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医学免疫学实验课件实验-溶血实验
医学免疫学实验课件实验-溶血实验
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多克隆抗体(polyclonal antibody,pcAb)
天然抗原刺激 多种B淋巴细胞克 隆产生的多种抗 体的混合物。
免疫血清的制备流程
一、免疫动物的选择 二、免疫程序 三、动物采血法 四、抗血清的鉴定 五、抗血清的纯化、保存
一、免疫动物的选择
抗原来源与动物种属的关系
种属差异越远,免疫原性越强
2.皮下接种
将小量药液注入皮下组织的方法。 目的 (1)需迅速达到药效、不宜经口服给药时采用; (2)预防接种。 部位:后背及大腿外侧方
2.皮下接种
操作方法 (1)消毒皮肤待干,左手绷紧皮肤,右手持注射 器,食指固定针栓,针头斜面向上和皮肤呈30度到40 度角,迅速刺入针头的三分之二,放开左手固定针栓, 抽吸无回血,即可推注药液。 (2)注射完毕,消毒棉签轻按针刺处,快速拔针。
各种注射的进针深度
材料分配
1.补体参与的溶血反应 (操作,2人/组)
2.免疫血清的制备与鉴定 (操作,6人/组)
完全溶血
不溶血
实验四 免疫血清的制备
【原理】 将适当的抗原物质注入动物体内,经过一定
时间,动物血清中可出现大量特异性抗体,这种 含抗体的血清称为免疫血清(多克隆抗体)。
优质免疫血清的产生,主要取决于抗原的纯 度和免疫原性,以及动物应答的能力。此外,尚 需考虑免疫途径、抗原剂量、注射次数、时间间 隔、有无佐剂等因素。
将小量药液注入表皮与真皮之间的方法。 目的 (1)用于各种药物过敏试验,以观察局部反应; (2)预防接种。 部位:后背及大腿外侧方
1.皮内接种
操作方法 (1)消毒皮肤待干,左手绷紧皮肤,右手持注射 器,使针头斜面向上,和皮肤呈5度至15度刺入皮内。 (2)待针头斜面进入皮内后,放平注射器,注入 药液0.1ml, 药量要准确,使局部形成一圆形隆起的 皮丘,皮肤变白,毛孔变大。 (3)注射完毕,迅速拔出针头,切勿按揉。
第7天 ห้องสมุดไป่ตู้12天 第15天
皮内
静脉
静脉
全血 20%悬液 20%悬液
2.0 1.0
2.0
材料:
1.动物 家兔、绵羊。 2.试剂 Alsever’s液、生理盐水、佐剂。 3.器材 注射器、碘酒、酒精、毛细滴管。
常用免疫接种技术
1. 皮内接种 2. 皮下接种 3. 腹腔接种 4. 耳缘静脉接种
1.皮内接种
实验内容
实验三 补体参与的溶血反应 实验四 免疫血清的制备
目的要求
1.掌握补体溶血反应原理。 2.熟悉溶血反应操作、结果观察,免疫血清制 备原理,操作过程及应用。 3.了解补体CH50的测定。
实验三 补体参与的溶血反应
【原理】 山羊红细胞抗原与其相应抗体(溶血素)
结合后,通过经典途径激活补体,产生膜攻击作 用,最后导致红细胞溶解,发生溶血反应。
原理:
Ag + Ab
经典激活途径
补体活化
裂解
材料:
1. 2%绵羊红细胞 2. 溶血素 3. 补体:豚鼠血清 4. NS 5. 试管、吸管、水浴箱等。
方法:
1.取试管四支,编号,按下表加入各物。 2.37℃水浴30min,判定结果。
0.25 0.5 0.5 0.75
结果:
1.管内液体透明呈红色为溶血。 2.管内液体浑浊呈浅红色为不溶血。 3.根据所学知识分析各管结果出现的原因
动物个体的选择
适龄、健康、体重符合要求
抗原的性质
二、免疫程序
免疫原的剂量 免疫间隔时间 免疫途径
皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结
三、动物采血法
颈动脉采血法 家兔、绵羊、山羊 心脏采血法 家兔、豚鼠、大鼠、鸡 静脉采血法 家兔、山羊、绵羊
四、抗血清的鉴定
抗体特异性的鉴定 双向免疫扩散法 抗体效价的鉴定 凝集试验 、双向免疫扩散试验 抗体亲合力的鉴定 抗体纯度的鉴定
五、抗血清的纯化、保存
纯化目的是除去这些不相关成分,防止抗 血清中其他杂抗体干扰试验结果。 2℃~8℃保存:短期保存 冰冻保存:保存5年 真空干燥保存:保存5~10年
例:兔抗羊红细胞抗血清 (溶血素)的制备
日期(天) 第1天 第3天
途径
皮内 皮内
抗原
全血 全血
剂量(ml) 0.5 1.0
第5天 皮内 全血 1.5
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