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【组培专题8】组织培养过程中常见问题解答1、两次培养基用的配方都一样，为什么一个凝固的特好，一个就凝固不了？培养基的凝固与否有下列几种情况决定：1、琼脂批次有变，没有做批次试验，沿用以前的用量造成不足。
2、大量元素重复加入，或大量元素母液配制时出错。
3、pH值调的过低，或有活性炭高压灭菌时间过长，造成蔗糖分解量剧增，影响培养基的pH值降低较多。
4、加入新的天然附加物，或附加物过多。
2、75%的酒精和70%的酒精有什么区别，组培时用哪种好?酒精的70%和75%都是可以的，但往往由于桶装酒精的浓度达不到95%，这样按照70%的配制就达不到要求了，因此我们一般是桶装按照75%的配，瓶装则按照70%的配。
3、大型灭菌器在灭菌的时候总会出现个别瓶子破裂的现象，请问什么原因？是温度过高，压力过大，还是内部冷热不均造成的呢？高压灭菌造成玻璃瓶的破裂，特别是大型灭菌装置，最主要还是在放气冷却时造成的。
究其原因，应该是在放气时，由于容积较大，压力在不同位置（内外部）的变化速度并不相同，致使瓶内与瓶外的压力差距较大，如果是封口膜，表现的可能就是塑料膜的破裂。
4、初代培养时，外植体出现发白，慢慢枯死，是什么原因？外植体的初代培养出现这种情况，是比较好理解的。
大田植物材料离体以后，进入不同环境中继续生存代谢，需要一个过渡。
首先，植物材料要吸收培养基的养分，不再是根吸收，盐类浓度相对于离体的植物材料的吸收能力可能是过量的，植物材料褪色就是叶绿素形成受阻和细胞代谢受阻，另外培养基养分供应的有效性滞后，以及植物材料本身内含物向培养基的流失等等。
建议在初代培养阶段最好先采用空白培养。
5、做无毒苗的快繁，一直找不到合适的培养基，能不能推荐一种？关于组培快繁的方式概括起来有下列两种途径：1、外植体－愈伤组织－再生芽－继代－生根－出苗2、外植体－丛生芽－继代－生根－出苗至于采取那种途径，需要彻底了解所选组培植物的生物习性，包括繁殖方式，顶端优势，萌孽生根能力等。
浅谈林木植物组织培养技术中存在的问题及对策林木植物组织培养技术是一种重要的植物繁殖和种质改良方法，它在林木栽培和林业生产中具有重要意义。
然而在实际应用中，我们也会面临一些问题和挑战，需要通过对策来解决。
本文将就林木植物组织培养技术中存在的问题进行探讨，并提出相应的对策。
问题一：杂交胚发育受阻在林木植物组织培养中，比较常见的问题之一是杂交胚发育受阻。
由于林木植物杂交种子的发育过程受到外界环境和内部基因因素影响，导致杂交胚发育不够完善，甚至完全停滞。
这给组织培养带来了很大的困难。
对策：1. 优化杂交技术，提高杂交胚发育率。
通过提高杂交时配对的质量和频率，可以有效地提高杂交胚的发育率。
2. 优化培养基配方，提供适宜的营养条件。
合理的培养基搭配可以提供充足的养分，促进杂交胚发育。
问题二：离体组织死亡率偏高在林木植物的组织培养过程中，离体组织死亡率偏高也是一个比较普遍的问题。
离体组织易受外界环境的影响，死亡率高会影响到组织培养的效果。
对策：1. 选择适宜的离体组织来源。
尽量选择健康、生长良好的母本材料进行组织培养。
2. 优化培养条件，包括温度、湿度、光照等，提供良好的生长环境。
3. 添加生长调节物质，如激素、细胞分裂素等，以促进离体组织的生长和增殖。
问题三：植株再生率低在林木植物组织培养过程中，植株再生率低也是一个常见的难题。
植株再生率低会严重影响植物的繁殖效率和培育效果。
对策：1. 优化培养基，提供适宜的营养物质和生长激素，促进植株再生。
2. 采用生物技术手段，如基因编辑和转基因技术，对植物进行改良，提高其再生能力。
3. 选择适宜的组织培养方法，如愈伤组织培养、离体叶片培养等，以提高植株再生率。
问题四：遗传变异率高在林木植物组织培养中，有时会出现遗传变异现象，这对植物材料的繁殖和种质改良带来了一定的困扰。
对策：1. 严格选择培养基和生长激素。
合理搭配培养基成分和生长激素种类和比例，以减少遗传变异的可能性。
培育技术在植物组织培养中的常见问题解析植物组织培养是现代植物学中常用的实验技术，它通过将植物的组织或细胞分离培养于含有适宜营养物质的培养基中，以实现植物再生、基因转化等目的。
然而，由于培育技术的复杂性和植物本身的复杂性，常常会遇到一些困扰和挑战。
本文将针对植物组织培养中的常见问题进行解析，并提供一些解决之道。
问题一：组织污染在植物组织培养过程中，一个常见的问题就是组织污染，即外来细菌、真菌或其他微生物侵入培养基和植物组织中。
这会导致培养失败或产生不良的变异。
解决之道：1. 严格消毒：在进行培养操作前，必须进行彻底的操作台、器皿和培养基的消毒。
用70%酒精或其他消毒液擦拭操作台面和器皿表面，确保无菌状态。
2. 地方新鲜：在培养室内保持良好的通风和空气流动，通过定期更换和清洁培养室内的过滤网和空气过滤器，减少外界细菌的侵入。
3. 给予适宜的抗生素：在培养基中添加适量的抗生素，可以抑制细菌和真菌的生长，从而减少污染的可能性。
但需要注意的是，选择抗生素要根据具体培养物种和品种而定。
问题二：离体生根率低离体生根是植物组织培养中最重要的步骤之一。
然而，许多时候我们会发现离体生根率非常低或根系发育不良。
解决之道：1. 适宜的培养基组成：适量的植物生长调节剂（如生长素和细胞分裂素）对于促进离体生根至关重要。
通过调整培养基中激素的浓度，可以提高植物的生根能力。
2. 植物生长调节剂浓度梯度法：通过在不同的培养基上设置不同浓度的植物生长调节剂，例如生长素的浓度逐渐降低，可以促进植物从愈伤组织到根系转变的过程。
3. 建立泰勒诺夫瓜气孔消融法：在切割愈伤组织后，将其暴露在高湿度下，有助于减少水分蒸发和气孔开放，提高植物在离体生根过程中的存活率。
问题三：组织块增殖困难在一些植物的组织培养中，我们会遇到组织块增殖困难的问题，即组织块不再增殖或增殖速度非常慢。
解决之道：1. 选择适宜的培养基类型：不同植物的组织有不同的培养基类型要求。
植物组培过程中污染产生的原因及防治措施一、污染的原因污染是指在培养过程中，培养基或培养材料上滋生真菌、细菌等微生物，使培养材料不能正常生长和发育的现象。
组织培养中污染是经常发生的，常见的污染病原是细菌和真菌两大类。
细菌污染常在接种1-2d后表现，培养基表面出现黏液状菌斑。
真菌污染一般在接种后3d以后才表现，主要症状时培养基上出现绒毛状菌丝，然后形成不同颜色的孢子层。
造成污染的原因也很多，主要有(1) 培养基及各种使用器具灭菌不彻底(2) 外植体消毒不彻底(3) 接种时不严格无菌操作(4) 接种和培养环境不清洁(5) 培养容器原因，包括盖子和封口膜等。
二、材料带菌或培养基灭菌不彻底会造成成批接种材料被细菌污染，操作人员不严格遵守无菌操作规程也是造成细菌污染的重要原因。
培养环境不清洁、超净工作台的过滤装置失效、培养容器的口径过大以及封口膜破损等主要引起真菌污染。
2 污染的预防措施2.1灭菌要彻底在组培生产中，各种培养基以及接种过程中使用的各种器具都要严格灭菌。
首先是培养基的灭菌，耐高温的培养基需要在121-123℃条件下灭菌20-30min。
若出现灭菌时间不足或温度不够，培养一段时间后就会在培养基表面产生细菌性的污染。
一些不耐高温的物质，可采取细菌过滤器除去其中的微生物。
其次，接种用的器具除了经过高温霉菌外，在接种的过程中，每使用1次后，都要蘸酒精在酒精灯火焰上灼烧灭菌，特别是在不慎接触到污染物时，极易由于器具引起污染。
第三，对于被污染的培养瓶和器皿要单独浸泡，单独清洗，有条件的灭菌后再清洗。
2.2环境消毒不清洁的环境也会使培养的污染率明显增加，尤其是在夏季，高温高湿条件下污染率更高。
接种和培养环境要保持清洁，定期进行熏蒸或喷雾消毒。
高锰酸钾和甲醛熏蒸效果好，但对人体有一定的伤害，一般每年熏蒸2-3次。
平时读接种室和培养室可采用紫外线照射消毒或喷2%来苏尔消毒。
臭氧消毒机对环境消毒效果较好，而且使用灵活方便，对人体的伤害也相对较小。
组织培养存在的问题
组织培养是指企业、机构等组织为了提高员工的能力和素质，而对其进行的教育和训练。
然而，在实践中，组织培养也存在一些问题： 1. 缺乏科学性。
有些组织培养虽然有一定的培训计划和内容，但缺乏科学的指导和评估方法，难以评估培训效果。
2. 培训成本高。
组织培养需要耗费一定的时间和人力物力，而且员工在培训期间无法完成工作任务，会造成生产效率下降和成本增加。
3. 培训内容不实用。
有些组织培养只注重培训理论知识，而忽视实践操作，使得员工在实际工作中无法应用所学知识。
4. 学习动力不足。
有些员工对于组织培养缺乏足够的重视和学习热情，培训效果不理想。
为了解决这些问题，组织在培训前应制定科学的培训计划和评估方法，减少员工在培训期间的工作压力，注重实际操作和场景模拟，提高培训的实用性，同时，也需要通过激励机制等方式提高员工的学习动力，以达到更好的培养效果。
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组培苗在培养过程中常见问题分析一、植物褐化A、原因可能有：1、植物本身含有较多的酚类物质，在切割外植体时，从伤口渗透出来，直接渗入培养基中，或在继代培养时不断形成并渗出。
2、（1）外植体的取材部位及季节（2）培养基成分，浓度过高的无机盐和高浓度6-BA、KT 等容易加重褐化。
（3）培养条件不当，温度过高培养时间过长、光照过强，均可以提高多酚氧化酶的活性。
B、防止措施：1、选择合适的外植体：选取幼龄材料，选合适部位，时间一般在初冬或初春2、暗培养或勤转瓶3、弱光培养、低温培养4、添加活性炭或抗氧化剂等5、可以降低无机盐含量，由全量降为半量，减少铵态氮的含量。
二、玻璃化现象A、原因可能有：1、培养温度高2、生长素种类及其配制比例不合适。
铵态氮及碳源对某些植物培养不适宜。
B、防止措施：1、降低培养瓶内的湿度，增加琼脂量，每瓶接种量减少三分之一2、降低培养温度3、增加光照4、降低培养温度5、降低培养基中细胞分裂素含量，可以考虑加入适量脱落酸。
也可以降低或去除铵态氮。
6、在培养基中加入1.0~5.0g/L活性炭。
三、黄化现象A、原因可能有：1、培养基中铁元素含量不足，激素配比不当，糖用量不足。
2、培养瓶温度不适，光照不足。
3、pH值有问题。
（培养基配置不正确）B、防止措施：1、检查培养基配置过程，保证培养基成分正确添加2、调节培养基的成分和pH值3、控制培养室温度，增加光照，用透气盖改善瓶内通气情况四、污染现象A、原因可能有：1、原瓶苗有污染2、接种工具灭菌不彻底3、操作时认为带入菌4、接种环境不干净5、原瓶苗细菌性污染（浑浊水渍状、或泡沫发酵状）常由于灭菌锅未排尽冷空气、灭菌锅压力温度不够，计时不准确造成。
6、原瓶苗真菌性污染（出现各种颜色的孢子），可能是由于空气、瓶口及瓶盖真菌孢子引起。
B、防止措施：1、正确使用灭菌锅2、接种工具每次使用完后要消毒灭菌，接种时，手不要碰盘子的任何地方，用镊子夹盘子。
3、污染的原瓶苗要及时淘汰，如果原瓶苗数量少要进行灭菌4、接种时，要保证接种环境的干净卫生，台内工具不宜放太多。
组培中易出现的问题及解决措施组织细胞培养是一项非常重要的生物技术，它可以用来从单个细胞中培养出成千上万个细胞。
组织细胞培养的应用非常广泛，从基础生物学到医学应用都有着重要的作用。
组织细胞培养的成功需要正确的实验计划、培养条件和技术操作等多个方面因素的支持。
尽管组织细胞培养已经有着相对成熟的技术和应用，但是在实验过程中还是经常会出现一些问题，这些问题可能会导致实验出现失败，影响实验的准确性和可靠性。
因此，在组织细胞培养中，我们需要特别注意常见问题，并尝试寻找解决方案。
一、细胞培养过程中细胞死亡在组织细胞培养过程中，细胞死亡是一个非常常见的问题。
细胞死亡可能是由于培养环境不适宜、细胞器受损等多种原因引起的。
首先，我们需要确认细胞死亡的原因。
若是由于细胞培养环境不适宜所引起的，则我们可以通过调整培养条件来解决问题。
例如，我们可以改变培养基配方、调整 pH 值或温度来提高培养环境的适宜性。
此外，如果细胞死亡是由于受到刺激性化合物的作用或者细胞器损伤所致，我们可以考虑加入一些细胞保护剂或体外作用因子，保护细胞的生命活力。
如果细胞死亡造成严重损失，我们需要重新设计和实施实验。
二、细胞表型不稳定在细胞培养中，细胞表型不稳定也是一个常见问题。
细胞表型不稳定有时候可能由于细胞培养环境的改变，例如培养温度或半衰期等变化，也可能由于细胞的遗传学变异。
为了解决这个问题，我们需要尽可能保持细胞培养环境的稳定性并且进行维护，避免温度、血清物质浓度和酸碱度等变化。
此外，通过使用抗生素、氢化叶酸和选择性试剂等方法可以限制细胞遗传学变异的发生。
三、细菌侵染在细胞培养中，细菌侵染也是一个常见的问题，尤其在长期培养和细胞密度过高的情况下。
细菌侵染可能会损害细胞生长、侵入细胞免疫系统，甚至造成病毒和真菌感染。
为了解决这个问题，我们需要加强无菌技术操作，避免细菌的外源性污染，并及时采取细胞毒性药物或细菌毒素的处理措施来杀灭细菌。
四、细胞品种污染细胞品种污染也是组织细胞培养中经常遇到的问题之一。
植物组培过程中污染产生的原因及防治措施一、污染的原因污染是指在培养过程中，培养基或培养材料上滋生真菌、细菌等微生物，使培养材料不能正常生长和发育的现象。
组织培养中污染是经常发生的，常见的污染病原是细菌和真菌两大类。
细菌污染常在接种1-2d后表现，培养基表面出现黏液状菌斑。
真菌污染一般在接种后3d以后才表现，主要症状时培养基上出现绒毛状菌丝，然后形成不同颜色的孢子层。
造成污染的原因也很多，主要有(1) 培养基及各种使用器具灭菌不彻底(2) 外植体消毒不彻底(3) 接种时不严格无菌操作(4) 接种和培养环境不清洁(5) 培养容器原因，包括盖子和封口膜等。
二、材料带菌或培养基灭菌不彻底会造成成批接种材料被细菌污染，操作人员不严格遵守无菌操作规程也是造成细菌污染的重要原因。
培养环境不清洁、超净工作台的过滤装置失效、培养容器的口径过大以及封口膜破损等主要引起真菌污染。
2 污染的预防措施2.1灭菌要彻底在组培生产中，各种培养基以及接种过程中使用的各种器具都要严格灭菌。
首先是培养基的灭菌，耐高温的培养基需要在121-123℃条件下灭菌20-30min。
若出现灭菌时间不足或温度不够，培养一段时间后就会在培养基表面产生细菌性的污染。
一些不耐高温的物质，可采取细菌过滤器除去其中的微生物。
其次，接种用的器具除了经过高温霉菌外，在接种的过程中，每使用1次后，都要蘸酒精在酒精灯火焰上灼烧灭菌，特别是在不慎接触到污染物时，极易由于器具引起污染。
第三，对于被污染的培养瓶和器皿要单独浸泡，单独清洗，有条件的灭菌后再清洗。
2.2环境消毒不清洁的环境也会使培养的污染率明显增加，尤其是在夏季，高温高湿条件下污染率更高。
接种和培养环境要保持清洁，定期进行熏蒸或喷雾消毒。
高锰酸钾和甲醛熏蒸效果好，但对人体有一定的伤害，一般每年熏蒸2-3次。
平时读接种室和培养室可采用紫外线照射消毒或喷2%来苏尔消毒。
臭氧消毒机对环境消毒效果较好，而且使用灵活方便，对人体的伤害也相对较小。
2.3严格无菌操作在接种时要严格无菌操作，避免人为因素造成污染。
为了使超净工作台有效工作，防止操作区域本身带菌，要定期读一过滤器进行清洗和更换。
对内部的过滤器，不必经常更换，但每隔一定时间要检测操作区的带菌量，如果发现过滤器失败，则要整块更换。
此外还需要测定操作区的风速，通过调压旋钮使操作区的风速达到无菌操作需要的20-30m/min。
植物组培过程中培养物的玻璃化及其防治方法当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水渍状，苗体趋于透明，其茎、叶表面无蜡质，这种现象通常称为玻璃化。
玻璃化为组培苗的生理失调症，它的出现会使组培苗生长缓慢、繁殖系数有所下降，玻璃化的嫩茎不宜诱导生根。
1 导致玻璃化的主要因素：① 材料差异，在不同的种类、品种间，组培苗的玻璃化程度有所差异。
② 激素水平过高,若细胞分裂素浓度过高或细胞分裂素与生长素相对含量高，易引起玻璃化现象。
③ 培养基水势，培养基中离子种类,比例不适。
④ 环境温度、光照强度和通气性。
温度过低或过高,光照时间强度不足及培养容器中空气湿度过高，透气性较差所造成的通气不良,易造成组培苗含水量高,从而发生玻璃化现象。
⑤ 琼脂浓度降低、有杂质等。
2 常用的防治措施有① 增加光照强度和光照时数。
② 降低细胞分裂素含量。
在培养基中添加少量聚乙烯醇、脱落酸等物质，能够在一定程度上减轻玻璃化的现象发生③ 增大培养基中琼脂的含量，以降低培养基的水势④ 降低NH4+浓度，减少培养基中含氮化合物的用量⑤ 增加容器通风，最好进行 CO2施肥，这对减轻组培苗玻璃化的现象有明显的作用；降低培养温度，进行变温培养，有助于减轻组培苗玻璃化的现象发生；组培苗瘦弱或徒长的防治措施正常的组培苗应当叶色浓绿、植株粗壮。
如果在增殖阶段出现芽苗瘦弱、徒长或节间过长，这种苗转入生根培养时能够生根，在环境条件较好的情况下，也会稍转粗壮，但总体看来，苗的株型、叶色、叶片大小等性状还是差于生长正常的增殖苗；有时即便是正常或健壮的增殖苗，若生根阶段培养基不适宜或培养的环境条件得不到保障，往往根原基及根还未形成，就很快表现出小苗徒长，节间明显伸长，叶片变细、变薄、变嫩并出现黄化。
这样的苗进行过渡培养时，会出现萎蔫和烂根，很容易死亡，过渡成活率极低。
对组培苗瘦弱的原因分析如下。
(1)细胞分裂素浓度过高，产生了过多的不定芽，这些密集的芽若不及时进行转移和分切，很快就开始变成瘦弱苗。
(2)温度过高，高温有利于苗的生长，多数品种适宜的温度是25℃左右，在过高的温度条件下，苗木的伸长速度快，叶片变薄、变长。
(3)光照不足，组培苗会变黄、变弱、变细并加速生长，使苗在短时间内变得更瘦弱。
(4)培养基水分过多，在琼脂含量不足会引起植株徒长变弱。
(5)通气不良，在使用不透气膜时，会增加瓶内湿度，从而使苗表现嫩弱。
以上因素同时出现时，对苗的不良影响明显大于单一因素，各个因素之间相互促进又相互制约。
因此控制瘦弱苗，培养粗壮苗应通过多个因素共同调节才可能获得理想的效果。
减少和避免徒长和瘦弱苗的产生，可从以下几个方面考虑。
(1)根据品种特点减少细胞分裂素用量，加速继代转瓶的速度，适当降低接种密度。
(2)利用空调降低培养室温度。
(3)提高光照强度和延长光照时间，充分利用较强的自然光做光源，调整摆放位置和密度。
(4)调整培养基硬度，改用透气膜做封口，进行培养基及环境因子的综合调控，力求获得最优质健壮的组培瓶苗。
植物组织培养技术原理之灭菌方法常用的灭菌方法：常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类，即：物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(紫外线、超声波、微波)、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施；化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。
1、湿热灭菌（培养基）培养基在制备后的24h内完成灭菌工序。
高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸气不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。
在o．1MPa的压力下，锅内温度达121℃。
在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。
注意完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底。
高压灭菌放气有几种不同的做法，但目的都是要排净空气，使锅内均匀升温，保证灭菌彻底。
常用方法是：关闭放气阀，通电后，待压力上升到O．05MPa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀。
关阀再通电后，压力表上升达到0．1MPa时压力0．1-0．15MPa，20min。
对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。
洗净晾干后用耐高压塑料袋装好，高压灭菌20-30min。
培养基中的铁在高压灭菌时会催化蔗糖水解，可使15%-25%的蔗糖水解为葡萄糖和果糖。
培养基值小于5.5，其水解量更多，培养基中添加0.1%活性炭时，高压下蔗糖水解大大增强，添加1%活性炭，蔗糖水解率可达5%。
防止高压灭菌培养基变化的方法：(1)经常注意搜集有关高压灭菌影响培养基成分的资料，及时采取有效措施。
(2)设计培养基配方时尽量采用效果类似的稳定试剂并准确掌握剂量。
如避免使用果糖和山梨醇而用甘露醇，以IBA代替IAA，控制活性炭的用量(在0.1%以下)注意pH值对高压灭菌下培养基中成分的影响等。
(3)配制培养基时应注意成分的适当分组与加入的顺序。
如将磷、钙和铁放在最后加入。
(4)注意高压灭菌后培养基pH值的变化及回复动态。
如高压灭菌后的pH值常由5.80升高至6.48。
而96h后又回降至5.8左右。
2、灼烧灭菌（用于无菌操作的器械）在无菌操作时，把镊子、剪子、解剖刀等浸入95%的酒精中，使用之前取出在酒精灯火焰卜灼烧火菌。
冷却后，立即使用。
操作中可采用250或500ml的广口瓶，放入95%的酒精，以便插入工具。
3、紫外线和熏蒸灭菌（空间）(1)紫外线灭菌在接种室、超净台上或接种箱里用紫外灯灭菌。
紫外线灭菌是利用辐射因子灭菌，细菌吸收紫外线后，蛋白质和核酸发生结构变化，引起细菌的染色体变异，造成死亡。
紫外线的波长为200—300nm，其中以260nm的杀菌能力最强，但是由于紫外线的穿透物质的能力很弱，所以只适于空气和物体表面的灭菌，而且要求距照射物以不超过1.2m为宜。
(2)熏蒸灭菌用加热焚烧、氧化等方法，使化学药剂变为气体状态扩散到空气中，以杀死空气和物体表面的微生物。
这种方法简便，只需要把消毒的空间关闭紧密即可。
常用熏蒸剂是甲醛，熏蒸时，房间关闭紧密，按5—8ml／m3用量，将甲醛置于广口容器中，加5g/m3高锰酸钾氧化挥发。
熏蒸时，房间可预先喷湿以加强效果。
冰醋酸也可进行加热熏蒸，但效果不如甲醛。
4、喷雾灭菌（物体表面）物体表面可用一些药剂涂擦、喷雾灭菌。
褐变和玻璃化1、初代培养外植体的褐变外植体褐变是指在接种后，其表面开始褐变，有时甚至会使整个培养基褐变的现象。
它的出现是由于植物组织中的多酚氧化酶被激活，而使细胞的代谢发生变化所致。
在褐变过程中，会产生醌类物质，它们多呈棕褐色，当扩散到培养基后，就会抑制其他酶的活性，从而影响所接种外植体的培养。
褐变的主要原因:①植物品种:研究表明，在不同品种间的褐变现象是不同的。
由于多酚氧化酶活性上的差异。
②生理状态:由于外植体的生理状态不同，所以在接种后褐变程度也有所不同。
一般来说，处于幼龄期的植物材料褐变程度较浅，而从已经成年的植株采收的外植体，由于含醌类物质较多，因此褐变较为严重。
③培养基成分：浓度过高的无机盐会使某些观赏植物的褐变程度增加，此外，细胞分裂素的水平过高也会刺激某些外植体的多酚氧化酶的活性，从而使褐变现象加深。
④培养条件不当：如果光照过强、温度过高、培养时间过长等，均可使多酚氧化酶的活性提高，从而加速被培养的外植体的褐变程度。
减轻褐变现象发生的方法①选择合适的外植体一般来说，最好选择生长处于旺盛的外植体，这样可以使褐变现象明显减轻。
②合适的培养条件无机盐成分、植物生长物质水平、适宜温度、及时继代培养均可以减轻材料的褐变现象。
③使用抗氧化剂在培养基中，使用半胱氨酸、抗坏血酸、PVP等抗氧化剂能够较为有效地避免或减轻很多外植体的褐变现象。
另外，使用0.1%-0.5%的活性炭对防止褐变也有较为明显的效果。
24h的培养后，再转移到新的培养基上，这样经过连续④连续转移对容易褐变的材料可间隔12~处理7-l0d后，褐变现象便会得到控制或大为减轻。
2、继代培养时材料的玻璃化实践表明，当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水渍状，这种现象通常称为玻璃化。
它的出现会使试管苗生长缓慢、繁殖系数有所下降。
当培养基上细胞分裂素水平较高时，也容易出现玻璃化现象。
