大孔吸附树脂纯化甘草提取物中甘草酸的研究

大孔树脂吸附解吸甘草黄酮效果研究目的研究大孔树脂对甘草黄酮吸附分离特性。

方法选择8种大孔吸附树脂，比较其对甘草黄酮的吸附率和解吸率，筛选出最佳种类，并对其动力学曲线和动态吸附性能进行考察。

结果HPD300树脂对甘草黄酮有较好的吸附和解吸效果。

其吸附分离甘草黄酮适宜的条件为：上样液浓度2.0 mg/mL，上样流速1.5 BV/h，上样量为2 BV（树脂床体积）；以80%乙醇洗脱，洗脱速率1.5 BV/h，洗脱剂用量为3 BV。

用优化出的条件进行甘草黄酮的纯化，得到的黄酮纯度比纯化前提高2倍以上。

结论HPD300树脂综合性能较好，适合于甘草黄酮的分离纯化。

Abstract：Objective To study the adsorption and separation of licorice flavonoid with macroporous resins. Methods Eight types of macroporous resin were selected to compare their performances in absorbing and desorbing licorice flavonoid. The optimal type for licorice flavonoid was decided，meanwhile，its kinetic curve and dynamic absorbing behavior were studied. Results HPD300 resin possessed higher adsorption and desorption capacity. The appropriate adsorption and desorption conditions were as follows：concentration of sample was 2.0 mg/mL，velocity of sample solution was 1.5 BV/h，volume of sample solution was 2 BV （bed volume）；velocity of 80% ethanol was taken as eluant 1.5 BV/h，and the volume was 3 BV. Flavonoid content was increased more than 2 times under above conditions. Conclusion HPD300 macroporous resin showed better comprehensive adsorption property. It can be used to purify and separate licorice flavonoid.Key words：licorice flavonoid；macroporous resin；adsorption；desorption甘草（Licorice）是新疆蕴藏量大、药用价值高的一种荒漠药用植物，其主要有效成分是三萜皂苷和黄酮类化合物。

毕业论文文献综述生物工程甘草酸单钾盐制备工艺研究1 前言甘草(Radix glycyrrhizae)为豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensisFisch)、胀果甘草(Glycyrrhiza inflataBat.)或光果甘草(GlycyrrhizaglabraL.)的干燥根和茎,是极为重要的一味中药材。

甘草中主要含有甘草酸(glycyrrhizic acid)、甘草次酸、黄酮、生物碱、氨基酸等化学成分,具有广泛的生理活性。

甘草酸是其中最为重要的化学成分(其含量最高可达14%),也是研究得最早、最多的化学成分。

目前，甘草酸已被广泛应用于食品、化妆品和医药等行业,用作甜味剂、美容护肤品以及用于解毒、消炎、抗过敏、抗溃疡、镇咳、抗肿瘤和防治病毒性肝炎、高血脂症和癌症等疾病[1~3]。

因此, 甘草酸被列为重要的精细化工产品,国内外需求量都很大。

近年来,甘草药材由于遭到过度采挖,资源急剧减少,保护甘草资源已迫在眉睫。

国内有些生产厂家所用工艺落后,也不同程度地造成资源的浪费。

甘草酸单钾盐为甘草中主要有效成分甘草酸的单钾盐，甘草酸在水溶液中溶解度低，所以常把它制备成甘草酸单钾盐，国内外曾对其活性进行了广泛的研究。

据报道,其有消炎、保肝、抗溃疡、抗过敏、抗病毒等多种药理作用。

2 甘草酸单钾盐制备2.1 甘草酸粗品的制备2.1.1传统提取方法从甘草及其制品中提取甘草酸的传统方法包括室温冷浸法、渗滤法、煎煮和热回流法以及索氏(Soxhlet)提取法。

室温冷浸法是在室温条件下,将甘草粉末加入到适当的容器中,加入适当比例的水、氨水或醇等溶剂浸提,其提取的效率较低,时间相对较长;渗滤法需要使用特制的渗滤设备,不断加入溶剂,使之与渗出液一直保持一定的浓度差,提取效率较冷浸法高,但与冷浸法一样提取时间较长,溶剂消耗量较大;煎煮和热回流法是通过加热处理,增加甘草酸的溶解度和加快溶出速度,热回流法避免了乙醇等低沸点溶剂的挥发损失提取效率较高[4]。

南京工业大学硕士学位论文单葡萄糖醛酸甘草次酸分离纯化的研究姓名：戴燕申请学位级别：硕士专业：发酵工程指导教师：卢定强20060530摘要甘草是我国一种传统的中草药，其主要成份甘草酸（glycyrrhizin 或glycyrrhizic acid, GL）具有抗炎症，抗病毒，抗肿瘤，抗过敏等作用，而且它是一种甜味剂，甜度约是蔗糖的170倍。

单葡萄糖醛酸甘草次酸（glycyrrhetic acid 3-O-mono-β-D-glucuronide, GAMG）作为GL的衍生物，两者具有相似的生物活性，其在抗炎和抗过敏活性上等同或超过GL，而且具有显著的抗癌作用。

GAMG 是一种新型的天然甜味剂，甜度约是GL的5倍。

因此，GAMG具有重要的研究价值。

近年来，生物转化GL而直接制备GAMG成为研究热点。

本论文围绕GAMG的酶法制备工艺及GAMG的分离纯化工艺展开系统的研究。

主要工作总结如下：1）建立了一种能同时检测生物转化体系中GL和GAMG的常规等度洗脱反相高效液相色谱的定量分析方法。

采用Apollo C18分析柱，流动相是V(甲醇)：V(水)：V(冰醋酸)＝75：25：5，流速1.0 mL/min，紫外检测波长254 nm，柱温为室温。

在进样量0.2～20 μg内成良好的线性关系，GL的加样回收率为97.47%~99.32%，RSD为0.88%~3.78%；GAMG加样回收率为92.68%~98.44%，RSD为1.07%~3.95%。

该法准确、简捷、耗材低廉。

2）GAMG制备工艺的研究。

方法一：利用固态的酶颗粒对GL进行生物转化，经有机溶剂萃取后蒸干溶剂，得粗品GAMG；方法二：使用游离状态的酶及膜固定化反应装置对GL进行生物转化而制得GAMG的粗品溶液，经喷雾干燥后得其粗品。

3）系统地研究了树脂对GL及GAMG的吸附分离，主要包括以下内容：(1) 树脂的初步筛选。

通过研究九种树脂对GL及GAMG的静态吸附，筛选出HP-20，NKA，X-5这三种非极性大孔吸附树脂及D380弱碱性阴离子交换树脂。

编号:FZD0148 甘草提取物中甘草酸（Glycyrrhizic Acid）含量测定方法一、色谱条件
色谱柱：Zorbax SB-C18 15cm×4.6mm 5μm
流动相：乙腈:水:冰醋酸（33:73:4，V/V）
流速：1.0mL/min
柱温：25℃
检测波长：254nm
进样量：10μL
二、溶液制备
1. 对照品溶液制备精密称取干燥至恒重的甘草酸对照品约5mg 于50mL容量瓶中，加入流动相溶解定容。

避光保存。

2. 样品溶液制备精密称取甘草提取物约200mg于50mL容量瓶中，加入30mL流动相，超声60min溶解后，放置至室温，流动相定容，用0.45μm微孔滤膜过滤即得样品溶液。

三、样品测定
在上述色谱条件下，待仪器稳定基线平稳后进样测定。

甘草酸保留时间约为34min，用外标法计算含量。

甘草中甘草酸和甘草苷的提取工艺研究魏宁;郎伟君【摘要】为优选甘草的最佳提取工艺条件，以甘草酸和甘草苷的提取率为指标，采用正交设计法对影响提取的因素进行优化．结果表明，最佳提取溶剂为乙醇，影响浸出的主要因素为乙醇体积分数、溶媒用量、提取时间和提取次数，最佳提取工艺为6倍量55％乙醇，加热回流提取3次，每次1．5 h．该工艺合理，稳定可行，适合生产．%The orthogonal design method was used to optimize the best extraction technology conditions of glycyrrhiza uralensis with extraction rate of glycyrrhizic acid and liquorice glyco-sides as index.Results indicated that the best extraction solvent was ethanol, and the main factors influencing the leaching were ethanol concentration, solvent dosage, extraction time and extraction times.In addition, the best extraction process was 6 times of the volume of 55%ethanol, heating reflux extraction for 3 times and each time for 1.5 h.This process was reasonable, stable, feasible and suitable for production.【期刊名称】《哈尔滨商业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】3页(P143-145)【关键词】甘草酸;甘草苷;正交试验;提取工艺【作者】魏宁;郎伟君【作者单位】哈尔滨商业大学药学院，哈尔滨150076;哈尔滨商业大学药学院，哈尔滨150076; 哈尔滨乐泰药业有限公司，哈尔滨150025【正文语种】中文【中图分类】R284甘草为豆科植物甘草、胀果甘草、光果甘草的根及根茎，具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药的功能[1].甘草的主要化学成分为三萜皂苷类和黄酮类，其中甘草酸、甘草苷分别是其重要的单体活性成分，具有很强的药理活性[2].本文以甘草酸和甘草苷的提取率为指标，对提取溶剂的选择和最佳方法进行考察，旨在为甘草用于化妆品并实现工业化生产提供参考.高效液相色谱仪(日本岛津公司)：SPD-M20A型二极管阵列检测器、LC-10ATvP型泵、DGU-20A3型脱气器、CBM-20A型系统控制器、SIL-20A型自动进样器、LC solution色谱工作站、Diamonsil-C18色谱柱(5 μm,150 mm×4.6 mm)(迪马公司).甘草药材(哈药集团世一堂制药厂，经哈尔滨商业大学药学院张德连副教授鉴定为真品)；甘草酸单铵盐对照品(批号：111089-201301)、甘草苷对照品(批号：111610-201301)均购自中国药品生物制品鉴定所；甲醇、乙腈、冰乙酸为色谱纯，水为双蒸水，无水乙醇为分析纯.2.1 甘草酸和甘草苷的质量浓度测定2.1.1 色谱条件1)甘草酸色谱柱：Diamonsil-C18柱(5 μm,150 mm×4.6 mm)；流动相：甲醇-0.2 mol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(67∶33∶1)；检测波长：250 nm；流速：1 mL/min，进样量：10 μL.2)甘草苷色谱柱：Diamonsil-C18柱(5 μm,150 mm×4.6 mm)；流动相：乙腈-0.5%冰醋酸(1∶4)；检测波长：276 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：20 μL.2.1.2 对照品溶液的制备1)甘草酸精密称取甘草酸单铵盐对照品5 mg，置于5mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀即得.2)甘草苷精密称取甘草苷对照品1.25 mg，置于5 mL量瓶中，加甲醇制成每1 mL含250 μg的溶液.2.1.3 供试品溶液的制备1)甘草酸精密量取各提取液1 mL，置50 mL量瓶中，加流动相约20 mL，超声处理30 min，加流动相稀释至刻度，精密量取续滤液10 mL，置25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，取续滤液，测定并计算；2)甘草苷精密量取各提取液1 mL，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇溶液10 mL，超声处理30 min，补足减失的重量，精密量取续滤液1 mL，置50 mL量瓶中，用20%乙腈稀释至刻度，取续滤液，测定并计算.2.1.4 线性关系考察1)甘草酸精密吸取对照品溶液0.25、0.50、0.75、1.00、1.50 mL，分别置于5 mL容量瓶中，流动相稀释，摇匀.分别精密吸取10 μL注入液相色谱仪进行分析.以甘草酸单铵盐对照品的进样质量浓度(C)对其峰面积积分值(A)进行线性回归，得回归方程：A=3811.1C+683.15(r=0.999 8)，结果表明，甘草酸单铵盐对照品的进样质量浓度在50～300 μg/mL的范围内与其峰面积积分值呈良好线性关系.2)甘草苷精密吸取对照品溶液0.25、0.50、0.75、1.00、1.50 mL，分别置于5 mL容量瓶中，甲醇稀释，摇匀.分别精密吸取20 μL注入液相色谱仪进行分析.以甘草苷对照品的进样质量浓度(C)对其峰面积积分值(A)进行线性回归，得回归方程：A=19 003C+10 174(r=0.999 7)，结果表明，甘草苷对照品的进样质量浓度在6.25～37.5 μg/mL的范围内与其峰面积积分值呈良好线性关系.2.2 提取工艺研究2.2.1 不同提取溶剂的选择根据文献报道[3]和2010年版《中国药典》(一部)，结合实际生产的需要，对不同提取溶剂进行筛选.选取水和65%的乙醇作为提取溶剂，以甘草酸和甘草苷的提取率为评价指标进行比较，提取方法： 1)水煎煮法：甘草粗粉50 g，用20倍量水煎煮3次，每次1.5 h，合并煎液，离心，倾取上清液，浓缩至50 mL，测定； 2)乙醇回流提取法：甘草粗粉50 g，用6倍量65%的乙醇回流提取3次，每次1.5 h，合并提取液，回收乙醇至无醇味，浓缩至50 mL，测定.不同提取溶剂下甘草酸和甘草苷的提取率见表1.注由表1可知，水煎煮法的总提取物得率比65%乙醇回流提取法的总提取物得率高一些，但65%乙醇回流提取法的甘草苷和甘草酸的提取率都比水煎煮法的高很多，综合结果优选65%的乙醇作为提取溶剂.2.2.2 优化乙醇回流提取工艺选用正交试验，优化乙醇回流提取条件.根据预实验选取乙醇体积分数(A)、溶媒用量(B)、提取时间(C)、提取次数(D)4个因素，每个因素选3个水平，采用L9(34)正交设计，以甘草酸和甘草苷的提取率综合值为指标进行考察，综合值=(甘草酸提取率+甘草苷提取率)/2.因素水平见表2；正交实验结果见表3；方差分析结果见表4.由表3直观分析可知，各因素对提取效果的影响依次为D>C>B>A，优化水平是A2B3C3D3；由表4方差分析可知，提取次数(D)对甘草酸、甘草苷提取效果的影响有显著意义(P<0.05).以总提取物得率为考察指标时，直观分析表明各因素对提取效果的影响依次为D>C>B>A，优化水平是A2B3C3D3；方差分析表明，B、C、D三种因素对总提取物得率的影响均有显著意义(P<0.05)；乙醇体积分数(A)对甘草酸、甘草苷的提取率，总提取物得率的影响均无显著意义.为降低大批量生产成本，决定选用55%乙醇(A1)，则最佳工艺为A1B3C3D3，即6倍量55%乙醇，回流提取3次，每次1.5 h.该结果与正交试验中综合值最高者的搭配A1B3C3D3一致.2.2.3 验证试验称取甘草50 g，按最佳工艺A1B3C3D3进行验证试验，测得甘草酸、甘草苷提取率分别为73.41%、74.18%，接近正交试验方案中的最高值，优化条件可行.有文献报道[4]，甘草酸用氨水提取效果好.甘草苷易溶于有机溶剂，多用乙醇提取.通过查阅文献和预实验，并从甘草用于化妆品工业化生产和安全角度考虑，本试验综合优选乙醇作为提取溶剂，确定乙醇体积分数、溶媒用量、提取时间和提取次数为考察因素，通过验证放大实验表明，正交实验优选确定的最佳工艺水平是科学、可行的，有利于实际生产降低能源、节约时间，故确定甘草乙醇回流提取的最佳工艺为A1B3C3D3，即6倍量55%乙醇，回流提取3次，每次1.5 h.【相关文献】[1] 国家药典委员会.中国药典(一部)[M].北京: 中国医药科技出版社, 2010. 80-81.[2] 张明发, 沈雅琴, 张艳霞.甘草及其有效成分的皮肤药理和临床应用[J].药物评价研究, 2013, 36(2): 146-156.[3] 刘育辰,王文全,郭洪祝.甘草有效成分的提取纯化方法研究进展[J].中成药, 2010, 32(11): 1953-1957.[4] 杜文彬,张洪.甘草中甘草酸的提取工艺研究[J].安徽农业科技, 2008, 36(25): 10935-10946.。

甘草中活性成分连续提取纯化及多孔炭材料制备工艺研究甘草中活性成分连续提取纯化及多孔炭材料制备工艺研究摘要：为了开发和利用甘草中的活性成分，本研究通过连续提取和纯化的方法，成功提取出甘草中的活性成分，并将其用于多孔炭材料的制备。

实验中采用乙醇提取甘草的活性成分，并通过分离纯化方法获得高纯度的甘草活性物质。

采用高温炭化方法将提取物转化为多孔炭材料，并通过扫描电子显微镜和氮气吸附-脱附测试对其表征。

结果显示，甘草中的活性成分成功提取，并且多孔炭材料具有良好的孔结构和吸附性能，有望在吸附剂和催化剂等领域得到应用。

关键词：甘草；活性成分；提取纯化；多孔炭材料；工艺研究引言：甘草是一种常见的中草药材，具有广泛的药用价值。

甘草中含有丰富的活性成分，如甘草酸、黄酮类化合物、三萜皂苷等。

这些成分具有抗氧化、抗炎、抗菌等多种生物活性，对于药物研究和新型材料的开发具有重要意义。

然而，甘草中的活性成分提取纯化研究还相对较少，且多孔炭材料制备工艺方面的研究也不充分。

方法：1. 甘草活性成分的提取使用乙醇作为提取剂，对甘草进行连续提取。

首先将甘草粉末与乙醇进行浸泡，然后采用超声波提取法进行连续提取。

通过调节乙醇的浓度、提取时间和提取温度等条件，优化活性成分的提取效果。

2. 活性成分的分离纯化采用色谱技术对乙醇提取物进行分离纯化。

选择合适的色谱柱和溶剂系统，通过层析技术将活性物质从杂质中分离。

最后通过结晶、再结晶等方法提高纯度。

3. 多孔炭材料的制备采用高温炭化法将提取物转化为多孔炭材料。

将纯化后的活性成分进行炭化处理，通过高温煅烧获得多孔炭材料。

在炭化过程中，通过控制温度和时间等参数，调节多孔炭材料的孔结构和比表面积。

结果与讨论：成功提取出甘草中的活性成分，并通过色谱技术获得高纯度的甘草活性物质。

通过扫描电子显微镜观察到，多孔炭材料表面呈现出丰富的孔洞结构，具有较大的比表面积。

通过氮气吸附-脱附测试发现，多孔炭材料具有优良的吸附性能，对某些有机物质具有良好的吸附能力。

[通讯作者]　3郭丽冰,Tel:(020)39352179,E -mail:xiaobing_12@yahoo 1com 1cn 。

常用大孔吸附树脂的主要参数和应用情况郭丽冰3,王蕾(广东药学院中药学院,广东　广州　510006)[摘要]大孔吸附树脂是近年来应用广泛的一种新型高分子聚合物,国内外生产厂家和型号众多,使用前需要有充分了解。

鉴于此,收集了国内外一些常用的大孔树脂的主要参数和应用情况供参考。

[关键词]大孔吸附树脂;型号;生产厂家;应用 大孔吸附树脂是20世纪60年代发展起来的一种新型非离子型高分子聚合物,也叫大网格吸附剂,兼有吸附性和筛选性,是以吸附作用和筛选作用相结合的分离材料。

大孔吸附树脂理化性质稳定,不溶于酸、碱及有机溶剂,对有机物选择性好,不受无机盐等离子和低分子化合物的影响[1]。

近年来在环保、医药、化工、分析化学、临床鉴定等领域应用很广泛。

大孔树脂的优点是品种多、比表面积大、吸附力强、选择性高,可用于多种有效成分或有效部位的分离纯化,其缺点是可带进毒性大的甲苯、二甲苯等残留物。

因此,大孔树脂应进行预处理,洗去残留物检查合格后方可使用。

目前国产树脂型号多,生产厂家和树脂型号显得比较混乱。

目前最常用的D101型树脂,其供应厂家就有天津树脂厂、天津骨胶厂、天津农药厂、上海试剂厂、天津市试剂厂、南开大学化工厂等,但缺乏统一的标准和必要的指导,使得树脂的质量难以得到保证,给使用者带来一定的盲目性。

大孔树脂型号不同,其极性不同,不同型号适用于不同有效成分或有效部位的分离纯化,使用时必须根据情况加以选择。

本文收集了一些常用大孔吸附树脂的主要参数和应用情况,以期对今后的应用有一定参考价值。

1　大孔吸附树脂的作用原理大孔树脂的基本性能和凝胶树脂相似,其“孔隙”是在合成时由于加入惰性的制孔剂,待网络骨架固化和链结构单元形成后,再用溶剂萃取或水洗蒸馏将其去掉,就留下了不受外界条件影响的孔隙,即“永久孔”。