牛舍环境中大肠杆菌对常用消毒剂耐药性的研究

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消毒剂诱导大肠杆菌质控菌耐药与抗菌药物耐药相关性试验

（南大学动物医学系，庆荣昌４２６）西重０４０
摘要：着消毒剂与抗菌药物的广泛使用，量细菌对消毒剂与抗菌药物产生了耐药性。为了探讨细菌对消毒剂与抗菌随大
药物耐药性之间的相关性，试验通过亚抑菌浓度苯扎溴铵对大肠杆菌质控菌ＡＣ５２本ＴＣ２９２进行体外诱导培养，定诱导前测
浓度依次为２６１８６、２１、、，／５、２、４３、６８４／ｍＩｇ。
每组设阳性对照（菌液对照）阴性对照（液对、药
照）空白对照（汤对照）、肉３个对照，微量移液器用
取１００Ｌ稀释后的菌液，依次加入倍比稀释的含药试管以及菌液对照管中，最终接种菌量为５０使 ×１
药根据苯扎溴铵的ＭＩ配制１２× ＭＩ１Ｃ，／Ｃ、 ×
ＭＩ、 × ＭＩ、４× ＭＩ、 × ＭＩ、６ × ＭＩ、３ × Ｃ２ＣＣ８Ｃ１Ｃ２
收稿日期：０卜Ｏ—２２１４１基金项目：庆市科委科技攻关项目（Ｓ重ＣＴＣ，０１１２）２１ＡＢ０６作者简介：静（９６）女，士生，究方向为兽医药理学与张Ｉ８一，硕研
毒理学， — ｉｑｘ１３ｃｒＥｍａｌｍｌ＠６．ｏ：ｎ

奶牛乳源大肠杆菌耐药性、毒素基因鉴定及PFGE分型研究

奶牛乳源大肠杆菌耐药性、毒素基因鉴定及PFGE分型研究王晓;王新;郝丹;唐晓双;周传丽;王雅春;张胜利;张沅;俞英【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2014(045)003【摘要】通过采集中国北方地区某荷斯坦牛场生产群牛及乳房炎牛197份样品(195份奶样及2份洗布水样),分离出28株大肠杆菌菌株,并进行细菌药敏试验、毒力基因检测及PFGE分型,为牛场防治大肠杆菌型乳房炎提供数据支持.检测28株大肠杆菌对35种抗生素的敏感性发现,兽用临床抗生素庆大霉素和大观霉素应作为该奶牛场大肠杆菌型乳房炎的主要治疗药物.但该牛场出现了对非兽用广谱抗生素麦迪霉素的耐受性菌株,提示牛场在治疗奶牛大肠杆菌型乳房炎时应该注意用药问题.同时,洗布水样分离出的大肠杆菌的多重耐药性较强,也应引起重视,以便及时切断病菌传播途径.基于本研究在28株大肠杆菌中Ecs3703毒力基因的检出率为100％,证实所分离的大肠杆菌为肠出血性大肠杆菌(EHEC)而非肠毒素大肠杆菌(ETEC).细菌毒力基因Irp2和CNF2的检出则暗示携带这两类毒力基因的大肠杆菌极可能为奶牛乳房炎致病菌.【总页数】8页(P463-470)【作者】王晓;王新;郝丹;唐晓双;周传丽;王雅春;张胜利;张沅;俞英【作者单位】中国农业大学动物科技学院,北京100193;西北农林科技大学食品学院,杨凌712100;西北农林科技大学食品学院,杨凌712100;西北农林科技大学食品学院,杨凌712100;中国农业大学动物科技学院,北京100193;中国农业大学动物科技学院,北京100193;中国农业大学动物科技学院,北京100193;中国农业大学动物科技学院,北京100193;中国农业大学动物科技学院,北京100193【正文语种】中文【中图分类】S852.612【相关文献】1.乳房炎奶牛金黄色葡萄球菌毒素基因的检测及PFGE分型研究 [J], 王新;俞英;韦艺媛;张静;周婷;梁珍娟;杨保伟;席美丽;夏效东;孟江洪2.生产群奶牛金黄色葡萄球菌毒素基因检测及PFGE分型研究 [J], 王晓;王新;王雅春;张胜利;张沅;刘超;郝丹;唐晓双;卢振峰3.腹泻犊牛大肠杆菌血清型抗菌药物耐药性耐药基因鉴定及脉冲场凝胶电泳分型[J], 张陆;蒋月;盛鹏飞;张秀英4.猪源耐黏菌素大肠杆菌PFGE分型及耐药性研究 [J], 吴宁鹏;吕小月;于辉;周娟5.新疆牛源产志贺毒素大肠杆菌耐药性及其ESBLs基因鉴定 [J], 佟盼盼;马凯琪;刘争辉;谢金鑫;苏红;王栋;孙雪;高姣姣;苏战强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

某牛场犊牛大肠杆菌病的实验室诊断与药敏试验

某牛场犊牛大肠杆菌病的实验室诊断与药敏试验赫鸣睿【摘要】2018年3月份,黑龙江省齐齐哈尔市某规模化奶牛场发生犊牛腹泻,为了确诊其病因,无菌采取10头腹泻犊牛粪便进行细菌分离鉴定、生化试验、PCR鉴定和药敏试验等.生化结果表明:符合大肠杆菌生化特性;PCR结果表明:引物能有效扩增大肠杆菌OmpA、K99、Sta、irp2、FyuA基因;药敏结果表明:大肠杆菌对恩诺沙星、左氟沙星、头孢曲松高度敏感;10头犊牛均为大肠杆菌感染,本研究为该牛场犊牛腹泻的病因分析和防治提供了指导.【期刊名称】《现代畜牧兽医》【年(卷),期】2019(000)001【总页数】5页(P39-43)【关键词】犊牛腹泻;大肠杆菌;细菌分离鉴定;药敏试验【作者】赫鸣睿【作者单位】黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江大庆 163319【正文语种】中文【中图分类】S855.1+2腹泻是严重威胁犊牛健康的一种疾病，大部分发病犊牛是由于细菌或病毒的感染[1]。

新生犊牛有较高的发病率和死亡率，引起犊牛腹泻的病原体有牛病毒性腹泻病毒、沙门氏菌、大肠杆菌、轮状病毒等[2]。

虽然抗生素对于犊牛腹泻的治疗起着积极作用，但犊牛生活环境才是影响腹泻发生的重要因素[3]。

我国养牛业发展迅速，犊牛腹泻病严重阻滞着牛业生产[4]。

明确引起犊牛腹泻的病因和药物治疗情况对犊牛腹泻的防控具有一定的指导意义[5]。

2018年3月，齐齐哈尔市某牛场多头犊牛出现体温升高、精神沉郁、粪便稀薄呈水样、粪便恶臭等临床症状，笔者对该牛场犊牛腹泻疾病进行了调查，对采集的病料进行了细菌分离鉴定和药敏试验，旨在对发病牛群的犊牛腹泻疾病防控提供指导。

1 试验材料1.1 病料采集在黑龙江省齐齐哈尔市某规模化奶牛场采粪便10份，分别将粪样放入2 mL磷酸盐缓冲溶液（PBS）中，置于4℃冰箱保存。

1.2 培养基与试剂革兰氏染色液，购自安徽省巢湖市弘慈医疗器械有限公司；营养肉汤、营养琼脂、麦康凯琼脂、血液琼脂培养基等，均购自青岛高科园海博生物技术有限公司；生化试验管、药敏片等，均购自杭州滨和微生物试剂有限公司。

大肠杆菌耐药性研究进展

大肠杆菌耐药性研究进展教郁，高维凡，胡彩光(沈阳农业大学，辽宁省沈阳市，110000)摘要：大肠杆菌是典型的革兰氏阴性杆菌，其引起的大肠杆菌病是一种常见疾病，在治疗过程中容易产生耐药性，且耐药谱广，耐药机制复杂，给养鸡业预防和治疗该病带来很大困难。

大肠杆茵对抗生素的耐药问题是当前国内外研究的热点。

本文对大肠杆菌耐药的现状以及产生耐药性机制的研究进行了综述，以便正确理解大肠杆菌耐药性的特点及其规律，从而为防治大肠杆菌耐药性的产生及合理用药提供理论依据。

关键词：大肠杆菌；耐药性；作用机制The research progress on mechanism of Drg-resistance of Escherichia coli Abstract: E.coli is gram-negative bacteria, colibacillosis is a kind of common disease. Escherichia coli strains showed high levels of resistance, resistance spectrum to expand, and multiple drug resistance. The drug resistant gene is complex and diverse. So the prevention and treatment of the disease bring a lot of difficulties. Antibiotic resistance is the current domestic and international research hot spot. The advances on mechanism of resistance and the present situation of E coli resistance are summarized．Thus the trend of the drug-resistance on the E coli resistance can be understood better and the basis for preventing the production of the resistant stains and using drugs reasonablely can be furtherly provided．Keywords: Eescherichia coli; resistance; resistance mechanism致病性大肠杆菌为医学和兽医学临床感染中最常见的病原菌之一。

青海一例犊牛腹泻大肠杆菌分离鉴定与药敏试验讨论

DOI:10.3969/j.issn.1003-1650.2024.15.028为探究青海省犊牛腹泻的优质治疗方案，本次试验依据当地牛养殖场内的犊牛腹泻发病案例，收集患病犊牛新鲜粪便为病料，采取实验室细菌分离法将病料中的大肠杆菌分离出，并明确大肠杆菌的致病性。

同时采取纸片扩散法对提取出的大肠杆菌实施药敏试验，筛选出对大肠杆菌表现敏感的药物。

研究结果表明：在本次病例中共分离出大肠杆菌致病菌株15种，且不同的菌株对药物的敏感性不同。

其中对恩诺沙星、头孢噻呋钠敏感率较高，分别为87%、80%，对链霉素、阿莫西林、四环素耐药性较高，为67%。

因此，建议该养殖户在实施犊牛腹泻治疗时，可使用恩诺沙星及头孢噻呋钠交替轮换治疗，并对发病严重的犊牛群体加以辅助药剂治疗，减少犊牛腹泻治疗的盲目性，以提升治疗效果。

一、青海省犊牛腹泻发生现状青海省作为养殖大省，牛羊养殖为当地牧民的重要经济来源。

在牛养殖期间，犊牛腹泻属于一种较为常见的传染性疾病，致病因较为复杂，通常包含环境因素、饲料因素、自身免疫因素等。

犊牛在出生之后，由于其自身的消化道系统发育不完善，对致病原的抗性差，当养殖环境不良、营养供应不足、初乳不足或无法吃上初乳的情况下，均会导致犊牛的肠胃消化功能异常，较易受各种致病原的侵染，出现腹泻病症。

通过对青海省的犊牛腹泻的发生与流行特征调查，青海省犊牛腹泻发生率逐年提升，且发病后持续周期长，药物治疗效果不佳，并且犊牛腹泻病症在经过治疗后，无法达到痊愈的效果，常表现出周期性、顽固性的传播与流行。

为更好的防治青海省犊牛腹泻疾病，降低其对犊牛养殖的影响，需加强对致病原的研究与调查，并采取致病原分离鉴定、药敏试验，分析出最佳的药物治疗方案，以期能够在犊牛腹泻发病之初，短时间内控制出病情的恶化与传播，减轻其对牛养殖产业的不良影响。

二、犊牛腹泻大肠杆菌病原分离鉴定与药敏试验1、试验材料与方法（1）病情分析在青海省格尔木市的一个肉牛养殖场内，共有牛104头，其中犊牛21头。

某规模化牧场致犊牛腹泻的大肠杆菌分离鉴定及耐药性检测

某规模化牧场致犊牛腹泻的大肠杆菌分离鉴定及耐药性检测曹芳1，魏勇2，吴忧1，赵鹏飞1，陈钊铭2，任静静1，齐亚银11 石河子大学动物科技学院，新疆石河子 8320032 新疆天润科技股份有限公司，新疆乌鲁木齐 830063摘要：[目的]为确定引起石河子某规模化牧场犊牛腹泻的主要病原菌及其耐药情况，并针对犊牛腹泻提出合理应对措施，为该牧场防治犊牛腹泻提供参考。

[方法]本研究采取现场流行病学检查，无菌采集15 份犊牛腹泻病料，对其进行病原菌分离纯化；通过生化试验以及分子生物学鉴定，确定致犊牛腹泻的病原菌；对病原菌进行药敏试验，确定耐药情况。

[结果]经生化试验以及分子生物学鉴定发现，15 份犊牛腹泻病料中，有12 份分离到了大肠杆菌。

药敏试验结果显示，13 株大肠杆菌对链霉素耐药率最高为46.15%（6/13），对青霉素、氨苄西林耐药率为38.46%（5/13），且敏感菌株多为中低敏；对四环素敏感性为76.92%（10/13），13 株菌株对头孢噻肟和万古霉素敏感性最高，为84.62%（11/13），多数菌株为多重耐药菌株。

[结论]本研究针对腹泻犊牛进行病原菌分离鉴定、药敏试验，为该牧场犊牛腹泻诊治提供参考。

关键词：犊牛腹泻；大肠杆菌；分离鉴定；耐药性文章编号：1671-4393（2024）02-0071-05 DOI:10.12377/1671-4393.24.02.140 引言犊牛腹泻俗称犊牛拉稀，一年四季均可发生，是犊牛常发的一种胃肠问题。

多发于2 周龄犊牛，这个阶段的牛抵抗力差，容易受感染。

犊牛患病后，如不及时治疗，其死亡率升高，患腹泻病的牛表现为便稀、呕吐、脱水等症状，治疗不当会影响生基金项目：奶牛信息智能化管理技术研究与示范（编号：NYHXGG，2023AA310）；石河子大学高层次人才科研启动项目（编号：RCZK202042）作者简介：曹芳（1996-），女，山东邹平人，硕士，研究方向为预防兽医学；魏勇（1980-），男，四川内江人，硕士，高级兽医师，研究方向为奶牛健康养殖；吴忧（1999-），女，河南平顶山人，硕士，研究方向为预防兽医学；赵鹏飞（2001-），男，河南安阳人，硕士，研究方向为预防兽医学；陈钊铭（1979-），男，新疆阿克苏人，本科，研究方向为奶牛疾病诊断及防控；任静静（1990-），女，河南长垣人，博士，讲师，研究方向为动物细菌性疾病诊断与防治；齐亚银（1980-），男，宁夏固原人，博士，教授，研究方向为预防兽医学。

携带耐药基因的大肠杆菌对消毒剂抗力研究

携带耐药基因的大肠杆菌对消毒剂抗力研究吴晓松;谈智;陈越英;戎毅;王晓蕾;沈元;孙俊;徐燕【期刊名称】《中国消毒学杂志》【年(卷),期】2007(24)6【摘要】目的研究临床分离的大肠杆菌耐消毒剂基因携带情况及其对消毒剂抗力水平。

方法采用PCR检测法与肉汤稀释法对临床分离大肠杆菌耐药基因和对消毒剂的最小抑菌浓度进行检测,同时与消毒试验标准菌株作平行比较。

结果临床分离的7株大肠杆菌中,有4株耐药基因qacE△1-sulIPCR扩增阳性;该7株大肠杆菌基因qacA/B均为阴性。

醋酸氯己定对7株大肠杆菌的最小抑菌浓度为1-2mg/L,对大肠杆菌标准株为2mg/L。

对氯间二甲苯酚对7株临床分离大肠杆菌与标准株的最小抑菌浓度均为156mg/L。

苯扎溴铵对7株大肠杆菌的最小抑菌浓度为19.5mg/L,与标准菌株相同。

聚维酮碘和聚醇醚碘对7株临床分离大肠杆菌的最小抑菌浓度分别为1000mg/L与500mg/L,与标准株相同。

结论临床分离大肠杆菌多数存在耐药基因,其对常用消毒剂的抗力与标准菌株相当。

【总页数】3页(P533-535)【关键词】大肠杆菌;消毒剂;耐药基因;最小抑菌浓度【作者】吴晓松;谈智;陈越英;戎毅;王晓蕾;沈元;孙俊;徐燕【作者单位】江苏省疾病预防控制中心;无锡市疾病预防控制中心【正文语种】中文【中图分类】R187.2【相关文献】1.大肠杆菌O157:H7对消毒剂抗力与质粒pO157关系的研究 [J], 张本;刘衡川;张朝武;李灶平2.大肠杆菌O157:H7对消毒剂抗力与其质粒pO157、染色体DNA关系的研究[J], 张本;刘衡川;张媛;李福平;涂国平3.两株大肠杆菌对消毒剂及冷热抗力的试验比较 [J], 刘秀岩;孙守红;李新武;张流波;袁洽劻4.连续消毒中大肠杆菌O157:H7对消毒剂抗力的变化及其与质粒关系的研究 [J], 张本;刘衡川;张朝武;殷强仲;叶酶君;余倩5.连续消毒中大肠杆菌O157:H7对消毒剂抗力变化与DNA关系的研究 [J], 张本;张媛;刘衡川;张朝武;涂国平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

三种消毒剂对育肥牛场圈舍消毒效果评价

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(C ol l ege o f A gri cul t ure & A n i m al H us b an d ry ， Qi n ghai U ni v ers i ty ， Xi ni ng 810016， C hi na) A : To e v al uat e the inhib i to ry ef f ect o f84 d is i nf ectan t ，s tro ng d i s i nf ecti o n an d 1 +1 d is i nf ectant ，w e rand o m l y s el ected three s hed s f ro m o n e o f cattl e an d s he ep f ee dl ot i n H uangz ho ng. The Es cheri chi a co l i an d Stap hyl o co ccusaureuswere s el ected f o r t arget b ac teri a. Each s hed w ere s am p le d and co un ted co l o ny b ef o re an d af ter d i s inf ecti ng. The res ul tss ho w ed that the d i s i nf ec ti o n ef f ect o f84 d i s inf ectant w as b es t， s tro n g d i s inf ecti o n w as go o d ， 1 +1 d is i nf ectant w aswo rs t. The p o l l uti o n o fthe three s hed si ss eri o us ，m i cro o r gan i s m s catego ri es are v ar i o us ，c o m p rehen s i v e the ef f ect o fthree k i nd sd i s i nf ectant ，s ugges ti on f o r the f arm er us e 84 d i s i nf ectant and us eo f di f f erent d i s i nf ectantsat i n ter v al sto red uce m i cr ob i alto l erated . K ef f ect 随着我国养殖业规模化 � 集约化的发展，日常预防性消毒工作越来越受到重视 � 为了预防传染病的发生，各养殖场常用消毒剂对家畜的生存环境 � 繁育环境以及使用的设备和饮水进行消毒

牛细菌性腹泻病原的分离鉴定与耐药性分析

摘要：为了解新疆维吾尔自治区阿克苏地区新和县规模化养殖场及散养户中不同阶段的牛细菌性腹泻病原菌的分布情况及耐药性情况。

对2020—2021年采集新疆维吾尔自治区阿克苏地区新和县规模化养殖场及散养户中不同阶段的患腹泻牛粪便、肛拭子及内脏病料358份，采用细菌分离鉴定、形态学观察、生化鉴定等方法对大肠杆菌、沙门菌、奇异变形杆菌、空肠弯曲杆菌等细菌性病原菌进行分离鉴定，采用K-B 药敏纸片法检测临床分离菌株对临床中常用的药物耐药情况。

结果显示：从358份病料样品中分离到大肠杆菌62株、沙门菌52株、空肠弯曲杆菌29株、奇异变形杆菌28株，检出率分别为17.3%、14.5%、8.1%、7.8%；分离的菌株对临床中常用的药物产生不同的耐药性，其中大肠杆菌、沙门菌、空肠弯曲杆菌及奇异变形杆菌均对头孢噻呋、头孢喹肟、氟苯尼考、恩诺沙星、环丙沙星、林可霉素、硫酸黏菌素等药物敏感，对其他药物耐药。

为该牛细菌性腹泻病防治及合理指导临床用药提供参考。

关键词：仔猪；细菌性腹泻；分离鉴定；耐药性牛细菌性腹泻病原的分离鉴定与耐药性分析热娜古丽·依明（新和县畜牧技术推广中心新疆阿克苏842100）收稿日期：2023-04-04作者简介：热娜古丽·依明（1986.10—），女，维吾尔族，新疆新和人，本科，兽医师，研究方向：畜牧。

近几年，随着我国养牛业的发展，其奶牛和肉牛的养殖数量呈现逐年升高的趋势，河北、陕西、内蒙古、新疆等许多地区奶牛和肉牛的养殖数量较大，已经形成集约化、规模化的养殖模式[1-2]。

在牛养殖过程中，牛腹泻病是成为临床中重要的及常见的疾病之一，经过统计在规模化牛场及散养牛场中不同阶段的腹泻性疾病发病率一直有增无减，引起腹泻的因素复杂，各个阶段牛容易感染，尤其是犊牛的死亡率较高，该病严重影响着养牛业的健康发展，对养牛业造成严重的经济损失[3-5]。

相关研究表明，引起规模化养殖场及散养户中不同阶段的牛腹泻病的病因有许多，主要包括传染性因素和非传染性因素，其中传染性因素有病毒、细菌、寄生虫等，非传染性因素有养殖环境卫生、饲养管理方式及外界环境应激等，其中细菌是引起牛腹泻为最常见的因素之一[6-8]。

牛肠道大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

牛肠道大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析郑启铭;梁纤纤;李晓卓;李月;刘文锴;韩翔舒;冯继红;翟少华;夏俊【期刊名称】《草食家畜》【年(卷),期】2024()1【摘要】【目的】新疆昌吉市周边某牛场大量犊牛严重腹泻,排黄色水样稀便,有的带血,并出现精神萎靡、食欲不振等症状,为确定此次发病的病原并提供治疗参考。

【方法】通过对该牛场出现的犊牛腹泻粪样进行细菌鉴定及分型并进行耐药性分析。

【结果】PCR鉴定结果显示为大肠杆菌阳性,染色镜检结果符合大肠杆菌形态特征,分离菌株具有K99黏附性基因。

药敏试验结果显示该分离菌株仅对多黏菌素B中介(既不敏感也不耐药),对其他所有受试抗菌药物耐药。

在致病性试验中,小鼠在15 h内陆续死亡,说明该菌株具有一定致病力。

【结论】结果表明,该牛场犊牛腹泻粪便中分离的菌株为产肠毒素性大肠杆菌,携带K99毒力基因,对多黏菌素B中介,具有一定致病力。

【总页数】6页(P31-36)【作者】郑启铭;梁纤纤;李晓卓;李月;刘文锴;韩翔舒;冯继红;翟少华;夏俊【作者单位】新疆农业大学动物医学学院;新疆草食动物新药研究与创制自治区重点实验室;新疆畜牧科学院兽医研究所/新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心;农业农村部草食动物疫病防控重点实验室(省部共建);石河子大学动物科技学院;新疆维吾尔自治区呼图壁县农业农村局【正文语种】中文【中图分类】S858.23【相关文献】1.大熊猫肠道大肠杆菌的分离、鉴定及其耐药性分析2.鹿源肠道致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析3.鸡肠道大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析4.腹泻仔猪肠道大肠杆菌分离鉴定与毒力基因及耐药性分析5.牛源大肠杆菌的分离鉴定与耐药性分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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圜　卞国　ｊ！｝２０１８·２　ＤＡＩ　ＲＹ　ＨＥＡＩ　ｒＨ　牛舍潲中大肠杆菌对常用消舒　性的硼究　张国礼’，马高民’，金兰梅　，徐云迪　，朱彬　（１．南京卫岗奶业集团奶源公司，南京　２１００９５；２．金陵科技学院动物科学与技术学院，　南京２１　００３８）　

中图分类号：Ｓ８５８．２３文献标识码：Ａ文章编号：１００４—４２６４（２０１８）０２—００３２—０５　ＤＯＩ：１　０．１　９３０５／ｊ．ｃｎｋｉ．１　１－３００９／ｓ．２０１　８．０２．００９　摘要：为了研究规模化奶牛养殖场痉气环境中大肠杆菌对消毒药的耐药性，本试验利用沉降法采集牛舍空　气中的细菌样本，应用常规的微生物检验法进行大肠杆菌的分离培养，采用试管稀释法稀释消毒剂对致病性　强的大肠杆菌进行敏感性试验。结果显示：从奶牛场空气环境中共分离出３０株大肠杆菌，１５株具有致病性；　血清型鉴定得出ｏ　型７株、ｏ　和ｏ　型各３株、ｏ　型２株，其中ｏ　型为优势血清型。应用菌毒双杀季铵盐络　合碘溶液、癸甲溴铵溶液和聚维酮碘溶液对其进行耐药性试验，数据显示，癸甲溴铵溶液稀释浓度为１：２０００　时，对大肠杆菌具有较好的抑制效果，１：１５００的稀释浓度下５ｒａｉｎ内可以杀灭；季铵盐络合碘溶液稀释到１：３００　时才有杀灭作用；聚维酮碘溶液的原液没有杀灭作用。结果表明，此牛场空气环境中的大肠杆菌对季铵盐络　合碘溶液和聚维酮碘溶液已经产生耐药性。　关键词：牛舍环境；大肠杆菌；消毒效果　

空气环境中的致病微生物会对人类和家畜的生理状　态和生产性能产生不利影响，还可能导致气源性传染病　的发生…。我国奶牛的规模化养殖比例已超５Ｏ％。高密　度的人工封闭环境给牛场疾病的预防及治疗带来了诸多　困难。空气中少量大肠杆菌的存在不会对奶牛的健康造　成影响，但大肠杆菌含量一旦超标，则可能导致奶牛乳　房炎的发生，给牧场造成巨大损失＿２－　。犊牛大肠杆菌　病也是由大肠杆菌引起的，主要表现为肠炎或败血症，　是新生犊牛死亡的主要原因。另外，奶牛四大疾病（乳　房炎、不孕症、腐蹄病和营养代谢病＿４　）中，除代谢病　收稿日期：２０１７—０４—１６　作者简介：张国礼（１９７６一），男，江苏南京人，执业兽医师，主要从　事奶牛疾病防治方面的工作。　通讯作者：金兰梅（１９５６一），女，江苏泗洪人，教授，主要从事动物　疾病防治方面的研究工作。　Ｉ　３２　外，其他三种疾病均由细菌引起。因此，选用有效的消　毒剂对环境中细菌进行杀灭具有重要意义。　目前，由于消毒剂的大量滥用，许多细菌对消毒剂　产生了耐药性。据班海群　艮道，当长期使用低浓度的　消毒剂作用细菌时，细菌的基因突变率会增加，引起消　毒剂靶位的改变、外排泵系统下调、膜孔蛋白流失，使　细菌对消毒剂产生耐药性。许多学者已经做了关于细菌　对消毒剂耐药性的研究，如郭莉娟【６　等研究表明，大肠　杆菌及肺炎克雷伯氏菌已经对季铵盐类消毒剂产生了　

一定的耐药性。本试验对牛舍空气中细菌进行分离鉴　定，并且针对牛舍中大肠杆菌对３种常用消毒剂的耐药　性进行了研究，以便寻求出牛舍中最有效的消毒剂及　其最佳消毒浓度，为预防和控制奶牛场疾病提供科学　依据。　１材料与方法　１　１　主ｊ娶试刹　试剂：营养琼脂（ＮＡ），麦康凯琼脂（ＭＡＣ），　伊红美兰琼脂（ＥＭＢ），增菌肉汤（ＬＢ增菌液），ＰＢＳ　中和剂（３％吐温８０）。生化鉴定所用肠杆菌科属细菌　微量发酵管（杭州滨和微生物试剂有限公司，批号为　１　５０４０９）；空白敏试纸片（杭州滨和微生物试剂有限　公司赠送）。　消毒剂：菌毒双杀季铵盐络合碘（武汉和田生　物科技有限公司生产，批号为１　５０８Ｏ２）；聚维酮　碘溶液（四川天定生物科技有限公司生产，批号为　１５０８０１】：癸甲溴铵溶液（上海派斯德生化有限公司　生产。批号为１５０７０１）。　ｌ　２　试　５佥仪：　ＳＷ—ＣＪ一２ＦＤ型净化工作台（苏州净化设备公　司）；ＬＲＨ一５０型一恒温恒湿培养箱（广州医疗器械　厂）；灭菌锅（上海博迅实业公司）；ＤＨＧ一９２４０Ａ型　电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备公司）；可调　移液器【德国Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）；水浴锅等。　１．．　试验动物　普通实验小鼠，体重为１６～２４ｇ。　ｌ　４试验设计　１．４．１　样本采集　选择南京卫岗乳业有限公司某奶牛场，分别在产　房、犊牛舍、２个成年母牛舍、青年牛舍内和运动场采　集样本，环境空气取样参照中华人民共和国国家标准　“公共场所空气微生物检验方法”的细菌总数测定中的　自然沉降法　。在每个牛舍由东向西依次取５个点，每　个位点放置２个培养基（麦康凯及琼脂培养基）。将两　种平皿置于离地面高度１－２ｍ处，将平皿盖打开暴露于空　气中１　５ｍｉｎ，盖好平皿盖，记录位置。然后将平皿尽快　送达实验室，在３７℃恒温箱中培养４８ｈ。　１．４．２病原茵分离　取营养琼脂上边缘整齐、形状为圆形、表面带有光　泽、光滑、颜色为灰白色的菌落，加入到营养肉汤中，　置于３７℃培养箱中培养２４ｈ，然后将营养肉汤培养得到　的细菌接种于营养琼脂培养基中，继续在３７￣Ｃ培养箱中　培养１８～２２ｈ。之后挑取单个圆形凸起、光滑、湿润、　卞圈　才２０１８·２　Ｉ）ＡＩＲＹ　ＨＥＡ【　Ｈ　ｌ　奶牛　保健一　半透明、灰白色菌落接种于麦康凯培养基中，再放入　３７。ｃ培养箱中培养２４ｈ。选择典型红色菌落进行革兰氏　染色，初步判定为大肠杆菌。用接种环挑取红色菌落接　种于伊红美兰培养基中，置３７℃培养箱中培养２４ｈ。然　后选取带金属光泽的黑色菌落接种到营养肉汤中，放入　３７℃摇床中１５０ｒ／ｍｉｎ进行纯化培养６～１２ｈ，其问不断做　菌液镜检计数，当含菌量达到１　Ｘ　１０　ＣＦＵ／ｍＬ时。放人　４０（３冰箱保存备用。　１．４．３病原菌生化鉴定　将上述普通琼脂基中培养的细菌茵落分别接种于含　葡萄糖、乳糖、卫矛醇、苯丙氨酸、尿素、赖氨酸、鸟　氨酸、硫化氢、蛋白胨水、西蒙氏枸橼酸盐生化试剂管　内，置于３７℃培养箱中培养２４ｈ后再取出观察其生化反　应，记录结果。　１．４．４血清型鉴定　将病原茵放在斜面的试管琼脂培养基中培养，用石　碳酸（５％苯酚）冲洗，高压２ｈ，做成抗原。取大肠杆　菌抗体与抗原混合，观察抗原抗体有无凝集或者浑浊现　象，以确定其血清型　ｊ。　１．４．５动物致病性试验　取大肠杆菌肉汤培养物（含菌量为１　Ｘ　１　０７ＣＦＵ／ｍＬ），　腹腔注射小鼠，每只注射０．３ｍＬ，３个重复，对照组分　别注射相同剂量的生理盐水，定时观察小鼠的发病和死　亡情况。对死亡的小鼠进行剖检，观察其病变状态，并　取其病料进行涂片、染色、镜检，接种到对应的培养基　中进行２４ｈ分离培养，得到与注射菌液相同的大肠杆菌　菌株。未发病的持续观察１周。　１．４．６细菌对消毒剂敏感性的测定　采用滤纸片法测定细菌对消毒剂的敏感性＿ｇＪ，选择　聚维酮碘溶液、季铵盐络合碘消毒液、癸甲溴铵溶液　３种常用的消毒药，按照厂家生产说明书稀释成不同的　浓度（表１）。再分别取１　ｍＬ消毒液分别装入对应标记　的青霉素小瓶中，放入５０片无菌的空白纸片２ｈ。再用纸　密封瓶口，置于３７℃培养箱中进行烘干备用。　将致病性强的菌株在肉汤中３７ｏＣ恒温培养２４ｈ，再　分别涂于普通营养琼脂上，用干净镊子夹取纸片贴在琼　脂培养基的上面，在３７℃恒温箱中培养２４ｈ后取出，测　量每个培养皿中抑菌圈的大小，按抑茵圈直径作为判定　敏感性的标准，每个菌株均做３个重复试验，最后取其　

３３　Ｉ　奶牛】ｌ保健１　ｌ——————　平均值。　消蝴　聚维酮碘　

中国　斗２０１８·２　ＤＡ１　ＲＹ　ＨＥＡ１　Ｈ　

表１不同消毒剂的稀释倍数　１：５０　１：１００　１：２００　１：３００　１：４００　１：５００　１：６００　１：８００　１：１０００　霪　１－ｚｏｏ　…５ｏ０　０ｏ　ｍ００¨ｚＯ０　１：１５００　：２０。。　

癸甲溴铵１：５００　１：８００　１：１０００　１：１２００　１：１５００　１：２０００　１：２５００　１：３０００　１：３５００　１．４．７最ｓＪ＼；ｔｌ：ｐ菌浓度试验　根据药敏试验结果，将３种不同的消毒剂按６种　不同浓度进行稀释，聚维酮碘为１：１、１：２０、１：４０、　１：６０、１：８０、１：１Ｏ０，季铵盐碘络合物为１：５０、１：１Ｏ０、　１：１　５０、１：２００、１：２５０、１：３００，癸甲溴铵为１：５００、　１：８００、１：１０００、１：１５００、１：２０００、１：２５００。按以上浓　度取消毒剂稀释后的溶液２ｍＬ和等量的两倍浓度的营养　肉汤进行混合。再取０．１　ｍＬ菌悬液与ＬＢ溶液接种到各　试管中，每株细菌都进行３次重复，在３７ｏＣ　１９温箱中培　养。４８ｈ后观察其抑菌的效果，如果发现肉汤出现浑浊　（有的甚至可见菌膜或菌环），记为＋，说明有细菌生　长。当看见肉汤澄清透明、没有浑浊，记为一，说明没　有细菌生长。能够抑制细菌生长的最高稀释倍数就是此　消毒剂对本次试验菌最低的抑菌浓度。　１．４．８消毒剂最小杀菌浓度的测定¨。。　分别取不同浓度的３种消毒剂各２ｍＬ与Ｏ　１　ｍＬ菌液　混合，在５ｍｉｎ、１０ｍｉｎ、３０ｍｉｎ和６０ｍｉｎ时分别取出　Ｏ．１　ｍ　Ｌ的样本接种到有中和剂的营养肉汤当中，重　复３次试验，在３７ｏＣ培养箱中培养４８ｈ，观察其中的结　果，将没有细菌生长繁殖的最高稀释倍数作为该消毒剂　在这个时间段对试验菌的最小杀菌浓度。　

２结果与分析　２．１　细菌分离鉴定结果　本次试验共采集了９０个样本，分离出４５个菌株，　革兰氏染色后镜下观察其形态，初步判定为大肠杆菌的　有３５株，在伊红美蓝培养基上生长出带金属光泽的菌株　有２５株；经生化鉴定。确认１５株为大肠杆菌，其中３株　来源于产房舍，６株来源于犊牛舍，３株来源于成年母牛　舍，２株来源于青年牛合。１株来源于舍外点。对１　５株大　肠杆菌进行血清型鉴定，其中０　。型７株、０　和Ｏ　型各　有３株、Ｏ。　型有２株，Ｏ　。型为优势血清型。　

Ｉ３．　

表２　的敏感性　单位：ｍｍ　１　２　３　４　５　６　７　８　９　１０　１：１００　８　８　８　７　７　７　８　７　７　８　１：２００　８　８　７　６　８　７　６　８　７　７　１：３００　８　７　７　７　７　７　７　７　７　７　季铵１：５００　７　７　６　７　７　７　６　６　６　７　盐络１：８００　６　６　７　６　６　６　６　６　６　６　合碘１：１０００　６　６　６　６　６　６　６　６　６　６　

１：１２００　６　６　６　６　６　６　６　６　６　６　１：１５００　６　６　６　６　６　６　６　６　６　６　１：２０００　６　６　６　６　１｜５Ｏ　８　８　８　７　１：１ｏｏ　８　８　７　６　１：２ｏｏ　８　７　７　７　１：３ＯＯ　７　７　６　７　１：４００　６　６　６　７　１：５ｏ０　６　６　６　６　１：６ｏｏ　６　６　６　６　１－黜６　６　６　６　１：１０ｏ０　６　６　６　６　１：５００　２２　２３　２３　２２　１：８０Ｕ　Ｚｌ　２２　Ｚ２　ｌ　ＺＩ　ＺＩ　Ｚ　ｌ　１：１０００　２０　２１　２０　２１　２０　２１　２１　２２　２３　２２　１：１２００　２１　２０　２１　１９　２１　２Ｏ　２０　２０　２２　２１　１：１５００　２１　２２　２１　１９　２０　２１　２０　２１　２０　２１　１：２０００　２０　２１　２０　２０　２１　２０　１９　２０　２１　２２　１：２５００　１８　１９　１８　１７　１６　１６　１８　１８　２０　１７　１：３０００　１２　１３　１５　１３　１４　１２　１３　１４　１２　１１　１：３５００　１０　１１　１２　１３　１１　１３　１２　１１　１１　１０　