实验室培养酵母菌的方法

五、实验室常用培养基的配制方法

Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml)

组份浓度 100 mg/ml Ampicillin

配制量 50 ml

配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。

2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。

3.用0.22 µm过滤膜过滤除菌。

4.小份分装(1 ml/份)后，-20℃保存。

IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)

组份浓度 24 mg/mL IPTG

配制量 50 mL

配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。

2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。

3.用0 22 µm过滤膜过滤除菌。

4小份分装(1 ml，份)后，-20℃保存。

X-Gal (20 mg/ml)

组份浓度 20 mg/ml X-Gal

配制量 50 ml

配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。

2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至50 ml。

3.小份分装(1 ml/份)后，-20℃避光保存。

LB培养基

组份浓度 1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨)，0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物)，1%(W/V)NaCl

配制量 1 L

配制方法

1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。

Tryptone 10 g

Yeast Extract 5 g

NaCl 10 g

2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1)，调节pH值至7.0。

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日

(21)申请号 202011050219.4

(22)申请日 2020.09.29

(83)生物保藏信息CCTCC:M2020464 2020.09.04

(71)申请人 云南中烟工业有限责任公司地址 650231 云南省昆明市五华区红锦路367号

(72)发明人 巩效伟　朱东来　赵伟　李廷华　李寿波　韩熠　吴俊　张霞　洪鎏　

(74)专利代理机构 北京市领专知识产权代理有限公司 11590代理人 钟华　任永利

(51)Int.Cl.C12N 1/16(2006.01)C12N 1/02(2006.01)C12R 1/645(2006.01)

(54)发明名称一种乳酸克鲁维酵母菌及其分离和培养方法(57)摘要本发明公开了一种乳酸克鲁维酵母菌，其微生物学分类命名为乳酸克鲁维酵母菌KM，拉丁文学名：Kluyveromyces lactis KM，已于2020年9月4日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCCM M2020464。本发明还公开了乳酸克鲁维酵母菌KM的分离、

培养方法。权利要求书1页 说明书4页

序列表1页 附图1页CN 112143660 A2020.12.29

CN 112143660

A1.一种乳酸克鲁维酵母菌，其特征在于，其微生物学分类命名为乳酸克鲁维酵母菌KM，

拉丁文学名：Kluyveromyces lactis KM，已于2020年9月4日在中国典型培养物保藏中心保

藏，保藏编号为CCTCCM M2020464。

2.一种分离和培养权利要求1所述的乳酸克鲁维酵母菌KM的方法，其特征在于，包括以

下步骤：

a、取多份虾酱样品，利用YPD固体培养基筛选出单菌落，单菌落在YPD液体培养基中培

养12～16h，保存于-80℃冰箱中；

b、从步骤(a)中选取20～30株菌落，在烟叶固体培养基中划线分离，在28～30℃下培养

五、实验室常用培养基的配制方法

Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml)

组份浓度 100 mg/ml Ampicillin

配制量 50 ml

配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。

2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。

3.用0.22 µm过滤膜过滤除菌。

4.小份分装(1 ml/份)后，-20℃保存。

IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)

组份浓度 24 mg/mL IPTG

配制量 50 mL

配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。

2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。

3.用0 22 µm过滤膜过滤除菌。

4小份分装(1 ml，份)后，-20℃保存。

X-Gal (20 mg/ml)

组份浓度 20 mg/ml X-Gal

配制量 50 ml

配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。

2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至50 ml。

3.小份分装(1 ml/份)后，-20℃避光保存。

LB培养基

组份浓度 1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨)，0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物)，

1%(W/V)NaCl

配制量 1 L

配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。

Tryptone 10 g

Yeast Extract 5 g

NaCl 10 g

2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1)，调节pH值至7.0。

4.加去离子水将培养基定容至1 L。

5高温高压灭菌后，4。C保存。

LB/Amp培养基

组份浓度

1%(W/V)

Tryptone

0.5%(W/V) Yeast Extract

1%(W/V) NaCl

污水处理厂及实验室活性污泥培养方法

一、污水处理厂活性污泥培养方法

污水处理厂建成以后，要进行单机试车和清水联动试车，如无问题，就应进行活性污泥培养，使处理厂尽早发挥污水处理功能。另外，曝气池泄空检修完毕之后，也有一个活性污泥培养问题。城市污水处理厂的污泥培养问题一般较简单，但当工业废水含量非常高时，会有一些困难，应视具体情况进行专门的污泥驯化。这里仅介绍城市污水处理厂污泥培养的一般方法及程序。

1．培养方法及种类

活性污泥从无到有，从不正常到正常的培养过程，有很多途径可以实现，因而也就有很多培养方法。对于一般城市污水来说，采用任一方法都可将活性污泥培养正常，但不同的方法所要求的培养时间不同，操作量及培养费用也不同。实践中，应根据处理广的具体情况，选择一种方法培养或几种方法并用。

1)间歇培养。将曝气池注满水，然后停止进水，开始曝气。只曝气而不进水称为“闷曝”。闷曝2～3d后，停止曝气，静沉1h，然后进入部分新鲜污水，这部分污水约占池容的1／5即可。以后循环进行闷曝、静沉和进水三个过程，但每次进水量应比上次有所增加，每次闷曝时间应比上次缩短，即进水次数增加。当污水的温度为15～20℃时，采用该种方法，经过15d左右即可使曝气池中的MLSS超过l 000mg/L。此时可停止闷曝，连续进水连续曝气，并开始污泥回流。最初的回流比不要太大，可取25％，随着MLSS的升高，逐渐将回流比增至设计值。

2)低负荷连续培养。将曝气池注满污水，停止进水，闷曝1d。然后连续进水连续曝气，进水量控制在设计水量的1／2或更低。待污泥絮体出现时，开始回流，取回流比25％。至MLSS超过1 000mg／L时，开始按设计流量进水，MLSS至设计值时，开始以设计回流比回流，并开始排放剩余污泥。

3)满负荷连续培养。将曝气池注满污水，停止进水，闷曝一天。然后按设计流量连续进水，连续曝气，待污泥絮体形成后，开始回流，MLSS至设计值时，开始排放剩余污泥。