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真菌是一种广泛存在于自然界中的生物，也是一类常见的病原体。
在研究真菌时，鉴定其特征和分类是非常重要的步骤。
对真菌的鉴定需要注意其不同的形态、生长环境和遗传特征等多方面的因素，因此准确地识别真菌是一个相对困难的任务。
本文将讨论目前常用的真菌鉴定方法，包括形态学鉴定、遗传学鉴定和分子生物学技术。
1.形态学鉴定在真菌初步分类时，形态学鉴定是基本的方法。
这一方法通常会涉及到真菌菌丝体和子实体的形态特征。
菌丝体通常呈细丝状或短棒状，并且有时会形成分支或团块。
对于子实体，其外观（包括色彩、形状、质地和大小）以及内部的菌柄、孢子和异型等部分的特征都是鉴定的关键要素。
除了以上主要的形态学鉴定方法之外，还可以通过对真菌产生的代谢产物进行鉴定。
有些真菌会产生一些特殊的化合物，如次生代谢物等，这些代谢产物对真菌鉴定也有一定的帮助。
例如，人们可以通过对真菌产生的次生代谢物进行分析来判断其属于哪一品种或属。
2.遗传学鉴定随着技术的进步，越来越多的人选择了通过遗传学鉴定真菌。
这一方法建立在基因序列比对的基础上，主要利用真菌DNA序列的不同构成来对其进行分类。
在这一技术中，人们可以对真菌线粒体DNA序列、大肠杆菌RNA多序列比较和嵌合子单链多态性等进行分析。
遗传鉴定提供了一种非常准确的真菌鉴定方法，由于其几乎可以排除因为环境影响而导致的误判。
3.分子生物学技术在分子生物学技术中，PCR（聚合酶链式反应）和DNA杂交技术是最广泛应用的技术之一。
通过PCR技术，可以从真菌样品中扩增出自RNA的DNA片段（例如其特征序列），以此来进行鉴定。
DNA杂交技术则是基于双链碱基对形成的互补性，将RNA或DNA探针与指定标记DNA 杂交，从而实现对真菌物种的准确识别。
这些技术未来将会得到更广泛的应用和发展。
真菌的鉴定是一个相对复杂的过程，需要经验丰富、技术优秀的人员协助完成，同时多种技术的结合也是一个比较可行的解决方案。
随着科学技术的进步，我们可以更加准确地对真菌进行鉴定，从而更好地了解和利用这些生物的各个方面。
植物病原真菌的分离培养精选文档TTMS system office room 【TTMS16H-TTMS2A-TTMS8Q8-实验十三植物病原真菌的分离培养一、实验原理植物患病组织内的真菌菌丝体，如果给予适宜的环境条件，除个别种类外，一般都能恢复生长和繁殖。
植物病原菌的分离就是指通过人工培养，从染病植物组织中将病原真菌与其它杂菌相分开，并从寄主植物中分离出来，再将分离到的病原菌于适宜环境内纯化，这个过程总称植物病菌的分离培养。
植物病原真菌的分离一般都是采用组织分离法，就是切取小块病组织，经表面消毒和灭菌水洗过后，移到人工培养基上培养。
二、实验目的：植物病原菌的分离培养是植物病理学实验最基本的操作技术之一，它对原害鉴定，病原形态观察、植物病害接种体的培养等方面都是经常使用的研究手段。
通过本实验，要求植物病原菌分离培养的一般原则和方法。
三、实验材料及准备：1．分离材料：梨黑斑病（Alternaria kikuchiana），柿树圆斑病（Pestnlotia sp）及杉木炭疽病（Glomerella cingolata）新发病的病叶；杨树烂皮病（Cytospora chrysosperma）国槐腐烂病（Dothiorella sp.）的带有新病斑的枝条；油松种子。
2．分离用具（每小组为单位）酒精灯4个，手术剪4把，眼科镊4把，PDA培养基3瓶，培养皿（Φ9cm）24套，小烧杯（5ml）4个，大烧杯1个，斜面培养基12管，灭菌水4瓶，75%酒精瓶1个（内放脱脂棉球）%升汞瓶1个，5%乳酸瓶（60ml）1个，火柴1盒，湿、干纱布各4张。
四、实验方法及步骤：（一）、分离前的准备工作：1．工作环境的清洁和消毒分离培养一般在无菌室、无菌箱或无菌工作台（超净工作台）上进行，无菌室和无菌箱要经过喷雾除尘，并用药物或紫外线照射消毒（常用消毒药物为70%酒精，2%煤酚皂液，5%石炭酸液等喷雾。
若用紫外线灯照射则需20-30分钟）。
川芎内生真菌的分离与鉴定汪杨丽，严铸云，郭晓恒，宋杰，陈新，万德光成都中医药大学药学院中药材标准化实验室，四川成都 (610075）E-mail：wangyangli27@摘要：目的：探讨川芎内生真菌类群与川芎品种和产地的关系。
方法：采用平板分离法分离川芎的内生真菌，采用点植法对分离菌株进行分类鉴定。
结果：从6个产地的川芎根茎样品共获得内生真菌50株，经形态观察分类鉴定为1纲、3目、4科、13属。
结论：不同产地及不同品种川芎的内生真菌在数量、分布、种群及其组成存在差异，推测川芎的道地性可能和川芎内生真菌种群有关。
关键词：川芎，内生真菌，分离鉴定川芎为伞形科（Umbelliferae）藁本属植物川芎（Ligusticum chuanxiong Hort.）的干燥根茎，具有活血行气、祛风止痛的功效，是著名的川产道地药材。
四川都江、彭州为川芎的主要产区。
此外，云南丽江、甘肃庄浪和华亭、江西等地也产，分别称“云芎”、“西芎”、“抚芎”[1～3]。
有关不同产地及不同品种川芎的化学成分品质、药理、药效的研究报道较多[4]，但至今未见从川芎根茎分离内生真菌及其内生真菌种群多样性的研究报道。
根据内生真菌和植物互惠共生的关系[5，6]，本文对不同产地及不同品种的川芎进行内生真菌的分离，探讨川芎在特定生境中的微生物群落结构的特征。
1. 材料与方法1.1材料1.1.1植物来源（见表1）1.1.2 培养基 PDA培养基[7]（马铃薯葡糖糖培养基）＋青链霉素混合液[8]（用于分离）；PDA 培养基；促孢培养基（KH2PO41g、KNO31g、MgSO4.7H2O 0.5g、KCl 0.5g、淀粉0.2g、葡萄糖 0.2g、蔗糖 0.2g、琼脂15～20g、蒸馏水 1000ml、PH自然)。
表1 各种川芎的样品情况药材名原植物部位采集地采集时间川芎Ligusticum chuanxiong Hort. 根茎四川彭州敖平2006.5.20川芎L. chuanxiong Hort. 根茎四川都江堰石羊2006.5.22山川芎L. chuanxiong Hort. 根茎四川彭州小鱼2006.7.24山川芎L. chuanxiong Hort. 根茎四川汶川水磨2006.8.10西芎L. sinense Oliv. 根茎甘肃平凉市华亭马峡2006.9.14云芎L. chuanxiong Hort. cv. Jinxiong根茎云南丽江泸沽湖2006.8.17注：以上品种经成都中医药大学严铸云副教授鉴定1.2方法1.2.1. 内生真菌的分离先去掉新鲜川芎的须根，用自来水将川芎根茎表面洗净，用5%的NaClO溶液浸泡5min，用自来水反复的漂洗，稍干后切成适宜大小的小块，在无菌的条件下，用75％酒精中浸泡5 min，用无菌水冲洗3～4次，无菌滤纸吸干，然后用无菌刀片将表皮削去，分别切成5 mm×5 mm×1 mm的小块种植于PDA培养基内，每个培养皿中放7小块，每个样品6个培养皿，置28℃恒温箱中培养3～15d，观察到培养基上从各植物组织块内部向周围长出菌丝并渐渐形成菌落时，采用尖端菌丝挑取法把真菌转移到另一个PDA的试管斜面或者平皿纯化培养，即得内生真菌。
一株产黑色素海洋真菌的分离、鉴定及色素性质的研究胡晟源;刘姝;王淑军;焦豫良;来蒋丽;顾张慧;房耀维【摘要】Our aims are to isolate melanin-producing fungi from Haizhou Bay,to clarify the taxonomic status,and to study the properties of the melanin. The pigments-producing fungi were isolated from the collected samples of sea water,sea anemone,and sea mud from Haizhou Bay with the method of enrichment culture. The melanin-producing fungi were re-screened by shake flask fermentation. Then the melanin-producing fungi were identified and the properties of the crudly extracted melanin were measured. The strain CXPF01 was obtained and identified as Cladosporium cladosporioides by its morphological and ITS sequence homology. The pigment had maximum absorption value at 220 nm. There was non-significant effect of light on the pigment while high temperature and alkalinity or acidity had a remarkable impact on it. The pigment presented inhibitory effect on Staphylococcus aureus and Escherichia coli. Conclusively,the melanin-producing fungus CXPF01 was obtained,from which the melanin was stable in light and it had antibacterial activity.%从海州湾筛选产黑色素的真菌,确定其分类地位,并对其所产色素的性质进行研究.对海州湾海域采集的海水、海葵、海泥等样品进行富集培养,筛选具有产色素能力的真菌.利用摇瓶发酵进行复筛,筛选得到产黑色素的菌株,对筛选得到的菌株进行鉴定,然后对其所产色素进行粗提,并对性质进行测定.通过筛选获得一株产黑色素丝状真菌菌株CXPF01,结合形态学观察和ITS分子序列分析将CXPF01鉴定为Cladosporium cladosporioides.所产黑色素在220 nm处具有最大吸收值.光照对色素的稳定性影响不显著,高温和酸碱对黑色素稳定性具有显著影响.该色素对Staphylococcus aureus和Escherichia coli具有抑制作用.该真菌所产黑色素对在光照条件下有较好的稳定性并具有抑菌作用.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2017(033)012【总页数】6页(P138-143)【关键词】海洋真菌;色素;枝孢属;性质研究【作者】胡晟源;刘姝;王淑军;焦豫良;来蒋丽;顾张慧;房耀维【作者单位】江苏省海洋资源开发研究院,连云港 222005;淮海工学院海洋学院,连云港 222005;江苏省海洋资源开发研究院,连云港 222005;淮海工学院海洋学院,连云港 222005;淮海工学院海洋学院,连云港 222005;江苏省海洋资源开发研究院,连云港 222005;江苏省海洋资源开发研究院,连云港 222005;江苏省海洋资源开发研究院,连云港 222005;淮海工学院海洋学院,连云港 222005;江苏省海洋资源开发研究院,连云港 222005【正文语种】中文黑色素（Melanin）是广泛存在于自然界中的一种色素，大量存在于动植物和微生物中［1］。
某种真菌的新种分离与鉴定从古至今，真菌一直是生物学家们关注的重点研究对象。
随着科技的发展和研究方法的改进，越来越多的真菌被发现和鉴定。
在这些真菌中，有一种新物种引起了我的注意，它就是——新分离的某种真菌。
如何发现并分离新种真菌呢？一般来说，分离并鉴定新种真菌需要进行以下几个步骤：1. 采集样品：采集来源于不同环境的样品是发现新种真菌的前提之一。
例如，可以从森林、沙漠、河流和水库等不同的环境中采集土壤、叶片、树干、食品等样品。
2. 培养分离：在实验室中将样品分离到不同的培养基上，以培养所含的微生物。
在通常情况下，培养基选择多样化，可利用琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂、小麦麦芽琼脂等多种培养基直接筛选出可能存在的真菌。
3. 选择筛选：对于筛选出的微生物在不同培养条件下进行重新分离、纯化和鉴定，以确定其类型和分类。
在这个过程中，科学家们需要借助多种技术手段，如:分子生物学技术、基因流、形态学等综合分析和鉴定真菌的营养、生长动态和代谢。
如何确定新分离的某种真菌？确定新分离的某种真菌需要专业、系统的鉴定和分类技术。
1. 形态学鉴定：这是通过对真菌的形态、结构、形状、大小、色泽、染色等特征进行描述和研究，从而确定其种类的方法之一。
2. 分子生物学鉴定：这是通过解析真菌的基因组信息，并基于其地位扩增和放大DNA片段，以确定其种类、变异性和分布区域等值。
3. 生理生化鉴定：这是通过测定真菌生长的要件如pH值、温度、气体、酸碱度等的影响，并对其代谢物进行分析，以判断其类别和分布。
值得注意的是，真菌是一类非常广泛的生物，其多样性、复杂性和变异性非常高，因此要分离和鉴定新分离的某种真菌是一个复杂、耗能、耗财和耗时间的问题。
新分离的某种真菌的应用前景是什么？新分离的某种真菌有哪些应用前景呢？真菌以其多样、广泛的生存环境，以及丰富的代谢物等特性，成为生物学家们关注和研究的重点，也是许多化学制品、医药品、食品等重要的原料来源。
以医学来说，真菌有很多特性可以用于研究和开发新药物。
第1篇一、实验背景极端真菌是一类能在极端环境中生长的真菌，它们能够在高温、低温、高盐、高酸、高碱等极端条件下生存。
这些真菌在生物多样性和生态系统中扮演着重要角色，同时也具有潜在的应用价值。
本实验旨在通过分离、纯化、培养和鉴定极端环境中的真菌，探讨其生物学特性和潜在应用价值。
二、实验目的1. 从极端环境中分离和纯化真菌。
2. 鉴定分离到的真菌种类。
3. 探讨极端真菌的生物学特性和潜在应用价值。
三、实验材料与方法1. 样品采集在实验室附近的高山、温泉、盐湖等极端环境中采集土壤、水样等样品。
2. 真菌分离与纯化（1）样品预处理：将采集的样品进行筛选和初步处理，去除杂质。
（2）真菌分离：采用平板划线法或稀释涂布法，将样品接种于PDA培养基上，置于适宜的条件下培养。
（3）真菌纯化：将分离到的疑似真菌菌落进行多次划线或转接，直至获得纯培养。
3. 真菌鉴定（1）菌落特征观察：观察纯培养的菌落形态、颜色、质地等特征。
（2）显微镜观察：采用光学显微镜观察真菌的菌丝、孢子等结构。
（3）分子生物学鉴定：提取真菌DNA，进行PCR扩增和测序，将测序结果与已知真菌序列进行比对，确定真菌种类。
四、实验结果1. 真菌分离与纯化从极端环境中分离到多种真菌，包括酵母菌、霉菌、接合菌等。
2. 真菌鉴定（1）菌落特征观察：分离到的真菌菌落形态多样，有白色、黄色、绿色、黑色等。
（2）显微镜观察：观察到真菌的菌丝、孢子等结构，进一步确认了真菌种类。
（3）分子生物学鉴定：通过PCR扩增和测序，确定分离到的真菌种类，包括酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、黑曲霉（Aspergillus niger）、青霉菌（Penicillium chrysogenum）等。
五、讨论与分析1. 本实验从极端环境中成功分离和纯化到多种真菌，表明极端环境中真菌资源丰富。
2. 通过分子生物学鉴定，确定了分离到的真菌种类，为后续研究提供了基础。
微生物实验报告实验课题：粮食中真菌的分析学院：粮油食品学院专业班级：食品科学与工程姓名:学号：20104806河南工业大学实验报告系别粮油食品学院班级食品科学与工程姓名同组者姓名实验组成绩评定完成日期20121106实验题目：粮食中真菌的分析（实验八、九）摘要：粮食的供给影响到一个国家的稳定发展，粮食储藏就在粮食安全上起着尤为重要的意义。
所以要对粮食进行控制首先得了解粮食中菌种的种类和数量，这样才能在粮食储存中发挥事半功倍的功效，更加高效地控制防治粮食微生物的生长代谢。
关键词：粮食真菌鉴定防治内容：粮食含有丰富的碳水化合物、蛋白质、脂肪及无机盐等营养物质，是微生物生长的天然培养基。
世界各地所产的粮食、粮食加工产品及饲料上都有大量微生物存在，这些微生物包括病毒、细菌、放线菌、真菌。
其中数量最大、对粮食危害最为严重的是霉菌及其代谢产物。
这一类个体微小不易观察的生物造成的危害却不容忽视。
粮食微生物在环境适宜的条件下，可以分解粮食中的有机物质，使之变质、霉腐，因而使粮食出现变色、变味、发热、生霉等症状，不但严重影响粮食安全储藏，导致储粮品质劣变，而且还可能产生毒素污染，危及人畜健康。
现在本次试验做了对粮食的菌种进行分离提纯培养等操作，鉴定粮食中主要霉菌的种类，并确定菌种的量。
实验目的与要求：1.掌握食品中真菌含量及菌相分析方法。
2了解检测过程中系统误差产生的原因及控制的机制。
3.掌握粮食中主要的真菌类群的鉴定方法。
4.熟悉常见霉菌的形态特征。
实验原理：培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料，能够给给微生物特提供一个良好的是生存环境。
营养：碳源、氮源、能源、生长素、水分和无机盐等；适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力；一定的氧化还原电位；合适的渗透压。
琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。
加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固，不容易被微生物污染。
但多次反复融化，其凝固性降低。
内蒙古广播电视大学 “一村一名大学生计划”毕业作业
作业题目真菌的分离培养和鉴定___
教学点名称：包头广播电视大学_ 学 员 姓 名：张瑞光__________ 学 号：1015004452077___ 专 业：畜牧兽医专科____ 入 学 时 间：2010秋_________ 指 导 教 师：杨瑞芳 _________ 真菌的分离培养和鉴定 【摘要】：从发霉的红薯上和酸败腐烂的苹果上挑取霉变物用沙堡琼脂培养基28℃培养2-3天，分离出几个真菌菌株。将分离株重新进行平板划线分离，挑取单菌落表面的少许孢子用马铃薯葡萄糖琼脂培养基进行载片小培养，经28℃培养2—3天于低倍镜下观察，通过菌丝和孢子对分离株进行鉴定。观察到簇生在分生孢子梗的顶端的呈帚状分枝的分生孢子和有隔菌丝，可鉴定为青霉类菌；观察到分生孢子梗上呈轮状着生、具有3个分隔、弯曲的孢子，可鉴定为弯孢霉类菌；观察到单细胞的芽殖孢子，并通过进一步的酵母菌生理生化测定，可鉴定为酵母菌。 【关键词】：真菌；菌落；菌丝；孢子 1 前言 真菌一词来源于拉丁文的“蘑菇”，现在真菌这一名词的概念不仅包括蘑菇，而是代表着一个相当庞大的生物类群。什么是真菌呢？从生物学的观点来看，它们是一大类真核微生物，无根茎叶，不含叶绿素，不能利用无机物来制造食物，靠寄生或腐生生活，仅少数为单细胞，其余为多细胞，大多数真菌有分枝或不分枝的丝状体，能进行有性生殖和无性生殖。从形态上分为酵母菌、霉菌、担子菌。 其实，真菌并不像其看起来的这般抽象，在我们的日常生活中几乎到处都有它们的存在，我们每个人都有过接触和不同程度的感性认识。例如酿酒、制馒头用的酵母；酒曲的曲种（曲霉和根霉）；做豆腐乳的毛霉和红曲霉；发酵饲料的黑曲霉；味美可口的蘑菇、木耳、银耳、猴头；作为中药的神曲、麦角、虫草、茯苓、灵芝；此外还有食品、衣物、用具等因潮湿而发生的霉；引起农作物病害的小麦锈病等等都是真菌。 真菌与细菌的大小、形态、结构及化学组成差异很大，单细胞个体比细菌大几倍至几十倍，具有细胞壁，但不含细菌细胞壁的肽聚糖。有些真菌因环境条件的改变而改变形态，称之为真菌的两相性，如假皮疽组织胞浆菌在动物机体呈酵母菌样。而在人工培养基上呈丝状。 真菌不仅种类多，数量大，而且分布极为广泛，与人类生产与生活有着极密切的利害关系。有些菌丝可引起人与畜禽疾病，有些霉菌还产生毒素，直接或间接的危害人类健康。因此，了解真菌的培养方法，认识其形态十分重要。 近年来在真菌分类方面趋向于采用Anisworth&bisby的《真菌学辞典》介绍的分类系统。该系统认为真菌不属于低等植物，而是属于单独成立的真菌界，界以下分为黏菌门和真菌门。真菌门再分为鞭毛菌亚门、接合菌亚门、担子菌亚门和半知菌亚门。本研究从自然界分离到几株真菌，并用真菌分类方法对其进行了鉴定。 2 材料 2.1 病料 发了霉的红薯、酸败腐烂的苹果 2.2 培养基 2.2.1 沙堡琼脂培养基 成分：蛋白胨10克、麦芽糖40克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升 2.2.2 马铃薯葡萄糖琼脂培养基 成分：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升 2.2.3 保存琼脂培养基 成分：蛋白胨10克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升 2.3 器材 无菌室、手提式高压蒸汽灭菌锅、电炉、天平、铁架台、灭菌培养皿、锥形瓶、漏斗、试管、烧杯、胶头滴管、石蕊试纸、接种环、酒精灯、量筒、玻璃棒、纱布、滤纸、试管塞、报纸、扎绳、标签、温箱、冰箱、盖玻片、载玻片、显微镜、杜氏管
3 方法 3.1 真菌的分离培养 3.1.1 实验的准备 沙堡琼脂培养基的制备：用天平称取蛋白胨10克、麦芽糖40克、琼脂20克，用量筒量取蒸馏水1000毫升置烧杯中混匀，在电炉上加热熔化，加热过程中不断用玻璃棒搅拌，调整PH值至5.4，倒入锥形瓶中，115℃灭菌20分钟，倾注平板，冷却[1]。 无菌室、接种箱的清洁：用酒精棉球将接种箱的内部全部擦洗干净，放入试管架、酒精灯、标签、接种环、笔、火柴等实验用具放入接种箱内，密封接种箱。依次打开接种箱与无菌室的紫外灯，紫外线灭菌20分钟。 3.1.2 划线分离培养 在酒精灯火焰下进行以下操作： （1）从发霉的红薯上和酸败腐烂的苹果上挑取霉变物用28℃培养2-3天，分离出几个真菌菌株。将分离株重新进行平板划线分离，挑取单菌落表面的少许孢子用马铃薯葡萄糖琼脂培养基进行载片小培养，经28℃培养2—3天于低倍镜下观察，通过菌丝和孢子对分离株进行鉴定。 （2） 左手持皿，用左手的拇指、食指及中指将皿盖揭开20度左右的角度（角度越小越好，以免空气中的细菌进入皿中将培养基污染）。划线前先将接种环稍稍弯曲，这样易和平皿内琼脂面平行，不致划破培养基。 （3） 右手持接种环，将上述霉变物分区划线接种于沙堡琼脂培养基平板中，划完前一个区域后将接种环在火焰上灼烧灭菌，冷却后与前一区域的最后一两条折线接触划出第二区域，依次类推，共划三到四个区域。划线中不宜过多的重复旧线，以免形成菌苔。 （4） 接种完毕，在皿底上作好日期，平皿倒扣，置28℃培养2-3天。 （5） 将分离培养得到的几个分离株用沙堡琼脂培养基重新进行平板划线分离，以得到纯的单一的菌落。 3.2 真菌的载片培养（小培养） 3.2.1 实验的准备 马铃薯葡萄糖琼脂培养基的制备：将新鲜的马铃薯洗净、去皮，（注意：发霉、变绿的不要使用。）切成薄片或蚕豆大小的方块，称取所需的重量，倒入锅内，加水1000mL煮沸半小时左右，至马铃薯酥而不烂为止，用四层纱布过滤，然后将事先称好的琼脂加到上述滤液中，用小火加热，使之慢慢融化，并用玻棒不断搅拌，以免烧焦锅底。再加入事先用温水溶化的糖溶液，用二层纱布过滤。测定pH值，用1mol/L的NaOH或HCl调至pH为5.5～6.5之间，最后加水补足至1000mL[2]。 无菌室、接种箱的清洁：同2.1.1 无菌水的制备：取5-6mL蒸馏水装入10mL小试管中，塞上棉塞，用报纸包装好，115℃高压灭菌20分钟。 3.2.2 实验的操作 取直径7cm左右的圆形滤纸一张，铺放于一个直径9cm的平皿底部，上放一个U形玻棒，其上再平放一张干净的载玻片与一张盖玻片，盖好平皿盖，进行灭菌[3]。 为防止培养过程中培养基干燥，特在滤纸上滴加无菌水3-4mL，挑取真菌孢子接入盛有灭菌水的试管中，震荡试管制成孢子悬液。用灭菌滴管吸取灭菌后熔化的固体培养基少许，滴于上述灭菌平皿内的载玻片中央，并用接种环将孢子悬液接种在培养基上，然后盖上盖玻片，用镊子轻轻压一下，最后盖上平皿盖, 即成为载片小培养[4]。 3.3 真菌的保存 3.3.1 保存琼脂培养基的制备 取蛋白胨10克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升至烧杯中混匀，在电炉上加热融化，调整PH值至5.4，分装试管，115℃灭菌20分钟，摆成斜面[5]。 无菌室及接种箱的清洁：同2.1.1 3.3.2 实验操作 将划线分离培养28℃2-3天的平板从温箱取出，放入无菌室中进行以下的操作：在无菌室中靠近酒精火焰处，从平板培养基上选取可疑菌落，用接种环轻轻刮取其表面的少许孢子，拉出接种环立即伸入斜面培养基上，勿碰及斜面和管壁，直达斜面底部从斜面底部开始划曲线，向上至斜面顶端为止，管口通过火焰灭菌，将棉塞塞好。接种完毕，接种环通过火焰灭菌后放下接种棒，最后在斜面管壁上注明日期，置28℃温箱中培养2-3天，后置4℃冰箱中保存[6]。 3.4 酵母菌的鉴定——生化试验 3.4.1 糖发酵试验 用12.5%豆芽汁配制成2%糖溶液（棉子糖为4%）分装杜氏管。测定发酵的容器以杜氏管为主，凡能发酵某种糖则在杜氏管内小管之顶部应能看到有一定量的CO2气泡[7]。具体操作：A.将豆芽汁分装杜氏小管，每管1.2ml，15磅灭菌15分钟。B.把各种糖用灭菌蒸馏水分别配成10%的糖溶液，煮沸15分钟，稍冷，用无菌吸管吸取一定糖液，分装于杜氏管，使糖浓度达到2%（棉子糖4%），即成为糖类发酵基础培养基。C.欲鉴定的新培养菌株，接种于发酵管，25-28℃培养，每天观察结果。一般观察2-3天即可，凡不发酵者或弱发酵者，可延长观察至10天，因半乳糖酶是适应酶，故观察发酵半乳糖可延长2周至1个月[8]。 3.4.2 同化碳源试验 A.菌液制备：将酵母菌制成菌悬液（1ml无菌生理盐水接入少许约一接种环的新培养的酵母菌制成悬液）。B.浇制平板：将此悬液全部倒入经溶化并冷却至45℃左右的20ml基础培养基中，倒入培养皿，使菌体在培养基中混和均匀，静止，凝固后在28℃把培养皿倒置几小时，使表面不致太湿。C.点样：然后在培养皿底部做上碳源名称的标记，分别用无菌不锈钢匙或无菌药匙，按标记加糖少许（约米粒大），如果结果不明显可于第二天再补加一次糖。D.观察：观察结果时以葡萄糖作对照，一般是25-28℃培养1-2天观察结果，凡能同化者在所加碳源的周围形成生长圈。凡生长缓慢的酵母或是在测半乳糖同化时，可适当采用液体培养法，即在含某种碳源的液体培养集中接入酵母，25-28℃培养1-2周，以含葡萄糖的液体培养基作对照，观察酵母生长情况，是否更加浑浊或形成环、岛等，必要时可延长观察查到三周[9]。
4 结果与分析 4.1 真菌的培养性状观察 4.1.1 真菌在固体培养基上的生长表现 酵母菌在固体培养基上的生长表现：酵母菌在固体培养基上菌落呈油脂状或腊脂状，表面光滑、湿润、粘稠，有的表面呈粉粒状，粗糙或皱褶，菌落边缘整齐、缺损或带丝状。菌落颜色有乳白色、黄色和红色等。 霉菌在固体培养基上的生长表现：将不同霉菌在固体培养基上培养2-3天，可见霉菌菌落有绒毛状、絮状、绳索状等。菌落大小依种而异，有的能扩展到整个固体培养基，有的有一定局限性（直径1-2㎝或更小），很多霉菌的孢子和菌丝能产生色素，致使菌落表面、背面甚至培养基呈现不同颜色，如黄色、绿色、黑色、橙色等。 4.1.2 真菌的载片培养的形态观察 酵母菌的载片小培养的形态观察：类似于细胞，多
