当前位置：文档之家 › DAB显色试剂盒说明书

DAB显色试剂盒说明书

  • 格式：pdf
  • 大小：105.63 KB
  • 文档页数：1

产品说明书 / Specification Sheet
辣根过氧化氢酶DAB显色试剂盒
产品编号：PW017
产品简介：
DAB即：二氨基联苯胺（3，3’-diaminobenzidine）是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成浅棕色不溶性产物。

用于检测过氧化物酶的活性，它灵敏度高，特异性好。

是HRP结合物最常用的底物,常在免疫组化,原位杂交,Western blot等膜显色或检测细胞或组织内源性的过氧化物酶中应用广泛。

运输和保存条件：
常温下运输，收到后，将溶液A, 溶液C在-20度闭光的环境中保存，反应液2-8度保存，保质期一年。

组成:
本试剂是为免疫组化,原位杂交,Western blot等膜显色专门配制的,由反应液,溶液A, 溶液C三部分构成:能够使用5次
1: PW017-1 反应液50ml
2:PW017-2 溶液A 1 ml
3:PW017-3 溶液C 0.12ml
使用方法:
1:在免疫印迹(western blot)实验中,先将相应的HRP（辣根过氧化氢酶）标记的二抗覆盖膜后,在37度的情况下,于震荡器上,震荡一个半小时左右,再用TBST或者PBST洗涤膜3~4次,最后一次用TBS或PBS洗涤膜,再将膜转移到阴暗处。

2:显色前,先取反应液10 ml在一个15ml的干净棕色瓶子中，再取200ul左右的溶液A和溶液C 20ul形成显色工作液, 加入充分混匀。

3在阴暗处.将显色工作液加入膜上,将膜覆盖, 在37度的情况下,震荡反应十分钟左右即可.这时浅棕色的条带出现。

4倒掉反应液，双蒸水冲洗条带3~4次，自然干燥。

5照像记录实验结果。

注意事项:
1: 溶液A在使用之前，37度温育10分钟，以免产生沉淀。

2: 显色时间严格控制，非常小心，一般10分钟左右。

以免造成过度显色，而且显色后数小时将会褪色。

3: 请使用完后，将反应液，溶液A, 溶液C的盖子旋紧,以防止溶液挥发和与空气中的成分发生化学反应。

4 : 推荐所配试剂的量适合于6X8cm的膜，如果膜较大,请适当增加所配试剂的量,以便完全覆盖膜。

5: 请正确配制Western blot 所需要的试剂,正确的膜转移,抗体的稀释和冲洗步骤,以保证能够显色和减少杂带的产生。

6: DAB在常温下不稳定，易氧化分解，溶液A, 溶液C在-20度闭光的环境中保存。

同时做好防护，因为溶液A有一定的致癌性。

7：显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用。

8：请将沾有溶液A的容器等放在含有3%KMnO4 ,2%NaCO3 的溶液浸泡三小时,以减少污染。

9: 本试剂只能够用于体外实验,不能够用于临床,治疗,动物体内实验等目的,由此产生的后果,概不承担责任。

地址: 上海市松江区香闵路698号Add: 698 Xiang Min Road SongJiang Shanghai China
电话/Tel: 86-21-37772436 传真/Fax: 86-21-37772170 技术支持/Support: 800-820-1016
邮箱/Email: protein@网址/Web: 。

合集下载

普罗安蒂生物科技增强型DAB显色试剂盒说明书

普罗安蒂生物科技增强型DAB显色试剂盒说明书

陕西普罗安蒂生物科技发展有限公司增强型DAB显色试剂盒说明书产品简介：本试剂盒适用于辣根过氧化物酶（HRP）检测系统的免疫组化染色，也可用于western blot等实验。

产品组成：10xDAB浓缩液3MLDAB缓冲液60ML使用方法：1-对于组织切片或细胞样品或膜，在与HRP标记的抗体或其他形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5min。

对于检测内源性HRP的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5min。

2-10XDAB浓缩液：DAB缓冲液=1:10配置，得DAB工作液。

取1mL DAB 缓冲液，100ul 10xDAB浓缩液混匀后即为DAB显色工作液。

3-最后一次洗涤完毕后，去除洗涤液，加入适量DAB工作液，确保能充分覆盖样品。

4-室温避光孵育3-10min，或在显微镜下根据颜色深度自行掌握反应时间，染色结果为棕色。

染色结束后，去除反应液，用双蒸水清洗2-3次即可。

注意事项：（1）本产品需避光保存，混合好的工作液30min内有效。

（2）使用时请做好防护，如果不慎将试剂沾染到眼睛、皮肤上，请立即用大量清水冲洗。

（3）本产品仅做科研用途。

贮存条件：-20℃避光保存。

常见问题：1-背景显色太深a-在IHC如果背景显色太深，一方面须考虑使用适当的封闭液进行封闭，使用和一抗相同来源的血清（10%）进行封闭。

另一方面，请选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。

b-在IHC如果背景显色太深,需注意灭活内源性过氧化氢酶，可以在4体积甲醇中加入1体积3%过氧化氢，混匀后用于内源性过氧化氢酶的灭活。

c-可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度，另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。

2-没有显色或显色太弱a-可以考虑适当提高一抗或二抗的浓度，检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在膜上，检测二抗是否可以被正常显色。

b-可以考虑使用更加灵敏度的放大体系，例如使用生物素检测体系。

TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)说明书

TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)说明书

TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(显色法)产品编号 产品名称包装 C1098TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(显色法)50次产品简介：碧云天生产的显色法TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。

对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB 显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。

细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA 内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA 。

细胞凋亡时抽提DNA 进行电泳检测，可以发现180-200bp 的DNA ladder 。

基因组DNA 断裂时，暴露的3'-OH 可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP 的催化下通过DAB 显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。

本试剂盒有如下优点。

(1) 高灵敏度：背景染色极低，阳性染色强，可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA 断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。

(2) 特异性好：TUNEL 检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。

(3) 快速：仅需约2-3个小时即可完成。

(4) 应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。

(5) 实测效果好：参考图1。

图1. 本试剂盒的检测效果图。

A. HeLa 细胞未处理或用DNase I 室温孵育10分钟后的检测效果图。

牛病毒性腹泻抗体(BVDAb)ELISA试剂盒使用说明书

牛病毒性腹泻抗体(BVDAb)ELISA试剂盒使用说明书

牛病毒性腹泻抗体（BVD Ab）ELISA试剂盒使用说明书南京森贝伽现货供应，质量保证，价格优惠，试剂盒首选森贝伽。

本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关液体样本中牛病毒性腹泻抗体（BVD Ab）的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中牛病毒性腹泻抗体（BVD Ab）水平。

用纯化的病毒性腹泻（BVD）抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入病毒性腹泻抗体（BVD Ab），再与HRP标记的病毒性腹泻（BVD）抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的病毒性腹泻抗体（BVD Ab）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛病毒性腹泻抗体（BVD Ab）浓度。

样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。

DAB显色——精选推荐

DAB显色——精选推荐

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS12048.1 v.A GENMED二氨基联苯胺（DAB）显色溶液产品说明书（中文版）主要用途GENMED二氨基联苯胺（DAB）显色溶液是一种旨在通过过氧化物酶的催化，而形成棕褐色不溶性产物，以鉴定过氧化物酶活性，进而确定目标印记的实验辅助试剂。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适用于辣根过氧化酶标记蛋白的免疫学检测包括蛋白质西方杂交和免疫化学，以及原位杂交染色等。

产品即到即用，性能稳定，操作便捷，敏感度高，显色清晰，重复性好。

技术背景二氨基联苯胺（3，3’-diaminobenzidine，DAB）是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成棕褐色不溶性产物，且不受乙醇影响。

用于检测过氧化物酶的活性，灵敏度高，特异性好。

产品内容GENMED染色液（Reagent A）毫升GENMED反应液（Reagent B）毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED染色液（Reagent A）在－20℃冰箱里，GENMED反应液（Reagent B）在4℃冰箱里；GENMED 染色液（Reagent A），避免光照，有效保证12月用户自备甲基绿复染试剂盒（GMS40010）或苏木素复染试剂盒（GMS80050）：用于常规染色后复染15毫升锥形离心管：用于显色工作液配制的容器平式摇荡仪：用于孵育和混匀反应1.5毫升离心管：用于配制染色工作液的容器光学显微镜：用于细胞染色后观察分析实验步骤一、 免疫印迹染色实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（Reagent A）和4℃冰箱里GENMED反应液（Reagent B）置入室温下，分别移出 毫升GENMED染色液（Reagent A）和 毫升GENMED 反应液（Reagent B）到15毫升锥形离心管，混匀后标记为GENMED显色工作液，避免光照。