蜡样芽孢杆菌的检测
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欧盟蜡样芽孢杆菌标准
欧盟蜡样芽孢杆菌标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：欧盟蜡样芽孢杆菌标准是指欧洲联盟制定的关于蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）的质量要求和检测方法的标准。
蜡样芽孢杆菌是一种常见的细菌，广泛存在于自然界中的土壤、水源、植物等环境中。
它是一种潜在的食品污染源，能够在一定条件下产生产生毒素，引起食物中毒。
欧盟制定了一系列的标准，旨在控制和监测蜡样芽孢杆菌在食品中的含量，保障食品安全。
欧盟蜡样芽孢杆菌标准主要包括以下几个方面：1. 质量要求：欧盟规定了食品中蜡样芽孢杆菌的最大容许限量。
不同类型的食品具有不同的容许限量，其中以婴幼儿食品和食品中成分含水量高的产品要求最为严格。
这些限量的设定旨在保证人们在食用食品时不会遭受蜡样芽孢杆菌毒素的危害。
2. 检测方法：欧盟规定了蜡样芽孢杆菌的检测方法，包括取样方法、预处理方法、培养方法、毒素检测方法等。
这些方法一般由专业实验室进行操作，确保检测结果的准确性和可靠性。
3. 风险评估：欧盟对食品中蜡样芽孢杆菌的风险进行评估，分析潜在的风险因素和传播途径。
通过风险评估，可以及时采取控制措施，降低食品中蜡样芽孢杆菌的污染风险。
4. 风险管理：欧盟制定了一系列的风险管理措施，包括食品加工中的卫生规范、食品贮存和运输中的控制措施等。
这些措施旨在预防和控制蜡样芽孢杆菌在食品中的传播和繁殖。
欧盟蜡样芽孢杆菌标准的制定和执行，旨在保障食品安全，减少食品中蜡样芽孢杆菌的污染，降低人们因食用受污染食品而引发的食物中毒风险。
对于食品生产企业和相关部门而言，严格执行欧盟蜡样芽孢杆菌标准是确保产品质量和消费者健康的重要措施。
希望通过这些标准的制定和实施，可以有效地保障欧盟市场上食品的安全性，提高消费者对食品的信任度和满意度。
第二篇示例：欧盟蜡样芽孢杆菌标准（European Union Bacillus cereus Standard）是欧洲联盟为保障食品安全所制定的一项重要规范。
致病菌检验-蜡样芽孢杆菌.
V-P反应
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － － － － － － －
明胶液化
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋
与类似菌鉴别：
表2 蜡样芽孢杆菌与其他类似菌的鉴别
项目 过氧化氢酶 动力 硝酸盐还原 酪蛋白分解 卵黄反应 葡萄糖利用（厌氧） 甘露醇 木糖 溶血 已知致病菌特性 巨大芽 孢杆菌 ＋ ＋/－ － ＋/－ － － ＋ ＋/－ － 蜡样芽孢 杆菌 ＋ ＋/－ ＋ ＋ ＋ ＋ － － ＋ 产生肠毒素 苏云金芽孢 杆菌 ＋ ＋/－ ＋ ＋/－ ＋ ＋ － － ＋ 对昆虫致病的 内毒素结晶 蕈状芽孢杆菌 炭疽芽孢杆菌 ＋ － ＋ ＋/－ ＋ ＋ － － －/＋ 假根样生长 ＋ － ＋ －/＋ ＋ ＋ － － －/＋ 对动物
能分解葡萄糖，麦芽糖，蔗糖，水杨苷，产酸不产气。
不分解乳糖，甘露醇，阿拉伯糖，山梨醇，木糖 H2S（-），尿素酶试验（-）卵磷脂酶（+）， V-P试验（+），液化明胶。
二、致病性
食品蜡样芽胞杆菌数量>106/g（mL）时常可导致食物中毒，
导致中毒的主要原因是其产生的肠毒素 。 肠毒素类型： 耐热性肠毒素：100℃30min不能被破坏，常在米饭中形成。 不耐热肠毒素：能在各种食物中形成。
表1 蜡样芽孢杆菌生化分型
生化试验
型别 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
柠檬酸盐利用
＋ － ＋ － － ＋ ＋ － － － ＋ ＋ － ＋ ＋
硝酸盐还原
＋ ＋ ＋ － － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － － －
淀粉水解
＋ ＋ － ＋ － － ＋ － － ＋ ＋ － ＋ － ＋
临床症状：食物中毒，分为呕吐型和腹泻型两类。
蜡样芽孢杆菌平板计数
/asphtml/refere8940.htm蜡样芽胞杆菌平板计数法（第一法）4.2操作步骤4.2.1样品处理冷冻样品应在45 ℃以下不超过15 min或在2 ℃～5 ℃不超过18 h解冻，若不能及时检验，应放于-10℃~ -20℃保存；非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于2 ℃～5 ℃冰箱保存，24 h 内检验。
4.2.2样品制备称取样品25 g，放入盛有225 mL PBS或生理盐水的无菌均质杯内，用旋转刀片式均质器以8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL PBS或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。
若样品为液态，吸取25 mL 样品至盛有225 mL PBS或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀，作为1:10的样品匀液。
4.2.3样品的稀释吸取4.2.2中1:10的样品匀液1 mL加到装有9mL PBS或生理盐水的稀释管中，充分混匀制成1:100的样品匀液。
跟据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。
每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。
4.2.4样品接种根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），以0.3 mL、0.3 mL、0.4 mL 接种量分别移入三块MYP琼脂平板，然后用无菌L棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。
使用前，如MYP琼脂平板表面有水珠，可放在25 ℃～50 ℃的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。
4.2.5分离、培养4.2.5.1 分离在通常情况下，涂布后，将平板静置10 min。
如样液不易吸收，可将平板放在培养箱30 ℃±1℃培养1 h，等样品匀液吸收后翻转平皿，倒置于培养箱，30 ℃±1 ℃培养24 h±2 h。
如果菌落不典型，可继续培养24 h±2 h再观察。
蜡样芽孢杆菌食物中毒诊断标准
蜡样芽孢杆菌食物中毒诊断标准【蜡样芽孢杆菌食物中毒诊断标准】引言：在当今食品安全日益成为人们关注的焦点之际，蜡样芽孢杆菌食物中毒成为了一个备受争议的话题。
蜡样芽孢杆菌是一种常见的细菌，能够在恶劣条件下生存，并产生毒素，导致中毒症状。
为了保障公众健康，食物中毒的诊断标准至关重要。
本文将从深度和广度两个角度出发，全面评估蜡样芽孢杆菌食物中毒的诊断标准，并为读者提供深入的理解。
一、蜡样芽孢杆菌食物中毒的概述蜡样芽孢杆菌是一种厌氧细菌，可以存在于土壤、水源、动物肠道等不同环境中。
当食物受到污染后，蜡样芽孢杆菌便会繁殖并产生毒素。
主要通过摄入受污染的食物或饮用水进入人体，引发中毒。
蜡样芽孢杆菌食物中毒在全球范围内都较为常见，尤其是与未煮熟的动物产品有关。
二、蜡样芽孢杆菌食物中毒的临床表现蜡样芽孢杆菌食物中毒的临床表现多种多样，包括腹痛、呕吐、恶心、腹泻等。
通常在摄入受污染食物后6至12小时内出现临床症状，持续时间较短，一般不超过48小时。
对于临床医生来说，准确的诊断标准至关重要。
三、蜡样芽孢杆菌食物中毒的诊断标准1. 临床症状：患者应该出现急性胃肠炎症状，包括腹痛、呕吐、恶心、腹泻等。
这些症状通常在摄入受污染食物后6至12小时内出现，并持续时间较短，一般不超过48小时。
2. 实验室检测：从患者的粪便或食物样品中分离和鉴定出蜡样芽孢杆菌。
实验室检测的结果对于蜡样芽孢杆菌食物中毒的诊断起着关键作用。
3. 流行病学调查：确定是否存在食品源的污染，并追踪病例，找出疫点，制定相应的控制措施。
四、个人观点和理解蜡样芽孢杆菌食物中毒的诊断标准对于保障公众健康具有重要意义。
然而，仅凭临床症状很难得出准确的诊断，必须依靠实验室检测和流行病学调查来提供确凿的证据。
在实际中，医生应该密切关注患者的症状和流行病学调查的结果，及时采取相应的控制措施，以预防和控制蜡样芽孢杆菌食物中毒的发生。
总结回顾：本文通过深度和广度的探讨，全面评估了蜡样芽孢杆菌食物中毒的诊断标准。
欧盟蜡样芽孢杆菌标准
欧盟蜡样芽孢杆菌标准1. 引言1.1 背景介绍蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）是一类能够生存于环境中的革兰氏阳性细菌，常见于土壤、灰尘和食品中。
这种细菌能够产生孢子，具有较强的耐热性和耐酸性，容易在食品加工过程中存活和繁殖。
蜡样芽孢杆菌引起的食品中毒是一种常见的食源性疾病，主要通过食用被污染的食品进入人体，引起胃肠道不适、腹泻、恶心等症状。
为了保障食品安全和公共健康，欧洲联盟制定了关于蜡样芽孢杆菌的标准，旨在规范食品生产过程中对蜡样芽孢杆菌的监测、控制和管理。
这些标准不仅要求食品生产企业对食品中的蜡样芽孢杆菌进行严格监测，还规定了相应的防控措施和应急处理措施。
通过遵守这些标准，可以有效减少蜡样芽孢杆菌引起的食品中毒事件，维护食品安全和公众健康。
欧盟蜡样芽孢杆菌标准的制定和执行对于提升食品安全水平至关重要。
2. 正文2.1 欧盟蜡样芽孢杆菌标准的制定欧盟蜡样芽孢杆菌标准是针对食品安全领域的一项重要标准，其制定过程经历了多方的协商和研究。
欧盟蜡样芽孢杆菌是一种常见的食品中毒菌，对人体健康造成危害，因此有必要确立相应的标准来规范其在食品中的含量。
制定欧盟蜡样芽孢杆菌标准的过程中，专家们首先对该菌种的生物学特性、生长环境等进行了深入研究，以确定其危害程度和影响范围。
在明确了标准的必要性后，欧盟相关部门组织了一系列的研讨会和听证会，邀请了业界专家和学者共同讨论制定标准的可行性和合理性。
经过多次讨论和修改，最终确定了欧盟蜡样芽孢杆菌标准的具体内容和限量要求。
这些标准的制定不仅有助于监督食品生产过程中的卫生安全问题，也对消费者的健康起到了保护作用。
2.2 欧盟蜡样芽孢杆菌标准的内容欧盟蜡样芽孢杆菌标准的内容包括对该细菌的识别和检测方法、食品中蜡样芽孢杆菌的限量要求、食品生产过程中对蜡样芽孢杆菌的控制措施等内容。
针对不同食品种类，这些内容可能会有所不同，但欧盟对蜡样芽孢杆菌的标准主要是为了确保食品的安全和质量。
蜡样芽胞杆菌微生物检测原始记录表
受控编号：
蜡样芽胞杆菌检测原始记录表
检测项目：蜡样芽胞杆菌样品状态：□液态☑固态□完好□已开封□其他：存放条件：□冷藏☑冷冻□室温检测日期：2023.12.6 -2023.12.8 环境条件： 25 ℃ 48 %RH 检测仪器：□电热恒温培养箱☑生化培养箱
检测依据：☑GB/T 4789.14-2014 □其它：
样品处理：（1)按无菌操作称取样品 25 g（mL），加入 225 mL□灭菌生理盐水□其他，研成匀浆制成混悬液，并逐级稀释成所需稀释倍数的检测液。
（2)选择3个适宜稀释度，每个稀释度分别吸取 0.3 mL 0.3 mL 0.4 mL样品匀液，分别接种 1 个MYP平板并涂布均匀，平板于30℃培养48h.
（3)选择适宜的MYP平板，计数平板上的典型和可疑菌落，从典型或可疑菌落中挑取五个菌落进行证实试验。
备注： 1 “＋”表示选择性平板上有可疑或典型菌落生长或生化试验呈阳性，“－”表示选择性平板上无可疑或典型菌落生长或生化试验呈阴性。
2.蜡样芽孢杆菌在MYP上的典型菌落特征：粉红色菌落，周围有粉红色晕；在营养琼脂上典型菌落特征：菌落不透明，表面粗糙，似毛玻璃状或融蜡状，边缘不整齐。
检验员：复核人：审核人：
第页，共页
2022年10月01日执行。
食品中蜡样芽孢杆菌芽孢EMA-qPCR 检测
关键词：蜡样芽孢杆菌；超声波振荡法；实时荧光 PCR；叠氮溴化乙锭
蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）是 1.2 仪器设备
一种常见的兼性需氧革兰氏阳性致病
ABI 7500FAST 实时荧光 PCR 仪、
菌，极易污染乳制品、米饭、水果制 生物安全柜、超声波细胞破碎仪、显 品等食品 [1]。目前，检测方法主要是传 微镜。
图 3 不同光照时间处理对 EMA-qPCR 结果影响
管黑暗中室温放置 5 min。然后将离心 列， 设 计 引 物 和 探 针（ 南 京 金 斯
管放置冰上，分别强光下ຫໍສະໝຸດ 光 0、1、5、 瑞 生 物 公 司 合 成 ）。 上 游 引 物：
运用到蜡样芽孢杆菌实时荧光PCR检测中， 30 s，12 000 r/min 离心 2 min，取上
提高qPCR检测的准确度，降低假阳性率。 清用细菌 DNA 提取试剂盒提取 DNA。
1 材料和方法
1.4.2 溶菌酶法
1.1 菌种
向收集菌体的离心管加入 500 μL
蜡样芽孢杆菌 CMCC(B)63301。 无菌水，涡旋 30 s，再加入 1 μL 溶菌
统培养法，耗时费力，难以适应现代 1.3 蜡样芽孢杆菌芽孢的制备
食品生产的检验需要。
蜡样芽孢杆菌芽孢形成可以通过
蜡样芽孢杆菌实时荧光 PCR 技术 营养限量进行诱导，在培养基中添加 因具有检测时间短、操作简便等优点 Mn2+ 能提高芽孢的得率及稳定性。孔
得到广泛运用。蜡样芽孢杆菌在食品 雀石绿染色镜检芽孢生成情况。蜡样
酶（100 mg/mL），37 ℃ 水 浴 2 h， 12 000 r/min 离心 2 min，取上清提取 DNA。
1.4.3 煮沸法 在菌体中加入 500 μL 无菌水，涡 旋 30 s，置 95 ℃水浴 5 min，12 000 r/min 离心 2 min，取上清提取 DNA。 1.4.4 超声波破碎法 向 离 心 管 中 加 入 500 μL 的 无 菌 水，涡旋 30 s，放入超声波细胞破碎 仪超声波振荡 20 min（40%，5 s，5 s）， 12 000 r/min 离心 2 min，取上清提取 DNA。 1.5 EMA 使用浓度优化 用 ddH2O 配 制 0.1 mg/mL 的 EMA 溶液，-20 ℃避光保存。取 Mn2+ 营 养 肉 汤 中 30 ℃ 培 养 48 h 的 蜡 样 芽孢杆菌菌液于 80 ℃水浴中处理 20 min，灭活营养体细胞。将 EMA（0.1 mg/mL）分别加入装有 1 mL 上述灭 活 菌 液 的 离 心 管 中， 使 EMA 终 质 量 浓 度 分 别 达 到 0.1、1.0、2.0、5.0、 10.0、20.0 μg/mL，不加 EMA 的菌液 作为对照。充分混匀后，将离心管黑 暗中室温放置约 5 min，让 EMA 与细 菌 DNA 充分结合。然后将离心管放置 冰上，强光下曝光 20 min，以此为模 板采用超声波破碎法提取 DNA。 1.6 EMA 光照时间优化 添加 EMA 到 1.5 中所述灭活菌液 1 mL 离心管中，使每管 EMA 终浓度 达到 2.0μg/mL。充分混匀后，将离心
蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）是 1.2 仪器设备
一种常见的兼性需氧革兰氏阳性致病
ABI 7500FAST 实时荧光 PCR 仪、
菌，极易污染乳制品、米饭、水果制 生物安全柜、超声波细胞破碎仪、显 品等食品 [1]。目前，检测方法主要是传 微镜。
图 3 不同光照时间处理对 EMA-qPCR 结果影响
管黑暗中室温放置 5 min。然后将离心 列， 设 计 引 物 和 探 针（ 南 京 金 斯
管放置冰上，分别强光下ຫໍສະໝຸດ 光 0、1、5、 瑞 生 物 公 司 合 成 ）。 上 游 引 物：
运用到蜡样芽孢杆菌实时荧光PCR检测中， 30 s，12 000 r/min 离心 2 min，取上
提高qPCR检测的准确度，降低假阳性率。 清用细菌 DNA 提取试剂盒提取 DNA。
1 材料和方法
1.4.2 溶菌酶法
1.1 菌种
向收集菌体的离心管加入 500 μL
蜡样芽孢杆菌 CMCC(B)63301。 无菌水，涡旋 30 s，再加入 1 μL 溶菌
统培养法，耗时费力，难以适应现代 1.3 蜡样芽孢杆菌芽孢的制备
食品生产的检验需要。
蜡样芽孢杆菌芽孢形成可以通过
蜡样芽孢杆菌实时荧光 PCR 技术 营养限量进行诱导，在培养基中添加 因具有检测时间短、操作简便等优点 Mn2+ 能提高芽孢的得率及稳定性。孔
得到广泛运用。蜡样芽孢杆菌在食品 雀石绿染色镜检芽孢生成情况。蜡样
酶（100 mg/mL），37 ℃ 水 浴 2 h， 12 000 r/min 离心 2 min，取上清提取 DNA。
1.4.3 煮沸法 在菌体中加入 500 μL 无菌水，涡 旋 30 s，置 95 ℃水浴 5 min，12 000 r/min 离心 2 min，取上清提取 DNA。 1.4.4 超声波破碎法 向 离 心 管 中 加 入 500 μL 的 无 菌 水，涡旋 30 s，放入超声波细胞破碎 仪超声波振荡 20 min（40%，5 s，5 s）， 12 000 r/min 离心 2 min，取上清提取 DNA。 1.5 EMA 使用浓度优化 用 ddH2O 配 制 0.1 mg/mL 的 EMA 溶液，-20 ℃避光保存。取 Mn2+ 营 养 肉 汤 中 30 ℃ 培 养 48 h 的 蜡 样 芽孢杆菌菌液于 80 ℃水浴中处理 20 min，灭活营养体细胞。将 EMA（0.1 mg/mL）分别加入装有 1 mL 上述灭 活 菌 液 的 离 心 管 中， 使 EMA 终 质 量 浓 度 分 别 达 到 0.1、1.0、2.0、5.0、 10.0、20.0 μg/mL，不加 EMA 的菌液 作为对照。充分混匀后，将离心管黑 暗中室温放置约 5 min，让 EMA 与细 菌 DNA 充分结合。然后将离心管放置 冰上，强光下曝光 20 min，以此为模 板采用超声波破碎法提取 DNA。 1.6 EMA 光照时间优化 添加 EMA 到 1.5 中所述灭活菌液 1 mL 离心管中，使每管 EMA 终浓度 达到 2.0μg/mL。充分混匀后，将离心
蜡样芽孢杆菌
食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验1范围本标准规定了蜡样芽胞杆菌的检验方法。
本标准适用于各类食品和食物中毒样品中蜡样芽胞杆菌的检验。
2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB／T 4789.2食品卫生微生物学检验菌落总数测定GB／T 4789.28—2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3.1冰箱：0℃～4℃。
3.2恒温培养箱：36℃±l℃。
3.3恒温水浴锅：46℃±l℃。
3.4显微镜：l0×～l00×。
3.5均质器或灭菌乳钵。
3.6架盘药物天平：0g～500g，精确至0.5 9。
3.7灭菌锥形瓶：500 mL。
3.8灭菌试管：16 mm×160 mm。
3.9灭菌吸管：1 mL(具0.01 mL刻度)、10mL(具0.1 mL刻度)。
3.10灭菌平培养皿：直径90 mm。
3.11灭菌刀、剪、镊子等。
4培养基和试剂4.1 肉浸液肉汤培养基：GB／T 4789.28 2003中4.1。
4.2 酪蛋白琼脂培养基：GB／T 4789.28—2003中4.65。
4.3 动力一硝酸盐培养基：GB／T 4789.28—2003中4.72。
4.4 缓冲葡萄糖蛋白胨水：GB／T 4789.28—2003中3.4。
4.5 血琼脂培养基：GB／T 4789.28--2003中4.6。
4.6 3％过氧化氢溶液。
4.7 甲萘胺一乙酸溶液：GB／T 4789.28—2003中3.17。
4.8 对氨基苯磺酸一乙酸溶液：GB／T 4789.28—2003中3.17。
4.9 革兰氏染色液：GB／T 4789.28—2003中2.2。
蜡样芽孢杆菌 食品法规
蜡样芽孢杆菌食品法规蜡样芽孢杆菌是一种在大自然中广泛分布的菌类，同时也是一种重要的致病菌。
随着人们对食品安全的关注度不断提高，越来越多的国家和地区开始制定针对蜡样芽孢杆菌的食品法规。
本文将详细介绍蜡样芽孢杆菌食品法规的相关内容。
一、国内对蜡样芽孢杆菌的法规1.《食品安全法》《食品安全法》是中国制定的最重要的食品安全方面的法律法规之一，在其中已明确规定了蜡样芽孢杆菌的检测标准。
规定了蜡样芽孢杆菌在茶叶类、肉制品、水产制品等领域中的检测限值及其相关标准。
2.《食品安全国家标准》此标准规定了在食品加工、运输、储存以及销售过程中关于蜡样芽孢杆菌的检测方法、检测标准及防范方法等。
该标准还明确了食品生产加工企业在处理蜡样芽孢杆菌时需要遵守的原则和方法。
3.地方性法规各省市还分别出台了适应其本地情况下的食品安全法规，各个地区都在根据其本地情况和实际情况制定适宜的推进措施，以保障当地食品安全。
这些东西包括当地的法规和企业自制的内部品质控制系统。
二、国际对蜡样芽孢杆菌的食品法规1.欧盟食品法规欧盟规定蜡样芽孢杆菌在3个统计批量中的平均值，应该小于每克100 CFU。
他们也规定了蜡样芽孢杆菌可以存在于肉制品、乳制品及某些植物制品中的最大限制值。
2.美国食品法规美国FDA在对蜡样芽孢杆菌的标准中，规定蜡样芽孢杆菌在食品中比其它类别的食品中更加重要。
他们也在制定针对防范蜡样芽孢杆菌的检测标准和预防措施。
综合来看，不同国家或地区蜡样芽孢杆菌食品法规存在差别，但都要求加强对食品中蜡样芽孢杆菌的监管。
食品制造企业需要加强其产品的品质控制体系，不断完善并落实相关的法规标准，确保食品的安全卫生且经久耐用。
欧盟蜡样芽孢杆菌标准
欧盟蜡样芽孢杆菌标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：欧盟蜡样芽孢杆菌标准是指欧盟针对食品安全领域中蜡样芽孢杆菌的监测、检测和控制制定的相关规定和标准。
蜡样芽孢杆菌是一种常见的细菌，存在于土壤、水源、动植物体表等环境中。
它可以在适宜的条件下繁殖生长，并产生毒素，对人体健康造成危害。
欧盟通过制定相应的标准，以确保食品中不含有危害健康的蜡样芽孢杆菌。
蜡样芽孢杆菌在食品中的检测主要是通过对食品样品进行采样，提取样品中的蜡样芽孢杆菌，然后进行培养、鉴定和计数。
欧盟要求食品生产企业在生产过程中对食品进行严格的监控，确保食品中蜡样芽孢杆菌的数量符合规定的标准。
如果食品中的蜡样芽孢杆菌超过规定的限量，必须立即采取措施加以处理，以避免对消费者造成健康风险。
欧盟蜡样芽孢杆菌的标准主要包括以下几个方面：1. 检测方法：欧盟规定了蜡样芽孢杆菌的检测方法，包括培养、分离、鉴定和计数等步骤。
食品生产企业必须使用认可的检测方法对食品进行检测，确保检测结果的准确性和可靠性。
2. 菌落数量限量：欧盟规定了食品中蜡样芽孢杆菌的菌落数量限量。
不同类型的食品对蜡样芽孢杆菌的容许量也会有所不同。
食品生产企业在生产过程中必须严格按照标准的要求进行控制，保证食品中的蜡样芽孢杆菌数量在安全范围内。
3. 处理措施：如果食品样品中的蜡样芽孢杆菌超过规定的限量，食品生产企业必须立即采取措施，如停产、召回产品等，以避免对消费者造成健康风险。
企业还必须配合相关部门进行溯源调查，查明蜡样芽孢杆菌的来源，并采取措施避免再次发生类似事件。
4. 标签要求：欧盟规定在食品包装上必须标明食品中是否含有蜡样芽孢杆菌，并注明蜡样芽孢杆菌的数量是否符合标准要求。
消费者通过检查食品包装上的标签信息可以了解食品的安全性和质量。
欧盟蜡样芽孢杆菌标准是欧盟为确保食品安全和保护消费者健康而制定的重要规定。
食品生产企业必须严格遵守蜡样芽孢杆菌的检测、限量和处理要求，确保生产的食品符合相关标准，保障消费者的权益和健康。
ISO7932-2004中文版
蜡样芽孢杆菌菌落计数方法一、范围：适用于各类食品中蜡样芽孢杆菌的检测，也适用于食品生产加工区域环境中蜡样芽孢杆菌的检测。
二、规范性引用文件ISO6887-1:1999初始样品与稀释液的制备ISO/TS11133-2:2003培养基的品质检测Performance testing三、要点3.1一定量的检测样品接种在平皿中的选择性培养基的表面；3.2在有氧的环境中，30℃培养18-48小时；3.3计数四、试剂4.1MYP培养基-甘露醇卵黄多粘菌素琼脂培养基4.2Sheep blood agar-绵羊血琼脂培养基五、仪器5.1高压灭菌锅5.2鼓风干燥箱或培养箱37℃±1℃--55℃±1℃（干燥凝固培养基）5.3生化培养箱：30℃±1℃5.4恒温水浴锅：44℃-47℃5.5PH计5.6培养皿：90mm（玻璃或塑料）5.7移液管或移液枪：1ml、10ml5.8L形涂抹棒3.5mm*20mm六、实验样品制备样品有代表性，且不得在送样或储存过程中破损或性状改变。
七、操作步骤7.1初始样液与稀释样液制备（ISO6887-1）7.2接种与培养7.2.1分别移取0.1ml样液至2个平板的培养基表面，每个稀释度2个平板。
7.2.2快速的用涂抹棒把样液在培养基表面涂抹均匀，小心不要使涂抹棒触碰平板壁，每个平板使用一个灭菌的涂抹棒，盖好平皿盖，放置15分钟，使样液被培养基吸收。
7.2.3倒置平板，置30℃培养18-24小时，若菌落不清晰，继续培养24小时。
7.3、菌落计数选取2个合适的连续稀释度，计数＜150的菌落数量。
菌落大、粉红色（表示不发酵甘露醇），周围有粉红色的沉淀环（表示产生卵磷脂酶）。
7.4、证实实验7.4.1挑取5个可疑的菌落，做证实实验，若菌落弥漫，或没有清晰独立的菌落，则挑取可疑菌落划线分离于选择性培养基(MYP)上，置30℃培养18-24小时。
然后做证实实验。
7.4.2溶血反应挑取菌落划线或针刺接种于绵羊血琼脂培养基的表面，置30℃培养24h±2h。
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实验材料 •甘露醇 卵黄 多粘菌素（MYP）琼脂平板 甘露醇-卵黄 多粘菌素（ 甘露醇 卵黄-多粘菌素 ） •营养琼脂培养基 营养琼脂培养基 •L-酪氨酸营养琼脂培养基 •胰酪胨大豆羊血琼脂 胰酪胨大豆羊血琼脂(TSSB) 胰酪胨大豆羊血琼脂 •动力 硝酸盐生化鉴定管 动力-硝酸盐生化鉴定管 动力 •木糖 明胶生化鉴定管 木糖-明胶生化鉴定管 木糖 •硝酸盐试剂 硝酸盐试剂(1%对氨基苯磺酸溶液 0.2% α-萘胺溶 对氨基苯磺酸溶液, 硝酸盐试剂 对氨基苯磺酸溶液 萘胺溶 液) •3%的双氧水 的双氧水 •革兰染液 革兰染液
4 证实试验
预 实 验 营 养 琼 脂 培 养 基 菌落形态观察
革兰染色
镜检观察菌体 卵磷脂酶实验 L-酪氨酸分解实验 酪氨酸分解实验 触酶实验 溶血实验
双氧水 胰酪胨大豆羊血琼脂平板 MYP琼脂平 琼脂平 板 L-酪氨酸琼脂培养基 L-酪氨酸琼脂培养基
生 化 实 验
鉴 别 试 验
动力与硝酸盐还原实验
动力-硝酸盐生化鉴定管 动力 硝酸盐生化鉴定管
1 形态观察 本菌革兰染色阳性，呈短链或长链，芽孢位于菌体 中央或偏端，不是菌体胀大。
2 实验结果 1 MYP平板上：粉红色菌落，菌落周围产生粉红色浑浊 MYP平板上 粉红色菌落 菌落周围产生粉红色浑浊 平板上： 菌落， 圈。 2 L-酪蛋白琼脂培养基：菌落周围形成透明圈。 酪蛋白琼脂培养基：菌落周围形成透明圈 透明圈。 3 触酶试验：加入过氧化氢后30秒产生气泡。 触酶试验：加入过氧化氢后30秒产生气泡 30秒产生气泡。 4 TSSB平板上：菌落周围产生的β溶血圈。（在菌落 TSSB平板上 菌落周围产生的β溶血圈。 平板上： 周围出现一个大小不一的完全透明清楚的宽带）。 周围出现一个大小不一的完全透明清楚的宽带）。 紫云金芽孢杆菌和蕈状芽孢杆菌呈现弱得溶血现象， 紫云金芽孢杆菌和蕈状芽孢杆菌呈现弱得溶血现象， 而炭疽芽胞杆菌通常不溶血。 而炭疽芽胞杆菌通常不溶血。 5 动力-硝酸盐生化鉴定管：细菌沿穿刺线扩散生长， 动力-硝酸盐生化鉴定管：细菌沿穿刺线扩散生长 扩散生长， 加硝酸盐试剂后培养基变红 加硝酸盐试剂后培养基变红。 蕈状芽孢杆菌常常呈绒毛状生长， 蕈状芽孢杆菌常常呈绒毛状生长，蜡样和紫云金芽 孢杆菌通常运动极为活泼，而炭疽芽胞杆菌则不运动。 孢杆菌通常运动极为活泼，而炭疽芽胞杆菌则不运动。
检验程序
检样 50g(mL)+450mL +450mL无菌磷酸盐缓冲稀释液 50g(mL)+450mL无菌磷酸盐缓冲稀释液
10-1~10-6稀释液 选择性培养基 MYP 30°C , 24h ° 形态观察 菌数测定 营养琼脂 30°C , 24h ° 证实试验
革兰染色 生长及菌落观察 鉴别试验
生化反应
计菌落数
MYP 琼脂平板
3 分离培养 计数后，从每个平板选取5个已计数的菌落分别接 种于营养琼脂斜面做纯培养，30℃培养24h，进 行形态观察和证实试验。
第二次课
分类 需氧芽孢杆菌根据芽孢囊膨大与否及芽孢的 形状，可将其分为3个群。第一群的芽孢不突出菌 体，形成的芽孢为椭圆形或圆柱形；第二类的芽 孢囊突出菌体，形成的芽孢为椭圆形；第三群的 芽孢囊突出菌体形成的芽孢为球形。 蜡样芽胞杆菌属于第一群。该群内细菌，根据 营养型细胞的宽度可以又分为两类，其中宽度 ≥0.9µm者称大细胞群，该群有蜡样芽胞杆菌、蕈 状芽孢杆菌、紫云金芽孢杆菌、炭疽芽胞杆菌、 巨大芽孢杆菌。这几种与蜡样芽胞杆菌形态上相 似的4个菌种必须用微生物学和生化学试验进行鉴 别。
产生溶血素：使胰酪胨大豆羊血琼脂（ 产生溶血素：使胰酪胨大豆羊血琼脂（TSSB） ） 中的血细胞发生β溶血 溶血。 中的血细胞发生 溶血。 产生明胶酶： 产生明胶酶：将明胶水解为多肽再水解为氨 基酸而使其由半固体转化为液态状。 基酸而使其由半固体转化为液态状。 触酶实验: 触酶实验 产生过氧化氢酶分解过氧化氢生 成水和氧气。 成水和氧气。 动力和硝酸盐试验: 蜡样芽胞杆菌运动活泼, 动力和硝酸盐试验 蜡样芽胞杆菌运动活泼 能还原硝酸盐为亚硝酸盐。 能还原硝酸盐为亚硝酸盐。
（第一次课） 第一次课）
蜡样芽胞杆菌概述 蜡样芽胞杆菌概述
一 形态与染色
本菌是革兰氏阳性杆菌， 本菌是革兰氏阳性杆菌， 1.0~1.2µm×3~5µm,菌 × 菌 体两端钝圆，有鞭毛， 体两端钝圆，有鞭毛， 无荚膜， 无荚膜，多成短链状排 列。 本菌生长6小时以后可以 本菌生长 小时以后可以 既可以形成芽孢， 既可以形成芽孢，形成 的芽孢小于菌体横径， 的芽孢小于菌体横径， 位于中心或稍偏于一端 稍偏于一端。 位于中心或稍偏于一端。
二 培养特性
营养要求不高， 营养要求不高，在普通 培养基上可生长良好， 培养基上可生长良好， 最适宜温度为28~35℃。 最适宜温度为 ℃ 菌落较大，不透明， 菌落较大，不透明，表 面粗糙似毛玻璃状或蜡 边缘常成扩展状。 状，边缘常成扩展状。 在普通肉汤上培养基呈 浑浊生长， 浑浊生长，常形成菌膜 或壁环，震摇易乳化。 或壁环，震摇易乳化。
实验步骤
2：样品稀释及计数 样品稀释及计数： 样品稀释及计数
1mL 1mL 1mL 1mL 1mL
10Байду номын сангаас1
10-6
9mL
9mL
9mL
9mL
9mL
1 每个稀释度混匀吹打完毕 后换用另一只灭菌吸管。 后换用另一只灭菌吸管。 2 每稀释度接种两个平皿。 每稀释度接种两个平皿。
各稀释度0.1mL， 各稀释度0.1mL，L型玻棒均匀涂布 0.1mL 30℃ ，24h ℃
实验结果
3 计数（表面涂布法）
1克样品中含的蜡样芽孢杆菌数： 克样品中含的蜡样芽孢杆菌数： 克样品中含的蜡样芽孢杆菌数 证实阳性菌落数 挑取的菌落数
MYP平板上的菌落数× 平板上的菌落数
× 稀释倍数× 10 稀释倍数×
举例：将检样10 稀释液0.1mL涂布于MYP 0.1mL涂布于MYP琼脂平板 举例：将检样10-4稀释液0.1mL涂布于MYP琼脂平板 生成的可疑菌落数为25 25个 个进行鉴定， 上，生成的可疑菌落数为25个，取5个进行鉴定， 证实为蜡样芽胞杆菌的是4 1g样品中含的蜡 证实为蜡样芽胞杆菌的是4个，则1g样品中含的蜡 样芽孢杆菌数为（25×4/5） 样芽孢杆菌数为（25×4/5）×104×1/0.1
肠毒素测定
报告
实验步骤
1
样品的保存和送检 待检样品应保持在6℃以下运送并尽可能不使其冷冻。 6℃以下运送并尽可能不使其冷冻 待检样品应保持在6℃以下运送并尽可能不使其冷冻。 对可疑是该菌引起的食物中毒的病人， 对可疑是该菌引起的食物中毒的病人，应取可疑食 物或病患者的呕吐物、粪便，且立刻在3小时内送检 小时内送检。 物或病患者的呕吐物、粪便，且立刻在 小时内送检。 送达实验室后，应保存于4℃并尽快检验。 送达实验室后，应保存于 ℃并尽快检验。
不发酵甘露醇：在甘露醇 卵黄 卵黄-多粘菌素 不发酵甘露醇：在甘露醇-卵黄 多粘菌素 （MYP）琼脂平板上生成微粉红色菌落。 ）琼脂平板上生成微粉红色菌落。 产生卵磷脂酶：分解MYP琼脂中的卵磷脂， 琼脂中的卵磷脂， 产生卵磷脂酶：分解 琼脂中的卵磷脂 在菌落周围产生粉红色混浊环（沉淀环）。 在菌落周围产生粉红色混浊环（沉淀环）。 产生酪蛋白酶：分解培养基中的酪蛋白， 产生酪蛋白酶：分解培养基中的酪蛋白，生 酪氨酸在菌落周围形成透明圈。 成L-酪氨酸在菌落周围形成透明圈。 酪氨酸在菌落周围形成透明圈
三 流行病学
蜡样芽胞杆菌
病原菌 条件致病菌
肠 毒 素 不 耐 热
病
eg:
实验目的
1、掌握蜡样芽孢杆菌检验的主要步骤与方法。 掌握蜡样芽孢杆菌检验的主要步骤与方法。
2、了解蜡样芽孢杆菌菌落特点和掌握生化反 了解蜡样芽孢杆菌菌落特点和掌握生化反 应结果的判断方法。 应结果的判断方法。
蜡样芽胞杆菌具有以下生化特性： 实验原理：蜡样芽胞杆菌具有以下生化特性：