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人胃癌原代细胞培养方法的探讨

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瓶底 。
实验前 用胶原工 作液包被培养 瓶培
养面， 放入 ３ ７ ｃ培养箱 内至少 ｌ ５分钟 ， 使胶原能很好 地附着于 利用 胃癌新 鲜标本 培养的原代 细胞进行实验研究 较 胃癌 细胞系有更 多的优点 ， 细胞性质更接近体内肿瘤细胞 的特点 ， 对原代细胞进行 实验研究可 以更 好地探讨体 内肿 瘤的性状 。 但对原代肿瘤细胞的培养一直是 比较繁琐 ， 花费较大 ， 培养成 功率也比较低 。 根据我们教研室情况 及参 考文献 ， 摸索了一种 经济、 易行的人 胃癌原代细胞培 养的方法 。兹介绍如下。
１１ 其他 ．． ４
胶原储备液 ：５ Ｓ ２ ０ｇ Ｄ大 白鼠尾 巴 １ ，尾腱 条
用 ０１ ．％醋酸 １０ｍ 溶解。 ５ ｌ 胶原工作液【 胶原储 备液用 Ｒ ＭＩ６０进行稀释 ， １ ］ ： Ｐ １４ 使其工作
浓度达 到储备液浓度 的 ｌ ， ５至 １１ ，然后用 １ Ｎ Ｏ ／０ ａ Ｈ调 ｐ Ｍ Ｈ值
维普资讯
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ｗｔｏｔ ｖｒｍｅ ｓ ｓ Ｌ ｎｅ，９６，４ （０ ２ ：４ ～ ５ ｉ ｕ ｏｅｔ ｔ ｔ ｅ叨．ａ ｃｔ１ ９ ３ ７ ９０ ）６ ９ ６ ３ ｈ ａａ
２ Ｍ ａｔｎ ｔ ｏＬＡ， ｓ Ｊ Ｅｍｅｓｎ Ｓ Ｓ ｎ ｉ ｖ ｅｅ ｔ ｎｏ ａ Ｍｏ ｓＴ ， ｒｏ Ｇ．ｅ ｓｔ ｅｄ ｔｃｉ ｆ ｉ ｏ ｃｒｕａ— ｉ ｌｔ ｃ
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Ｏｎｏ ｇ ，００，８ １ ：８４ ｅｌ ｙ ２０ ５ （ ）３ － ４ ｏ
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ａｔ ｎ ． ａ ｃｒ ｅ １９ ５ １ ：７ １ ４０ ｃ ｏ册 Ｃ ｎ ｅ ｓ， ９ ２，２（７）４ ０ ～ ７ ５ ｉ Ｒ
作者简介 ： 昌平 ， ， ９ ２年 出生 ， 丁 男 １７ 本科 学历 ， 毕业于 湖南医科 大 学， 主管检验师。Ｅ ｍａｌｄ ｐ ｚ ＠ｙ ｈ ｏｃ ｍ．Ｒ － ｉ ｃ ｙ ｏ ａ ｏ ．ｏ Ｃ ： （ 收稿 日期 ：０ ６ １－ ３ ２ ０ － １０ ）
人 胃癌原 代 细胞 培 养方 法 的探 讨
ｄｓａｅ叨 ． ｔ Ｃ ｎｅ ，９ ６，４ ５ ：３ － ４ ｉ ｓ ｅ Ｉ ａｃｒ１９ ５ （ ）７ ９ ７ ３ ｎＪ
４ Ｋｉ ｍａ Ｆ ， ａｅ ｇ ｅ Ｓ ， ａ ａ ｅ １． ｔ ｃ ｏ ｎｄ ｃｉ ｉ ａ ｉ ｌ ｉ Ｎ ｔｕ ｏ Ｔ ｋ ｏ Ｓ， ｔａ Ｄｅｅ ｔ ｎ ａ ｌ ｃ ｌｓ 曲 一 ｉ ｎ ｃ ｎ ｅ ｏ ｌ ｍｐ ｏ ｅ ａ ｏ ｆｙ ｈｎ ｄ ｄ ｔ ｒ ｎ ｄ ｙ ｒ ｖ ｒｅ ｔａ ｓ ｒ ｐ ｅ ｅ ｍｉ ｅ ｂ ｅ ｅ ｓ ｎ ｃ ｉ － ｒ
３ Ｍｏ ｉＭ ， ｍｏ ， ｏ Ｈ ， ｔ １ ｌｃ ｌ ｒｄ ｔｃ ｏ ｆ ｉ ｕ ａ ｉ ｏ ｄ ｒ Ｍｉ ｆ Ｋ Ｕｅ ｅ ． ｅ ｕ ａ ｅｅ ｔ ｎ ｏ ｃ ｒ ｌｔ ｓ ｈ ｉ ａ Ｍｏ ｉ ｃ ｎｇ ｃ ｒ ｎ ｌａ ｃ ｉ ｎ ｔ ｅｐ ｆｐ ｅ ａ ｌｏ ：Ｔ ｅ ｃ ｎ ｅ ｔｏ ａ ｌ ｙ ｔ ｍｉ ￣ｃｉ ｏｌ ｅ ｌ ｉ ｅ ｈ ｒ ｌｂ ｏ ｄ ｌ ｓ ｈ ｉ ｈ ｏ ｃ ｐ ｆｅ ｒｙ ｓ ｓ ｅ ｃ
适 量培 养液使 组 织块底 部 刚好 没入 液体 内．４小时换 液一 ２ 次， 至大量肿 瘤细胞培养 出来。结果
整 个 瓶 底 。 结论
肿瘤细胞在 ２天 ￣ ３天
至中性 。或者用 ４ Ｒ Ｍ １４ 倍 Ｐ Ｉ６０进行稀释至 中性。 Ｄ Ｈ ｎ ｓ ： 于冲洗标本用。 — ａｋ 液 用
１ 方法 ． ２
后从组 织块 内爬 出， 呈半贴壁 生长 ， 开始大量生长 ， 并 蔓延至
利 用 经 济 易行 的 方 法 对人 胃癌 新 鲜 标 本 进
行原代细胞培养 ， 可以得到存活 的肿瘤细胞。
１ ． 实验前准备 ．１ ２
【 关键词 】原代细胞培养 人 胃 癌标本
鼠尾胶原
１ ．． 培养瓶包 被 ． １１ ２
高立永 刘 霞 柳 红 孔 庆 兖
（ 州医学 院病理教研室 ， 徐 江苏 徐州 ２ １ ０ ） ２ ０２
【 摘要】目的 探讨一种经济、易行的人 胃癌原代细胞
培养 的方法。方法 培 养瓶 瓶底 用鼠尾胶 原 包被 ， 置经过 放
处理 的 １Ｔ ｌ Ｉｎ １Ｔ ｌ 小的 人 胃癌 组 织 块数 个 。 入 ｌ １Ｔ ｌ Ｉｎ 大 Ｉｎ Ｘ ｌ Ｘ ｌ 加
１ 材 料 与 方 法
１ ．． 取材瓶 准备 ．１ ２ ２
有冰袋的保温瓶内。 １ ． 实验 步骤 ．２ ２
在 一广 口磨砂 瓶 内加 入 ２ ｌ ０ｍ 内有
ｃｎ Ｂ ｌｓ ｕｉ ｒｅｙｉ ｅｔｗ ｔ ｉｉｒｐｎｒａ ｃ ａ 佣 ．ｍ ａ ｏｒ ｅ ｒｎ ｓ ｇｒ ｐ ｎｓ ｉ ｂｌａｄ ａ ｃｅｔ ｎ ｃ ｌｄ ｇ ｕ ｎ ｈ ｌ ｉｃ Ａ
Ｊ ｕｇ １９ ，７ （ ）４ ５－７ ｒ，９ ９ １７ ６ ：７ － ９ ４

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实验报告-细胞原代培养实验

实验报告-细胞原代培养实验

实验报告-细胞原代培养实验细胞生物学实验报告实验三细胞原代培养1引言1.1 实验目的1. 理解细胞原代培养原理。

2. 了解细胞原代培养的应用。

3. 独立进行鼠胚和鸡胚细胞原代培养操作。

4. 巩固无菌操作技术。

1.2 实验原理细胞原代培养：原代培养组织直接从机体获取后，通过组织块长出单层细胞或者用酶消化或机械方法将组织分散成单个细胞开始培养，严格意义上的原代培养指在首次传代前的培养，但通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。

2实验仪器、试剂及操作步骤2.1 实验仪器超净工作台、倒置相差显微镜、CO2培养箱、酒精灯、酒精棉球、酒精喷壶、试管架、滴管筒（头）、废液缸、手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶等2.2 实验试剂DMEM培养基、D-Hanks缓冲液、血清、抗生素、胰蛋白酶消化液等2.3 实验材料动物：9至12日龄的鸡胚、15日龄的鼠胚2.4 实验步骤A.鸡胚成纤维细胞的原代培养1.实验室和超净工作台消毒，紫外照射20Min左右。

2.穿好实验服，进无菌室前穿鞋套、洗手。

3.关闭紫外灯，开日光灯和开风机，超净工作台台面应整洁，用75%酒精擦双手消毒，擦拭台面。

4.在D-Hanks缓冲液中按1：100的比例加入双抗。

5.取9-12日龄鸡胚，用照蛋器照检，画出气室边界和胎位。

将鸡胚置于鸡卵架上，用酒精棉球擦拭蛋壳。

6.用镊子在鸡蛋气室位置敲一道划痕，然后用镊子小心去除气室部位的蛋壳。

7.换用洁净的无菌镊子揭开膜，取出鸡胚至灭菌的培养皿中，用D-Hanks缓冲液冲洗鸡胚。

8.用眼科剪去除鸡胚的头部、四肢以及内脏，然后用D-Hanks缓冲液充分洗涤躯干。

9.将躯干置于小平皿盖中，用D-Hanks缓冲液至少洗涤3次，充分弃除红细胞。

10.用无菌眼科小剪刀将鸡胚躯干剪成1mm3的碎块。

在胚胎组织块中加入1mL的胎牛血清，用滴管吸取组织块接种到培养瓶内。

在培养瓶中放置10-15个组织块。

肿瘤相关成纤维细胞的生物学特征及Transwell共培养对胃癌细胞生长和

肿瘤相关成纤维细胞的生物学特征及Transwell共培养对胃癌细胞生长和

-1582-中国药理学通报Chioese Pharmacological Bulletin2019Nov；35(11)：1582~9网络出版时间：2019/10/2816:14网络出版地址：htt p：//kd neAkcms/deCil/34.1086.r.20191024.1434.038.html肿瘤相关成纤维细胞的生物学特征及Transwell共培养对胃癌细胞生长和转移的影响邵久针"，王颖锤1"2仰鑫1，许尤琪3，沈明勤"(1.南京中医药大学附属中西医结合医院中药药理毒理实验室，江苏南京210028；2.江苏省中医药研究院中药药理毒理实验室，江苏南京210028；3.江苏省第二中医院肿瘤科，江苏南京210008)dW：10.3969//imn.1001-1978.2019.11.019文献标志码:A文章编号：1001-1978(2019)11-1582-08中国图书分类号:R322.44；R329.24；R73-35；R735.202.2摘要：目的培养原代人胃癌相关成纤维细胞#cancer ww-ciated fibobOsts，CAFs)和正常成纤维细胞(normal fibo-blwy/NFW，探究生物学特性及对胃癌细胞影响。

方法CAF-和NFs分离培养后，MTT法绘制生长曲线，免疫荧光法、WoCm bO-、qRT-BCR检测a-SMA和Vimentin表达。

MGC—03与CAFs、NFs进行Transwell共培养，Transwell法检测胃癌迁移和侵袭,MTT法比较细胞活力及AMD3100影响，pH计、乳酸酶法、DCFHNA法测定共培养体系酸化、乳酸及活性氧(ROS)含量’结果CAFs、NF呈长梭形、多角形等，CAFs增殖和重叠生长现象均高于NFs°CAF s细胞a-SMA 和Vimentin为阳性表达，而NF s为低表达或阴性’胃癌细胞活力低密度共培养组>中密度组>高密度组，CAFs共培养体系出现pH值降低，乳酸、ROS含量高现象,且只有CAFs-低密度共培养组促癌效果明显’结论胃癌细胞与CAFs、收稿日期:2019-06-12,修回日期:2019-08-10基金项目：江苏省自然科学基金资助项目(No BK20161605)；江苏省研究生科研与实践创新计划项目(No SJCX19.0343)作者简介:邵久针(1994-)，女,硕士生，研究方向：肿瘤药理学，E-mail:935625337@；沈明勤(1963-)，男，研究员，硕士生导师，研究方向：中药药理学，通讯作者,E-mail:；王颖锤(1985-),女，硕士，助理研究员，研究方向：细胞药理学，通讯作者,E-mail:wyy9260@oeauiophago/omeand miiochondeiaweeeob/eeeed by e.ecieon miceo/copy，and ihe eegu.aioey mo.ecu.ae mechankm of HCQ combined with BEV w/s revealed by transcnpCmo sequenciny(RNA-seq).只£5^1 Compared with singio dmy youps,tho combination of HCQ and BEV cou.d syneegisiica.y inhibii HUVECproliferation,pomoia HUVEC apoptosis,and inhibil ih3eoemaiion oeeascu.aesieuciuesin HUVECs.HCQ could inhibit duNphdyy of HUVECs.Transcnptomo so-quenciny results showed tU/i Co cambination of HCQ and BEV influocO69dikeoni expressed yenos,and NFs共培养受比例影响较大，低密度共培养更能明显提高胃癌细胞的增殖和迁移能力，而高密度共培养可能会反过来抑制肿瘤细胞的增长和转移，可能与乳酸、ROS含量有关’关键词：胃癌;肿瘤相关成纤维细胞;原代培养；Transwell共培养;异质性;反Warburg效应胃癌是常见的恶性肿瘤，位于全球发病率第5位、死亡率第3位，而我国属胃癌高发国家,发病与死亡例数约占世界的50%,是癌症防治的重点［1］o 癌症的演化过程中，肿瘤细胞会积极募集成纤维细胞等基质细胞,营造低氧高酸性的肿瘤微环境,对肿瘤的发生、增殖、转移和凋亡具有重要的调节作用［2］。

吲哚美辛对原代培养胃癌细胞端粒酶活性的调节作用

吲哚美辛对原代培养胃癌细胞端粒酶活性的调节作用

２ ０ ０ ０ ， ６ Ｏ （ ２ ） ： ２ ９ ３ — ２ ９ ７ ．
癌 细胞 的 Ｂ ｃ ｌ 一 ２表达 水平 进行 检测 ， 结 果 显示 ， 药 物 作用 １ ２ ｈ后 Ｂ ｃ ｌ 一 ２水 平开 始 下 降 ， 且 随作 用 时 间延 长， Ｂ ｃ ｌ 一 ２表达 水 平 降低 ， 表 明 吲 哚美 辛作 用 于 胃癌 细胞 后 ，端粒 酶 活性 的降低 与 Ｂ ｃ ｌ 一 ２的变化 趋 势相
２ ０ ０ ０ ， ３ ７ （ １ ２ ） ： ４ ３ １ — ５ ０ ２ ．
Ｍａ ｎ ｄ ａ ｌ 等 ｕ 用含人 Ｂ ｃ ｌ 一 ２ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 的质粒 转染 人 宫颈 癌 Ｈ ｅ ｌ ａ 细 胞 和 人大 肠 癌 Ｄ ｉ Ｆ ｉ 细胞 中 ，建 立 了高表
达（ 较正常对照高 ４ ～ ４ ０倍 ） 的细 胞 株 ． 发 现 其 端 粒 酶活 性 较 对 照组 分别 提 高 了 ５ — １ ０倍 和 ８ ～ １ ２倍 ； 同 时 对 一种 Ｉ Ｌ 一 ２依赖 细胞 毒 性 Ｔ细胞 系 （ Ｃ Ｔ Ｌ Ｌ ） 进 行 研究 ， 发 现 通过 在 培养 液 中去 除 Ｉ Ｌ 一 ２而 下调 Ｂ ｃ ｌ 一 ２ 表达后 ， 端粒酶活性随之下降 ， 在 培 养 液 中重新 加 入 Ｉ Ｌ 一 ２ ， Ｂ ｃ ｌ 一 ２表达 升 高 ，端 粒酶 活性 亦 随之 上 升 。 由此研 究者 认 为 Ｂ ｃ ｌ 一 ２对 端粒 酶 活性 具有 重要 调 节 作 用 。本 研究 以吲哚 美辛 直接 作用 于 胃癌细 胞端 粒 酶 提 取液 ，所 测结 果 与对 照组 差异 有 统计 学 意 义 ， 也 证 实 了我 们 的结 论 ，即 Ｃ Ｏ Ｘ一 ２抑 制剂 抑 制 胃癌 细胞 的端 粒 酶活 性与 抑制 Ｂ ｃ ｌ 一 ２表达 水平 有关 。 总之 ，本研 究证 实 ， Ｃ Ｏ Ｘ 一 ２抑 制 剂 吲哚美 辛 能
人皮肤鳞状细胞癌的细胞原代培养研究方法

人皮肤鳞状细胞癌的细胞原代培养研究方法

人皮肤鳞状细胞癌的细胞原代培养研究方法发表时间：2012-10-25T15:18:52.730Z 来源：《医药前沿》2012年第20期供稿作者：王嘉月[导读] 对20份皮肤鳞癌患者的新鲜手术标本，采用组织块培养法和胶原酶消化悬液培养法进行体外培养。

王嘉月（山西长治医学院附属和济医院病理科山西长治 046000）【摘要】目的探讨一种简便实用、成本低、纯度高并且成熟稳定的，体外培养人皮肤鳞状细胞癌癌细胞及建立原代细胞系的方法,为皮肤癌的研究奠定实验基础。

方法对20份皮肤鳞癌患者的新鲜手术标本，采用组织块培养法和胶原酶消化悬液培养法进行体外培养。

通过直接观察、细胞形态学观察和免疫细胞化学方法观察细胞的生长情况、细胞形态学特征及鉴定所得到的癌细胞情况。

结果 3份标本两种方法均培养出皮肤癌细胞,后者培养的细胞生长速度快。

结论应用组织块和胶原酶消化法培养食管癌细胞,方法可行,适合推广应用。

【关键词】皮肤鳞状上皮癌细胞细胞培养细胞系【中图分类号】R73-35+1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）20-0117-02 皮肤鳞癌（SSCC）是起源于皮肤角朊细胞的一种恶性肿瘤，有时亦起源于附属器，包括毛囊漏斗、皮脂腺导管或末端汗腺的角朊细胞。

SSCC在所有癌中占很大比重，Ackerman统计占全部癌肿的第一位，国内胡正祥等[1]统计其占第二位，我国各种皮肤癌发病率明显不同于西方国家，欧美统计皮肤癌中胞癌的比例约鳞癌占20%，而基底细胞癌占80%。

我国与某些亚洲国家的情况正好相反，主要为鳞癌，鳞癌与基底细胞癌约为（5～10）∶1[2]。

SSCC的临床治疗以局部手术切除为主，辅以化疗，晚期肿瘤预后较差是因其发生深部浸润与远处转移。

皮肤癌的发生机制始终是研究的热点问题之一,但目前尚未完全阐明[3]。

体外分离、培养皮肤鳞癌细胞并建立细胞系,是研究皮肤癌生物学特性、癌变机理、指导治疗及判断预后必要的生物学模型。