谷氨酸含量的测定

安徽农学通报，Anhui Agri.Sci.Bull.2018，24（18）高效液相色谱法测定酵母抽提物中谷氨酸的研究李素媛喻玺刘恒余佳余术黄龙赵吉媛（湖北三峡食品药品检验检测中心，湖北宜昌443000）摘要：采用高效液相色谱柱前衍生法测定酵母抽提物中谷氨酸的含量，以苯异硫氰酸作为柱前衍生试剂，在C18柱上，弱碱性条件以保留时间定性、外标法定量。

结果表明，在0.2～1.0mg/mL线性范围内，线性相关系数为0.999816，相对标准偏差小于5%，回收率在95%～110%，样品检测结果良好。

该方法还可以用于其他氨基酸的检测。

关键词：高效液相色谱法；谷氨酸；柱前衍生中图分类号O657.72文献标识码A文章编号1007-7731（2018）18-0018-02 Determination of Glutamic Acid in Yeast Extract by HPLCLi Suyuan et al.（Three Gorges Product Quality Inspection and Testing Center，Yichang443000，China）Abstract：The content of glutamic acid in yeast extract was determined by high performance liquid chromatography column derivatization.Benzo thiocyanic acid was used as a pre column derivatization reagent.On the C18column，the retention time was qualitative and the external standard was quantified under the condition of weak alkali.The re⁃sults show that in the linear range of0.2～1.0mg/mL，the linear correlation coefficient is0.999816，the relative stan⁃dard deviation is less than5%，the recovery rate is between95%～110%，and the sample test results are good.This method can also be used for the detection of other amino acids.Key words：High performance liquid chromatography（HPLC）；Glutamic acid；Pre column derivatization氨基酸是构成蛋白质的基本单元，是动物体合成蛋白质的主要原料，是食品、饲料的营养成分，也是生物工程、生化制药、表面活性剂工业产品的化工原料，因此它们的分离分析引起了人们的关注［1-4］。

高效液相色谱法测定谷氨酰胺的含量摘要:建立高效液相色谱法测定谷氨酰胺含量的方法。

色谱柱为氨基柱,流动相为:0.05 mol/L的磷酸二氢钾(取磷酸二氢钾6.8 g,加水至1000 ml,用磷酸调节pH值为4.0)∶乙腈＝70∶30,检测波长为215 nm,结果表明该方法在所试验的浓度范围内具有良好的线性关系,r为0.999,精密度RSD等于0.37%,平均回收率为98.3%。

关键词:谷氨酰胺高效液相色谱法测定谷氨酰胺(Glutamin)亦被称作麸酰胺酸,为人体中含量最丰富的非必需氨基酸。

临床上主要用于改善胃溃疡和十二指肠溃疡的症状。

常见的分析方法有毛细管电泳法[1]。

本文建立了通过高效液相色谱法测定谷氨酰胺的方法,实验证明该方法操作简便、专一性及灵敏度高,结果准确可靠。

1 材料与方法1.1 仪器HLPC色谱仪型号:LC-20A,色谱仪编号:L20134506488AE,分析天平型号:AE100 分析天平编号:LS012,超声波型号:AS3120A,检测波长:λ＝215 nm。

1.2 色谱条件检测器型号:SPD-20A,检测器灵敏度:2.0AUFS柱温:35 ℃,进样体积:20 ul流速:1.0 ml/min,流动相:0.05 moL/L的磷酸二氢钾(取磷酸二氢钾6.8 g,加水至1000 ml,用磷酸调节PH值为4.0)∶乙腈＝70∶30,色谱柱:NH￠4.6×250 mm,色谱柱号:312316。

1.3 材料与试剂乙腈(色谱纯,康科德公司),磷酸二氢钾(AR级),磷酸(AR级),谷氨酰胺对照品(山东宝齡生物技术有限公司),高纯水。

1.4 样品制备标准溶液的制备:精密称取谷氨酰胺标准品250 mg于50 ml容量瓶中,用纯化水稀释并定容至刻度,摇匀,再精密吸取2 ml于10 ml容量瓶中,用流动相稀释定容至刻度,摇匀,备用。

其浓度为1 mg/ml。

样品溶液的制备:称取本品约250 mg,精密称定于50 ml容量瓶中,用纯化水稀释并定容至刻度,摇匀,再精密吸取2 ml于10 ml容量瓶中,用流动相稀释定容至刻度,摇匀,备用。

复合肥料中γ-聚谷氨酸含量的测定柱前衍生-高效液相色谱法复合肥料中γ聚谷氨酸含量的测定一直是农业科学中的一个重要研究方向。

γ聚谷氨酸是植物体内的一种非常重要的氨基酸，它在植物生长和发育过程中扮演着重要的角色，因此了解复合肥料中γ聚谷氨酸的含量对于植物生长的研究以及农业生产具有重要的指导意义。

为了准确测定复合肥料中γ聚谷氨酸的含量，我们可以使用柱前衍生高效液相色谱法。

该方法基于γ聚谷氨酸可以与特定的染料发生反应产生可检测的化合物。

下面，我将一步一步地解释如何使用柱前衍生高效液相色谱法来测定复合肥料中γ聚谷氨酸的含量。

首先，我们需要准备所需的实验材料和设备。

需要的材料包括复合肥料样品、外标准品γ聚谷氨酸、染料试剂、溶剂等。

设备包括高效液相色谱仪、注射器、柱等。

确保所有器材都已清洁并处于良好工作状态。

第二步，我们需要提取样品中的γ聚谷氨酸。

将复合肥料样品粉碎并称取适量样品，加入足够的溶剂将其溶解。

可以使用一种合适的有机溶剂，如甲酸盐缓冲液。

将样品均匀混合，并使用超声波浴来促进溶解。

然后使用滤膜或离心机将样品过滤或离心，以除去固体颗粒。

第三步，我们需要对提取物进行柱前衍生。

将提取物转移到一只玻璃瓶中，并加入适量染料试剂。

染料试剂可以选择具有良好反应性的染料，如洛丹明B。

将样品与染料试剂充分混合，并在室温下反应一定时间。

反应完成后，使用滤膜或离心机将溶液过滤或离心，以除去未反应的染料试剂。

第四步，我们需要将衍生产物分离。

将反应后的溶液通过色谱柱进行分离。

选用合适的色谱柱，如C18柱。

调整流动相的组成和流动速度以实现最佳的分离效果。

使用高效液相色谱仪进行分离，并记录检测器的响应。

第五步，我们需要计算出样品中γ聚谷氨酸的含量。

通过构建γ聚谷氨酸的标准曲线，可以计算出样品中γ聚谷氨酸的浓度。

准备一系列已知浓度的γ聚谷氨酸标准溶液，并使用相同的方法进行柱前衍生和分离。

记录标准溶液的峰面积和浓度，并绘制标准曲线。

通过比较样品中峰的面积与标准曲线，可以计算出样品中γ聚谷氨酸的浓度。

谷氨酸（Glu ）含量检测试剂盒说明书（微量法货号：BC5215规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体85mL×1瓶2-8℃试剂二液体1.5 mL×1支2-8℃试剂三粉剂×2瓶-20℃保存试剂四粉剂×2支-20℃保存试剂五液体4mL×1瓶2-8℃保存标准液液体0.5 mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂三：临用前取1瓶加入6mL 试剂一，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；2、试剂四：临用前取1支加入0.5 mL 试剂二，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融；3、标准液：10 μmol /mL 谷氨酸标准品。

产品说明：Glu 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一，而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。

此外，Glu 还是味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。

谷氨酸脱氢酶（GDH ）催化谷氨酸和NAD 生成α-酮戊二酸、NADH 和NH 4+，在1-mPMS 作用下，WST-1可与NADH 反应，产生水溶性formazan ，计算谷氨酸含量。

Glutamate+NAD +2-Oxoglutrate+NH 4++NADH formazan （450nm ）注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、超声破碎仪、冰、蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）细菌、细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL 试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率200w ，超声3s ，间隔10s ，重复30次），10000g ，常温离心10min ，取上清待测。

l-焦谷氨酸国标检测方法l-焦谷氨酸是一种重要的氨基酸，对人体健康具有重要作用。

为了确保食品和药品中l-焦谷氨酸的质量和安全性，国家制定了一套严格的检测方法。

本文将介绍l-焦谷氨酸的国标检测方法及其应用。

一、l-焦谷氨酸的国标检测方法l-焦谷氨酸的国标检测方法是根据国际标准和国内实际情况制定的。

该方法主要包括样品的制备、仪器设备的选择和检测步骤等内容。

1. 样品的制备样品的制备是l-焦谷氨酸检测的第一步。

通常情况下，样品是从食品或药品中提取出来的。

提取方法可以根据实际情况选择，一般是通过溶解、过滤和浓缩等步骤来获得样品。

2. 仪器设备的选择l-焦谷氨酸国标检测方法需要使用一些专用的仪器设备，以确保检测结果的准确性和可靠性。

常用的仪器设备包括高效液相色谱仪（HPLC）和气相色谱仪（GC）等。

3. 检测步骤l-焦谷氨酸国标检测方法包括一系列的检测步骤，主要包括样品准备、色谱条件设置、峰面积测定、标准曲线绘制和结果计算等。

具体步骤可以根据实际情况进行调整，以确保检测结果的准确性和可靠性。

l-焦谷氨酸国标检测方法主要应用于食品和药品等领域。

具体应用包括以下几个方面：1. 食品安全监测l-焦谷氨酸是一种常见的食品添加剂，用于提高食品的风味和营养价值。

然而，过量的l-焦谷氨酸可能对人体健康造成潜在风险。

因此，通过国标检测方法对食品中的l-焦谷氨酸含量进行监测，可以保证食品的质量和安全性。

2. 药品质量控制l-焦谷氨酸在药品中的应用也较为广泛。

通过国标检测方法对药品中l-焦谷氨酸的含量进行监测，可以确保药品的质量和疗效。

同时，对于一些特殊群体，如婴幼儿和孕妇等，需要对药品中的l-焦谷氨酸含量进行限制，以避免潜在的风险。

3. 新产品研发l-焦谷氨酸在食品和药品领域的应用不断创新。

通过国标检测方法，可以对新产品中的l-焦谷氨酸含量进行准确测定，为新产品的研发提供科学依据和技术支持。

总结：l-焦谷氨酸的国标检测方法是保障食品和药品安全的重要手段。

货号: QS1906 规格：50管/48样谷氨酸(glutamic acid，Glu)含量测定试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：Gu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一，而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。

此外，Glu还是味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。

测定原理：利用专用提取液提取，然后用显色剂进行显色，显色后在570nm下进行测定。

自备实验用品及仪器：可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。

试剂的组成和配制：试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL蒸馏水，充分混匀溶解，用不完的试剂仍4℃避光保存。

谷氨酸提取：1、细菌或培养细胞样品：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议1000万细菌或细胞加入2mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 常温离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.2g组织，加入2mL试剂一），进行冰浴匀浆。

8000g 常温离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）或细胞培养液样品：按照血清（浆）或细胞培养液体积（mL）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议取0.2mL血清（浆）或者细胞培养液加入2mL试剂一），进行冰浴匀浆。

8000g 常温离心10min，取上清，置冰上待测。

测定操作1、分光光度计预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。

测定管-A对照管。

对照管只要做一管。

谷氨酸（Glu）检测
谷氨酸（Glutamic acid, Glu），又称麸氨酸，是一种酸性氨基酸，分子内含两个羧基。

大量存在于谷类蛋白质中，动物脑中含量也较多。

谷氨酸在生物体内的蛋白质代谢过程中占重要地位，参与动物、植物和微生物中的许多重要化学反应。

L-谷氨酸主要用于生产味精、香料，以及用作代盐剂、营养增补剂和生化试剂等。

迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)和液质联用(LC-MS)法，可高效、精准的检测谷氨酸的含量变化。

此外，我们还提供其他氨基酸及其代谢物检测服务，以满足您的不同需求。

HPLC和LC-MS测定谷氨酸样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关质谱参数（中英文）
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 谷氨酸含量信息。

肉与肉制品中L-(+)-谷氨酸含量的测定1 范围本文件规定了测定肉与肉制品中游离L-(+)-谷氨酸含量的分光光度法和光吸收酶标法。

本文件适用于畜禽肉及其制品。

2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。

其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB 5009.3 食品安全国家标准食品中水分的测定（GB 5009.3-2016, ISO 1442:1997, NEQ）GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008, ISO 3696:1987, MOD)GB/T 12806 实验室玻璃仪器单标线容量瓶(GB/T 12806-2011, ISO 1042:1998, NEQ)GB/T 12808 实验室玻璃仪器单标线吸量管(GB/T 12808-2015, ISO 648:2008, NEQ )ISO 8655-2 活塞式容量测量仪第2部分：活塞式移液器(Piston-operated volumetric apparatus — Part 2: piston pipettes)3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

游离 L-(+)-谷氨酸free L-(+)-glutamic acid以游离态存在于肉与肉制品中的L-(+)-谷氨酸和谷氨酸盐。

4 原理用高氯酸溶液提取测试样品中的游离L-(+)-谷氨酸(C5H9NO4)。

提取液离心、过滤，加水稀释至合适浓度，调pH至10。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)在谷氨酸脱氢酶的存在下被L-(+)-谷氨酸还原，见式(1)。

所得到的还原态烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)在心肌黄酶的存在下与碘硝基氯化四氮唑蓝反应，见式(2)。

在490 nm 波长下测量所得甲瓒的含量，并计算测试样品的游离L-(+)-谷氨酸含量。

C5H9NO4 + NAD+ + H2O谷氨酸脱氢酶←→⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯C5H6O5 + NADH + NH3 + H+ （1）NADH + INT + H+心肌黄酶←→⎯⎯⎯⎯⎯NAD+ + 甲瓒（2）5 抽样抽取至少200 g 的有代表性样品。

茚三酮法测定谷氨酸含量
1. 操作条件
（1），2mol/L醋酸缓冲液：量取86mL 2mol/L醋酸钠溶液，加入14mL 2mol/L 乙酸混合而成。

（2）％茚三酮显色液：用，2mol/L醋酸缓冲液进行配制。

（2）样品液适宜测定浓度范围：每毫升含～谷氨酸（～％），即吸光度A值在~范围之内。

2. 操作步骤
取经过缓冲溶液（，2mol/L的醋酸缓冲液）适当稀释的样品液1mL，加入的％茚三酮显色液，混匀后于100℃沸水浴中加热15min，自来水冷却。

放置5min，加3mL 蒸馏水稀释，摇匀后测定570 nm波长下的吸光度A。

（注意：若测定样品加热后有沉淀，说明样品液浓度太高，需要适当稀释）。

代入标准曲线方程中，可计算出样品中谷氨酸含量。

将样品测定的A
570nm
=，C为稀释后料液浓度。

标准曲线方程：A
570
+/
则原实际料液中的谷氨酸浓度为：C' =NC=N (A
570
式中N为稀释倍数。

分光光度计的使用注意事项：
1.使用前，先合盖预热15-20min。

2.用空白液调100%和调0%。

空白液为：1mL水，加入的％茚三酮显色液，混匀
后于100℃沸水浴中加热15min，自来水冷却。

放置5min后，加3mL 蒸馏水稀释，摇匀。

3.不用时将分光光度计盖打开。

SBA-40C 生物传感反应仪山东省科学院生物研究所。