E. coli B含有EcoB核酸酶和EcoB甲基化酶
当λ(k)噬菌体侵染E. coli B时,由于其DNA中 有EcoB核酸酶特异识别的碱基序列,被降解掉。 而E. coli B的DNA中虽然也存在这种特异序列, 但可在EcoB甲基化酶的作用下,催化S-腺苷甲硫 氨酸(SAM)将甲基转移给限制酶识别序列的特 定碱基,使之甲基化。 EcoB核酸酶不能识别已甲 基化的序列。
基因重组DNA技术是指将一种生物体(供体)的基因 与载体在体外进行拼接重组,然后转入另一种生物体(受 体)内,使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或 新性状的DNA体外操作程序,也称为分子克隆技术。
供体、受体和载体是重组DNA技术的三大基本元件。
基因工程的目的:
分离、扩增、鉴定、研究、整理生物信息资源 大规模生产生物活性物质 设计、构建生物的新性状甚至新物种
反应必须ATP和Mg2+,具有特异性识别部位 并切割。 如EcoR I、Hinf III III 型限制酶的基本特点:
可以识别特定碱基顺序,并在这一顺序的3’端2426bp处切开DNA,切割位点没有特异性。
2、限制性核酸内切酶的命名原则
第一个字母:大写,表示所来自的微生物的属名的第一 个字母。 第二、三字母:小写,表示所来自的微生物种名的第一、 二个字母。 其它字母:大写或小写,表示所来自的微生物的菌株号。 罗马数字:表示该菌株发现的限制酶的编号。
⑶核酸内切限制酶对生物基因组的消化作用
小分子量的片断-----少 (电泳-容易分离目的片 断)cheria coli RY13的第一个限制
酶。
3、限制性内切酶作用后的断裂方式
形成粘性末端; 形成平末端;
粘性未端:切开后的两段DNA各留下一个尾,这2 个尾的核苷酸顺序完全一样,方向相反。它们之 间是互补的,在适当条件下可以再连接一起。