高职院校“鸡新城疫抗体水平测定”技能大赛操作要点探索
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西藏林芝某鸡场鸡新城疫抗体水平检测页数:2
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2014全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定解读
2014年全国职业院校技能大赛“鸡新城疫抗体水平测定”赛项规程一、赛项名称赛项编号：G-057赛项名称：鸡新城疫抗体水平测定英语翻译：Detection of the antibody titer againstthe Newcastle disease virus赛项组别：高职组赛项归属产业：农业二、竞赛目的通过本项目竞赛，促进高职学生了解鸡新城疫抗体水平测定的内容，熟练掌握测定方法，提高检测水平，培养学生的团队合作能力，不断提升学生的职业能力；引领农业职业院校适应畜牧业行业现状及技术发展趋势，促进畜牧兽医专业建设与教学改革；推进学院与相关企业深度合作，更好地实现工学结合的人才培养模式，为畜牧兽医行业培养高素质技术技能型人才。
三、竞赛内容与时间（一）竞赛内容竞赛项目为鸡新城疫抗体水平测定（微量法）。
测定方法参考《新城疫诊断技术》（GB/T16550—2008）标准，具体分为6个部分。
竞赛总时间为180分钟。
1.试验器材准备（占总成绩的6%）按照操作规程进行试验器材的准备，并进行标识，合理摆放。
2.配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的20%）按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液。
3.血凝（HA）试验（占总成绩的16%）按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反应板上滴加稀释液、新城疫标准抗原，充分混匀后倍比稀释，添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡和感作，正确判定抗原的血凝效价。
4.配制四单位病毒（占总成绩的15%）根据HA试验测定结果，按照操作规程配制四单位病毒。
5.血凝抑制（HI）试验（占总成绩的16%）按照操作规程，对10个被检血清进行血凝抑制试验操作，同时设新城疫标准阳性血清对照和阴性血清对照。
6.抗体滴度报告（占总成绩的27%）按照操作规程正确读数，填写完成报告单。
（二）竞赛时间四、竞赛方式本赛项为团体赛。
每组参赛学生2名，须为同校在籍学生。
由各省、自治区、直辖市教育行政部门商农业行政部门，在本区域内设置畜牧兽医专业的涉农高职院校全日制在籍学生中（参赛选手年龄须不超过25周岁，即2014年7月1日前不满26周岁），经选拔组成1个代表队参加比赛，每队限报1名指导教师。
鸡新城疫抗体水平测定技能大赛培训总结
鸡新城疫抗体水平测定技能大赛培训总结作者：杨永倩张勃伟成梦玲来源：《安徽农业科学》2016年第20期摘要根据近年来全国新城疫抗体测定技能大赛，探索高职学生参加技能大赛的培训方法，主要从培训的组织、培训的过程和培训的效果等方面进行了总结，以期为广大学生和指导教师今后参赛提供参考。
关键词新城疫抗体测定；技能大赛；培训中图分类号 S-01文献标识码 A文章编号 0517-6611（2016）20-240-02Abstract The training method of technical competition for college students were explored according to the recent Newcastle disease antibody detection contest. Training organization， process and effects were summarized， so as to provide references for the majority of students and tutors.Key words Newcastle disease antibody determination； Technical ability contest； Training鸡新城疫抗体水平测定是一项具有典型代表性的试验技能，已作为高职教育技能大赛中一项固定的赛项内容。
笔者曾两度指导学生参加省级鸡新城疫抗体水平测定技能大赛，对大赛培训的组织、培训过程和培训效果进行了总结。
1 技能操作参照标准鸡新城疫抗体水平测定技能大赛以教育部颁布的职业学校相关专业教学指导方案和国家职业标准《动物疫病防治员》（三级）规定的知识和技能要求为基础，依据《新城疫诊断技术》（GB/T16550—2008）标准[1]及技能型人才培养要求，确定比赛内容及方式。
在训练中要求学生严格按照国标操作。
鸡新城疫抗体水平测定技能大赛竞赛规程
附件-12019年河北省高等职业院校鸡新城疫抗体水平测定技能大赛竞赛规程一、比赛的职业、标准、形式和内容（一）职业：动物疫病防治员。
（二）标准：（三）比赛形式1.本赛项内容由理论测试与技能测试两部分组成，其中理论知识占总分30%，技能操作占总分70%。
2. 实际操作比赛要求在规定时间内进行操作，到达预订比赛结束时间，停止一切操作，所占比重为总成绩的70%；3. 参赛代表队由6名选手组成，每个代表队设领队1人，指导教师1人，不得超出。
（四）比赛内容本竞赛重点考查参赛选手鸡新城疫抗体水平测定的实践操作能力，具体包括：1. 配制1%鸡红细胞悬液采血方法规范、熟练、抗凝剂量使用合理；天平使用、离心机使用、灭菌生理盐水洗涤红细胞操作规范、熟练；正确配制1%鸡红细胞悬液。
2. 血凝试验移液器加样规范；倍比稀释时混匀充分，试剂不滴加到孔外,吸头更换操作规范；1%红细胞悬液加之前应充分混匀，边滴加边震荡混匀。
准确判定完全凝集的病毒的最高稀释倍数作为1个血凝单位。
3.准确计算并配制4个血凝单位病毒溶液10-20ml, 微量移液器吸取和打出液体操作规范。
4.血凝抑制试验移液器加样规范；倍比稀释时混匀充分，试剂不滴加到孔外，吸头更换操作规范；1%红细胞悬液加之前应充分混匀，边滴加边震荡混匀。
感作时间适宜，结果无跳孔现象，判读结果准确。
二、竞赛用仪器、设备与材料仪器设备按《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2008）标准要求配制。
本赛项三、参考资料四、评分规定理论测试：理论测试时间为60分钟，满分100分，主要测试动物疫病防治员岗位相关理论知识。
占总评成绩30%。
技能测试：鸡新城疫抗体水平测定技能比赛时间为180分钟，评分为六个部分：试验器材准备、配制1%鸡红细胞悬液、血凝试验、配制4个血凝单位病毒溶液、血凝抑制试验、抗体滴度报告,共计总分为100分，占总评成绩70%。
（一）评分标准（二）个人成绩的计算取参赛选手理论考试成绩乘以0.3，再加上其实际操作成绩乘以0.7，二者之和即为参赛选手的总成绩。
2016年全国职业院校技能大赛高职组鸡新城疫抗体水平测定赛项规程
2016年全国职业院校技能大赛高职组“鸡新城疫抗体水平测定”赛项规程一、赛项名称赛项编号：GZ-108赛项名称：鸡新城疫抗体水平测定英语翻译：Detection of the antibody titer against the Newcastle disease virus赛项组别：高职组赛项归属产业：农林牧渔二、竞赛目的本赛项由学校、行业、企业共设，是高职畜牧兽医专业的核心技能，通过技能竞赛有效促进学校建设并完善实验、实训平台，加强核心技能的训练，提升高职畜牧兽医专业的人才培养质量。
同时，通过竞赛方式也有效促进学校与企业之间的合作交流，推动高职畜牧兽医专业教学改革和校企合作，共同培养畜牧兽医行业一线技能型人才。
三、竞赛内容本项目为鸡新城疫抗体水平测定（微量法），测定方法按《新城疫抗体诊断技术》（GB/T16550-2008）标准，竞赛总时间为180分钟。
具体步骤及其分值如下：（一）试验器材准备（占总成绩的8%）按照操作规程进行器材准备，要求器材摆放有序，物品标识合理，桌面整洁等。
（二）配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的18%）按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液，要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜等。
（三）血凝试验（占总成绩的20%）按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反应板滴加稀释液、新城疫标准抗原，充分混匀，倍比稀释后，添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡混匀，正确判定抗原的血凝效价。
要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果正确等。
（四）配制四单位病毒（占总成绩的10%）根据血凝试验结果，按照操作规程配制四单位病毒。
要求稀释倍数计算正确，稀释液体积加入得当、四单位病毒配制量适宜等。
（五）血凝抑制试验（占总成绩的20%）按照操作规程，对20个被检血清进行血凝抑制试验操作，并设新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照；正确读取抗体滴度结果，完成报告。
1-鸡新城疫抗体水平测定
附件1：高职农林牧渔专业类鸡新城疫抗体水平测定赛项技能竞赛规程、评分标准及选手须知一、竞赛内容本项目为鸡新城疫抗体水平测定（微量法），测定方法按《新城疫抗体诊断技术》（GB/T16550-2008）标准进行。
本赛项不设理论考试，只对技能操作进行综合考核，技能竞赛题为公开试题，见本赛项规程的主要技术规程及要求。
二、竞赛方式本赛项为2人小组赛，以院校为单位组队参赛，不得跨校组队。
三、竞赛时量比赛时间为3小时。
比赛时由参赛队自行确定分工完成相关竞赛内容。
四、名次确定办法本赛项满分100分，采用分项计分法。
按总分由高到低排序，总分相同按完成时间先后排序，用时少者列前；若二项均相同，则按抗体滴度报告、西凝试验得分高低依次排序。
五、评分标准与评分细则1．评分标准及分值项目技能竞赛评分标准及分值见表1。
表1项目技能竞赛评分标准及分值2．评分细则项目技能竞赛评分细则见表2。
表2项目技能竞赛评分细则六、赛点提供的设施设备仪器清单仪器设备按《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2008）标准要求配制，且均为常用仪器、设备与材料。
本赛项所用的仪器、设备与材料见表3。
表3项目竞赛用仪器、设备与材料七、选手须知（一）主要技术规程及要求鸡新城疫抗体水平测定（微量法）按《新城疫抗体诊断技术》（GB/T16550-2008）标准进行，具体步骤及其分值如下:（一）试验器材准备（占总成绩的8%）按照操作规程进行器材准备，要求器材摆放有序，物品标识合理，桌面整洁（二）配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的18%）按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液，要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜等。
（三）血凝试验（占总成绩的20%）按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反应板滴加稀释液、新城疫标准抗原，充分混匀，倍比稀释后，添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡混匀，正确判定抗原的血凝效价。
要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果正确等。
实训5鸡新城疫免疫效果监测.
0.01mol/l磷酸盐缓冲溶液(PBS)、1%鸡红细胞悬液、阿氏液、 灭菌生理盐水、青霉素、链霉素、鸡新城疫病毒悬液、鸡新城 疫阳性血清、被检鸡血清等。
三、实训方法
1.按3～5人为一小组，配制阿氏液和制备1%鸡红细胞悬液； 鸡群免疫后10～14天，随机抽样采血制备血清，每组血清样本 不少于10份 。
的实训报告。
实训项目：鸡新城疫免疫效果监测
一、实训目的和要求
通过本次实训，使学生掌握鸡新城疫抗体监测的操 作方法，为今后从事鸡场疫病预防工作奠定基础。
二、实训材料
微量振荡器、离心机、微量加样器（配带滴头）、96孔V型
反 应 板 、 1ml 和 5ml 注 射 器 、 针 头 、 试 管 、 吸 管 、 pH7.2 、
2.微量血凝抑制（HI）试验：该法是最常用的方法。在进
行HI试验之前必须先进行微量血凝（HA）试验，测定病毒抗原 的血凝价，以确定HI试验4个血凝单位所用病毒抗原的稀释倍数。
三、实训方法
（1）微量血凝（HA）试验---操作步骤
①用微量加样器向反应板上每个孔中分别加PBS缓冲液25μl，共滴4排， 换滴头。②吸取25μl病毒液，加于第一孔中，用该加样器挤压5～6次使病 毒混合均匀，然后向第2孔移入25μl，挤压5～6次后再向第3孔移入25μl， 依次倍比稀释到第11孔，使第11孔中液体混合后从中吸出25μl弃去，换滴 头。第12孔不加病毒抗原，只作对照。③每孔再加PBS缓冲液25μl。④每孔 均加1%鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）25μl。⑤加样完 毕，将反应板置于微型振荡器上振荡1min，或手持血凝板摇动混匀，并放室 温（20℃～30℃）下作用40min，观察并判定结果 。
三、实训方法
（1）微量血凝（HA）试验---结果判定
三、实训方法
1.按3～5人为一小组，配制阿氏液和制备1%鸡红细胞悬液； 鸡群免疫后10～14天，随机抽样采血制备血清，每组血清样本 不少于10份 。
的实训报告。
实训项目：鸡新城疫免疫效果监测
一、实训目的和要求
通过本次实训，使学生掌握鸡新城疫抗体监测的操 作方法，为今后从事鸡场疫病预防工作奠定基础。
二、实训材料
微量振荡器、离心机、微量加样器（配带滴头）、96孔V型
反 应 板 、 1ml 和 5ml 注 射 器 、 针 头 、 试 管 、 吸 管 、 pH7.2 、
2.微量血凝抑制（HI）试验：该法是最常用的方法。在进
行HI试验之前必须先进行微量血凝（HA）试验，测定病毒抗原 的血凝价，以确定HI试验4个血凝单位所用病毒抗原的稀释倍数。
三、实训方法
（1）微量血凝（HA）试验---操作步骤
①用微量加样器向反应板上每个孔中分别加PBS缓冲液25μl，共滴4排， 换滴头。②吸取25μl病毒液，加于第一孔中，用该加样器挤压5～6次使病 毒混合均匀，然后向第2孔移入25μl，挤压5～6次后再向第3孔移入25μl， 依次倍比稀释到第11孔，使第11孔中液体混合后从中吸出25μl弃去，换滴 头。第12孔不加病毒抗原，只作对照。③每孔再加PBS缓冲液25μl。④每孔 均加1%鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）25μl。⑤加样完 毕，将反应板置于微型振荡器上振荡1min，或手持血凝板摇动混匀，并放室 温（20℃～30℃）下作用40min，观察并判定结果 。
三、实训方法
（1）微量血凝（HA）试验---结果判定
2019年安徽职业院校技能大赛高职组鸡新城疫抗体水平测
2019年安徽职业院校技能大赛高职组鸡新城疫抗体水平测一、简介2019年安徽职业院校技能大赛高职组鸡新城疫抗体水平测是一项专门针对鸡新城疫的技能比赛，旨在检测参赛选手对于鸡新城疫的了解和技能水平。
二、比赛原理和流程比赛原理：选择参赛选手在比赛现场采集的鸡血样本，进行检测鸡新城疫抗体水平，从而评判参赛选手对鸡新城疫的掌握情况。
比赛流程如下：1.选手准备：参赛选手需要提前了解比赛规则和对鸡新城疫的知识，并准备好相关试剂和设备。
2.采集样本：参赛选手在比赛现场采集鸡血样本。
3.检测鸡新城疫抗体水平：参赛选手将鸡血样本制成血清，并使用ELISA方法进行检测鸡新城疫抗体水平。
4.结果评价：参赛选手根据检测结果，评价样本中鸡新城疫的抗体水平。
三、技能要求参赛选手需要具备以下技能：1.掌握鸡新城疫的相关知识和防治措施。
2.熟练掌握鸡血样本的采集和血清制备方法。
3.较好地了解ELISA检测方法的原理和操作步骤。
4.能够熟练使用ELISA试剂盒。
四、比赛考察内容比赛考察内容包括以下方面：1.参赛选手对于鸡新城疫知识的理解和应用能力。
2.参赛选手对于鸡血样本的采集和血清制备技能掌握情况。
3.参赛选手对于ELISA试剂盒的操作技巧和应用能力。
4.检测结果的准确性和评价能力。
五、比赛影响2019年安徽职业院校技能大赛高职组鸡新城疫抗体水平测旨在促进鸡新城疫防治技术的提高和推广，同时也可以激发参赛选手的学习兴趣和实际应用能力。
比赛的影响将包括：1.推广鸡新城疫防治知识，促进兽医学技术的提升。
2.培养参赛选手的实际操作技能和应用能力。
3.促进行业内技术的交流和合作，推动行业快速发展。
六、总结2019年安徽职业院校技能大赛高职组鸡新城疫抗体水平测是一项重要的技能比赛，旨在检测参赛选手对于鸡新城疫的了解和技能水平。
比赛要求选手具备一定的理论基础和实际操作能力，考察内容涉及鸡新城疫的防治技术、鸡血样本的采集和ELISA试剂盒的应用等方面。
参加全国鸡新城疫抗体水平检测技能大赛体会
| 组稿 \Email ：******************* I 兽医论坛参加全国鸡新城疫抗体水平检测技能大赛体会王珊（宝鸡职业技术学院，陕西宝鸡721301）摘要：鸡新城疫抗体水平检测是一项禽病预防工作人员必须掌握的技能，也是近几年高职涉农专业唯一开展的赛项。
在操作工作中，国标是准绳，细节决定结果。
为了提高本赛项检测结果的准确性，科学指 导临床工作，本人将自己近几年指导此项的体会进行总结，供养殖企业、高职院校技术人员高校教 师 ％关键词:高职组；新城疫抗体水平检测；体会中图分类号：S858.31-4文献标识码:B 文章顺序编号：1005-5959（2020）10-042-031赛前筹划，积极备赛1.1校企合作，与时俱进掌握技术要领单凭教师自己的领悟是不够的，还需要企业专家、养鸡场技术人员及动物疫病预防控制中心的专家参与,共同研究国标、技能大赛评分标准 及操作规范,做到操作规范、正确、实用。
1.2 精心组织，重在选拔参加比赛要取得好成绩，选拔参赛选手非常重要。
俗话是最好的 师，此赛 的训练要：&,且体，外还要综合 的专业知识、心理素质及 能 。
新，参赛及的 作 ，到参赛与不参赛 作及的 ，技能大赛,选拔。
1.3优化实训条件，积极备赛要不自 的实， 实件与 与比赛 ，比赛中及 不够 ，水平的正常 。
1.4有条不紊，团队协作赛 的中，拔 人的非常重要。
，要 参赛 的 合理分， 人 ， 且要 合 ， 做到操作 ，合 。
2规范操作，保质保量2.1对照标准，严格训练赛 是国家业标准《动物疫病防治员》（级）规定的知识和技能要基础，中华人民共和国国家标准（GB/T16550-2008）“新城疫诊断技 术”依，操作规范与要求参考GB/T16550-2008（，研究赛 规程及国家标准，按照国家标准及评分标准要 严格训练，这样才能够的技能操作标准。
2.2选择试验器材，摆放整齐合理中，不论用的器材还是的设置上，好能与赛规及所承办院校提供的材和放置位置 ，重多次习，熟能巧，这样才能够确保选手比赛中不失误。
鸡新城疫抗体水平测定技能大赛培训总结
鸡新城疫抗体水平测定技能大赛培训总结杨永倩;张勃伟;成梦玲【摘要】根据近年来全国新城疫抗体测定技能大赛，探索高职学生参加技能大赛的培训方法，主要从培训的组织、培训的过程和培训的效果等方面进行了总结，以期为广大学生和指导教师今后参赛提供参考。
%The training method of technical competition for college students were explored according to the recent Newcastle disease antibody de-tection contest.Training organization, process and effects were summarized, so as to provide references for the majority of students and tutors.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2016(044)020【总页数】2页(P240-241)【关键词】新城疫抗体测定;技能大赛;培训【作者】杨永倩;张勃伟;成梦玲【作者单位】渭南职业技术学院，陕西渭南714026;渭南职业技术学院，陕西渭南714026;渭南职业技术学院，陕西渭南714026【正文语种】中文【中图分类】S-01鸡新城疫抗体水平测定是一项具有典型代表性的试验技能，已作为高职教育技能大赛中一项固定的赛项内容。
笔者曾两度指导学生参加省级鸡新城疫抗体水平测定技能大赛，对大赛培训的组织、培训过程和培训效果进行了总结。
鸡新城疫抗体水平测定技能大赛以教育部颁布的职业学校相关专业教学指导方案和国家职业标准《动物疫病防治员》(三级)规定的知识和技能要求为基础，依据《新城疫诊断技术》(GB/T16550—2008)标准[1]及技能型人才培养要求，确定比赛内容及方式。
在训练中要求学生严格按照国标操作。
2.1 校方的支持近年来，各职业院校都大力支持教师指导学生参加各级技能竞赛。
2017 技能大赛 高职 鸡新城疫抗体水平测定 正式赛卷及评分标准
2017年全国职业院校技能大赛
鸡新城疫抗体水平测定项目公开赛题
一、竞赛内容
本项目为鸡新城疫抗体水平测定（微量法），测定方法按《新城疫抗体诊断技术》（GB/T16550-2008）标准，竞赛总时间为180分钟。
具体步骤及其分值如下：
（一）试验器材准备（占总成绩的8%）
按照操作规程进行器材准备，要求器材摆放有序，物品标识合理，桌面整洁等。
（二）配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的18%）
按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液，要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜等。
（三）血凝试验（占总成绩的20%）
按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反应板滴加稀释液、新城疫标准抗原，充分混匀，倍比稀释后，添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡混匀，正确判定抗原的血凝效价。
要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果正确等。
（四）配制四单位病毒（占总成绩的10%）
根据血凝试验结果，按照操作规程配制四单位病毒。
要求稀释倍数计算正确，稀释液体积加入得当、四单位病毒配制量适宜等。
（五）血凝抑制试验（占总成绩的20%）
按照操作规程，对20个被检血清进行血凝抑制试验操作，并设
新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照；正确读取抗体滴度结果，完成报告。
要求移液器使用规范、反应板各孔的稀释正确、感作时间得当、结果判断正确等。
（六）抗体滴度报告（占总成绩的24%）
按照操作规程，正确读取抗体滴度结果，完成报告。
要求抗体滴度报告方式正确、场地整洁、结果误差小等。
二、评分标准
项目技能竞赛评分标准见表1。
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162019年第 49卷·第5期本赛项由学校、行业、企业共同设立。
通过采取全国统一标准进行技能竞赛，有效促进全国高职院校畜牧兽医类专业之间的交流，引领专业建设与课程改革；能进一步深化学校与企业之间的合作交流，为专业建设和课程改革增添了新的思路，同时通过本赛项的资源转化，可以向社会展示畜牧兽医类专业的师生风采和建设成果，提高专业的教学水平，提升人才培养质量[1,2]。
１ 比赛对照标准鸡新城疫抗体水平测定技能大赛赛项是以教育部颁布的国家职业标准《动物疫病防治员》（高级）为基础，以国家标准GB/T16550-2008[3]《鸡新城疫诊断技术》为依据，严格按照大赛组委会赛项规定[4]，进行结果判定和评分。
1.1 实验仪器的准备以2018年全国职业院校技能大赛赛项规程为例。
实验器材的准备占实验总成绩的8%。
主要要求参赛选手按照操作规程进行器材准备，要求器材选择正确、摆放有序，物品标识合理，桌面整洁等。
由赛组委会提供的项目竞赛用仪器、设备与材料共计34项。
但在实际操作过程中并不是所有的全部选用，选择仪器设备要以“使用合理的前提下够用”为原则。
在仪器与材料准备时要检查清点，并要做好清晰合理的标识。
使用的烧杯、离心管、离心管盖和血凝板都要进行标识。
实验器材的摆放要严格遵守分区摆放的原则，明确污染区和洁净区各自物品的数量和用途。
摆放完毕尽可能的不要去来回挪动器材，尽可能的做好各区域之间的互不干扰。
该赛项中主要用到的仪器有不同规格的精准微量移液器及相应的配套材料、离心机、托盘天平、微型震荡器，用到的实验材料及动物有非免疫公鸡、禽用采血器、96孔微型反应板、烧杯等。
对仪器的操作和使用要掌握其工作的原理，尤其要做好规范操作和合理使用。
1.2 1%鸡红细胞悬液配制1%鸡红细胞悬液的配置情况直接影响到实验的进度和实验结果的准确性。
而配置过程中采血是否成功是最为关键的。
在配置1%鸡红收稿日期：2019-03-26作者简介：张春霞（1989-），女，青海湟中人，讲师，主要研究方向为动物疫病防控。
高职院校“鸡新城疫抗体水平测定”技能大赛操作要点探索张春霞(青海畜牧兽医职业技术学院，青海 湟源 812100)摘 要：由农业部主办的全国职业院校鸡新城疫抗体水平测定技能大赛赛项是高职院校中规模最大、水平最高、竞争最激烈的比赛项目之一。
为了更好的提高学生的专业技能以及在以后的比赛中取得更突出的成绩，本文从实验器材的准备、配制1%鸡红细胞悬液、血凝（HA）实验、配制四单位病毒、血凝抑制（HI）实验和抗体滴度报告等六个操作环节进行了初步分析，以供从业者参考。
关键词：高职院校；鸡新城疫；抗体；技能大赛中图分类号：S854.4+4 文献标识码：A 文章编号：1006-799X(2019)05-0016-02综述专论zong shu zhuan lunDOI:10.15979/62-1064/s.2019.05.0032019年第49卷·第5期细胞悬液时，首先采血前要做好相关准备工作，采血器的正确选择、鸡的正确保定、3.8%枸橼酸钠的量、采血时的手法、采血的量、采血部位的处理以及后期对使用器材的正确处理等都要严格按照相关规定。
其次，要控制好倍比稀释液（生理盐水）的量，以及添加稀释液后的配平，第一次离心时转速和时间的选则、离心完成后是否完全吸取白细胞层和血小板层。
最后，在离心管中红细胞吸取的位置、吸取的量，以及吸取后洗涤的次数等都按照参赛规程的评分标准进行操作。
对参赛规定和国标要求不够明确的，多次的进行尝试性试验，并每次对比各种操作方法的实验结果选取最佳的操作方法，保证各项操作尽可能规范，提高配置的红细胞浓度的准确性。
1.3 血凝（HA）实验取血凝反应板，先对其进行标注，尤其标明该反应板为血凝实验操作用，标明第10、11、12孔位置，以防加样时混淆。
加样时要确保液体完全加入到v型板的底部，不能加到壁上甚至是溅出到孔外，加样过程中应尽可能的悬空加样，不能出现碰壁的情况，倍比稀释时要确保每一孔的吹吸次数是一样的，加红细胞时一定要边摇边加，尽量保证每一孔当中加入的红细胞的浓度是一样的，加样时应该从后往前加，减少相邻孔之间的交叉污染。
抗原悬液的滴加也要从后往前加，加入前也要混匀，减少实验误差。
反应板震荡的时间、感作时间和室温的要求严格按照国家标准。
结果判定时在生理盐水对照孔呈现明显的纽扣状沉到孔底时判定实验结果。
1.4 配制四单位病毒四单位病毒（4HAU）的配置要根据血凝实验的结果和待检血清的份数来进行计算。
4HAU 的配备是否准确会直接影响实验结果的准确性。
在平时准备或训练阶段一定要做回滴实验[5]来进行校正配置的4HAU浓度是否准确。
生理盐水和抗原的总配置量按照评分标准不能超过10～20 ml。
稀释的倍数要反复计算正确，在加入抗原时一定要反复吹洗多次。
1.5 血凝抑制（HI）实验首先要对反应板进行标记，每个反应板的第10、11和12孔、阴阳性对照组、待检血清都要进行仔细的标记。
加入的待检血清的编号一定要跟反应板标记的编号一一对应。
每个待检血清加入前都要充分摇匀，加入四单位抗原和红细胞悬液时也要充分混匀，要从后往前边摇边悬空加样，保证每一孔加进去的液体的浓度和数量是一致的。
在倍比稀释的过程当中不但要保证每孔吹吸的次数是一样的还要保证倍比稀释不产生气泡。
操作时间和结果的判定同样要严格依据国家标准GB/T16550-2008[1]《鸡新城疫诊断技术》的要求，在生理盐水对照孔和阴阳性对照成立的前提下进行结果的判定。
1.6 抗体滴度报告报告单主要填写血凝实验的血凝价，4单位抗原的稀释度和每个待检血清的血凝抑制价等。
实验结果出来后要马上举手示意评委。
在填写抗体的滴度时一定要用log2来进行规范表示。
记录要填写清楚，不乱涂乱改。
实验结束后仪器和器皿要复位，采血器、残留的红细胞泥离心管等都要放入到固废缸，要保证实验场地的整洁。
２ 结果判定是比赛关键点结果判定和抗体滴度报告占34分，抗体滴度结果的判定一定是在标准阳性血清和标准阴性血清对照成立的前提下，在对照孔红细胞呈明显钮扣状沉淀到孔底时判定结果，以能完全抑制红细胞凝集的血清的最大稀释度作为该血清的血凝抑制价。
整个实验过程中结果的读取都一定要遵循“完全”的原则。
（下转第20页）综述专论zong shu zhuan lun17202019年第 49卷·第5期参考文献：[1] Park CJ, Seo YS. Heat shock proteins: a review of the molecular chaperones for plant immunity[J]. Plant Pathol J, 2015, 31(4): 323-333.[2] MorimotoRl, Sarge KD, Abravaya K. Transcriptional regulation of heat shock genes .A paradigm for inducible genomic responses [J].J BiolChem,1992 ,267(31):21 987-21990.[3] Huang WJ, Xia, lM, Zhu F, et al. Transcriptional upregulation of HSP70-2 by HIF-1 in cancer cells in response to hypoxia[J]. Int J Cancer, 2009, 124(2): 298-305.[4] Zhou J, Schmid T, Frank R, et al. PI3K/Akt is required for heat shock proteins to protect hypoxia-inducible factor1alpha from pVHl-independent degradation[J].J BiolChem,2004,279(14): 13506- 13513.[5] 宾石玉,钟丹丹,杜雪松,等.吉富罗非鱼HSP70基因的多态性及其与耐寒性状的相关性研究[J].广西师范大学学报(自然科学版),2019,37(1):211-217[6] SunY,OuyangYB,XuL,etal.Thecarboxyl-terminaldomain of inducible Hsp70 protects fromischemic injury in vivo and in vitro[J].JCerebBloodFlowMetab,2006,26(7):937-950.[7] Li H，Li Y，Liu D，et al．Extracellular HSP70/HSP70-PCspromote epithelial-mesenchymal transition of hepatocarcinoma cells[J].PLoS One,2013,8(12):e84759．[8] Yi Z,Li Y,Liu D,et al.Extracellular HSP70/HSP70－PCs regulate hepatocarcinoma cell migration and invasion via ＲhoA[J].Oncol Lett,2017,13(3):1095-1100.[9] Zhe Y，Li Y，Liu D，et al．Extracellular HSP70－peptide complexes promote the proliferation of hepatocellular carcinoma cells via TL Ｒ2/4/JNK1/2MAPK pathway[J].Tumour Biol,2016，37(10):13951-13959．[10] 艾敏. 日本血吸虫热休克蛋白70诱导小鼠先天免疫的初步研究[J].中国农业科学院，2017,(5).[11] Richter －Landsberg C,Goldbaum O.Stress proteins in neural cells: functional roles in health and disease[J].Cellular ＆ Molecular Life Sciences:CMSL,2003,60(2):337-349.[12] Zhang G G，Teng X，Liu Y，et al．Inhibition of endoplasmreticulum stress by ghrelin protects against ischemia/reperfusion injury in rat heart[J].Peptides,2009,30(6):1109-1116.[13] 石键，傅伟明，张宏,等.C6胶质瘤细胞热耐受性与HSP70及VEGF 蛋白表达变化[J].2011中华医学会神经外科学学术会议论文汇编,2011,(2).（编辑：赵鹏飞）参考文献：[1] 吴双,王涛,徐婷婷,等.高职院校鸡新城疫抗体水平检测技能探索与实践[J].职业技术,2018,17(12):86-89.[2] 2018年全国职业院校技能大赛拟设赛项规程[S].赛项编号：GZ-2018011.[3] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,中国国家标准化管理委员会.新城疫诊断技术:GB/T16550-2008[S].北京:中国标准出版社,2008.[4] 2018年全国职业院校技能大赛福建赛区组委会.2018年全国职业院校技能大赛赛项指南[Z].2018.[5]陆品红,王丽娟.4HUA 抗原回滴操作在禽流感试验中的重要性[J].中国畜禽种业,2009,5(8):134.（编辑：赵鹏飞）（上接第17页）综述专论zong shu zhuan lun。