沙门氏菌和志贺氏菌的检测

生物学特性
1.形态
两端钝圆的革兰氏阴 性杆菌，〔0.4-0.9〕 µm ×(1-3)µm，无芽 孢，周生鞭毛，一般无 荚膜，少数有包膜。
光滑型的细菌大小均
培养和生化反响
• 兼性厌氧，最适生长温度35～37℃，最适生长 PH为6.8～7.8.本菌属对营养的要求不高，在普 通营养琼脂上生长的菌落为圆形、光滑、湿润， 半透明，边缘整齐的菌落，有时可出现粗糙型的 菌落。在肠道选择性培养基上菌落小至中等，透 明或半透明，乳糖不发酵，与志贺菌的菌落相似 ，有些能产生硫化氢的菌株，在SS琼脂上形成 中心黑色的菌落。
检验方法
• 别离培养 常规的肠道选择鉴别培养基能有效地别离 沙门菌。常用肠道鉴别培养基〔MAC或EMB〕和选 择培养基〔SS等〕，强选择性培养基〔孔雀绿和亚硫 酸铋等〕仅适用范围于爆发流行时。
别离培养
〔1〕血液和骨髓：血液5ml或骨髓液 0.5ml胆汁葡萄糖肉汤或胰化蛋白大豆肉 汤中，35-37℃孵育，假设有生长〔多 在2~4日内出现〕那么移种至血琼脂平 板和SS培养基中。
V-W变异：是指沙门菌失去Vi抗原的变异。初次别离得到的具有Vi 抗原、O抗原不凝集的沙门菌称V型菌；Vi抗原局部丧失，与O抗原 血清发生凝集又可与Vi抗血清凝集者称VW型菌。 Vi抗原完全丧失 ，与O抗原血清发生凝集又与Vi抗血清不凝集者称W型菌。V-W变 异的过程是V型菌经人工培养，逐渐丧失局部Vi抗原而成为VW型， 进而丧失全部Vi抗原而成为W型菌。
2〕食物中毒〔急性胃肠炎〕：由鼠伤寒沙门菌、 猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌引起，有发热、恶心呕吐 、水样泻，严重者致脱水、休克、肾衰而死亡〔主见 于婴儿、老人等〕，但，大多2~3天自愈。
3〕败血症 ：常由猪霍乱沙门菌、丙型副伤寒沙 门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌等引起。有高热 、寒战、贫血等严重病症。多见于儿童及免疫力低 下者。

肠道沙门氏志贺氏菌检验方法探讨【搞要】目的:了解本地区沙门氏菌和志贺氏菌的分布。

方法:对本地区1990年至2008年食品从业人员健康体检肠道门诊及肠道检测点患者检出的沙门氏菌、志贺氏菌进行分类统计。

结果:沙门氏菌977株,B群占57.22%;D1群占13.72%;E1群占11.88%。

志贺氏菌2522株,B群占80.53%;D群占15.82%;B群中以F2a、1a、1b为主。

结论:该区两菌分布情况与国内有关文献报道基本一致。

【关键词】沙门氏菌;志贺氏菌;分布沙门氏菌属广泛分布于自然界,通常寄居在人或动物肠道内。

本菌属中有的除引起肠道感染外,还能引起其它脏器或全身性感染,例如肠热症、败血症等。

志贺氏菌属亦称痢疾杆菌属,引起细菌性痢疾。

人对志贺氏菌易感,只需少量细菌进入肠道即可引起感染。

沙门氏菌属和志贺氏菌属也是引起食物中毒的重要病原菌。

1990～2008年本区疾控中心共检出沙门氏菌1138株、志贺氏菌2522株,分别作了鉴定。

1 对象与方法1.1 检测对象:本区食品从业人员健康体检、肠道门诊及肠道监测点患者。

1.2 检测依据:《标准操作规程》(上海市疾控中心);《卫生防疫细菌检验》;《沙门氏菌属诊断抗原表》(成都生物制成研究所);GB17012-1997感染性腹泻诊断标准及处理原则;GB16002-1995细菌性痢疾、阿米巴痢疾诊断标准及处理原则。

1.3 培养基:所用培养基均由上属市疾控中心提供,均在有效期内使用。

1.4 诊断血清:沙门氏菌属诊断血清和志贺氏菌属诊断血清均由成都生物制品研究所提供,均在有效期内使用。

2 病原学检验2.1 采样:调查中采集粪便(肛拭)标本,粪便标本保存于亚硒酸盐胱氨酸增菌液(每份10mL)内,血液标本分离血清后备用。

2.2 标本处理:粪便标本先转种SS、HE琼脂后,放(37±1)℃恒温箱21h,直接进行一次分离培养;同时再将增菌管继续放置于(37±1)℃恒温箱,增菌培养18h后再次转种上述鉴别培养基。

肛拭子的沙门、志贺菌检验程序标本（肛拭子）1 增菌培养GN增菌液或SC增菌液或SaSh增菌液或肠道增菌液（36℃，15h—18h）（36℃，18h—24h）（36℃，18h—24h）（36℃，18h—24h）2分离培养普通平板上：沙门氏菌：中等大小，圆形或卵圆形，光滑湿润，无色半透明，边缘整齐或呈锯齿状SS平板上：沙门氏菌：无色，较透明，光滑，稍扁平的菌落，大小不一，H2S +志贺氏菌：较小、圆形、光滑、无色透明。

但宋志菌落较大，边缘不整齐，较扁平。

HE平板上：沙门氏菌：蓝绿色或蓝色，多数中心黑色或几乎全黑色；有些为黄色，中心黑色或几乎全黑色。

大肠埃希菌：黄色菌落志贺氏菌：蓝绿色、透明菌落。

XLD平板上：沙门氏菌：呈红色，带或不带黑色中心，也有为黄色菌落，带或不带黑色中心福氏志贺菌：红色菌落。

大肠埃希菌：黄色或黄红色菌落。

BS平板上：沙门氏菌落：菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变；在麦康凯（MAC）平板上：沙门氏菌：典型菌落呈透明、无色，有时带有暗色中心。

沙门氏菌菌落有时可使培养基中其它细菌所造成的胆盐沉淀区透明。

大肠杆菌：粉色菌落。

EMB平板上：鼠伤寒沙门菌：无色到琥珀色菌落。

大肠杆菌：蓝黑色菌落抑制（部分）挑取可疑菌落涂片染色3三糖铁斜面：沙门氏菌：斜面变红，底层黄，H2S+ 产酸产气志贺氏菌：底层产酸，斜面产碱，H2S—，不产气，无动力4血清学试验A-F多价血清试验：+ 同时用生理盐水做对照。

在生理盐水中自凝者为粗糙形菌株，不能分型。

志贺氏多价血清：+ 同时用生理盐水做对照。

沙门氏菌属显色培养基：紫色菌落。

沙门氏菌：蛋白胨水（供靛基质试验）—，尿素—，动力+。

变形杆菌：靛基质—（+），尿素+，动力+；志贺氏菌：靓基质—（+），尿素—，动力—。

以上条件都接近可疑，接种两个普通平板，以纯菌种做生化试验。

5 生化试验6．血清学试验，被A-F多价O血清凝集者，依次用O4；O3、O10；O7；O8；O9；O2和O11因子血清做凝集试验。

24小时内使用。 ➢ 对于具有稳定的孢子形态的黑曲霉和枯草芽孢杆菌，可以
使用孢子储备液，在验证过的期间内，其稳定的孢子储备 液可以保存在2～8℃一直使用。
26
注意事项
➢ 黑曲霉转种操作应在超净工作台（或相当此环境）中进行， 关闭风机，靠近酒精灯操作；
➢ 每次移植后，应与原菌种的编号、名称逐一核对，确证培 养基特征和纯度无误后再继续保藏。
10
典型菌落--CHRO
菌落为紫红色
11
初筛微生 物
沙门氏菌
柠檬酸杆 菌属
变形杆菌
菌落颜色
紫色(直径约 1mm)
蓝色(直径约 1mm)
无色或被抑 制
12
注意事项
亚硫酸铋琼脂（BS）：该培养基制备过程不宜过分加热， 以免降低其选择性，应在临用时配制，超过48h不宜使用。
将已挑菌落的平板储存于2 ℃～5 ℃或室温至少保留24 h， 以备必要时复查。
➢ 各实验室应根据自身操作习惯总结出一套切实可行、 快速稳定的菌液制备标准程序。
23
操作步骤
➢ 1、接种前用1：1000新洁尔灭擦拭工作台面，然后开紫外 灯消毒30分钟。
➢ 2、自冰箱取出保存工作用菌种，室温放置20分钟，温度 平衡后才能传代。
➢ 3、实验人员进入缓冲间，换鞋、穿无菌衣、戴口罩，用1： 1000新洁尔灭溶液消毒双手，并将培养基及菌种移入阳性 菌接种室。
品污染了沙门菌后，通常没有感官性状的改变。
3
沙门氏菌检验程序
4
前增菌
目的：修复损伤的细菌细胞。 缓冲蛋白胨水(BPW) 肉汤：是基础增菌培养基，不含任
何抑制成分，有利于受损伤的沙门菌复苏。使受损伤的 沙门菌细胞恢复到稳定的生理状态。 方法：25 g（mL）样品置于盛有225 mL BPW的无菌均 质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为 液态，不需要均质，振荡混匀，直接进行培养。于36 ℃±1 ℃培养8 h～18h。