医学免疫学实验共47页

实验一人外周血单个核细胞分离（4学时）（一）实验目的1．掌握人外周血单个核细胞分离的原理及操作方法；（二）实验原理密度梯度离心法。

淋巴细胞与单核细胞的比重为 1.075～1.090，而红细胞与分叶核白细胞的比重为1.092。

淋巴细胞分离液的比重为1.077±0.001，与淋巴细胞比重相同，而红细胞较之为重，通过离心，即可将淋巴细胞分离出来。

（三）实验材料①肝素抗凝静脉血；②Ficoll淋巴细胞分离液（密度为1.077±0.001）；③D-Hanks液；④0.4%的台盼蓝染液；⑤器材：离心机、恒温水浴箱、显微镜、细胞计数板等。

（四）实验方法①抽取抗凝血2ml，与等量D-Hanks液混匀；②取分离液2ml，缓慢加入释血液4ml；③2000 rpm离心20 min，观察细胞分层情况；④取出PBMC，用4倍量D-Hanks液洗涤2次，每次1500 rpm离心10 min；④用10%FCS的Hanks液还原体积至1 ml，取样镜检计数；⑤细胞存活率测定：取一个1.5ml EP管，加入等量的细胞悬液与台盼蓝染液，混匀后静置5min，镜检；⑥注意事项。

（五）实验结果①PBMC的计数= xxx 个/ ml；②细胞存活率=实验二淋巴细胞检测（4学时）（一）实验目的1．掌握免疫组化技术的原理、方法、结果判断及实际应用；2．熟悉E花环形成试验和淋巴细胞转化试验的原理及结果判断。

（二）实验内容1．酶免疫组化技术测定CD3+T细胞数量（操作）（1）原理酶免疫组织化学技术是以细胞涂片或组织切片为检测对象，应用酶免疫技术对特定细胞表面抗原进行显色，通过普通光学显微镜观察，判断细胞表面有无特异抗原的表达。

本实验采用鼠抗人CD3单克隆抗体，与待检T细胞表面CD3分子结合，加入二抗，即聚合辣根过氧化物酶（HRP）标记抗小鼠IgG，通过HRP催化底物显色判断CD3分子的存在，从而确定T细胞。

（2）材料①人外周血单个核细胞悬液；②鼠抗人CD3单抗（武汉博士德）；③两步法免疫组化检测试剂盒（武汉博士德）；④ DAB显色试剂盒（武汉博士德）；⑤ 0.01M PBS（PH 7.4）；⑥器材：2 ml EP管、吸附载玻片、微量移液器、恒温水浴箱、光学显微镜等。

［实验名称］:沉淀反应 ［实验目的］:通过单向琼脂扩散测定待测血清Ig 含量［实验材料］: 打孔器(1)将溶解后的离子琼脂冷却到4 5 °C ，加入适当浓度的抗原混 合均匀，吸取3—4毫升加在载玻片上，使其均匀布满载玻片 而又不流失。

(2) 琼脂凝固后制成凝胶板，然后隔适当距离打孔。

(3) 在孔内滴加待测可溶性抗体。

(4) 将凝胶平板放入带盖瓷盘中，下面垫一湿纱布以保持湿度，置 于37 °0恒温箱中2 4小时，观察沉淀环。

单向琼脂扩散是一种定量试验，主要用来测定标本中各种免疫球蛋白或补体成分的含量。

在孔中加入待测抗体使其向四周扩散，经一定时间后抗体与琼脂中抗原相遇，在比例适宜处生成白色沉淀环。

沉淀环直径与抗体浓度成正比。

根据测试样品沉淀环直径的大小，可从已知的标准曲线中查出样品中抗体的含量。

实验二［实验名称］:间接凝集抑制试验（妊娠试验）［实验目的］:测定待检尿液中是否含HCG （绒毛膜促性腺激素）以诊断妊娠［实验材料］:孕妇尿液、非孕妇尿液、HCG 致敏乳胶抗原、抗HCG 血清、载实验一1%离子琼脂、白喉类毒素、白喉抗毒素、载玻片、毛细吸管［试验步骤］: ［实验结果］: (沉淀环直径) 测量沉淀环直径:毫米［实验分析］玻片等［试验步骤］:（1）取一片载玻片，标记出左右。

（2）在载玻片左侧加一滴待检尿液，右侧加一滴非孕妇尿液。

（3）在两侧尿液中分别加一滴抗HCG血清，摇动混匀2 —3分钟。

（4）在两侧液滴中分别再加一滴HCG致敏乳胶抗原，摇动混匀2 — 3分钟。

（5）观察判定结果。

［实验结果］:（凝集和非凝集的描述）左侧（待检尿液侧）呈现均匀的乳状液状态，无凝集颗粒。

间接凝集抑制阳性。

右测（非孕妇尿液侧）出现明显的凝集颗粒。

间接凝集抑制阴性。

［实验分析］:（结合实验原理）孕妇尿液中的HCG含量显著增高。

尿液中的HCG与加入的抗HCG结合, 抗HCG被消耗，使得加入的HCG乳胶抗原不能再与抗HCG结合，不出现乳胶抗原间接凝集反应（凝集被抑制），所以液滴呈现均匀乳状液，为乳胶间接凝集抑制阳性反应。

医学免疫学实验报告免疫学实验报告引言：免疫学是研究人体免疫系统的科学，通过实验研究可以更好地了解免疫系统的功能和应对机制。

本次实验旨在探究免疫系统对外来抗原的应答过程，并评估免疫细胞的活性和效能。

实验材料与方法：1. 实验动物：使用小鼠作为实验对象，因其免疫系统与人类相似度较高。

2. 抗原制备：选择一种常见的抗原，如牛血清白蛋白（BSA），通过纯化和浓缩得到高纯度的抗原溶液。

3. 免疫程序：将小鼠随机分为实验组和对照组，实验组注射抗原溶液，对照组注射生理盐水。

观察并记录两组小鼠的免疫应答情况。

4. 免疫指标测定：采集小鼠血液样本，使用酶联免疫吸附试验（ELISA）等技术测定血清中特定免疫球蛋白（如IgG、IgM）的水平。

实验结果与讨论：1. 免疫应答：实验组小鼠在注射抗原后，免疫系统迅速启动，产生针对抗原的特异性免疫应答。

对照组小鼠未注射抗原，免疫系统无明显应答。

2. 抗原特异性免疫球蛋白：ELISA结果显示，实验组小鼠血清中特定抗原特异性免疫球蛋白（如IgG）的水平显著升高，而对照组无明显变化。

这表明实验组小鼠的免疫系统成功识别并产生了针对抗原的免疫应答。

3. 免疫细胞活性：通过流式细胞术等技术，观察并比较实验组和对照组小鼠免疫细胞的活性。

实验结果显示，实验组小鼠的免疫细胞活性较高，表明其免疫系统对抗原的识别和攻击能力增强。

4. 免疫记忆效应：在实验组小鼠中，注射抗原后，免疫系统形成了对抗原的记忆效应。

再次注射相同抗原时，免疫应答更为迅速和强烈。

而对照组小鼠未形成明显的免疫记忆效应。

结论：本次实验结果表明，免疫系统对外来抗原具有高度的特异性和记忆性。

免疫细胞的活性和效能在免疫应答中起到关键作用。

这些实验数据为进一步研究免疫系统的功能和应对机制提供了重要依据。

展望：在未来的研究中，可以进一步探究免疫系统对不同类型抗原的应答差异，以及免疫细胞的分化和调控机制。

此外，可以结合其他技术手段，如基因工程和单细胞测序，深入研究免疫系统的细节和复杂性。

第一章免疫学概要1.免疫：免疫是指机体免疫系统识别“自身”与“非己”抗原，并通过面已经打排除抗原异物，以维持机体生理平衡的功能。

2.免疫防御：免疫防御是指机体排斥外源性抗原异物的一种免疫保护功能，这是机体不受外来物质干扰，保持物种纯洁的生理机制。

3.免疫自稳：免疫自稳是指机体识别和清除自身衰老残损的组织、细胞的能力，是机体维持正常内环境稳定的重要生理机制。

4.免疫监视：免疫监视是指机体识别和清除病毒感染的细胞和异常突变细胞的一种生理功能，借以监视和抑制恶性肿瘤在体内生长。

5.TCR：TCR即T细胞抗原受体，是T细胞表面特异性识别和结合抗原的结构。

6.SIg：即B细胞表面的膜免疫球蛋白，为B细胞的抗原受体，是B细胞特异识别和结合抗原的结构。

7.免疫细胞：是指参与免疫应答或免疫应答有关的各类细胞，主要有免疫活性细胞、嗜酸性粒细和嗜碱性粒细胞及组织中的肥大细胞等。

8.CD：CD即白细胞分化抗原，是白细胞（还包括血小板、血管内皮细胞等）在正常分化成熟和记过过程中的不同阶段出现或消失的细胞表面抗原标志。

9.APC：APC即抗原呈递细胞，也称为免疫辅佐细胞，能将抗原信息呈递给T细胞，从而使T细胞活化。

主要有单核巨噬细胞和树突细胞两大类。

10.外周免疫器官：包括淋巴结、脾和黏膜相关淋巴组织等，是免疫细胞聚集和免疫应答发生的场所。

11.中枢免疫器官：中枢免疫器官又称一级免疫器官，包括骨髓、胸腺。

中枢免疫器官是免疫活性细胞的产生、增值和分化成熟的场所，对外周淋巴器官发育和全身免疫功能起调节作用。

12.ADCC：ADCC即抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用。

当IgG类抗体与靶细胞表面相应抗原表位特异性结合后，可通过其IgGd Fc段与NK细胞表面Fc受体结合，定向非特异性杀伤靶细胞。

填空题：1.免疫功能主要是免疫防御、免疫自稳和免疫监视。

2.世界上第一例成功的疫苗是E.Jenner发明的牛痘苗，可预防天花。

3.淋巴细胞包括T细胞、B细胞和大颗粒淋巴细胞（NK细胞）。

医学免疫学实验报告引言免疫学是研究机体对各种病原体的防御和免疫反应的科学。

在医学领域中，免疫学的研究对于了解和探索疾病的发生机制以及开发新的治疗方法具有重要意义。

本实验旨在探索免疫系统的功能，并通过一系列实验步骤来加深对医学免疫学的理解。

实验材料和方法实验材料•小鼠•细菌•离心管•注射器•细胞培养基实验步骤1.实验准备：收集所需实验材料，确保实验环境的无菌性。

2.小鼠接种：将小鼠分为两组，一组为实验组，一组为对照组。

对实验组小鼠进行细菌接种，而对照组小鼠则不接种。

3.细菌培养：将细菌培养在适当的培养基中，以获取足够的细菌量。

4.细菌注射：使用注射器将培养好的细菌注入实验组小鼠的体内，同时对照组小鼠注射等量的生理盐水。

5.观察实验组小鼠：观察实验组小鼠在接种细菌后的反应和症状。

6.采集样本：在一定时间内，从实验组和对照组小鼠中采集血液样本和其他相关样本。

7.样本处理：将采集到的样本进行离心，分离出血清和细胞。

8.免疫检测：使用免疫学方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）等，对采集到的样本进行免疫检测。

9.数据分析：统计和分析实验数据，比较实验组与对照组的免疫反应差异。

结果与讨论通过上述实验步骤，我们进行了医学免疫学的实验研究。

初步结果显示，实验组小鼠在接种细菌后表现出明显的免疫反应，包括体温升高、免疫细胞增加等。

而对照组小鼠则没有出现这些免疫反应。

进一步的免疫检测结果显示，实验组小鼠血清中特定抗体水平升高，说明它们对细菌产生了免疫应答。

而对照组小鼠血清中的抗体水平相对较低。

通过本实验，我们验证了医学免疫学中关于免疫应答的理论，并了解了免疫系统在抵御细菌感染中的作用。

这对于研究疾病的发生机制以及开发新的治疗方法具有重要意义。

结论本实验通过对小鼠进行细菌接种，研究了免疫系统对细菌的免疫应答。

实验结果表明，细菌接种后实验组小鼠显示出免疫反应，而对照组小鼠则没有。

免疫检测结果进一步证实了实验组小鼠对细菌免疫的产生。