饲料中维生素A和维生素E含量的测定

兽药维生素检测项目1. 检测项目：兽药中维生素A含量检测参考内容：采用高效液相色谱法（HPLC）分析兽药中维生素A含量。

首先，样品中的维生素A必须经提取和纯化。

然后，使用HPLC仪器对纯化后的维生素A进行分离、检测和定量。

最终通过比对标准曲线，算出样品中维生素A的含量。

2. 检测项目：兽药中维生素E含量检测参考内容：采用高效液相色谱法（HPLC）分析兽药中维生素E含量。

首先，通过有机溶剂提取样品中的维生素E。

接着，使用HPLC仪器对提取后的维生素E进行分离、检测和定量。

最终通过比对标准曲线，算出样品中维生素E的含量。

3. 检测项目：兽药中维生素B1含量检测参考内容：采用高效液相色谱法（HPLC）或紫外光谱法分析兽药中维生素B1含量。

首先，对样品进行提取和纯化。

然后使用HPLC仪器或紫外光谱仪对纯化后的维生素B1进行分离、检测和定量。

最终通过比对标准曲线，算出样品中维生素B1的含量。

4. 检测项目：兽药中维生素C含量检测参考内容：采用高效液相色谱法（HPLC）或紫外光谱法分析兽药中维生素C含量。

首先，将样品中的维生素C从样品中提取出来。

接着，使用HPLC仪器或紫外光谱仪对提取后的维生素C进行分离、检测和定量。

最终通过比对标准曲线，算出样品中维生素C的含量。

5. 检测项目：兽药中维生素K3含量检测参考内容：采用气相色谱法（GC）或高效液相色谱法（HPLC）分析兽药中维生素K3含量。

首先，对样品进行提取和纯化。

然后使用GC或HPLC仪器对纯化后的维生素K3进行分离、检测和定量。

最终通过比对标准曲线，算出样品中维生素K3的含量。

饲料中常用维生素的检测及鉴别何绮霞【摘要】维生素是动物机体维持生命活动、生产必须的营养成分,是饲料的重要组分。

因此,对饲料厂来说,快速鉴别维生素及掌握正确检测方法十分关键。

为此,本刊特邀广东省农科院何绮霞高级药师就《饲料中维生素的检测方法及真假鉴别》为题,综述了脂溶性、水溶性维生素的鉴别、检测方法,本刊将在第6、第7期刊登,敬请关注。

【期刊名称】《广东饲料》【年(卷),期】2012(000)006【总页数】2页(P41-42)【关键词】水溶性维生素;快速鉴别;饲料厂;检测;广东省农科院;生命活动;动物机体;营养成分【作者】何绮霞【作者单位】广东省农科院农产品质量安全与标准研究中心,广州510620【正文语种】中文【中图分类】S816.32维生素是饲料中的重要组成部分，是一组化学结构不同，生理作用和营养功能各异的化学物。

动物对维生素的需要量极微，但其生理、营养作用显著。

所以在饲料中是否加入维生素、加入的量是否准确，对动物的生长、发育和养殖企业获得的经济效益都会受到很大的影响。

《饲料添加剂品种目录》列出的维生素有32种，分为两类：一类是脂溶性维生素，包括维生素A、维生素D3、维生素E、维生素K3；另一类是水溶性维生素，包括B族维生素和维生素C等。

维生素的测定方法包括高效液相色谱法、分光光度法、荧光光度法。

而高效液相色谱法是目前使用最多、比较理想的维生素分析方法，它具有分离效果好、灵敏度高、特异性强等特点，特别对于预混合饲料和配合饲料中的维生素，含量低，干扰成分多的情况下，只能用高效液相色谱法进行鉴别及含量分析。

本文主要介绍了维生素预混合饲料或配合饲料中维生素的鉴别及含量分析方法，以提供给广大饲料生产和养殖企业作为参考。

1 脂溶性维生素的鉴别、检测方法1.1 维生素A的鉴别及含量测定方法单体的维生素A肉眼看为淡褐色或灰黄色颗粒。

1.1.1预混合饲料中维生素A的鉴别方法。

取试样2～3g，加氯仿10mL，充分研磨，静置片刻后取少许上清液于点滴板上，加入1滴三氯化锑试液，即呈蓝色。

HP LC 法测定饲料中维生素A 、维生素D 3和维生素E摘要:建立了以w (C 2H 5OH =95%乙醇直接提取,高效液相色谱仪在波长280n m 和254n m 处连续测定饲料中维生素A 、维生素D 3和维生素E 的方法。

色谱柱为大连依利特Hypersil ODS C 18(25c m ×416mm ×5μm ,流动相为甲醇水,流速为112mL /m in 。

维生素A 、维生素D 3、维生素E 的质量浓度分别在110mg/L ~2010mg/L 、015mg/L ~15.0mg/L 、215mg/L ~5010mg/L 范围内与峰面积呈良好的线性关系,检测限分别为013×10-6μg 、0104×10-6μg 、510×10-6μg,相对标准偏差分别为116%、217%、214%,平均回收率分别为99%、102%、98%。

关键词:高效液相色谱法;维生素A;维生素D 3;维生素E;饲料中图分类号:O65717+2文献标识码:B 文章编号:10062009(200502003302To D etect V itam i n A,V it am i n D 3and V it am i n E i n Feed w ith HPLC(Changsha Environm ental P rotection Technology Institute,Changsha,Hunan 410004,ChinaAbstract:To detect V ita m in A,V ita m in D 3and V ita m in E in feed,which t o directly extract withw (C 2H 5OH =95%glycollic,with HP LC in 280n m and 254n m.Chr o mat ographic colu mn was Hy persil ODSC 18(25c m ×4.6mm ×5μm ,mobile phase was methanol -water,vel ocity of fl ow was 1.2mL /m in .W hen the mass concentrati on of V ita m in A,V ita m in D 3and V ita m in E was 1.0mg/L ~20.0mg/L 、0.5mg/L ~15.0mg/L 、2.5mg/L ~50.0mg/L,there had a well lineal relati onshi p.Detecti on li m it was0.3×10-6μg 、0.04×10-6μg 、5.0×10-6μg.Relative standard deviati on was 1.6%、2.7%、2.4%,recovery rate was 99%、102%、98%.Key words:HP LC;V ita m in A;V ita m in D 3;V ita m in E;Feed收稿日期:20040323;修订日期:20050130作者简介:王安群(1962—,女,江西吉安人,高级工程师,学士,从事环境监测教学工作。

农产品中维生素的测定原理维生素是人体必需的微量营养素，它在人体内发挥着重要的生物活性和生理作用。

针对不同种类的维生素，测定原理也会有所不同。

下面将就常见的几种维生素的测定原理进行详细解析。

1. 维生素A的测定原理：维生素A是溶于有机溶剂的脂溶性维生素，常见的测定方法有色度法、荧光法和高效液相色谱法。

色度法是通过维生素A的吸收特性来测定其含量，通过向样品中加入溶剂提取维生素A后，用特定波长下的光照射样品，测定吸光度，并通过与标准品的对照来计算维生素A的含量。

荧光法是利用维生素A与特定试剂反应生成荧光物质，再测定荧光的强度来计算维生素A的含量。

高效液相色谱法则是将样品中的维生素A分离出来，通过色谱柱的分离，再通过检测器测定其含量。

2. 维生素C的测定原理：维生素C是水溶性维生素，常见的测定方法有滴定法、分光光度法和电化学法。

滴定法是通过将含有维生素C的溶液与一定浓度的氧化剂（如碘、溴）滴定反应，直到产生显色终点，通过滴定液的用量来计算维生素C的含量。

分光光度法是在特定波长下，测定维生素C对光的吸收度，根据吸光度与浓度之间的关系来计算维生素C的含量。

电化学法利用维生素C具有良好的电化学性质，通过测定维生素C在电极上的电流或电压来计算其含量。

3. 维生素D的测定原理：维生素D是脂溶性维生素，常见的测定方法主要有比色法和放射免疫分析法。

比色法是利用维生素D的特定吸收波长与标准品对比，通过测定吸光度来计算维生素D的含量。

放射免疫分析法是将放射性同位素标记到维生素D上，通过测定放射性同位素的衰减来计算维生素D的含量。

4. 维生素B的测定原理：维生素B是水溶性维生素，常见的测定方法有微生物法、分光光度法和高效液相色谱法。

微生物法是利用维生素B对微生物生长的影响来测定维生素B的含量，通过测定微生物的生长情况来判断维生素B的浓度。

分光光度法是在特定波长下，测定维生素B对光的吸收度，根据吸光度与浓度之间的关系来计算维生素B的含量。

饲料中维生素E的快速测定方法摘要：用简便快捷的方法测定饲料中的维生素E，试剂消耗少，稳定性强，回收率也较为理想。

关键词维生素E 快速测定维生素E又称生育酚，能维持生殖器官的正常机能，提高母畜生殖能力，促进机体代谢，提高免疫力和抗应激水平，维生素E还有抗氧化作用，可防止脂肪化合物、维生素A、硒(Se)、两种硫氨基酸和维生素C 的氧化作用，提高维生素A的作用。

GB／T17812—1999是测定饲料中维生素E含量的传统方法，其原理是用碱液皂化样品，使试样中天然生育酚释放出来，再用乙醚提取未皂化的物质。

前处理需经过皂化、提取、浓缩几个步骤，耗时长、过程繁琐、消耗试剂多等局限性。

生育酚在碱性环境下极不稳定，在皂化过程中易分解。

在提取过程中要用到大量的乙醚，对操作人员的健康伤害大。

我们经多次试验，用热的甲醇超声样品，使维生素E溶解到甲醇中，将溶液过膜，上机测定，这种方法操作简便，试剂消耗少，回收率稳定。

1 材料和方法1.1 方法原理样品中加入甲醇并于一定温度水浴超声萃取，使维生素E溶解于甲醇中，经高效液相测定，用外标法计算其含量。

1.2仪器设备高效液相色谱仪（安捷伦1100型），配DAD或VWD检测器；超声波振荡器；电子天平：（精确度分别为0.0001g和0.00001g）。

1.3 试剂1.3.1 甲醇（分析纯）1.3.2 维生素E（dl-α-生育酚）标准溶液1.3.2.1 dl-α-生育酚标准储备液：准确称取dl-α-生育酚纯品油剂（USP）100.0mg于100.0mL棕色容量瓶中，用正己烷溶解并稀释至刻度，混匀，4℃保存。

该储备液浓度每毫升含维生素E1.0mg。

1.3.2.2 dl-α-生育酚标准工作液：准确吸取dl-α-生育酚标准储备液（1.3.1.1）1.00mL置于10mL棕色容量瓶中，用氮气吹干，用甲醇稀释至刻度，混匀，再按比例稀释。

配制工作液浓度每毫升含维生素E50µg。

1.4 色谱条件色谱柱为 Zorbax SB-C18 5μm 4.6×150mm（或相当型号色谱柱）,流动相为95％甲醇(色谱纯)，流速1.0mL/min，柱温为室温，检测波长280nm，进样体积20µL。

饲料中维生素含量标准
一、维生素A的限量标准
维生素A是动物生长、繁殖和免疫等方面必需的营养素之一。

饲料中维生素A的限量标准是根据动物分类和生长阶段的不同而有所差异。

以猪为例，幼猪每千克饲料中的维生素A限量为9000-15000 IU，生长育肥猪每千克饲料中的维生素A限量为5000-9000 IU。

二、维生素D的限量标准
维生素D是维持动物骨骼正常发育和免疫系统健康的重要营养素。

饲料中维生素D的限量标准也根据动物的品种和生长阶段不同而有所差异。

以鸡为例，每千克饲料中的维生素D限量为1000-6000 IU。

三、维生素E的限量标准
维生素E是维护动物运动能力、生殖健康和免疫功能不可或缺的营养素。

饲料中维生素E的限量标准同样与动物的品种和生长阶段有关。

例如，猪的每千克饲料中的维生素E限量为40-60 IU。

四、维生素K的限量标准
维生素K是维持动物正常凝血功能和骨骼生长的关键所需营养素。

饲料中维生素K的限量标准因动物品种和生长阶段不同而有所不同。

例如，幼猪每千克饲料中的维生素K限量为0.1-2.0 mg。

综上所述，饲料中维生素限量标准因动物品种和生长阶段的不同而有所不同。

这是为了保证动物摄入适量的维生素，同时避免过量导致的不良影响。

两种检测饲料中维生素A乙酸酯、维生素D3和维生素E测
定方法的比较分析
司慧民;元雪浈;全晓萍;陈蔷;韩立
【期刊名称】《当代畜禽养殖业》
【年(卷),期】2022()6
【摘要】本试验旨在筛选灵敏度高、准确度高、检测速度快并且可同时检测饲料
中维生素A乙酸酯(VA)、维生素D3(VD3)和维生素E(VE)的检测方法。

试验选取
3种猪浓缩饲料和3种猪预混合饲料分别采用国标方法和快速测定法进行提取测定。

结果表明:利用快速提取法测得3号猪浓缩饲料中VA和VE含量以及3号猪预混
合饲料中VD3和VE含量均显著高于国标方法(P<0.05);整体比较分析结果表明,利用快速测定法测定猪浓缩饲料中维生素A乙酸酯含量显著高于国标方法(P<0.05),
猪预混料使用2种测定方法所得的3种维生素含量差异均不显著(P>0.05)。

综上
所述,快速测定法提取时间短、效率高且操作便捷,更适合饲料中VA、VD3和VE
的多组分一次性提取测定。

【总页数】4页(P31-34)
【作者】司慧民;元雪浈;全晓萍;陈蔷;韩立
【作者单位】河南省兽药饲料监察所
【正文语种】中文
【中图分类】S816.17
【相关文献】
1.肉鸡饲粮中1α-OH D3与维生素D3生物学活性的比较
2.反相高效液相色谱法测定预混合饲料中维生素A乙酸酯的含量
3.维生素D3测定方法的比较
4.液相色谱-串联质谱法检测饲料原料中维生素A、维生素D3、维生素E
5.饲粮添加天然（D-α-生育酚）或合成（DL-α-生育酚乙酸酯）的维生素E对肉仔鸡生长性能、肉品质及氧化状况的比较研究
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兽药维生素检测项目兽药维生素检测项目的目的是检测动物饲料及其配料中残留的维生素，以及人类消费的畜产品中的维生素含量。

一般的检测项目有：1. 维生素 A 检测维生素 A 是一种脂溶性维生素，是视觉反应必须的化合物。

它主要在动物体内转变成一种称为视黄醛的活性形式，优于保障视力健康。

同时，它也对骨发育、生殖和免疫系统健康有重要作用。

维生素 A 含量过低或过高，都会对动物健康产生不良的影响。

维生素 D 是一种脂溶性维生素，它对骨骼发育和骨密度的形成是必需的。

当体内钙离子浓度降低时，它可以协助肠道吸收更多的钙和磷质，从而保障骨骼健康。

同时，维生素 D 也与免疫系统健康、心血管健康以及某些癌症预防有直接关系。

维生素 E 是一种脂溶性维生素，它是一种很强的抗氧化剂，可以降低体内自由基含量，从而保障细胞健康。

同时，它也对免疫系统、生育健康等方面有一定作用。

维生素 K 是一种脂溶性维生素，它在骨代谢、血液凝固和血管健康方面有着重要作用。

维生素 K 主要通过膳食摄入和肠道微生物代谢提供给人体使用。

以上几种维生素对动植物的生长和健康都有着很重要的作用，但是过量或不足都会对健康造成损害，因此对兽药中的维生素含量进行检测显得尤为重要。

目前，用于兽药中维生素含量检测的方法主要有色谱法、荧光法、光度法等。

其中，色谱法可以同时检测多种维生素，检测精度高且重复性好。

荧光法和光度法检测速度较快，但准确度不如色谱法。

总之，兽药维生素含量的检测对动物养殖业和人类健康都有着重要意义。

随着现代科学技术的不断发展，兽药维生素含量的检测方法也逐渐保持更新和优化，目前的检测结果也越来越准确和可靠。

饲料中维生素E的测定高效液相色谱法1范围本文件描述了饲料中维生素E的高效液相色谱测定方法。

本文件中“第一法皂化提取法”适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、复合预混合饲料和维生素预混合饲料中维生素E（dl-α-生育酚）的测定，“第二法直接提取法”适用于维生素预混合饲料、复合预混合饲料中维生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）的测定。

本文件“第一法皂化提取法”的定量限为1mg/kg，“第二法直接提取法”的定量限为20mg/kg。

2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。

其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。

4第一法皂化提取法注意：使用的器皿不含有氧化性物质；分液漏斗活塞玻璃表面不涂油，处理过程在避光下操作；提取过程在通风柜中操作。

4.1原理试样用碱溶液皂化后，经液液萃取或固相萃取净化后，用高效液相色谱仪分离测定，外标法定量。

4.2试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

4.2.1水：GB/T6682，一级。

4.2.2无水乙醇：色谱纯。

4.2.3无水乙醇。

4.2.4石油醚（沸程30℃-60℃）。

4.2.5甲醇：色谱纯。

4.2.6乙腈：色谱纯。

4.2.7甲酸。

4.2.8L-抗坏血酸。

4.2.9二丁基羟基甲苯（BHT）。

4.2.10无水硫酸钠。

4.2.11氢氧化钾溶液（500g/L）：称取500g氢氧化钾，加水溶解，冷却后用水定容至1000mL，混匀。

4.2.1270%乙醇溶液：取无水乙醇70mL，用水稀释，定容至100mL，混匀。

4.2.1310%甲醇溶液：取甲醇10mL，用水稀释，定容至100mL，混匀。

4.2.140.1%甲酸溶液：取甲酸1mL，用水稀释，定容至1000mL，混匀。

测定饲料中维生素A和维生素E含量方法的研究裘丞军;任玉琴【摘要】本文旨在建立一种能同时准确测定饲料中维生素A和维生素E含量的方法,试验将样品在碱性条件下65℃水浴超声皂化提取,冰乙酸调pH至中性,乙醇稀释后直接用高效液相色谱法(HPLC)进行测定.结果表明:维生素A在0.036～108 IU/mL线性关系良好,相关系数为1.00000,检出限1000 IU/kg,方法回收率为95.8％～98.8％,RSD为0.8％～4.4％(n=5);维生素E在0.6～125 μg/mL线性关系良好,相关系数为0.99998,检出限15 mg/kg,方法回收率为95.3％～102.2％,RSD为0.8％～ 4.2％(n=5).本方法快速简便,适用于配合料、浓缩料、维生素预混料和复合预混料中同时准确测定维生素A和维生素E的含量,相对于国标法节省了大量的时间和试剂,可应用于日常大批量饲料检测中.【期刊名称】《中国饲料》【年(卷),期】2019(000)011【总页数】5页(P56-60)【关键词】高效液相色谱;维生素A;维生素E;饲料;皂化【作者】裘丞军;任玉琴【作者单位】浙江省兽药饲料监察所,浙江杭州311199;浙江省兽药饲料监察所,浙江杭州311199【正文语种】中文【中图分类】S816.17维生素A和维生素E是维持动物体正常代谢所必需的脂溶性维生素，具有促进生长，提高免疫力等作用，已经广泛应用于大规模畜禽养殖中。

在饲料添加剂中主要以维生素A乙酸酯和dl-α-生育酚乙酸酯的形式存在，并且通过各种壁材包被保护（杨优敏，2016）。

目前测定饲料中维生素A和维生素E的方法已有国家标准GB/T 17812-2008和GB/T 17817-2010，主要是皂化萃取法和甲醇直接提取法，还有碱性蛋白酶水解法（赵晓华等，2010）。

皂化萃取法操作步骤繁琐，时间长，消耗试剂多；甲醇直接提取法和酶解法结果不稳定，有些包被产品未能被有效提取。

分析与检测Oct 2018 CHINA FOOD SAFETY29现行的饲料中维生素A 、维生素D 3、维生素E（以下简称“VA、VD 3、VE”）的检测方法均为液相色谱法，其中VA 的检测方法为GB/T 17817-2010，定量限为1000IU/kg；VD 3检测方法为GB/T 17818-2010，定量限为500IU/kg；VE 的检测方法为GB/T 17812-2008，定量限为1IU/kg。

饲料原料中VA、VD 3、VE 含量在方法的定量限之下时，上述方法无法准确检出它们的含量。

虽然饲料原料中VA、VD 3、VE 的含量很低，但由于饲料原料的添加比例很大，因此饲料中VA、VD 3、VE 的总量十分很可观，故研究适用于饲料中VA、VD 3、VE 低含量的检测方法是一件十分有价值的工作。

1 研究内容1.1 优化前处理方法1.1.1 皂化反应溶液需先离心：皂化反应后的样液转移至离心管中，离心取上清液转移至分液漏斗中，防止样品残渣堵塞分液漏斗。

1.1.2 用石油醚代替乙醚：石油醚的提取效率和乙醚的提取效率基本相同，且因为石油醚的毒性低于乙醚，因此用石油醚代替乙醚。

1.2 考查线性相关性用甲醇溶液配置VA、VD 3、VE 工作液，其系列浓度分别为0.1IU/L、0.5IU/L、1.0IU/L、5.0IU/L、20.0IU/L、100IU/L。

相同条件下，用串联质谱检测上述曲线各点的峰面积，VA 的浓度与峰面积的相关系数为0.9998，VD 3的浓度与峰面积的相关系数为0.9999，VE 的浓度与峰面积的相关系数为0.9995。

1.3 净化小柱的选择根据VA、VD 3、VE 的性质特点，应选取吸附特性为非极性的净化小柱。

经查阅资料，选择安捷伦公司提供的Bond Elut ENN、Bond Elut LMS、Bond Elut ENV、Bond Elut PLEXA4种净化小柱。

笔者分别考察并进行了VA、VD 3、VE 过净化小柱的回收率，其中，Bond Elut PLEXA 净化小柱VA、VD 3过柱回收率达到99%，VE 过柱回收率达到93%。

高效液相色谱法检测饲料中维生素a的方法步骤高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析方法，适用于维生素A等化合物的检测。

下面是使用HPLC法检测饲料中维生素A的方法步骤：1. 样品准备：将饲料样品取出一定量，加入适量的有机溶剂进行提取。

常用的有机溶剂有甲醇、乙醇等。

提取条件可根据实际需要进行优化，如提取时间、提取剂量等。

2. 过滤样品：使用0.45μm的微孔膜过滤器将提取液过滤，以去除杂质和固体颗粒，得到清晰的样品溶液。

3. 样品进样：将过滤后的样品溶液注入到高效液相色谱仪系统的进样器中。

进样器可选用自动进样器，可以提高分析效率和减少人为误差。

4. 色谱柱选择：选择适合维生素A分析的色谱柱，常用的色谱柱有反相色谱柱、正相色谱柱等。

反相色谱柱常用的填料材料有C18、C8等。

5. 色谱条件设置：设置适宜的流动相体系，常用的流动相为甲醇/水。

可根据实际需要优化流动相的组成和流速，以提高分离和检测效果。

6. 检测条件设置：设置适宜的检测波长，维生素A在紫外光区域有较好的吸收峰。

常用的检测波长为325nm。

7. 样品分离：通过色谱柱将样品中的维生素A与其他组分分离。

根据色谱柱和流动相的选择，可以调整梯度洗脱等条件，以提高分离效果。

8. 维生素A定量：根据标准曲线，通过峰面积和浓度的线性关系，计算饲料样品中维生素A的含量。

标准曲线可通过一系列已知浓度的维生素A标准溶液进行建立。

9. 数据处理：对得到的色谱图进行峰识别和集成，计算得到维生素A的含量。

可以使用色谱软件进行自动数据处理和结果输出。

以上就是使用高效液相色谱法检测饲料中维生素A的方法步骤。

HPLC法具有灵敏度高、分析时间短、准确度高等优点，可用于快速、精确地确定饲料中维生素A的含量，为饲料生产质量控制提供科学依据。

饲料中维生素A和维生素E含量的测定1-原理将具有代表性的样品皂化井用己烷抽提后，用HPLC分析。

维生素E在292nm测定，维生素A在325nm测定2-安全措施全部过程中必须戴护目镜特别应注意:-溶剂的挥发性气体，应在通风橱内工作-具腐蚀性的试剂，例如强酸和强碱3-试剂全部使用分析纯试剂;水必须是蒸馏水或相当品质3.1-氮气3.2-粒状氢氧化钾3.2.1-50%(质量/质量)氢氧化钾水溶液3.3-乙醇3.4-己烷3.5-硫酸，密度=1.833.5.1-80%(质量/质量)硫酸溶液3.6-无水硫酸钠3.7-碳酸氢钠3.7.1-5%碳酸氢钠水溶液3.8-HPLC级己烷3.9-HPLC级2-丙醇3.10-全反式维生素A标准物3.1l-维生素E醇类(a-生育酚)标准物，例如，FLUKA公司标准物Ref.No.95 2404-仪器-可在325nm处测定的紫外分光光度汁-常规实验室玻璃器皿和用具-专用特制玻璃器皿(附图-HPLC，装备有泵，自动取样器，进样器和能在325nm处进行检测的检测系统-旋转蒸发仪-水浴锅5-步骤注意:不能在自然光，荧光或氖灯下操作，而且要隔绝与空气的接触(抽提是在充氮条件下进行，玻璃器皿为可吸收紫外线的棕色器皿，照明为白炽灯，或在窗户上装备了紫外滤光屏卜5.1-制备溶液5.1.1-维生素A醇标准液-精确地(土0.01毫克)称取约含有25，侧灿的维生素A乙酸酷(3.10)。

-将维生素A乙酸酷转移至1叨毫升的沸腾管(见附图1)中;-加入25毫升乙醇(3.3)和3毫升氢氧化钾溶液(3.2.1);-在沸腾管「加上冷凝管，在水浴锅上沸腾叨分钟;-冷却，用己烷(3.4)抽提数次. 用己烷(3.4)稀释，使最终浓度达10-15 IU/毫升;-准确测定该溶液所含有的视黄醇浓度，测定方法是用光径为1厘米的石英比色怀测定此溶液在325皿处的光吸收值(A)，用已烷(3.·4)作空白对照:用公式计算:含量C(m/毫升卜Axl8·35.1.2-维生索E醇标准物溶液-精确地称取25毫克=0，01毫克的维生素E醇(3.11放入50毫开容量瓶;-用已烷(3.4)定容至刻度;-用取液器取该溶液5毫升，放入另一个50毫升容量瓶中-用已烷(3.4)定容至刻度;5.1.3-待测样品液-溶液A和溶液E-称取研磨的极细的样品200克+-0.1克，放人2升的容量瓶中;-加入1升乙醇(3.3)和100毫升氢氧化钾溶液(3.2.1);-把容量瓶称重;-记录质量M1;-摇动;-在容量瓶「加上水流冷凝管.将其放在容量瓶加热器上加热，煮沸25分钟;-用水流冷却至溶液平静为止;-加入乙醇(3.3)使其质量重新达到MI-取上清液50毫升放人沸腾管(附图1)中;-加入40毫升水月4x30毫升已烷(3.4)抽提;-将抽提物放人分液漏-斗，用2x100毫升冰洗涤至中性;-在无水硫酸钠(3.6)上过滤-蒸发毛干燥，迅速溶解于25毫开己烷;-取5毫升该溶液用于维生素A的测定:该溶液为溶液A.-在剩下的20毫升溶液中加入20毫升已烷，转移至100毫升沸腾管中; -加入10毫升80%硫酸溶液(3.5.1);-振荡完全;-待溶液完全静止后，将巳烷层转移至分液漏斗;-用4x30毫升巳烷(3.4)抽提硫酸层-把所有己烷抽提液放人分液漏斗中·用5毫升无水碳酸氧钠溶液(3.7.1) 冲洗，然后用2x200毫升水冲洗直至中性;-在无水硫酸钠上过滤;-蒸发至干燥，然后迅速用准确容量的己烷(Ve)溶解(记录Ve)使最终维生素E醇类的浓度约为0.05毫克/毫升:该溶液为溶液E.5.2-色谱分析-维生素A-按附图2所示加入标准液(5.1.1)不溶液A.-维生素E-按附图2所述注入标准液A(5.1.2)和溶液E6-计算结果维生素A(IU/克)变量:C=标准液(5·1·1)的浓度含量，弟位为因际单位IU叨/毫开Ar(反式)=朋标准液(5·1·1)所得到的全反式视黄醇的蜂的面积Ae(反式)=溶液A所得到的反式视黄醇的峰的面积Ae(顺式)=溶液A所得到的顺式视黄醇的峰的面积Ve=待测液的最终体积25毫升)Me=样品的质量，单位为克1.087=13-顺式视黄醇的响应参数1100=皂化反应中的总体积50=抽提所用的体积C[Ae(反式)+1.087xAe(顺式)lx Ve x1100维生素A含量(IU/克) =Ar(反式)x 50 xMe维生素E乙酸醋(毫/肘克)变量:P=维生素E醇类标准液(3.11)的浓度含量Mr(反式)二溶液(5.1.2) 中所含的维生素邱享类标准物的质量，单位为毫克Ae=待测溶液E所得到的维生素E的峰的面积Ve=侍测溶液酣勺最终体积Vr=际准液(5·1·2)的最终体积(通常为5叨毫升)Ar=用际准液(5·1·2)所得到的维生素E醇类物的峰的面积Me=样品的质最，兑位为克1100=皂化反应中的总体积50=抽提所用的体积1.25=纯化之前的体积与硫酸抽提体积之比，本文中应为25:20□·251.1=分子最的校正系数(维生素E乙酸酯/维生素E醇类)P x Mr x Ae x Ve x 1100 x 1·25 x 1.1维生素E含最(毫克/克) =Vr x Ar x Me x 50。

HPLC法测定饲料中维生素A、维生素D3和维生素E王安群;邓益群;彭凤仙【期刊名称】《环境监测管理与技术》【年(卷),期】2005(017)002【摘要】建立了以w(C2H5OH)=95 %乙醇直接提取,高效液相色谱仪在波长280 nm和254 nm处连续测定饲料中维生素A、维生素D3和维生素E的方法.色谱柱为大连依利特Hypersil ODS C18(25 cm×4.6 mm×5 μm),流动相为甲醇-水,流速为1.2 mL/min.维生素A、维生素D3、维生素E的质量浓度分别在1.0 mg/L～20.0 mg/L、0.5 mg/L～15.0 mg/L 、2.5 mg/L～50.0 mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系,检测限分别为0.3×10-6 μg、0.04×10-6 μg、5.0×10-6 μg,相对标准偏差分别为1.6 %、2.7 %、2.4 %,平均回收率分别为99 %、102 %、98 %.【总页数】2页(P33-34)【作者】王安群;邓益群;彭凤仙【作者单位】长沙环境保护技术学院,湖南,长沙,410004;长沙环境保护技术学院,湖南,长沙,410004;长沙环境保护技术学院,湖南,长沙,410004【正文语种】中文【中图分类】O657.7+2【相关文献】1.高效液相色谱法测定鱼样中的维生素A、维生素D3和维生素E [J], 谭青松;付洁;何瑞国2.高效液相色谱法(HPLC)双柱串联方式测定饲料中维生素A和维生素D3 [J], 高星3.液相色谱-串联质谱法检测饲料原料中维生素A、维生素D3、维生素E [J], 于家丰4.二维液相色谱法同时测定饲料中维生素A、维生素D3、维生素E [J], 赵玉富;咸伟玥5.测定饲料中维生素A和维生素E含量方法的研究 [J], 裘丞军;任玉琴因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

维生素A和维生素E的测定方法（HPLC）杨月欣教授等高效液相色谱法最小检出量分别为VA：0。

8ng；α—E：91。

8ng；γ—E：36。

6ng;δ—E：20。

6ng。

1。

原理食物中的维生素A及维生素E经皂化提取以后，将其不可皂化的部分提取到有机溶剂中。

用HPLC法测定维生素A及维生素E的含量。

2. 适用范围GB12388-90 本法适用于各种食物和饲料的测定3. 仪器(1）高压液相色谱仪(带紫外检测器）（2）六孔恒温水浴锅(3) 旋转蒸发器(4）高纯氮气（5）高速离心机4。

试剂本实验所用试剂皆为分析纯，所用水皆为蒸馏水4。

1 无水乙醇:重蒸，不含有醛类物质检查方法:取2ml银氨溶液于试管中，加入少量乙醇,摇匀,再加入10%氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛.脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中。

取4g氢氧化钠溶于温乙醇中。

将两者倾入1L乙醇中，振摇后，放置暗处两天（不时摇动，促进反应），经过滤，置蒸馏瓶蒸馏，弃去初蒸出的50ml。

当乙醇中：4。

2 10％抗坏血酸溶液（Vc）W/V 临用前配制4。

3 50％氢氧化钾溶液（KOH) W/V4.4 无水乙醚重蒸，不含过氧化物4.4。

1 过氧化物检查方法：用5ml乙醚加1ml10%碘化钾溶液,振摇1min,如有过氧化物则放出游离碘,水层呈黄色或加4滴0.5％淀粉液，水层呈蓝色。

该乙醚需处理后使用。

4.4。

2 去除过氧化物的方法：重蒸乙醚时，瓶中放入铁丝或铁末少许。

弃去10%初馏液和10％残馏液。

4。

5 pH 1—14试纸4.6 无水硫酸钠Na2SO44。

7 甲醇色谱纯或分析纯重蒸后使用4。

8 重蒸水蒸馏水中加入少量高锰酸钾重蒸后使用4。

9 苯并〔e〕芘标准液称取苯并〔e〕芘(纯度98%),用脱醛乙醇配制成1ml相当于5μg苯并〔e〕芘的内标溶液。

4.10 维生素A标准液视黄醇（纯度85％Sigma公司）用脱醛乙醇溶解维生素A标准品，使其浓度大约为1ml相当于1mg视黄醇。