结果显示，纯化后的血清球蛋白在醋酸纤维素薄膜上呈现出明显的单一条带，证明纯化效果良好。

六、实验结论本实验采用盐析法和凝胶层析法对血清球蛋白进行了提取和纯化，实验结果表明，该方法能够有效地提高血清球蛋白的纯度，为后续的生物学研究和应用奠定了基础。

七、实验讨论1. 实验过程中，盐析法提取血清球蛋白的效率较高，但纯度相对较低。

第1篇一、实验目的1. 了解血清球蛋白的组成和功能。

2. 掌握血清球蛋白测定的原理和方法。

3. 学习使用醋酸纤维薄膜电泳技术分离血清蛋白质。

4. 分析血清球蛋白含量与疾病的关系。

二、实验原理血清球蛋白是血清中的一种重要蛋白质，主要由五种球蛋白组成，包括α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和M-球蛋白。

它们在生理和病理过程中具有不同的功能，如免疫、运输、调节等。

血清球蛋白的测定通常采用醋酸纤维薄膜电泳技术，该技术利用蛋白质分子在电场中的迁移速度差异进行分离。

根据蛋白质分子大小、电荷和等电点的不同，可以将血清球蛋白分离成不同的区带。

三、实验材料1. 血清样品2. 醋酸纤维薄膜3. 巴比妥-巴比妥钠缓冲液4. 氨基黑染料5. 显微镜6. 电泳槽7. 直流稳压电泳仪四、实验步骤1. 准备醋酸纤维薄膜：将薄膜浸泡在巴比妥-巴比妥钠缓冲液中，使其充分湿润。

2. 点样：将血清样品点在薄膜上，注意控制点样量，避免过多或过少。

3. 电泳：将薄膜放入电泳槽中，加入巴比妥-巴比妥钠缓冲液，连接电源，进行电泳。

4. 染色：电泳完成后，将薄膜取出，浸泡在氨基黑染料中，使其充分染色。

5. 漂洗：将染色后的薄膜取出，用漂洗液进行漂洗，去除未结合的染料。

6. 观察和分析：将薄膜放入显微镜下观察，分析血清球蛋白的分布和含量。

五、实验结果1. 血清球蛋白在醋酸纤维薄膜上分离成五个区带，分别为α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和M-球蛋白。

2. 每个区带的颜色深浅与球蛋白含量呈正相关。

3. 通过与标准曲线比较，可以计算出血清中各球蛋白的含量。

六、实验讨论1. 血清球蛋白含量与疾病的关系：血清球蛋白含量异常可能与多种疾病有关，如感染、炎症、肿瘤、自身免疫性疾病等。

例如，γ-球蛋白升高可能与慢性感染、自身免疫性疾病和肿瘤等疾病有关；α2-球蛋白升高可能与炎症、感染和肝脏疾病等疾病有关。

2. 影响血清球蛋白测定的因素：实验过程中，应严格控制操作条件，如点样量、电泳时间、染色时间等，以减少误差。

生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：第六实验室生物化学与分子生物学实验教学中心一、实验室规则1．实验前应认真预习实验指导，明确实验目的和要求，写出预实验报告。

2．进入实验室必须穿白大衣。

严格遵守实验课纪律，不得无故迟到或早退。

不得高声说话。

严禁拿实验器具开玩笑。

实验室内禁止吸烟、用餐。

3．严格按操作规程进行实验。

实验过程中自己不能解决或决定的问题，切勿盲目处理，应及时请教指导老师。

4．严格按操作规程使用仪器，凡不熟悉操作方法的仪器不得随意动用，对贵重的精密仪器必须先熟知使用方法，才能开始使用；仪器发生故障，应立即关闭电源并报告老师，不得擅自拆修。

5．取用试剂时必须“随开随盖”，“盖随瓶走”，即用毕立即盖好放回原处，切忌“张冠李戴”，避免污染。

6．爱护公物，节约水、电、试剂，遵守损坏仪器报告、登记、赔偿制度。

7．注意水、电、试剂的使用安全。

使用易燃易爆物品时应远离火源。

用试管加热时，管口不准对人。

严防强酸强碱及有毒物质吸入口内或溅到别人身上。

任何时候不得将强酸、强碱、高温、有毒物质抛洒在实验台上。

8．废纸及其它固体废物严禁倒入水槽，应倒到垃圾桶内。

废弃液体如为强酸强碱，必须事先用水稀释，方可倒入水槽内，并放水冲走。

9．以实事求是的科学态度如实记录实验结果，仔细分析，做出客观结论。

实验失败，须认真查找原因，而不能任意涂改实验结果。

实验完毕，认真书写实验报告，按时上交。

10．实验完毕，个人应将试剂、仪器器材摆放整齐，用过的玻璃器皿应刷洗干净归置好，方可离开实验室。

值日生则要认真负责整个实验室的清洁和整理，保持实验整洁卫生。

离开实验室前检查电源、水源和门窗的安全等，并严格执行值日生登记制度。

二、实验报告的基本要求实验报告通过分析总结实验的结果和问题，加深对有关理论和技术的理解与掌握，提高分析、综合、概括问题的能力，同时也是学习撰写研究论文的过程。

1．实验报告应该在专用的生化实验报告本上、按上述格式要求书写。