连续监测法测定血清亮氨酸氨基肽酶的活性及临床应用

进行测定 ； 试 剂 开 口稳 定 性 实 验 通 过将 试 剂 定 标 后 ， 开 口放 置
ｔ ｕ ｔ ｅ ， Ｃ Ｉ Ｓ Ｉ ） 制 订 的评 价 方 案 对 自主 研 发 的 Ｌ Ａ Ｐ试 剂 在 分 析 性 能 方 面 进行 了评 价 ， 旨在 为 临 床 检 测应 用 提供 数 据 参 考 。
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 材 料 日立 ７ １ ８ ０全 自动 生 化 分 析 仪 ： 购 于 日本 日立 公
司； 岛津 ２ ４ ５ ０分 光 光 度 计 ， 购 于 日本 岛 津 公 司 ； 游 离 胆 红 素 及 结 合胆红素 ： 购 于 百 灵 威 科 技 有 限公 司 ， 批号 分别为 Ｌ Ｋ５ ０ Ｌ １ ９ 和Ｊ Ｈ１ ０ — ４ ２ ８ ６ ； 血红蛋 白： 购 于 上海 瑞 齐 生 物 科 技 有 限公 司 ， 批
沃燕波 ， 邹继 华 ， 黄 幸 雷， 张桂春 （ 宁波 美康 生物科技 股 份有 限公 司 ， 浙 江宁波 ３ １ ５ １ ０ ０ ）
摘 要 ： 目的 参 照 Ｃ Ｌ Ｓ Ｉ Ｅ Ｐ方 案 对 自主 研 发 的 亮 氨 酸 氨基 肽 酶 （ Ｌ Ａ Ｐ ） 试剂分析性能进行评价 ， 了解 其 是 否 满 足 临 床 需 求 。 方法 参 照 文件 测 定 试 剂 空 白吸 光 度 、 检测 度、 线性 范 围 、 干扰 试 验 和 稳 定 性 等 技 术 指标 。结 果 试
线性 评 价 按 Ｅ Ｐ 一 ６ Ａ文件评 价【 Ｊ ： 取 Ｉ Ａ Ｐ高 、 低 值 血 清 标 本 各 一 份 。将 高值 和低 值 血 清 分 别 按 不 同 比 例 昆合 稀 释 成 不 同浓 度 梯 度 的 样 本 ， 并 将 这 些 样 本 随机 排 列 进 行 测 定 ， 各 个 浓 度 重 复 测 定 ３次 ， 取 其 均 值 为 测 定值 ， 与 预 期值 做 线 性 对 比 。 干扰实验按照 Ｃ Ｌ Ｓ Ｉ Ｅ Ｐ 一 ７ Ａ ２文 件 评 价 ［ ７ ］ ： 测 定 加 入 干 扰 物的混合血清 。 试 剂 热 稳 定性 通过 将 试 剂 置 于 ３ ７ ｃ水 浴 ， 分 别 于 水 浴 前 及水浴 １ 、 ３ 、 ７ ｄ后 对 高 、 低 浓度 的 Ｌ Ａ Ｐ标 本 及 试 剂 线 性 范 围

【 ｅ ｗ ｒｓ Ｌｕｉ ｉ ｐｐ ｄｓ；ａｅ ｓ ｉ ｐ ｉ ｄ ｅ ｅ Ｋ ｙ ｏｄ 】ｅｃ ｅ ｍ ｎ ｅｔ ａ Ｐｔｎ ｔ ｈ ａｃ ｉ ａ ｎ ａ ｏ ｉ ｅ ｉ ｔ ｗ ｈ ｅ ｔ ｓ ｓ
亮氨 酸氨 基肽 酶 （ｅｅ ｅｍ ｉ ｐｐｉａｅＬ Ｐ 是 广泛 分 布 于各 组 织 中 ， １ｕｉ ｎｎ ｅｔ ｓ Ａ ） ｎ ｏ ｄ 由（ ２显示 ）在 不 同 临床 类 型 的 肝 病 患 者 中 ，Ａ 表 ， Ｌ Ｐ活 性 和 阳性 率 依 尤 以肝胆 、 含量 丰 富的一 种蛋 白水解 酶 ， 胰 为探 讨其 在 各种 肝 病诊 治 中 的意 照 ： 性黄 疸性 肝炎 、 性活 动性肝 炎 、 急 慢 肝硬 化 、 原发 性肝 癌 顺序 显著 增 高 （ Ｐ 义 ， 选择 了 １７例该 病患 者作 为研 究对 象 ， 我们 ５ 观察 其病 变及 治疗 过程 中血 ＜ ． １ 其 以原发 性 肝 癌 增 高 幅 度 最大 ， 性 率 最 高 ， 诊 断 敏 感 性 达 ０ Ｏ ）尤 ， 阳 其 ８ ５ 。 ９． ％ 清 Ｌ Ｐ的活 性变 化 ， 探讨 Ｉ Ａ 旨在 ＡＰ对肝病 患 者的诊 治价 值 。 １ 对 象与方 法 ． ２３ 经过疗 后 的肝 病 患 者患病 期 与康 复 期 或 者稳 定 期血 清 Ｌ Ｐ检 测 ． Ａ 见 ） １１ 对象 ： ． 观察组 ：３ 例各类肝病患者来 自我院２０ １７ ０３年 １ ２月至 ２０ 结果 比较 （ 表 ３ 。 ０６ 年ｌ ０月期 间住 院患 者 ， ９ 例 ， ４ 男 １ 女 ６例 ， 均年 龄 ３． ±１ ． 。包 括 急 平 ５ １ ３５岁 表 ３ 肝病 患 者患病 期 与康复期 或者 稳定 期血 清 Ｌ Ｐ检测 结果 比较 Ａ
ｃ ｅ ｃ ｌａ ａｌｚ ｒ ｏ ｌｎ ｏ ｎ ｔｒ ｇ ａ ｓｙ ｍｅｈ ｄ ． ｅｅ ｔｄ ｔ ｅａ ｔｖｔ ｆｓ Ｆ ｍ Ｐ ｉ ３ ａ ｅ ｔ ｗ ｔ ｅ ａｉ ｉｅ ｓ ｎ ｏ ￣ｅ ｉ ３ ｈ ａｔ ｙｃ ｎｒ ｌ． ｈ ｍｉａ ｎ ｙ ｅ ｎｉ ｕ ｓｍｏ ｉ ｉ ｓａ ｔ ｏ ｓ ｗｅｄ ｔｃｅ ｃ ｉｉ ｏ ａ ＬＡ １ ７ ｐ ｔ ｎ ｓ ｈ ｈ ｐ ｔｃｄｓ ａ ｅａ ｄ ｃ ｍｐ ｄ ｗ ｔ ９ ｅ ｌ ｏ ｔｏｓ ｃ ｏｎ ｈ ｙ ｅ ｎ ｉ ｉ ｈ ｈ

中的 临床 意 义 。方法 基 于 Ｌ Ａ Ｐ催 化 水解 Ｌ ｅ ｕ — ｐ Ｎ Ａ 生 成有 色对硝 基 苯胺 的原 理 ，对 ｐ Ｈ 值 、底物 浓度 、反 应 时间 等 条件 进行研 究 ，并 用该 法检 测 临床各 种 肝病血 清 Ｌ Ａ Ｐ活性 。 结果 酶促 反应 最适 ｐ Ｈ为７ ． ２ ０ ， 最适 底物 浓度 为 ４ ． ８ ｍ ｍｏ ｌ ／ Ｌ， 批 内、 批 问平 均 变异 （ Ｃ Ｖ％） 分别 为 ３ ． ６ ８ ％、 ５ ． ９ １ ％。临床检 验 表明 ，肝硬 化 、活 动性 肝炎 患者 的血 清 Ｌ Ａ Ｐ活 性均 高 于正 常组 ，呈现 显著 性差 异 （ 尸＜ ０ ． ０ ５ ） 。结 论 本 法灵敏度 高，结 果 准确 ，且操 作 简便 ，在 肝脏 疾病 诊 断 中具 有 临床意 义 。 【 关 键词 】 亮 氨酰对硝 基 苯胺 （ Ｌ ｅ ｕ — ｐ Ｎ Ａ） ；亮氨 酸氨 基肽 酶 （ Ｌ Ａ Ｐ ） ；连 续监 测 法；肝脏 疾 病
Ｊ ｌＭ ｉ ｎ ｇ ，Ｙ ＡＯ Ｌｉ － ｙ ｕｎ Ｚ ＨＡＮＧ Ｊｉ ａ ｎ — ｈｕ ａ
（ ｊ Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ， Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ ｅ ｙ ｅ Ｅ ａ ｒ Ｎ ｏ ｓ ｅ ａ ｎ ｄ Ｔ ｈ ｒ ｏ ａ ｔ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ， Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ Ｆ ｕ ｄ ａ ｎ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ ２ ０ ０ ０ ３ １ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ，
４ ｈ ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． １ １ ， Ｎ ｏ ． ７
连续监测法测定血清亮氨酸氨基肽 酶的活性 及临床应用

连续监测法快速检测脂肪酶的价值
卢忠;沈俊娅
【期刊名称】《现代中西医结合杂志》
【年(卷),期】2007(016)001
【摘要】目的探讨连续监测法检测脂肪酶(LPS)在临床上诊断急性胰腺炎的价值.方法在日立7170自动生化分析仪上用连续监测法测定LPS.试剂针吸LPS试剂前用0.1 mol/L HCl 270 μL冲洗,设置自动生化分析仪测定时间为5 min,用EDTA-K2或肝素抗凝的血浆测定.结果有效降低了自动生化分析仪试剂针的携带污染,批内变异系数(CV)＜1.80%,总CV＜2.45%;报告时间缩短至30 min内.结论在自动生化分析仪上用连续监测法测定LPS具有准确、快速、重复性好、干扰物少等优点,推动了LPS在临床上诊断急性胰腺炎的广泛应用.
【总页数】2页(P95-96)
【作者】卢忠;沈俊娅
【作者单位】浙江省杭州市第一人民医院,浙江,杭州,310006;浙江省杭州市第一人民医院,浙江,杭州,310006
【正文语种】中文
【中图分类】R446.1
【相关文献】
1.荧光聚合酶链反应熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌及异烟肼耐药突变的临床应用价值 [J], 阳央;冯智;侯欢;李芳芹
2.膜芯片法在结核杆菌耐药快速检测中的应用价值 [J], 韩晓静; 林牧; 陶雪; 龚亚东; 唐竹; 陈云华; 马庆庆
3.全自动细菌鉴定仪法在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的应用价值 [J], 安莹花;王文君;刘莹
4.镜检和疟原虫抗原快速检测(RDT)胶体金法及巢式PCR法在疟疾诊断中的价值[J], 梁文娇
5.一种新的水稻种子碱性脂肪酶活性快速检测方法及其应用 [J], 张瑛;吴跃进;何成芳;刘洁;蒋家月
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

医学体外诊断试剂---产品临床意义1.D-二聚体测定试剂盒（D-Dimer）2.纤维蛋白（原）降解产物测定试剂盒（FDP）13.抗凝血酶III测定试剂盒（AT-III）4.纤维蛋白溶酶原测定试剂盒（S-PLG）5.凝血酶原时间测定试剂盒（PT）6.活化部分凝血活酶时间测定试剂盒（APTT）37.凝血酶时间测定试剂盒（TT）8.纤维蛋白原测定试剂盒（FIB）9.a2纤溶酶抑制物测定试剂盒（S-APL）10.铜兰蛋白（CP）11.总胆汁酸（TBA ）12.前白蛋白（PA）13.腺苷脱氨酶（ADA ）14.5 ‘ -核苷酸酶（5 ‘-NT）15.胆碱酯酶（CHE ）16.a-L岩藻糖苷酶（AFU）17.甘胆酸（CG ）18.亮氨酸氨基肽酶（LAP）19.总胆红素（TBIL）20.直接胆红素（DBIL）21.丙氨酸氨基转移酶（ALT）22.天门冬氨酸氨基转移酶（AST）23.天冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶（ASTm ）124.碱性磷酸酶（ALP）25.Y -谷氨酰氨基转移酶（GGT ）26.总蛋白（TP）27.白蛋白（ALB）28.胱抑素 C （Cysc）29.视黄醇结合蛋白（RBP ）30.0 2微球蛋白（0 2MG ）31.a1微球蛋白测定试剂盒（a1-MG ）32.N-乙酰-0-D-M基葡萄糖苷酶（NAG ）33.肌酐（CR ）34.尿酸（UA）35.尿素氮（BUN ）36.尿总蛋白（UTP ）37.尿微量白蛋白（MALB）38.纤维蛋白（原）降解产物（FDP ）39.同型半胱氨酸（HCY）40.游离脂肪酸（NEFA）41.血管紧张素转化酶（ACE ）42.超敏C反应蛋白（HS-CRP）43.甘油三酯（TG ）44.总胆固醇（TCH）45.高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）46.低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）47.载脂蛋白 AI（ApoAI）48.载脂蛋白B（ApoB）49.载脂蛋白E（ ApoE）50.脂蛋白（a）（LP（a））51.肌红蛋白（Mb）52.肌钙蛋白I（cTn I）53.肌酸激酶同工酶（CKMB ）54.肌酸激酶（CK）55.乳酸脱氢酶（LDH）56.a-羟丁酸脱氢酶（HBDH ）57.葡萄糖（GLU ）58.糖化血清蛋白（GSP ）59.糖化血红蛋白（HBAIC）60.糖化白蛋白（GA ）61.0-羟丁酸（0-DH）62.乳酸（Lac）63.丙酮酸（PYR）64.a-淀粉酶（a-AMY ）65.脂肪酶（LIP）66.钙离子（Ca）67.镁离子（Mg ）68.无机磷（P）69.二氧化碳（Co2 ）70.钾离子（K）71.钠离子（Na ）72.氯离子（CI）73.锌离子（Zn）74.铁离子（Fe）75.抗链球菌溶血素O（ASO ）76.类风湿因子（RF）77.C-反应蛋白（CRP）78.铁蛋白（Ferr）79.转铁蛋白（Tf）80.免疫球蛋白G （IgG）81.补体C3（C3）82.B 因子（BF）83.al-酸性糖蛋白（a 1-AG ）84.al-抗胰蛋白酶（a1-AT）85.尿a2巨球蛋白（Ua2-MG ）86,唾液酸（SIA）87.超氧化物歧化酶（SOD ）尿液蛋白临床意义体外诊断试剂产品临床意义1.D-二聚体测定试剂盒（D-Dimer）方法学：乳胶增强免疫比浊法参考值：血浆：01.0mg/L线性范围：0.520mg/LD-二聚体是在血液凝固与纤溶系统中，由于凝固第十三因子的作用，安定的交联纤维蛋白被纤溶酶分解的FDP的一种，血液中存在YY/DXD、YD/DY、DD/E、DD复合体等各种分子类的D-二聚体。

ｉ ｎ ｇ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｐ ｅ ｉｏ ｒ ｄ ｓ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ｌ ａ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ．Ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ：Ｆ ｒ ｏ ｍ Ｏｃ ｔ ｏ ｂ ｅ ｒ ２ ０ １ ２ ｔ ｏ Ｏ ｃ ｔ ｏ ｂ ｅ ｒ ２ ０ １ ４，ｖ ｅ ｌ ｏ ｃ ｉ ｔ ｙ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ Ｌ ＡＰ
ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｉ ｎ ｄ ｅ ｘ ｅ ｓ ａ ｍｏ ｎ ｇ ６ ０ ｅ ａ ｒ ｌ ｙ ｐ ｒ ｅ ｇ ｎ ａ ｎ ｔ ｗ ｏ ｍ ｅ ｎ（ ｅ ａ ｒ ｌ ｙ ｐ ｒ ｅ ｇ ｎ ａ ｎ ｃ ｙ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ，ｉ ｎ ｃ ｌ ｕ ｄ ｉ ｎ ｇ ２ ２ ｗ ｏ ｍ ｅ ｎ ｗ ｉ ｔ ｈ ｅ ｃ ｔ ｏ ｐ ｉ ｃ ｐ ｒ ｅ ｇ ｎ ａ ｎ ｃ ｙ ａ ｎ ｄ ３ ８ ｎ ｏ ｍａ ｒ ｌ
・
１ ８ ｌ ９・
・
妇女保健 ・
孕妇 血 清亮 氨 酸 氨基 肽 酶 检 测 在异 常妊 娠 中的 临床 价值 探 讨①
周 学梅 周 芳 湖北省孝感市第一人民医院产科 ４ ３ ２ ０ ０ ０
罗 丹 枫 华 中科技 大 学 附属 同济 医 院妇产科
中国图书分类号 Ｒ ７ １ ４ ． ２ 文献标识码 Ａ 文章编号 １ ０ ０ １ － ４ ４ １ １ （ ０１ ２ ５） １ ２ ・ １ ８ １ ９ － ０ ３ ； ｄ ｏ ｉ ： ｌ ｏ ． ７ ６ ０／ ２ ｚ ｇ ｆ ｙ ｂ ｊ ． ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ １ １ ０ １ － － － ４ ４ １ １ ． ２ ０ １ ５ ． １ ２ ． ０ ５

(二)连续监测法测定酶活性
偶联反应中存在几个时相：
①预孵育期： ②延滞期： ③稳态期：
酶偶联法测定ALT的吸光度变化
米－曼氏方程
• Michaelis 和Menten提出的酶作用的中间产物学说
E+S
K1 K2
ES K3
E+P
1913年提出了著名的酶促反应速度与底物浓度关系 的
方程式，即米-曼氏方程(Michaelis-Menten equation):
酶 ALT AST ALP
ACP LD CK γ-GT
AMY LPS ChE#
方法 连续监测法 底物中含磷酸吡哆醛
底物中不含磷酸吡哆醛 连续监测法 底物中含磷酸吡哆醛
底物中不含磷酸吡哆醛 连续监测法（磷酸对硝基苯酚法）
比色法（磷酸麝香草酚法） 连续监测法 L→P，即LD-L法
P→L，即LD-P法 连续监测法（酶偶联法）
(三)干扰因素
1. 其他酶和物质的干扰 2. 酶的污染 3. 非酶反应 4. 分析容器的污染 5. 沉淀形成
（四）血清酶活性浓度测定的条件的优化
1.方法选择 尽可能采用连续监测法；尽量减少操作步骤。 2.仪器和设备 明确规定仪器和设备的各种性能规范。 3.试剂 化学试剂必须具有一定纯度；试验用水最好是纯水或双蒸水。 4.自动生化分析仪参数的设置
参考区间 男：≤45U/L；女：≤34U/L* 5~40U/L 男：≤35U/L；女：≤33U/L* 8~40U/L 1~12岁＜500U/L； 男：12~15岁＜750U/L，
＞25岁40~150U/L； 女：＞15岁40~150U/L 0.5~1.9U/L ≤252U/L* 200~380U/L 男：≤169U/L；女：≤143U/L*

ADA、5'-NT、TRF、TBA、LAP和PA在肝病诊断中的临床评价朱月蓉;邱红;王冰;楼小伟;何玉杰;朱康正;王志浩【摘要】目的探讨腺苷脱氨酶(ADA)、5'-核苷酸酶(5'-NT)、转铁蛋白(TRF)、总胆汁酸(TBA)、亮氨酸氨基肽酶(LAP)、前白蛋白(PA)6项指标在肝病诊断和治疗中的价值.方法使用日立7600全自动生化分析仪测定41例急性肝炎、78例慢性肝炎、62例肝硬化、50例肝癌患者和53例健康对照者血清的上述6项指标,并对检测结果进行统计学分析.结果与正常对照组相比,急性肝炎组与肝癌组ADA、5'-NT、LAP显著升高(P<0.01),TRF和PA显著降低(P<0.01),TBA升高(P<0.05);慢性肝炎组中ADA、5'-NT、TBA、LAP与正常组相比有显著升高(P<0.01),而TRF、PA显著降低(P<0.01);肝硬化组中ADA、TBA与正常组相比有显著升高(P<0.01),而TRF、PA显著降低(P<0.01),5'-NT升高(P<0.05),但是肝硬化组的LAP与正常组无差异(P>0.05).急性肝炎组受试者工作特性曲线(ROC)下面积5'-NT最大,慢性肝炎组曲线下面积ADA和PA较大,肝硬化组ADA、TBA和PA曲线下面积较大,肝癌组ADA、5'-NT和PA曲线下面积较大,LAP在慢性肝炎、肝硬化和肝癌组的曲线下面积较小.结论上述六项指标中,ADA和PA对肝病的诊断价值较高,可作为各实验室的常规项目开展,而除LAP外的其他5项指标对肝硬化均有较高临床应用价值.此外,上述6项指标与常规指标联合应用,可对临床医师在诊断、治疗、评估肝功能状况时起到重要的参考作用.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2011(015)006【总页数】3页(P728-730)【关键词】腺苷脱氨酶;5'-核苷酸酶;转铁蛋白;总胆汁酸;亮氨酸氨基前白蛋白;肝病【作者】朱月蓉;邱红;王冰;楼小伟;何玉杰;朱康正;王志浩【作者单位】解放军第八一医院生化科,江苏,南京,210002;解放军第八一医院生化科,江苏,南京,210002;解放军第八一医院生化科,江苏,南京,210002;解放军第八一医院生化科,江苏,南京,210002;解放军第八一医院生化科,江苏,南京,210002;解放军第八一医院生化科,江苏,南京,210002;解放军第八一医院生化科,江苏,南京,210002【正文语种】中文我国乙肝病毒感染率和发病率居高，是世界上感染最严重的国家之一，病毒性肝炎的平均发病率约为100/10万。

7
(amylase, AMY)
1. 以天然淀粉为底物的测定方法：可测定淀粉水解前后粘度或浊度的改变；也可测产物葡 萄糖；还可测定淀粉与某些活性染料的呈色反应（如碘淀粉比色法 ，但准确性和重复性都 较差）。
2. 以人工合成的麦芽寡糖苷为底物的测定方法：底物的结构和相对分子量确定。
IFCC推荐法： EPS法：以4,6-亚乙基-4-硝基酚-“-D-麦芽七糖苷 (EPS) 做底物偶联多功能“-葡萄糖糖苷酶
9
“-
(alpha-L-fucosidase,AFU)
1. 以4-甲基伞形酮-“-L-岩藻糖苷为底物的荧光法： 灵敏度高 ，但需先用凝胶去除干扰物质。 2. PNPF法：以4-硝基苯-“-L-岩藻吡喃糖苷为底物经AFU水解释放4-硝基苯酚后 ，用碱性缓 冲液终止反应 ，使4-NP呈黄色的方法：需设样本空白并延长反应时间。
12
N-
(β-N-acetyl-D-glucosaminidase, NAG)
1. CNP-NAG法： 色原CNP解离常数 (PKa) 为 5.5 ，摩尔吸光系数大 ，可实现NAG的速 率法分析 ，无需设置样品空白 ，但底物的溶解性和稳定性较差。
2. PNP-NAG法：底物易得 ，反应速度快且稳定 ，是目前常用的方法。 3. MTP-NAG法：可用于尿液NAG测定 ，底物稳定 ，反应灵敏度高。
3. 连续监测法： CNP-NAG法、 PNP-NAG法、 MTP-NAG法。
测定原理： CNP-NAG NAG CNP + 氨基葡萄糖苷
PNP-NAG NAG PNP + 氨基葡萄糖苷
产物CNP、 MPT在405nm/ 340nm处的吸光度与NAG 的活性成正比。
MTP-NAG + H2O NAG N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖+ MPT (6- 甲基-2-巯基吡啶

器材：分光光度计、半自动生化分析仪、恒温水浴箱、微量进样
器、移液管等。
待测标本：血清
2020/3/23
8
标准曲线的绘制（改良赖氏法）
❖ 取干净试管5支标明管号，按下表所示操作。
加入物（ml）
0
1
2
3
4
0.1mol/L磷酸盐缓冲液 2.0mmol/L丙酮酸标准液
基质缓冲液 2,4二硝基苯肼溶液
0.4mol/L NaOH溶液
二硝基苯肼溶液，氢氧化钠溶液（0.4mol/ L），丙酮酸标准液
（2.0mmol/L ）
连续监测法用试剂盒。
试剂1：Tris缓冲液【100mmol/L（pH7.5）】，NADH（0.2mmol/L）， LDH （＞1350U/L）；
试剂2：Tris缓冲液【100mmol/L（pH7.5）】，α-酮戊二酸 （50mmol/L），L-丙氨酸（400mmol/L）。
完全。加入NaOH溶液的方法和速度要一致，不同的
方法及速度也会导致吸光度读数的差异。
5、底物中的α-酮戊二酸和2，4-二硝基苯肼均为呈色物
质，称量必须很准确，每批试剂的空白管吸光度上下
波动不应超过0.015，如超出次范围，应检查试剂及
仪器等方面的问题。
6、当血清标本酶活力超过150卡门氏单连续监测法）
L-丙氨酸+α-酮戊二酸 丙酮酸+NADH
ALT 丙酮酸+L-谷氨酸
LD L-乳酸+NAD+
在340nm连续监测NADH的消耗量，从而计算出ALT的活力。
2020/3/23
7
主要试剂、材料与仪器
改良赖氏法试剂：0.1mol/ L磷酸盐缓冲液、基质缓冲液、2,4-

【试剂】
5．1.0mmol/L 2，4-二硝基苯肼溶液 称取2，4-二硝基苯 肼（AR）19.8mg，溶于1.0mol/L盐酸100ml，置棕色玻 璃瓶中，室温中保存，若冰箱保存可稳定2个月。若有结 晶析出，应重新配制。 6．0.4mol/L NaOH溶液 称取NaOH 1.6g溶解于蒸馏水中， 并加蒸馏水至100ml，置具塞塑料试剂瓶内，室温中可长 期稳定。 7．2.0mmol/L丙酮酸标准液 准确称取丙酮酸钠（AR） 22.0mg，置于100ml容量瓶中，加0.05mol/L硫酸至刻度。 此液不稳定，应临用前配制。丙酮酸不稳定，开封后易变 质（聚合），相互聚合为多聚丙酮酸，需干燥后使用。 8．待测标本 病人血清或质控血清。
（以蒸馏水代替血清，其它和对照管同样操作）。所以， 成批标本测定时，一般不需要每份标本都作自身血清对照 管，以试剂空白管代替即可，但对超过正常值的血清标本 应进行复查。严重脂血、黄疸及溶血血清可引起测定的吸 光度增高；糖尿病酮症酸中毒病人血中因含有大量酮体， 能和2，4-二硝基苯肼作用呈色，也会引起测定管吸光度 增加。因此，检测此类标本时，应作血清标本对照管。
【计算】
• 测定管吸光度减去样本对照管吸光度的 差值为标本的吸光度。该值在校正曲线上查 得ALT的卡门氏单位
【参考范围】
•
血清ALT：5～25卡门氏单位
临床意义
ALT在肝细胞中含量较多，且主要存在于肝细 胞的可溶性部分。当肝脏受损时，此酶可释放入 血，致血中该酶活性浓度增加，故测定ALT常作 为判断肝脏受损指标。
【操作步骤】
1 . 标准曲线的绘制：取试管5支，按表操作。
编号
0
1
2
3
4
0.1mol/L磷
0.10

常用血清酶和同工酶测定的临床意义1.连续监测法测定血清肌酸激酶（CK）2.连续监测法测定乳酸脱氢酶（LD）总活性3.连续监测法测定血清（天）门冬氨酸氨基转移酶（AST）4.连续监测法测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）5.连续监测法测定血清碱性磷酸酶（ALP）6.连续监测法测定血清中谷氨酰基转移酶（GGT）7.淀粉酶（AMY）测定8.比色法测定酸性磷酸酶（ACP）连续监测法测定血清肌酸激酶（CK）CK是由两种不同的亚基M和B组成的二聚体。

正常人体中有三种同工酶，即CK-BB（CK1）、CK-MB（CK2）和CK-MM（CK3）。

CK作用后生成的磷酸肌酸含高能磷酸键，是肌肉收缩时能量的直接来源。

CK需要镁离子激活。

1.原理酶偶联反应测定CK活性浓度。

在340nm监测NAD（P）H的生成量，可计算出CK的活性浓度。

2.生理变异年龄、性别和种族对CK含量都有一定影响。

CK含量和肌肉运动密切相关。

3.参考值男性38～174U/L（37℃）；女性26～140U/L（37℃）。

4.临床意义升高：（1）心肌梗死。

心肌梗死发生后2～4h此酶即开始升高，12～48h达最高峰值，可高达正常上限的10～12倍，在2～4天降至正常水平。

（2）病毒性心肌炎。

（3）肌营养不良症、皮肌炎、骨骼肌损伤。

（4）脑血管意外、脑膜炎、甲状腺功能低下等疾病及一些非疾病因素如剧烈运动、各种插管及手术、肌肉注射冬眠灵和抗生素。

降低：甲亢，长久卧床者总CK（主要为CK-MM）可下降。

5.CK同工酶检测原理及临床意义CK是由两种不同的亚基M和B组成的二聚体，正常人体中有三种同工酶：在细胞线粒体内还有另一种CK同工酶，称为CK-Mt。

（1）检测方法：琼脂糖凝胶电泳法CK 同工酶免疫特性和电泳迁移率各不相同。

在电泳时，CK-BB 迁移最快，走在阳极白蛋白区；CK-MB 居中，位于α2和β球蛋白区；CK-MM 最慢，位于阴极γ-球蛋白区；CK-Mt 迁移率最低，位于CK-MM 之后。

A/G比值减低或倒转
严重肝功能损害 M蛋白血症（如多发性骨髓瘤、原 发性巨球蛋白血症）。

影响血清蛋白质检测结果因素

检测方法； 激烈运动； 体位； 标本溶血； 乳糜标本； 静脉采血时止血带压迫时间超过3分钟。
采血状态：静止、空腹、卧位；并避免标本溶血。

血清蛋白电泳
（serum protein electrophoresis，SPE）
与肝脏功能有关的特殊蛋白测定




血清α1-酸性糖蛋白( α1-acid-glycoprotein, α1-AG或 AAG) 是血浆蛋白中含糖量最高的蛋白（含糖量高达 40%）。合成于肝脏和白细胞。急性时相反应蛋白。 血清α1-抗胰蛋白酶( α1-antitrypsin, α1-AT或AAT)，主 要合成于肝脏，广泛存在于血清和体液中。血清中主 要的糖蛋白酶抑制剂。急性时相反应蛋白。 血清α2-巨球蛋白(α2 –macroglobulin, α2-MG, AMG)是 血浆中分子量最大的蛋白质，合成于肝脏和网状内皮 系统。急性时相反应蛋白。具有蛋白酶抑制功能。 血清铜蓝蛋白 (ceruloplasmin, CP)由肝脏合成。 血清纤维结合蛋白(fibronectin, FN)由肝细胞、内皮细 胞和巨噬细胞合成。
血清胆红素测定——原理



血清中胆红素与偶氮染料发生重氮化反应有快相 与慢相两期，前者为可溶性结合胆红素，后者为 不溶解的非结合胆红素。 应用Jendrassik-Grof方法，使用茶碱和甲醇作为 溶剂，以保证血清中结合与非结合胆红素完全溶 解，并与重氮盐试剂起快速反应，即为血清中的 总胆红素（serum total bilirubin）。 血清中不加溶解剂，当血清与重氮盐试剂混合后 快速发生颜色改变，在1分钟时测得的胆红素即为 结合胆红素（CB）。总胆红素减去结合胆红素即 为非结合胆红素（UCB）。

天门冬氨酸氨基转移酶连续监测法最适条件的探讨
宋耀虹;李学仁
【期刊名称】《化学试剂》
【年(卷),期】1991(13)2
【摘要】根据天门冬氨酸氨基转移酶(AST)催化作用的乒乓反应机制,通过二次作图法测定的 L-天门冬氨酸(S_1)和α-酮戊二酸(S_2)的米氏常数分别为
(K_m)_(s_1)=7.5mmol/L、(K_m)_(s_2)=0.384mmol/L。

当υ_1=0.91V 时,最适条件为;L-天门冬氨酸110mmol/L;α-酮戊二酸12mmol/L;NADH_2
0.25mmol/L;MDH 500U/L;LDH500U/L;Tris 缓冲液80mmol/L,pH8.0±0.1。

在此条件下,本法的测定性能为:1)延迟反应时间为30～60s;2)线性反应时间为
8min;3)线性测定范围为500U/L(30℃);精确性CV%为0.53～6.7%;相关试验
r=0.9900;95%正常成人 AST 的分布范围为7～30U/L。

【总页数】4页(P111-114)
【关键词】AST;转移酶;连续监测法
【作者】宋耀虹;李学仁
【作者单位】北京协和医院检验科
【正文语种】中文
【中图分类】Q555
【相关文献】
1.DBP连续法生产工艺条件探讨（之一）——酯化工序 [J], 刘焕田;韩邦友
2.血清碱性磷酸酶连续监测法及其实验条件的探讨 [J], 刘振宗;周锦红
3.连续排放监测法在我国发电行业碳交易应用前景探讨 [J], 胡永飞;冯田丰;姚艳霞;郭慧东
4.氨法脱硫条件下热湿法烟气连续监测技术 [J], 张弛;孙长库;张孝凯;孙搏
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

亮氨酸氨基肽酶测定试剂盒（L-亮氨酰-p-硝基苯胺底物法）产品技术要求meigaoyi亮氨酸氨基肽酶测定试剂盒（L-亮氨酰-p-硝基苯胺底物法）适用范围：用于体外定量测定人血清或尿液中亮氨酸氨基肽酶的活性。

1.1包装规格3×50ml；2×40ml；2×80ml；2×24ml；1×40ml。

1.2主要组成成分L-亮氨酸-p-硝基苯胺2mmol/LTris缓冲液100mmol/L2.1 外观和性状2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。

2.1.2 试剂应为无色或淡黄色透明液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物。

2.2 净含量液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度在405nm处测定试剂空白吸光度，应≤0.5。

2.3.2 试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率△A/min≤0.005。

2.4 分析灵敏度测试220U/L的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不低于0.04。

2.5 准确性与比对试剂盒同时测试40例线性范围内的不同浓度的样本，样本浓度在(1,240)U/L区间内，其相关系数（r）≥0.975；测定浓度在(1,40]U/L范围内绝对偏差不超过±6U/L；测定浓度在（40，240)U/L范围内相对偏差不超过±15%。

2.6 重复性重复测试正常浓度和高浓度样品，批内变异系数（CV）应≤5%。

2.7 线性2.7.1 在(1,240)U/L区间内，线性相关系数r应不低于0.990；2.7.2 在（40，240)U/L区间内，相对偏差不超过±10%；在(1,40]U/L区间内，绝对偏差不超过±4U/L。

2.8 批间差抽取3个不同批号试剂，对同一浓度样品进行重复检测，批间相对极差≤10%。

2.9 稳定性该产品在2℃～8℃条件下贮存有效期为18个月，取效期末的产品进行检测，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7之规定。

亮氨酸氨基肽酶在肝胆系统恶性肿瘤诊断中的应用价值王萌;仝颖娜;刘晓彬;管明秀;周云丽【摘要】目的探讨亮氨酸氨基肽酶(LAP)在肝胆系统恶性肿瘤诊断中的应用价值.方法采用全自动生化分析仪检测452例肝胆系统恶性肿瘤(恶性组)、124例肝胆系统良性肿瘤患者(良性组)及124例健康体检者(对照组)血清LAP,应用ROC曲线分析LAP对肝胆系统恶性肿瘤的诊断价值.结果恶性组、良性组、对照组血清LAP 分别为(88.1±60.7)、(55.1±33.9)、(45.0±7.2)U/L,各组两两比较P均＜0.05.肝细胞癌、胆管细胞癌和胆管癌患者血清LAP分别为(70.6±27.9)、(117.1 ±105.9)、(101.5±57.2) U/L,三者两两比较P均＜0.05.血清LAP对肝细胞癌诊断的敏感度和特异度分别为58.6％、75.8％,对胆管细胞癌分别为69.6％、85.1％,对胆总管癌分别为93.0％、90.7％.血清LAP诊断肝细胞癌的ROC曲线下面积(AUC)为0.649,诊断胆管细胞癌的AUC为0.801,诊断胆管癌的AUC为0.863.结论肝胆系统恶性肿瘤患者血清LAP水平升高,有助于肝胆系统恶性肿瘤尤其是胆管恶性肿瘤的诊断.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2016(056)018【总页数】2页(P62-63)【关键词】亮氨酸氨基肽酶;肝细胞癌;胆管细胞癌;胆总管癌【作者】王萌;仝颖娜;刘晓彬;管明秀;周云丽【作者单位】天津医科大学肿瘤医院,国家肿瘤临床医学研究中心,天津市肿瘤防治重点实验室,天津300060;天津医科大学肿瘤医院,国家肿瘤临床医学研究中心,天津市肿瘤防治重点实验室,天津300060;天津医科大学肿瘤医院,国家肿瘤临床医学研究中心,天津市肿瘤防治重点实验室,天津300060;天津医科大学肿瘤医院,国家肿瘤临床医学研究中心,天津市肿瘤防治重点实验室,天津300060;天津医科大学肿瘤医院,国家肿瘤临床医学研究中心,天津市肿瘤防治重点实验室,天津300060【正文语种】中文【中图分类】R735.5近年来，肝胆系统恶性肿瘤发病率逐渐增加，其症状隐匿、恶性程度高、手术切除率低、预后很差，因此早期发现、早期治疗非常关键[1]。