微生物学基本知识

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一.培养基

1.SS(生长抑素)培养基

[适用范围]适用于沙门氏菌、志贺氏菌的分离培养

[主要成分]选择适于沙门氏菌、志贺氏菌生长的营养物质,添加抑制其它杂菌生长的抗生素配制而成。

[主要结构]由葡萄糖、蛋白胨、琼脂等原材料灭菌后,浇注于无菌聚乙烯树脂平皿而成。

[操作步骤]

1、从冰柜中取出所需数量的培养基复温;

2、从溃疡处采集标本后尽快划线接种。

3、将接种好的培养基置37℃培养18~24小时

2.伊红美蓝培养基

培养基成分

乳糖1g胰蛋白胨0.5g NaCl 0.5g K2HPO4 2g2%伊红溶液2ml0.5%美蓝溶液1ml琼脂1.5~2g蒸馏水100ml自然pH或pH 7.2

配制方法

(1)称量称取培养基各成分所需量。

(2)溶化在烧杯中加入约2/3所需水量,依次逐一溶化培养基各成分。(3)定容。

(4)调pH。

(5)按每100ml培养基加入2ml 2%伊红溶液和1ml 0.5%美蓝溶液。

(6)加琼脂加热融化并补足失水。

(7)分装、加塞、包扎。

(8)高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。

3.麦康凯培养基

成份:

蛋白胨 20克氯化钠 5克

乳糖 10克琼脂 20克

H2O 1000毫升 1%中性红溶液 3--4毫升

1%结晶紫 0.1毫升 PH7.4

除中性红临时用时加入外,其余均高压灭菌备用

二.细菌学个论

1.革兰氏阳性球菌

(1)葡萄球菌属

致病性葡萄球菌常引起各种化脓性疾病、败血症或脓毒败血症。

一般特征:无芽孢,无菌毛,有的形成荚膜或黏液层。革兰氏阳性,但衰老、死亡或被白细胞吞噬以及耐青霉素的菌株呈阴性。

分类:3种,金黄色(致病性强),白色(致病性比较弱),柠檬色(不致病)葡萄球菌。

金黄色葡萄球菌

蛋白抗原:所有人源菌株都含有葡萄球菌蛋白A(SPA)。SPA能与人,猴,猪,犬及所有哺乳动物的免疫球蛋白的Fc段非特异性结合,结合后的IgG仍能与相应抗原进行特异性的反应。

药物敏感性:对磺胺类、青霉素、土霉素、红霉素、新霉素等抗生素敏感,但是易产生耐药性。

致病性及毒力因子:常引起两类疾病,一是化脓性疾病。另一类是毒素性疾病,被葡萄球菌污染的食物或饲料一起人或动物的中毒性呕吐、肠炎及人的毒素休克症等。

主要的毒力因子是毒素及酶:

a毒素,又叫a溶血素。属于穿孔毒素,是外毒素,经CH2O处理后成为内毒素。

肠毒素:是结构相似的一组蛋白质,耐热抗酸,能经受住100度30min或胃蛋白酶的水解。

凝固酶:凝固酶结合在菌体表面,它们能使含有抗凝剂的家兔或人的血浆凝固。检测葡萄球菌的凝固酶是鉴别菌株的重要指标,致病株多数是凝固酶阳性,非致病株则为阴性,但近年来发现后者亦有致病性。

此外,还有杀白细胞酶和透明质酸酶。

生物学诊断:1.生长现象。

2.生化反应.

3.毒素检查(小猫或是家兔)P204

(2)链球菌属

分类:按溶血能力分类:

α型溶血链球菌:在菌落周围形成不透明的草绿色溶血环,红细胞未溶解,血红蛋白变成绿色。这种细菌致病力不强,多为条件性致病菌。

β型溶血链球菌:菌落周围形成完全透明的溶血环,红细胞完全溶解。这类菌致病力强,常引起人及动物的各种疾病。(与葡萄球菌类似)

γ型溶血链球菌:菌落周围无溶血现象,一般为非致病菌。

形态与染色

一般致病性链球菌的链比较长,非致病菌株较短。而成双出现的是容易是葡萄球菌。

特性

只有链球菌才能分解菊糖,而葡萄球菌能在高渗环境中生长。

致病性链球菌细胞壁上的脂磷壁酸(LTA)等与动物皮肤及黏膜表面具有高度的亲和力,使细菌容易吸附于口腔,咽部的黏膜上皮。其荚膜成分、M蛋白等具有抗吞噬作用,均有利与细菌发挥致病作用。

微生物学诊断

在链球菌败血症样、猪等动物组织涂片中,往往成双球状,具荚膜,以瑞氏或姬姆萨染色比G氏染色清楚,与巴氏杆菌两极染色不同,而在腹腔或心包液等组织液中则呈长链,但荚膜不如组织涂片中明显。(注意区别链球菌和巴氏杆菌)

2.肠杆菌科

沙门氏菌属是寄生与人和动物肠道内的无芽孢直杆菌,G阴性,绝大多数发

酵葡萄糖产酸产气,在三糖铁琼脂上常产生H2S。并且绝大多数的沙门氏菌对人和动物有致病性。

沙门氏菌耐高盐,在腌制品中可存活2-3个月,对氯霉素,土霉素较敏感。所有沙门氏菌不能发酵乳糖,而大肠杆菌可以。

沙门氏菌病是一种很重要的畜共患病:败血症,胃肠炎,以及其他部位局部炎症。

3.巴氏杆菌科

(1)巴氏杆菌属

多杀性巴氏杆菌:主要使动物发生出血性败血症或传染性肺炎。为球杆状或短杆状,两段钝圆,单个存在有时成双,瑞氏染色个美蓝染色呈典型的两极着色,无鞭毛、芽孢,G阴性,需氧或兼性厌氧。普通培养基上生长贫瘠,在麦康凯培养基上不生长,37度,PH7.2-7.4在血清琼脂平板上培养得淡灰白色,闪光的露珠状小菌落,无溶血现象,在血清肉汤中培养,开始轻度浑浊,4-6d后液体变清朗,管底出现粘稠沉淀,震摇后不分散,表面形成菌环,触酶和氧化酶实验均呈阳性,甲基红、VP实验均为阴性,产生H2S,氨。

致病性:急性型出血性败血症

亚急性出血性炎症(在黏膜、关节等处)

慢性萎缩性鼻炎(猪羊)关节炎局部化脓性炎症

4.G阴性需氧杆菌

布氏杆菌,又名布鲁菌,细菌呈球状,球杆状或短杆状,新分离者呈球状,多单在,很少成双,不形成荚膜和芽孢,无鞭毛,G阴性,姬姆萨染色紫色,专性需氧,初次分离培养需5%-10%CO2,37度,PH6.6-7.4。

主要侵害生殖系统,造成母畜流产,人畜共患病。

致病性:不产生外毒素,有毒性较强的内毒素(豚鼠最易感)

变态反应检查:本法适用于动物的大群检疫,主要用于绵羊和山羊,其次是猪。凝集反应、补体结合反应、变态反应中,变态反应时间最长。

5.G阳性无芽孢杆菌

丹毒丝菌属

猪丹毒丝菌属:直或稍弯的细杆菌,两端较圆,在普通琼脂培养基和普通肉汤培养基上生长不良,血琼脂平皿上37度,PH7.2-7.6,24小时可形成湿润、光滑、透明的灰白色、露珠样圆形小菌落并形成α溶血环。在麦康凯培养基上不生长。在肉汤中中呈轻度浑浊,有少量白色粘稠沉淀,不形成菌膜和菌环。

6.G阳性产芽孢杆菌

(1)炭疽芽孢杆菌:惯称炭疽杆菌,为G阳性大杆菌,无鞭毛、不运动,芽孢为椭圆形,位于菌体中央,芽孢囊不大于菌体,可形成荚膜,在动物血液中,此菌单独或是呈2-5个相连的短链,菌体矢直,相连的细菌呈竹节状,围绕以丰厚的荚膜。荚膜具有较强的抗腐败能力,当菌体因腐败而消失后仍有残留荚膜显示,称之为“菌影”。在培养基中常形成长链,培养18-24h后形成芽孢,普通培养基上不形成芽孢。

为需氧菌,厌氧条件下也可生长,最适温度是30-37度,PH7.2-7.6。在普通