单链探针
用化学法合成或从克隆在M13噬菌体的特异性 基因片段制备;优点是在杂交反应中可以排除互补 链的干扰。
2020/10/17
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2.RNA探针
与 DNA 单 链 探 针 相 比 , RNA 探 针 具 有 标 记 效 率高、易于纯化、成本低和杂交信号强等优点
➢早期采用细胞mRNA和病毒RNA作探针
不影响碱基配对的特异性与稳定性 灵敏度和特异性极高 对各种酶促反应无任何影响
放射性污染
半衰期短, 随用随标
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r-32P ATP
a-32P dATP
*
*
3’ 2’ H
dATP
32P的放射性较强,放射自显影所需时间较短,
灵敏度高,可广泛应用于各种印迹杂交。
缺点是半衰期短(14.3天),射线散射严重,放
核 酸 分 子 杂 交 (nucleic acid hybr指id具iz有a一ti定on互)补序列、不同来源的核苷酸单链,
在一定条件下按照碱基互补配对的原则,形成核苷 酸双链的过程。
Marmum和Doty1961年发现的DNA变性复性现象 是核酸杂交技术的理论基础。
2020/10/17
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(heteroduplex)
2020/10/17
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DNA随机引物标记法示意图
随机引物:含有各种 可能排列顺序的寡核 苷酸片段的混合物。 46=4096
DNA 聚 合 酶 ⅠKlenow片段:保留 5’→3’ DNA聚合酶活 性 , 弱 3’→5’ 外 切 酶 活性,无5’→3’外切 酶活性。
2020/10/17
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与待测特定核苷酸的某一段序列相互补; 有明确的标志用于后续的检测。